專利名稱：綠豆用于制備ace抑制劑的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于食品領域，具體地說，是關于綠豆用于制備血管緊張素轉化酶(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)抑制劑的應用。
背景技術：
綠豆(學名Vigna radiata)是ー種豆科、蝶形花亞科豇豆屬 植物，原產印度、緬甸地區。現在東亞各國普遍種植，非洲、歐洲、美國也有少量種植，中國、緬甸等國是主要的綠豆出口國。種子和莖被廣泛食用。綠豆是ー種高蛋白、中淀粉、低脂肪的藥食同源作物，每IOOg干物質含有22 26g蛋白質，是禾谷類的2倍，含淀粉50g左右，膳食纖維6. 4g左右，脂肪含量低，僅占1%。此外，緑豆中還含有豐富的維生素及微量元素，維生素BI是雞肉的17. 5倍，維生素B2是禾谷類的2 4倍，磷是禾谷類及豬肉、雞肉、魚、雞蛋的2倍，鈣是禾谷類的4倍，還含有鐵、硒、鎂、鋅等微量元素。緑豆營養成分全面，不僅蛋白質含量高，而且蛋白質功效比高，居各種豆類之首，蛋白質中氨基酸種類齊全且構成比例較好，尤其以賴氨酸含量較為豐富。ACE (血管緊張素轉化酶,Angiotensin Converting Enzyme)在人體內的作用是將血管緊張素 I (Angiotensin I Converting Enzyme)轉化成血管緊張素 II (Angiotensin
IIConverting Enzyme)，而血管緊張素II為強烈的血管收縮物質，可使血管收縮，從而使體內血壓升高。此外，ACE還可以失活體內調節血壓的舒緩激肽，也從而使體內血壓升高。ACE是ー種金屬肽酶，含有2個結合Zn2+的位點，即所謂“必須結合位點(Obligatory Binding Site)”。Zn2+結合位點是ACE催化反應的活性基團所在部位。各種ACE抑制物的共同作用是與ACE活性部位的Zn2+結合，使之失活。降血壓肽是由數個氨基酸組成的肽，是對ACE活性區域親和カ較強的競爭性抑制齊U，它們與ACE的親和カ比血管緊張素轉化酶I (AngI)或舒緩激肽更強，而且也較不容易從ACE結合區釋放，降低ACE活性或使其失去活性，從而阻礙ACE催化血管緊張素I轉化成血管緊張素II，使血管不收縮，以及催化水解舒緩激肽成為失活片段的兩種生化反應過程，起到降血壓的作用。到目前為止，未發現有關于利用緑豆制備ACE抑制物或降血壓藥物的報道。
發明內容
本申請的發明人在長期研究緑豆的用途的過程中發現，緑豆的水解產物具有明顯的血管緊張素轉化酶(ACE)抑制活性。因此，本發明的目的在于提供一種綠豆用于制備血管緊張素轉化酶抑制劑的應用。根據本發明，所述綠豆為綠豆經蛋白酶水解后的產物。根據本發明的優選實施例，所述蛋白酶選自胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它們的組
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基于綠豆具有抑制血管緊張素轉化酶活性的作用，緑豆可進ー步用于開發具有降血壓功能的食品或保健品本發明為緑豆的開發利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應用前景。
具體實施例方式以下結合具體實施例，對本發明的降血壓多肽的制備方法作進ー步詳細說明。應理解，以下實施例僅用于實施本發明而非用于限定本發明的范圍。以下實施例中，ACE抑制活性的測定原理及方法步驟如下緑豆的蛋白水解物(多肽)的ACE抑制活性測定采用體外模擬測定，體外ACE抑制率測試原理為底物馬尿酰組氨酰亮氨酸(HHL)在ACE酶的催化作用下，可以生產馬尿酸(Hip)和ニ肽，通過液相的方法測定馬尿酸的含量，進而可以間接測定ACE酶的酶活；而ACE抑制劑的存在可以抑制ACE酶的活性，致使Hip的生成減少，從而間接反映了 ACE抑制肽的活性。測試ACE抑制率的方法步驟如下選取EP管作為反應器，編號0、1、2、3等。O號管加入15 μ L去離子水為對照，I、2、3等管加入15 μ L的ACE抑制劑。然后各管內均加入15 μ L的底物HHL，37°C溫浴5min后，加入5 μ L的ACE酶啟動反應，在37°C水浴中反應40min。反應結束后，加入300 μ L IM HCl終止反應。反應液進行高速離心，過4. 5μπι的濾頭，然后進行高效液相色譜(HPLC)測定。HPLC條件是10%こ腈90%水(O. 1%TFA)，檢測波長228nm，柱溫30°C，上樣量20yL ;ACE抑制率(X)按下式計算X= (A 對照-Al) /A 對照 X 100%式中X—ACE抑制率(％) A對照一對照組生成Hip的峰面積Al—實驗組生成Hip的峰面積實施例I_8、綠豆多肽水解物的制備取緑豆，洗浄，搗碎研磨后收集，取一定量的緑豆粉末，進行干燥，得干燥的緑豆粉。按表I所示，對獲得的干燥緑豆粉分別用不同組合的蛋白酶進行處理，具體如下稱取2g粉末,配制成20mg/ml的溶液,按照表I的蛋白酶水解條件，調pH值至相應的酶反應PH條件，加入相應的酶O. 1% (w/v)，在相應的反應溫度下水浴酶解O. 17^10小吋，攪拌。當使用兩種不同蛋白酶處理時，在第一種蛋白酶酶解結束后，煮沸IOmin滅酶活，再進行第二種蛋白酶的處理步驟。終止反應后，調節PH至7，水解物離心(12000r/min,lOmin)，取上清液，在_40°C冷凍干燥，收集水解物粉末。表I、不同蛋白酶水解條件
實施例酶的組合I溫度(°C) Γ~ρ 時間(hr)
I胃蛋白酶371.5O. 1權利要求
1.綠豆用于制備血管緊張素轉化酶抑制劑的應用。
2.如權利要求I所述的應用，其特征在于，所述綠豆為綠豆經蛋白酶水解后的產物。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述蛋白酶選自胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它們的組合。
4.綠豆用于制備降血壓食品或保健品的應用，其特征在于，所述降血壓食品或保健品用于抑制血管緊張素轉化酶的活性。
全文摘要
本發明公開了一種綠豆用于制備血管緊張素轉化酶抑制劑的應用。優選的，所述綠豆為綠豆經蛋白酶水解后的產物。本發明為綠豆的開發利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應用前景。
文檔編號A23L1/20GK102626206SQ20121013771
公開日2012年8月8日 申請日期2012年5月4日 優先權日2012年5月4日
發明者吳燕玲, 張旭晟, 方明, 李瑩, 李鵬, 杜磊, 束雯婷, 王波, 謝靜莉, 鄧高靜 申請人:華東理工大學