專利名稱：一種專用于漆酶的培養基配方及其制備方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，具體為一種專用于漆酶的培養基配方及其制備方法。
背景技術：
漆酶(Laccase)是一種多酚氧化酶，也是一種典型的含Cu2+的糖蛋白。它具有特征性吸收光譜，具有單體、雙體和四聚體形式，但一般以單體形式存在。漆酶蛋白分子含有4個銅離子，這4個銅離子處于漆酶的活性部位，在催化氧化反應中起著決定性作用。漆酶是單電子氧化酶，以O2為電子受體。在菌體外，當存在O2時漆酶發生聚合反應，還原態漆酶被氧化，而O2被還原成水。這個過程的實現是四個銅離子通過協同傳遞電子和價態變化完成的。在這個反應過程中，漆酶從底物分子中獲得一個電子形成一個不穩定的自由基，該 自由基可以進一步發生聚合反應和解聚反應。漆酶具有非常寬泛的專一性，主要是氧化酚類生成苯氧自由基。它能催化的氧化底物種類繁多，有酚及其衍生物、羧酸及其衍生物、芳胺及其衍生物、留體激素和生物色素以及其它酚類底物。因此，漆酶不僅在生物制漿、生物漂白以及有毒化合物的降解等方面有重要的應用前景，而且在生物檢測、合成工業、染料降解等方面也具有潛在的應用前景。漆酶最早從漆樹的分泌物中發現，廣泛存在于植物、真菌和細菌和昆蟲中。分泌漆酶的真菌主要集中于擔子菌亞門(除了屬名和種名之外，其他學名都是正體)、子囊菌亞門及半知菌亞門等高等真菌中，其中最主要的是擔子菌亞門的白腐真菌。本發明通過對產漆酶培養基配方進行優化，篩選出一種專用于漆酶的培養基，以提高產酶量，降低工業上產酶成本，為工業化奠定基礎。
發明內容
鑒于現有技術中存在的問題，本發明的目的在于設計提供一種專用于漆酶的培養基配方及其制備方法的技術方案，其生產成本低、效果好且對環境無影響。所述的一種專用于漆酶的培養基配方，其特征在于含有重量比的以下物質紅薯汁8 16份,酒石酸I 5份,甘露糖8 14份,酵母骨6 15份,氯化鈉5 10份,牛肉膏4 13份，蛋白胨7 12份，硫酸銨6 12份，磷酸二氫鉀5 11份，硫酸鎂7 12份，干酪素3 7份，麥芽糖5 10份，蒸餾水15-25份。所述的一種專用于漆酶的培養基配方，其特征在于紅薯汁10 15份，酒石酸2 4份，甘露糖9 12份，酵母膏7 13份，氯化鈉6 9份，牛肉膏6 11份，蛋白胨8 10份，硫酸銨7 11份，磷酸二氫鉀7 10份，硫酸鎂8 11份，干酪素4 6份，麥芽糖6 8份，蒸餾水17-23份。所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于包括以下步驟
1)按權利要求I所述比例稱取紅薯，將紅薯去皮蒸煮10_21min，后搗爛用四層紗布取汁，再加入權利要求I中所述比例的蒸餾水攪拌均勻，110-135°C滅菌15-30min，備用；
2)按權利要求I所述比例稱取酒石酸、甘露糖、酵母膏、氯化鈉、牛肉膏、蛋白胨、硫酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、干酪素、麥芽糖，然后與步驟I)中紅薯汁、蒸餾水攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于步驟I)中紅薯蒸煮時間為12-20min，優選13_18min。所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在 于步驟I)中滅菌溫度為 120-130°C，優選 125-128°C。所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于步驟I)中滅菌時間為 16-28min，優選 20_25min。上述一種專用于漆酶的培養基配方及其制備方法，通過多種營養成分按一定比例配制而成，解決了實驗室和工業上高效培養漆酶的問題。該配方安全溫和、富含漆酶生長所需的各種營養物質，培養出的漆酶活性高，大大超過漆酶基礎培養基，提高了產酶量，同時降低了產酶成本，在實驗室和工業上使用對漆酶的培養具有很好的效果，該培養基營養豐富、培養效果好，是理想的漆酶培養基。本申請文件中涉及的百分含量除另有說明外，其它的均為純物質的重量百分含量。
具體實施例方式現結合本發明的實施例和藥效試驗，進一步說明本發明的有益效果。實施例I
將紅薯去皮蒸煮13min，后搗爛用四層紗布取汁，向2L攪拌釜內投入14g紅薯汁，加入23g蒸懼水攪拌均勻，121°C滅菌25min,再加入4g酒石酸、Ilg甘露糖、7g酵母膏、6g氯化鈉、Ilg牛肉膏、8g蛋白胨、Ilg硫酸銨、7g磷酸二氫鉀、8. 5g硫酸鎂、4. 5g干酪素和6. 5g麥芽糖，攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。實施例2
將紅薯去皮蒸煮18min，后搗爛用四層紗布取汁，向2L攪拌釜內投入IOg紅薯汁，加入17g蒸懼水攪拌均勻，125°C滅菌20min,再加入2g酒石酸、9g甘露糖、8g酵母膏、7g氯化鈉、IOg牛肉膏、9g蛋白胨、IOg硫酸銨、8g磷酸二氫鉀、9. 5g硫酸鎂、4g干酪素和6g麥芽糖,攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。實施例3
