專利名稱：高效綠色降氟茯磚茶制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及農產品加工技術領域，具體涉及一種高效降低茯磚茶氟含量的茯磚茶 制備工藝，綠色降氟指無污染降低黑毛茶原料中氟含量。
背景技術：
氟是人類生命活動所必需的微量元素之一，人每日約需要攝入1. O 1. 5 mg的 氟。適量的氟可以促進人體骨骼和牙齒的鈣化，增強骨骼的強度。但是長期攝入過量氟 化物會引起氟中毒，如由于氟攝入過多可引起牙齒、骨骼等組織的病理改變，也可引起腎 臟、肝臟等器官的組織病變等。
茶樹是一種富集氟元素的植物，其中葉片是氟元素富集的一個重要場所，因茶樹 品種、葉片老嫩程度的不同每千克茶葉中的氟含量從幾十到上千毫克不等。因此，由氟元素 引起的茶的飲用安全性問題近年來逐漸引起人們的重視。目前，世界上大多數國家均制定 了人體每日氟攝入量標準。美國和德國提出的推薦標準是成人每日攝入量1. 5 4. O mg; 日本標準為2.1 2 .3 mg;世界衛生組(WHO)規定，人均每天適宜的氟攝入量為2. 5 4 .0 mg;我國制定的最大日攝入量標準為3. 5mg。而對于茶葉氟含量標準目前有農業部 2003年茶葉行業標準NY65922003規定的每千克茶葉中氟化物含量應低于200mg以及 GB1996522005中對磚茶含氟量規定的每千克中氟化物含量小于300 mg。地方病中心曾組 織全國專家對飲茶型氟中毒流行病學的系統研究，提出了我國磚茶含氟量衛生標準，磚茶 含氟應小于300 mg/kg，這是一個可避免大多數人不發生氟骨癥的標準。
茯磚茶是邊疆少數民族不可缺少的重要飲料，由于茯磚茶的原料黑毛茶較為粗 老，其中氟的含量相當高，為了提高邊銷茶的產品質量和飲用安全性，確保證少數民族人民 的身體健康，1997年，時任國務院總理的朱镕基同志作了 “要趕快組織低氟磚茶的生產”的 批示，此后中央財政多年撥付專項資金用于低氟黑茶的研究和開發并獲得了一些重要進 展。但氟含量降低問題目前仍未很好的解決，目前，降氟措施主要有選擇低氟品種、優化栽 培技術、提高原料嫩度、加工過程中化學降氟、磚茶水化學降氟等，從目前的研究進展看，培 育低氟品種是一項長期性措施，短期內尚難解決黑茶含氟量高的問題，而提高原料等級，勢 必加重消費者的負擔，可能導致部分消費者流失，在茶湯中添加降氟劑雖然降氟效果顯著， 但其大多為化學試劑，在除氟的同時可能造成新的污染或導致茶湯品質下降。因而亟待研 制一種無污染綠色降低茯磚茶中氟的具體工藝。發明內容
本發明所要解決的技術問題是解決上述現有降氟技術存在的問題，而提供一種 高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，能在茯磚茶制作期內實現無污染綠色降氟，而且不影響茯 磚茶的湯色、茶香、茶味、耐沖泡度等各種品質。
本發明采用的技術方案是一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，具體步驟如下①黑毛茶分篩、拼配；②綠色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分離、純化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；⑥添加冠突散囊菌孢子懸液；⑦壓制；⑧發花；⑨干燥和保存。
上述技術方案中，所述的黑毛茶分篩、拼配按照黑毛茶分級標準進行；所述的綠色 降氟方法為80°C的干凈水4-8分鐘后棄浸泡液；所述渥堆為37°C渥堆24小時控制含水量 為28% ;所述的冠突散囊菌的分離純化方法為用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基 平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定方法為挑取 純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養， 28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子 懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ;孢子懸液濃度最終確定控制在IO7 -1O8個/mL ;所述的添 加冠突散囊菌孢子懸液添加量為O. 25 mL/100g ;所述的壓制、發花、干燥及發花后保存條件 均為按照傳統處理方式。
PDA 指 Potato Dextrose Agar 的簡稱。
PDA瓊脂固體培養基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適 量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加 入蔗糖20g，混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分裝在三角瓶中，在1.1 kg/cm2 (121°C)中保 持20分鐘滅囷。
PDA液體培養基指上述培養基配制過程操作，但不添加瓊脂。
