專利名稱：血清miRNA-483-5p的定量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種血清的檢測方法，尤其是涉及一種血清miRNA-483-5p的定量檢測方法。
背景技術：
中國專利CN101793882A公開一種人血清中腫瘤標記物Bicr6蛋白的質譜篩選方法，其具體步驟為取人血清，用磁珠吸附后洗脫得到磁珠富集液；將磁珠富集液加入基質溶液，按以下條件進行基質輔助激光解離電離飛行時間質譜檢測第一離子源電壓20kV ； 第二離子源電壓18. 6kV ；晶體電壓7. 6kV ；脈沖離子時間:320ns ；極性正；矩陣抑制模式門控；門控強度最大；抑制高限600Da ；檢測器1.4 1.5kV ；樣本率1.00Gs/S ；電子獲取增強，IOOmV ；實時流暢高；激光頻率20Hz ；激光衰減關73%，范圍20%;質荷比為4964士 1處的峰為Bicr6蛋白。該發明具有時間短、靈敏度高等特點。
發明內容
本發明的目的在于提供一種血清miRNA-483_5p的定量檢測方法。本發明包括以下步驟1)取待檢測血清與裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA ；2)取純化miRNA在MMLV酶催化下應用特定引物將miRNA變為cDNA，然后將 cDNA在EXtaq酶催化下應用miRNA-483_5p的PCR引物和探針進行定量PCR檢測，條件為 950C IOmin后進行40循環95°C 10s，60°C 10s，70°C 10s，每循環在70°C時檢測FAM熒光值， 完成循環后分析數據與標準品比較得出定量值；所述miRNA-483-5p的PCR引物和探針如表 1所示。表 權利要求
1.血清miRNA-483-5p的定量檢測方法，其特征在于包括以下步驟[1)取待檢測血清與裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA；[2)取純化miRNA在MMLV酶催化下應用特定引物將miRNA變為cDNA，然后將cDNA在 EXtaq酶催化下應用miRNA-483-5p的PCR引物和探針進行定量PCR檢測，條件為95°C IOmin 后進行40循環95°C 10s,60°C 10s,70°C 10s，每循環在70°C時檢測FAM熒光值，完成循環后分析數據與標準品比較得出定量值；所述miRNA-483-5p的PCR引物和探針如下表
2.如權利要求1所述的血清miRNA-483-5p的定量檢測方法，其特征在于在步驟1)中， 所述待檢測血清為400 μ 1。
3.如權利要求1所述的血清miRNA-483-5p的定量檢測方法，其特征在于在步驟1)中， 所述裂解液的用量與待檢測血清同體積。
4.如權利要求1所述的血清miRNA-483-5p的定量檢測方法，其特征在于在步驟2)中， 所述進行定量PCR檢測采用ABI7300定量PCR儀。
全文摘要
血清miRNA-483-5p的定量檢測方法，涉及一種血清的檢測方法。取待檢測血清與裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA；取純化miRNA在MMLV酶催化下應用特定引物將miRNA變為cDNA，然后將cDNA在EXtaq酶催化下應用miRNA-483-5p的PCR引物和探針進行定量PCR檢測，每循環在70℃時檢測FAM熒光值，完成循環后分析數據與標準品比較得出定量值。系統完整地驗證了從引物、探針設計、各種催化酶的使用到外參定量方法，解決了血清中內參不穩定導致定量不準確的弊端，有望將此發明應用于臨床，并對今后血清中miRNA作為各種疾病的生物標記這一熱門研究起到引導作用。
文檔編號C12Q1/68GK102424858SQ201110458588
公開日2012年4月25日 申請日期2011年12月31日 優先權日2011年12月31日
發明者劉平果, 張舟徑, 王效民 申請人:廈門大學附屬中山醫院