將紅薯去皮蒸煮14min，后搗爛用四層紗布取汁，向2L攪拌釜內投入15g紅薯汁，加入18g蒸懼水攪拌均勻，123°C滅菌21min,再加入3g酒石酸、12g甘露糖、9g酵母膏、8g氯化鈉、9g牛肉膏、IOg蛋白胨、9g硫酸銨、9g磷酸二氫鉀、10. 5g硫酸鎂、5. 5g干酪素和7g麥芽糖，攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。實施例4
將紅薯去皮蒸煮15min，后搗爛用四層紗布取汁，向2L攪拌釜內投入13g紅薯汁，加入19g蒸懼水攪拌均勻，124°C滅菌22min,再加入2. 5g酒石酸、IOg甘露糖、IOg酵母膏、9g氯化鈉、8g牛肉膏、8. 5g蛋白胨、8g硫酸銨、IOg磷酸二氫鉀、8g硫酸鎂、5g干酪素和8g麥芽糖，攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。實施例5
將紅薯去皮蒸煮17min，后搗爛用四層紗布取汁，向2L攪拌釜內投入12g紅薯汁，加入20g蒸懼水攪拌均勻，123. 5°C滅菌24min,再加入3. 5g酒石酸、10. 5g甘露糖、Ilg酵母膏、
8.5g氯化鈉、7g牛肉膏、9. 5g蛋白胨、7g硫酸銨、8. 5g磷酸二氫鉀、9g硫酸鎂、6g干酪素和7. 5g麥芽糖，攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。實施例6
將紅薯去皮蒸煮16min，后搗爛用四層紗布取汁，向2L攪拌釜內投入Ilg紅薯汁，加入22g蒸懼水攪拌均勻，124. 5°C滅菌23min,再加入3. Ig酒石酸、11. 5g甘露糖、13g酵母膏、
7.5g氯化鈉、6g牛肉膏、9. 2g蛋白胨、7. 5g硫酸銨、9. 5g磷酸二氫鉀、IIg硫酸鎂、5. 8g干酪素和7. Sg麥芽糖，攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。
以下通過試驗進一步說明本發明的有益效果 表I實施例1-6對漆酶活性(U/L)的影響
權利要求
1.一種專用于漆酶的培養基配方，其特征在于含有重量比的以下物質紅薯汁8 16份,酒石酸I 5份,甘露糖8 14份,酵母骨6 15份,氯化鈉5 10份,牛肉骨4 13份，蛋白胨7 12份，硫酸銨6 12份，磷酸二氫鉀5 11份，硫酸鎂7 12份，干酪素3 7份，麥芽糖5 10份，蒸餾水15-25份。
2.如權利要求I所述的一種專用于漆酶的培養基配方，其特征在于紅薯汁10 15份，酒石酸2 4份，甘露糖9 12份，酵母膏7 13份，氯化鈉6 9份，牛肉膏6 11份，蛋白胨8 10份，硫酸銨7 11份，磷酸二氫鉀7 10份，硫酸鎂8 11份，干酪素4 6份，麥芽糖6 8份，蒸餾水17-23份。
3.如權利要求I所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于包括以下步驟 1)按權利要求I所述比例稱取紅薯，將紅薯去皮蒸煮10_21min，后搗爛用四層紗布取汁，再加入權利要求I中所述比例的蒸餾水攪拌均勻，110-135°C滅菌15-30min，備用； 2)按權利要求I所述比例稱取酒石酸、甘露糖、酵母膏、氯化鈉、牛肉膏、蛋白胨、硫酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、干酪素、麥芽糖，然后與步驟I)中紅薯汁、蒸餾水攪拌溶解混合均勻即成漆酶培養基。
4.如權利要求3所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于步驟I)中紅薯蒸煮時間為12-20min,優選13_18min。
5.如權利要求3所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于步驟I)中滅菌溫度為120-130°C，優選125-128°C。
6.如權利要求3所述的一種專用于漆酶的培養基配方的制備方法，其特征在于步驟I)中滅菌時間為16-28min，優選20_25min。
全文摘要
一種專用于漆酶的培養基配方及其制備方法，屬于生物技術領域。其特征在于含有重量比的以下物質紅薯汁8～16份，酒石酸1～5份，甘露糖8～14份，酵母膏6～15份，氯化鈉5～10份，牛肉膏4～13份，蛋白胨7～12份，硫酸銨6～12份，磷酸二氫鉀5～11份，硫酸鎂7～12份，干酪素3～7份，麥芽糖5～10份，蒸餾水15-25份。上述一種專用于漆酶的培養基配方及其制備方法，該配方安全溫和、富含漆酶生長所需的各種營養物質，培養出的漆酶活性高，大大超過漆酶基礎培養基，提高了產酶量，同時降低了產酶成本，在實驗室和工業上使用對漆酶的培養具有很好的效果，該培養基營養豐富、培養效果好，是理想的漆酶培養基。
文檔編號C12N9/02GK102719410SQ20121022067
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月29日 優先權日2012年6月29日
發明者周湘, 張昕, 林海萍 申請人:浙江農林大學