Tert基因突變檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種TERT因突變檢測液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對T174G位點的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16，針對C98T位點的SEQ?ID?NO.17及SEQ?ID?NO.18，針對G162A位點的SEQ?ID?NO.19及SEQ?ID?NO.20，針對G168A位點的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22，針對C209T位點的SEQ?ID?NO.23及SEQ?IDNO.24，針對G151T位點的SEQ?ID?NO.25及SEQ?ID?NO.26，和/或針對A129T位點的SEQ?IDNO.27及SEQ?ID?NO.28；包被有ant?i-tag序列包被的微球；擴增引物。本發明所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。
【專利說明】TERT基因突變檢測特異性引物和液相芯片
【技術領域】
[0001]本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種TERT基因突變檢測特異性引物和液相芯片。
【背景技術】
[0002]TERT 稱端粒酶逆轉錄酶(Telomerase reverse transcriptase),位于 5 號染色體5P13.3上，TERT基因是一種核糖核蛋白，位于端粒末端，在維持端粒功能上發揮主要作用，對于染色體的復制和抑制細胞的衰老都是必需的，端粒功能異常會影響基因的穩定性，從而增加腫瘤形成的風險。TERT基因編碼端粒酶催化亞單位，參與人體的細胞無限增殖和癌細胞發病機制，也是癌癥發展過程中的關鍵基因，和很多癌癥的發生有關系，與基底細胞癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌、宮頸癌、甲狀腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌和惡性膠質瘤等的發生有相關性。
[0003]目前，TERT基因突變檢測方法主要有:微陣列技術，熒光定量PCR技術和基質輔助激光解析電離時間飛行質譜技術(MALD1-T0F-MS)，微陣列技術存在成本昂貴、復雜、檢測靈敏度較低、重復性差、分析范圍較狹窄，探針的合成與固定比較復雜等問題，另外由于雜交位于固相表面，有一定程度的空間阻礙作用。熒光定量PCR技術存在靈敏度低，樣品易污染、假陽性率高的缺點，基質輔助激光解析電離時間飛行質譜技術一種軟電離技術，在蛋白質等生物大分子的檢測中有著強大而成熟的功能，但是在核酸檢測領域，由于核酸分子本身的特殊性，檢測受到一定的限制。
[0004]本發明目標檢測的TERT基因突變位點，如表所示:
[0005]
【權利要求】
1.一種TERT基因突變檢測液相芯片，其特征是，包括有: (A).針對TERT基因不同突變位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對:每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對T174G位點的SEQ ID N0.15及SEQ ID N0.16，針對C98T位點的SEQ IDN0.17 及 SEQ ID N0.18，針對 G162A 位點的 SEQ ID N0.19 及 SEQ ID N0.20，針對G168A 位點的 SEQ ID N0.21 及 SEQ ID N0.22，針對 C209T 位點的 SEQ ID N0.23 及 SEQ IDN0.24，針對 G151T 位點的 SEQ ID N0.25 及 SEQ ID N0.26，和 / 或針對 A129T 位點的 SEQ IDN0.27 及 SEQ IDN0.28 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID N0.1 -SEQ ID N0.14 ； (B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID N0.29-SEQ ID N0.42，且所述ant1-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應突變位點的目標序列的引物。
2.根據權利要求1所述的TERT基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為:針對 T174G 位點的 SEQ ID N0.43 及 SEQ ID N0.44，針對 C98T 位點的 SEQ ID N0.45 及SEQ IDN0.46，針對 G162A 位點的 SEQ ID N0.47 及 SEQ ID N0.48，針對 G168A 位點的 SEQID N0.49 及 SEQ ID N0.50，針對 C209T 位點的 SEQ ID N0.51 及 SEQ ID N0.52，針對 G151T位點的 SEQ IDN0.53 及 SEQ ID N0.54，和 / 或針對 A129T 位點的 SEQ ID N0.55 及 SEQ IDN0.56。
3.根據權利要求1或2所述的TERT基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為:針對T174G位點的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.15組成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ IDN0.16組成的序列，針對C98T位點的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.17組成的序列及由SEQ IDN0.4和SEQ ID N0.18組成的序列，針對G162A位點的由SEQ ID N0.5和SEQID N0.19組成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.20組成的序列，針對G168A位點的由SEQ ID N0.7和SEQID N0.21組成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.22組成的序列，針對C209T位點的由SEQID N0.9和SEQ ID N0.23組成的序列及由SEQ ID N0.10和SEQID N0.24組成的序列，針對G151T位點的由SEQ ID N0.11和SEQ ID N0.25組成的序列及由SEQ ID N0.12和SEQ IDN0.26組成的序列，和/或針對A129T位點的由SEQ ID N0.13和 SEQ ID N0.27 及由 SEQ IDN0.14 和 SEQ ID N0.28 組成的序列。
4.根據權利要求1所述的TERT基因突變檢測液相芯片，其特征在于，所述間隔臂為5-10 個 T。
5.用于TERT基因突變檢測的特異性引物，其特征在于，所述特異性引物序列為:針對 T174G 位點的 SEQ ID N0.15 及 SEQ ID N0.16，針對 C98T 位點的 SEQ ID N0.17 及 SEQIDN0.18，針對 G162A 位點的 SEQ ID N0.19 及 SEQ ID N0.20，針對 G168A 位點的 SEQ IDN0.21 及 SEQ ID N0.22，針對 C209T 位點的 SEQ ID N0.23 及 SEQ ID N0.24，針對 G151T 位點的 SEQ IDN0.25 及 SEQ ID N0.26，和 / 或針對 A129T 位點的 SEQ ID N0.27 及 SEQ IDN0.28。
【文檔編號】C12Q1/68GK103451267SQ201210177502
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2012年5月31日 優先權日:2012年5月31日
【發明者】許嘉森, 楊惠夷 申請人:益善生物技術股份有限公司