一種分離單個細胞的裝置制造方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種分離單個細胞的裝置，所述裝置包括依次連接的細胞采集管、手持管、連通管、微孔過濾器和口吸管；其中，所述細胞采集管被設置用于從樣品中吸取單個細胞；所述手持管被設置用于控制所述細胞采集管；所述微孔過濾器被設置用于阻隔微生物。使用本實用新型的分離單個細胞的裝置，通過口吸法可以簡單有效地挑取單個細胞，以用于后續的細胞培養、基因組測序等科學研究。
【專利說明】一種分離單個細胞的裝置
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及生物【技術領域】，具體地涉及一種分離單個細胞的裝置。
【背景技術】
[0002]近年來，單細胞水平的研宄已廣泛應用于單細胞PCR擴增、基因組測序和組織工程研宄等領域。隨著研宄的深入，單個腫瘤細胞的有效分離和培養成為了腫瘤細胞發生的分子機制、腫瘤細胞的靶向治療以及微環境相互作用等研宄中迫切解決的難題之一。
[0003]當前的單細胞分離方法包括:(I)熒光流式細胞技術分離法:該方法可有效獲得單個細胞，但是對細胞儀的性能要求較高，儀器價格高昂；(2)激光顯微切割術:能夠從組織中分離單個細胞，但是不適用于細胞培養與擴增，需要操作者熟練掌握技術；(3)顯微操控儀:采用顯微操控技術從單細胞懸液中吸取單細胞，但成本高，操作復雜；(4)手工機械分離法:在倒置顯微鏡下直接分離細胞，但容易損傷細胞。
[0004]有鑒于現有技術的上述缺陷，本領域技術人員致力于開發一種簡單、有效、低成本的單細胞分離裝置。
實用新型內容
[0005]為了解決現有技術中單個細胞分離困難、設備要求高、技術依賴性強的問題，本實用新型提供了一種結構簡單、容易操作的分離單個細胞的裝置，利用該裝置進行分離的單個細胞可用于后續細胞培養，或者用于核酸或蛋白分析的方法。
[0006]基于以上目的，本實用新型提供了一種分離單個細胞的裝置，所述裝置包括依次連接的:
[0007]細胞采集管、手持管、連通管、微孔過濾器和口吸管。
[0008]其中，所述細胞采集管被設置用于從樣品中吸取單個細胞；
[0009]所述手持管被設置用于控制所述細胞采集管；
[0010]所述微孔過濾器被設置用于阻隔微生物。
[0011]在另一優選例中，所述裝置還包括第一接頭，所述細胞采集管和所述手持管通過所述第一接頭連接。
[0012]在另一優選例中，所述第一接頭由硅膠制成，在所述接頭的一端設有供所述細胞采集管插入的孔。
[0013]在另一優選例中，所述手持管中填充有吸附材料，所述吸附材料優選為脫脂棉。
[0014]在另一優選例中，所述手持管由硬質透明材料制成。所述硬質透明材料包括但不限于玻璃、塑料等。
[0015]在另一優選例中，所述裝置還包括第二接頭，所述微孔過濾器和所述口吸管通過所述第二接頭連接。
[0016]在另一優選例中，所述微孔過濾器的過濾面積為口吸管橫截面面積的2-10倍，優選地為3-5倍。
[0017]在另一優選例中，所述微孔過濾器孔徑為0.1-0.5 μ m，優選地為0.1-0.22 μ m。
[0018]在另一優選例中，所述細胞采集管為微徑玻璃管。
[0019]在另一優選例中，所述微徑玻璃管直徑為15-50 μ m，優選地為25-45 μ m，更優選地為30 μπ?ο
[0020]在另一優選例中，所述連通管的長度為30cm-60cm，優選地為50cm。
[0021]在另一優選例中，所述連通管由柔性的材質制成，所述柔性的材質包括但不限于橡膠、PVC、聚烯烴熱塑彈性體(TPE)。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022]圖1是本實用新型一個較佳實施方式的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0023]下面結合具體實施例，進一步闡述本實用新型。應理解，這些實施例僅用于說明本實用新型而不用于限制本實用新型的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0024]實施例1
[0025]如圖1所示，本實用新型的分離單個細胞的裝置包括依次連接的細胞采集管1、手持管3、連通管4、微孔過濾器5和口吸管6 ;所述細胞采集管I被設置用于從樣品中吸取單個細胞；所述手持管3被設置用于控制所述細胞采集管，通過握持手持管3控制細胞采集管的運動方向；所述微孔過濾器5被設置用于阻隔微生物。
[0026]本實施例中，細胞采集管I為內徑為30 μπι的微徑玻璃管。所述裝置還包括第一接頭2，所述細胞采集管I和所述手持管3通過所述第一接頭2連接。接頭2由硅膠制成，在所述接頭2的一端設有供所述細胞采集管I插入的孔。該設計方便隨時更換細胞采集管1，以分離不同的細胞，或處理不同的樣品，而不用更換整個細胞分離裝置。
[0027]在手持管3為外徑為10_的中空中性玻璃管，填充有脫脂棉，可以吸取使用過程中產生的水汽，也可以吸取過量吸入的細胞培養液。
[0028]本實施例中，連通管4為50cm長的內徑為8mm外徑為12mm的橡膠管，一端于手持管3連接，另一端宇微孔過濾器5連接。
