一種能夠提高非酶糖基化反應抑制率的猴頭菌發酵液的制備方法
【專利摘要】一種能夠提高非酶糖基化反應抑制率的猴頭菌發酵液的制備方法，包括以下步驟：(1)斜面培養；(2)種子液的培養；(3)將猴頭菌種子液以4％的接種量接種到無葡萄糖發酵培養基中，在30℃，搖床轉速150轉/分鐘的條件下發酵培養2～4天；(4)向發酵液中補加葡萄糖，葡萄糖的補加量為以發酵培養基體積計、補加后濃度為20g/L，其他培養條件不變，繼續發酵培養2～6天。本發明顯著提升了猴頭菌發酵液對非酶糖基化反應的抑制率，對研究猴頭菌在治療糖尿病及其并發癥方面將會有巨大的推進作用。
【專利說明】一種能夠提高非酶糖基化反應抑制率的猴頭菌發酵液的制 備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物發酵領域，尤其是涉及一種能夠提高非酶糖基化反應抑制率的 猴頭菌的發酵方法。
【背景技術】
[0002] 猴頭菌又名猴頭菇，屬于擔子菌門、傘菌綱、紅姑目、猴頭菌科，除了是一種美味 佳肴外，其菌絲體和發酵液中含有豐富的多糖、低聚糖、留體化合物、脂肪酸、萜類化合物、 酚類化合物、吡喃酮類化合物等活性物質，因此具有多種藥用功效，包括保護和修復胃腸粘 膜、抗腫瘤、增強機體免疫力、保護神經系統、調節脂質代謝紊亂等，同時對糖尿病及其并發 癥也具有良好的治療效果。
[0003] 近年來，中國國糖尿病患病率逐年上升，已成為影響和危害國民身體健康的重要 威脅。糖尿病是以高血糖為特征，由于內分泌系統代謝障礙引起的疾病，具有患病率高、死 亡率高、致殘率高等危害。在患者患病期間，容易引起多種并發癥，包括糖尿病腎病、視網膜 病變、糖尿病周圍神經病變、牙周病和動脈粥樣硬化等疾病。蛋白質非酶糖基化反應是引起 糖尿病及其慢性并發癥的諸多重要因素之一，因此有效抑制蛋白質的非酶糖基化反應可以 達到防治糖尿病及其并發癥的效果。
[0004] 非酶糖基化反應是指由蛋白質、氨基酸等的游離氨基端與還原糖的羰基通過一系 列復雜的非酶促反應，最終生成不可逆的糖基化終末產物的過程。自然界資源豐富且來源 廣泛，多種食藥用真菌由于具有多種活性物質，具有抑制非酶糖基化反應的良好效果，因此 可作為預防和治療糖尿病及其并發癥的來源。
[0005] 目前對猴頭菌發酵液抑制非酶糖基化反應的研究非常少，現有的發酵控制手段及 策略對提高猴頭菌發酵液對非酶糖基化反應抑制率的效果也非常不理想。
【發明內容】
[0006] 針對現有技術存在的上述問題，本 申請人:提供了一種能夠提高非酶糖基化反應抑 制率的猴頭菌發酵液的制備方法。本發明顯著提升了猴頭菌發酵液對非酶糖基化反應的抑 制率，對研究猴頭菌在治療糖尿病及其并發癥方面將會有巨大的推進作用。
[0007] 本發明的技術方案如下：
[0008] -種能夠提高非酶糖基化反應抑制率的猴頭菌發酵液的制備方法，包括以下步 驟：
[0009] (1)斜面培養：將猴頭菌接種于斜面培養基上，在30°C下培養至菌絲體長滿斜面；
[0010] (2)種子液的培養：將斜面中生長的猴頭菌菌體接種到種子培養基中，在30°C，搖 床轉速150轉/分鐘的條件下培養7天；
[0011] (3)將猴頭菌種子液以4%的接種量接種到無葡萄糖發酵培養基中，在30°C，搖床 轉速150轉/分鐘的條件下發酵培養2?4天；
[0012] (4)向發酵液中補加葡萄糖，葡萄糖的補加量為以發酵培養基體積計、補加后濃度 為20g/L，其他培養條件不變，繼續發酵培養2?6天。
[0013] 所述的斜面培養基的配方為葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，馬鈴薯200g/L， VB110Xl(T3g/L，用自來水配置，121°C滅菌 15min。
[0014] 所述的種子培養基的配方為麩皮15g/L，玉米粉20g/L，葡萄糖20g/L，MgS04lg/L， KH2P042g/L，酵母膏 3g/L，VB115X l(T3g/L，用自來水配置，pH 自然，121°C滅菌 15min。