PDA平板指上述培養基滅菌結束后冷卻至50°C左右，在超凈工作臺上將培養基倒 入事先已經滅菌并干燥的培養皿中，待冷卻即為制得的PDA瓊脂固體培養基平板。
10%茯磚茶汁的PDA固體培養基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒 杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加IOOmL制備好的茯磚 茶汁，然后加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分 裝在三角瓶中，在1. lkg/cm2(12rC )中保持20分鐘滅菌。滅菌結束后冷卻至50°C左右， 在超凈工作臺上將10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基倒入事先已經滅菌并干燥的培養皿 中，待冷卻即為制得的10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板。
10%茯磚茶汁的PDA液體培養基與上述操作過程相同，但不添加瓊脂。
平板梯度稀釋法為將成品茯磚樣本用植物微型粉碎機將樣品粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig 樣品，定容IOmL,即配成I X 10 — i/mL的獲磚樣本溶液,從上述溶液中取I mL定容10 mL 配成I X 10 — 'g/mL的茯磚樣本溶液，依次配制成濃度I X 10 —3、I X 10 —4、I X 10 — 5g/mL的茯 磚茶樣本溶液各10 mL備用。取1X10 —3、IX 10 —4、1X10 —5g/mL的茯磚樣本溶液各0.5 mL，用涂布器涂布到冠狀散囊菌快速分離培養基平板上，超凈臺上吹干15分鐘左右，倒置平皿，28°C培養，3 — 4天后挑取優勢菌——金花菌，同樣條件繼代培養直至純化。
畫線接種指用滅菌的接種針在超凈臺上將已經生長好的菌落挑取，在新的固體培 養基平皿畫線分離相應微生物。
金花菌落指金花菌在固體培養基平板上生長到一定時候形成的一個菌落集合體， 菌落是指聚集在一起的微生物團。
茯磚茶汁的具體制備方法按照Ig茯磚茶樣本比30mL蒸餾水的比例稱取20g茯 磚茶，加入600mL蒸餾水，100°C水浴2小時，待稍冷卻后用量筒定容至600mL即為制備好的茯磚茶汁。
配成ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—5是指濃度，單位為g/mLo孢子懸液濃度IO7-1O8個/ ml中的“個”是指單個的金花菌的子囊孢子。計數方法為用梯度稀釋法涂布在添加10%茯 磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上生長計數或用722型分光光度計測量其OD值，控制在 0. 6左右，使金花孢子懸液濃度控制在每毫升IO7-1O8個金花孢子。
上述金花即冠突散囊菌。
本發明提供了一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，能在茯磚茶制作期內實現無污 染綠色降氟，而且不影響茯磚茶的湯色、茶香、茶味、耐沖泡度等各種品質。
圖1為本發明培養7天分離純化的冠突散囊菌落照片；圖2為本發明冠突散囊菌的孢子懸液20天培養結果照片；圖3為一品茯磚原料、百姓茯磚降氟茯磚茶發花結果照片；圖4為一品茯磚原料、百姓茯磚降氟茯磚茶多次沖泡效果圖；圖5為綠色降氟對茯磚茶中氟含量、茶多酚、水浸出物、咖啡堿成分影響鑒定表，所有 檢測方法均按照國標進行。
具體實施方式
1.黑毛茶分篩、拼配按照傳統黑毛茶分級標準對原料進行分篩、拼配以方便壓制成對應的不同檔次的茯磚茶。
2.綠色降氟以干凈水，水溫80°C維持浸泡4-8分鐘(依原料嫩度而定)后浙干,棄浸泡液。一級黑毛 茶水溫80°C維持浸泡4分鐘，二級黑毛茶水溫80°C維持浸泡5分鐘，三級黑毛茶水溫80°C 維持浸泡6分鐘，四級黑毛茶水溫80°C維持浸泡7分鐘，五級黑毛茶水溫80°C維持浸泡8 分鐘。
3.渥堆；37°C渥堆24小時控制含水量為28%。
4.冠突散囊菌的分離、純化冠突散囊菌即金花，從益陽茶廠成品湘益牌茯磚樣本中分離。具體分離和純化過程為 將成品湘益牌茯磚樣本粉碎，用平板梯度稀釋法在添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養 基平板上28°C培養，挑取金黃色優勢菌落，用同樣的培養基繼代培養直至純化。
5. 一定老化度金花的孢子懸液制備與濃度確定挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養 基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養15天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋 孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL。
6.添加冠突散囊菌孢子懸液按照每IOOg黑毛茶添加O. 25mL冠突散囊菌孢子懸液的比例，以噴霧的形式添加，混勻。
7.壓制按照傳統工藝條件處理方式壓制。