[0029]微孔過濾器5的孔徑為0.2 μ m，可以有效的將人與細胞樣品相隔離，既能有效的防止人的呼出氣體對細胞樣品的污染，也可以防止細胞樣本可能帶有的微生物對人造成感染。微孔過濾器5的過濾面積遠大于口吸管橫截面的面積，使得吸氣更順暢，操作更穩定。
[0030]在其它實施方式中，在微孔過濾器5和口吸管6之間設置第二連接頭，在口吸管6內放入適量干凈的吸水紙，以吸附呼出氣體中的水蒸氣，當需要更換口吸管時，可以方便地將口器管6取下更換，而不需要更換整個的分離裝置。
[0031]在使用本實用新型的裝置前，需要檢測裝置的氣密性，將裝置置于水中，從口吸管6吹氣，觀察各個連接處是否有氣泡產生，如果沒有氣泡產生，而且只有細胞采集管I處冒氣泡，說明裝置氣密性好，可以用于單細胞挑取實驗。
[0032]使用方法:
[0033]挑取細胞之前，用細胞采集管蘸少量PBS無菌溶液，在4倍物鏡下，將細胞采集管緩慢插入到細胞懸液中，顯微鏡觀察控制，在操作過程當中，要確保細胞采集管沒有吸入細胞懸液。將顯微鏡切換至10倍鏡下，觀察顯微鏡下的細胞采集管和細胞，將細胞采集管移至只有I個細胞的視野，然后對準細胞，輕微口吸，保證細胞進入到細胞采集管。吸取過程中保持呼吸均勻，不能用力過猛，防止吸取多個細胞。
[0034]將吸入細胞的細胞采集管移出，插入細胞培養液或者細胞裂解液，小心吹出。如果是后續培養，則將吸取的細胞置于細胞培養液中；如果是后續進行核酸或蛋白分析，則將細胞置于相應的裂解液中，立即進行細胞裂解。
[0035]本實用新型的操作簡單，耗時短，成本低，具有很好的應用價值。
[0036]實施例2 —種用于后續培養的活的單個細胞的分離
[0037]取培養好的細胞懸液100 μ L,置于96孔板的一個小孔中，使用實施例1中的分離單個細胞的裝置進行單細胞分離。
[0038](I)在倒置顯微鏡下面觀察96孔板中的細胞，確定細胞挑取視野。
[0039](2)先將細胞采集管插入PBS中并迅速取出再插入PBS，由于毛細管吸附和大氣壓強的作用，玻璃口吸管中會自動吸入由一個氣泡分隔成兩段的PBS液體。
[0040](3)在4倍物鏡下，將細胞采集管緩慢插入到細胞懸液中，在顯微鏡下觀察管孔，直到能清楚地看到管孔為止，在操作過程當中，要確保細胞采集管沒有吸入細胞懸液。根據目的細胞大小，將顯微鏡切換至10倍或20倍鏡下，觀察顯微鏡下的細胞采集管和細胞，將細胞采集管管孔移至只有I個細胞的視野，然后管孔對準細胞，輕微用口吸取，保證細胞進入到細胞采集管。吸取過程中保持呼吸均勻，不能用力過猛，防止吸取多個細胞。
[0041](4)將吸入細胞的細胞采集管移出，插入細胞培養液中，小心吹出至PBS氣泡處。將吸取的細胞置于細胞培養液中進行進一步細胞培養。
【權利要求】
1.一種分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述裝置包括依次連接的細胞采集管、手持管、連通管、微孔過濾器和口吸管； 其中，所述細胞采集管被設置用于從樣品中吸取單個細胞； 所述手持管被設置用于控制所述細胞采集管； 所述微孔過濾器被設置用于阻隔微生物。
2.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述裝置還包括第一接頭，所述細胞采集管和所述手持管通過所述第一接頭連接。
3.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述手持管中填充有脫脂棉。
4.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述手持管由硬質透明材料制成。
5.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述裝置還包括第二接頭，所述微孔過濾器和所述口吸管通過所述第二接頭連接。
6.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述微孔過濾器的過濾面積為口吸管橫截面面積的2-10倍。
7.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述微孔過濾器孔徑為0.1-0.5 μ m。
8.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述細胞采集管為微徑玻璃管。
9.如權利要求8所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述微徑玻璃管內徑為25-45 μm0
10.如權利要求1所述的分離單個細胞的裝置，其特征在于，所述連通管的長度為30cm_60cmo
【文檔編號】C12M1/12GK204224593SQ201420693779
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月18日 優先權日:2014年11月18日
【發明者】張楨珍, 李晶, 樓敬偉, 許騁, 吳云鳴, 易靜, 丁飛飛 申請人:上海張江轉化醫學研發中心有限公司, 上海寶藤生物醫藥科技有限公司, 上海寶藤醫學檢驗所有限公司