[0015] 所述的發酵培養基的配方為麩皮15g/L，玉米粉15g/L，MgS04lg/L，KH 2P042g/L，用 自來水配置，pH自然，121°C滅菌15min。
[0016] 優選的，步驟（3)的發酵培養時間為3天，步驟（4)的發酵培養時間為4天。
[0017] 本發明有益的技術效果在于：
[0018] 本發明從補料控制策略出發，基于碳源添加對猴頭菌發酵液抑制活性結果，提出 了一種可以有效多的提高其發酵液抑制非酶糖基化反應的方法。本發明通過控制向發酵培 養基中補加葡萄糖的控制策略，顯著提升了猴頭菌發酵液對非酶糖基化反應的抑制率，在 發酵的第3天向發酵培養基中補加20g/L葡萄糖后，繼續發酵4天后，測得猴頭菌發酵液對 非酶糖基化反應的抑制率為92. 55%，對研究猴頭菌在治療糖尿病及其并發癥方面將會有 巨大的推進作用。
【具體實施方式】
[0019] 以下對本發明的優選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優選實施例僅用 于說明和解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0020] 其中，非酶糖基化反應抑制率（NEG)的測定方法如下：
[0021] 蛋白質體外NEG反應體系為乙二醛、牛血清白蛋白和疊氮化鈉按照質量濃度 12mg · mL-l、10mg · mL-1 和 2. Omg · mL-1 分別溶于 0· 2mol · L-1KH2P04-K2HP04 磷酸緩沖 液中（pH = 7. 4)。量取待測樣品液ImL與上述反應體系液ImL充分混合，以蒸饋水為空白 對照樣品，于37°C生化培養箱避光反應15天，反應結束后向反應液中補充蒸餾水至體積為 10mL。利用熒光光度計測定樣品的熒光強度，激發波長和發射波長分別為370nm和440nm， 狹長分別為5nm和6nm，計算公式如下：
【權利要求】
1. 一種能夠提高非酶糖基化反應抑制率的猴頭菌發酵液的制備方法，其特征在于包括 以下步驟： (1) 斜面培養：將猴頭菌接種于斜面培養基上，在30°C下培養至菌絲體長滿斜面； (2) 種子液的培養：將斜面中生長的猴頭菌菌體接種到種子培養基中，在30°C，搖床轉 速150轉/分鐘的條件下培養7天； (3) 將猴頭菌種子液以4%的接種量接種到無葡萄糖發酵培養基中，在30°C，搖床轉速 150轉/分鐘的條件下發酵培養2?4天； (4) 向發酵液中補加葡萄糖，葡萄糖的補加量為以發酵培養基體積計、補加后濃度為 2〇g/L，其他培養條件不變，繼續發酵培養2?6天。
2. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的斜面培養基的配方為葡萄糖 20g/L，瓊脂 20g/L，馬鈴薯 200g/L，VB1 10 X 10_3g/L，用自來水配置，121°C滅菌 15min。
3. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的種子培養基的配方為麩皮 15g/L，玉米粉 20g/L，葡萄糖 20g/L，MgS04lg/L，KH2P042g/L，酵母膏 3g/L，VB1 15 X 10_3g/L， 用自來水配置，pH自然，121°C滅菌15min。
4. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的發酵培養基的配方為麩皮 15g/L，玉米粉 15g/L，MgS04lg/L，KH2P042g/L，用自來水配置，pH 自然，121°C滅菌 15min。
5. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3)的發酵培養時間為3天，步 驟（4)的發酵培養時間為4天。
【文檔編號】C12P1/02GK104388468SQ201410578568
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月24日 優先權日:2014年10月24日
【發明者】丁重陽, 田超, 彭林, 顧正華, 張梁, 石貴陽 申請人:江南大學