8.發花控制濕度和溫度發花條件為按照傳統工藝條件處理。
9.干燥和保存按照傳統工藝條件處理。
實施例1 :冠突散囊菌即金花的分離、純化將成品湘益牌茯磚樣本用植物微型粉碎機粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取 Ig 樣品，定容 10mL，配成 ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—4、10_5 各 10mL，取 10' 10_4、10_5 三個梯度各0.5mL涂布添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板，超凈臺上吹干，28°C培養3天，挑 取金黃色優勢菌落，畫線至添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上，同樣條件繼續 培養直至純化。
分離純化的金花菌落見附圖1。
實施例2 :冠突散囊菌即金花的孢子懸液制備挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養 基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養15天，震蕩分散分生孢子，用雙層 無菌紗布過濾，再后280rpm振蕩培養分散分生孢子，無菌水稀釋孢子懸液至OD值為0. 6，孢 子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL，即為可用的金花孢子懸液。
金花的孢子懸液培養結果見附圖2。
實施例3 :降氟茯磚茶發花驗證分別取益陽茶廠一品茯磚原料、百姓茯磚原料各lOKg，以不進行綠色降氟作為對照，按 照具體實施方式
中1-9步方法，在湖南省黑茶品質與發酵關鍵技術控制產學研示范基地進 行發花實驗，其降氟率能達到50%以上，金花生長普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，菌花 香濃郁。沖泡結果說明湯色與對照幾乎沒有差別，同樣泡十遍湯色不變，味道更醇和，無新 茶的澀味；檢測結果表明，經過水浸降氟處理后的茯磚茶中茶多酚、水浸出物、咖啡堿成分 與對照相比，下降量十分微弱，口味與對照相比，嘗不出明顯改變，故而可以說對茯磚茶品 質影響甚微。
降氟茯磚茶發花見附圖3。
低氟茯磚茶多次沖泡效果見圖4。
高效綠色降氟對茯磚茶中氟含量、茶多酚、水浸出物、咖啡堿成分影響見圖5。
權利要求
1.一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，其特征在于具體步驟如下①黑毛茶分篩、拼配；②綠色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分離、純化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；⑥添加冠突散囊菌孢子懸液；⑦壓制；⑧發花；⑨干燥和保存。
2.根據權利要求1所述的高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，其特征在于所述的黑毛茶分篩、拼配按照黑毛茶分級標準進行；所述的綠色降氟方法為80°C的干凈水浸泡4-8分鐘后棄浸泡液；所述渥堆為37°C渥堆24小時控制含水量為28% ;所述的冠突散囊菌的分離純化方法為用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定方法為挑取純化的金花菌落，接種至添加10% 茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養5天，然后升高溫度至30-32°C培養14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ； 孢子懸液濃度最終確定控制在IO7 -1O8個/mL ;所述的添加冠突散囊菌孢子懸液添加量為 O. 25 mL/100g ;所述的壓制、發花、干燥及發花后保存條件均為按照傳統處理方式。
全文摘要
一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，具體步驟如下①黑毛茶分篩、拼配；②綠色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分離、純化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；⑥添加冠突散囊菌孢子懸液；⑦壓制；⑧發花；⑨干燥和保存。本發明提供了一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，能在茯磚茶制作期內實現無污染綠色降氟，而且不影響茯磚茶的湯色、茶香、茶味、耐沖泡度等各種品質。
文檔編號A23F3/06GK103053722SQ20131001470
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月16日 優先權日2013年1月16日
發明者劉石泉, 趙運林, 龍立平, 胡治遠 申請人:湖南城市學院