專利名稱：間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種儲存人體基因信息的紀念物品及其制作方法，具體地說，涉及一種內含人體組織細胞的紀念物品，該物品中包含的人體組織細胞中儲存了該個體的全部基因信息，該物品可以單獨構成一件紀念物品，或以胚件的形式鑲嵌、粘接在其他物品上共同組成一件紀念物品。
背景技術：
紀念品是一類承載了人類特定情感的物品，其紀念價值大小與特定的人或特定的事件相關。例如現代人通常通過保留自己先人的骨灰、遺物、像片來寄托對先人的懷念，情侶、朋友之間往往通過互贈物品來表達彼此之間的情誼，Fans們也往往希望得到他們崇拜迷戀對象的某種物品來滿足自己的心理需求。能夠承載人類情感元素的產品往往能夠獲取高的附加值，各種奢侈品的高價格就是很好的例子。
紀念物品中來自個體身體的物質具有個體的唯一性，因而具備特定的情感意義， 是極具情感價值的紀念物品。例如，在歐洲人們有保存愛人、先人或崇拜對象的頭發來寄托情感的習慣，古代中國、印度等東方國家有保存供奉僧人舍利子的習慣，非洲人有保存供奉先人頭骨的習慣，等等。但這些物品是一些“死”物質，其中并沒有儲存有代表個體生命特異性的基因信息。
世界上沒有完全一樣的人，這種唯一性是由其基因組決定的。含有人體基因組的物品具有個體的唯一性，其紀念意義是一般的紀念性物品所不能比擬的。特別是將來科學技術的發展，個體的基因組有可能在新的細胞中重新表達，這意會著該個體將來存在復活的可能性。將自己的生命信息永遠地保存下來是人類夢寐以求的愿望，將自己的基因信息完整保存下來就有可能實現這個愿望。
基因信息儲存于DNA中，人的DNA存在于細胞的細胞核和線粒體當中，每個正常的細胞中包含了該個體的全部基因組，從基因信息的角度說，來自個體身體中的正常細胞可以代表該個體。要保存個體的完整基因組，必須保存完整的細胞。但組織細胞脫離機體后或機體死亡后會細胞會很快發生自溶，使其中的DNA降解。
生物醫學研究發現，如果將離體組織細胞迅速放入福爾馬林等生物固定劑中，可使蛋白質發生變性而避免細胞的自溶，使細胞的結構、成分穩定地保存下來。但有的固定劑會與DNA發生反應而造成DNA的破壞，選擇合適的固定劑可以使細胞中的DNA基本不受損傷(Sato Y, 1990 ；■，1990)，但溶液或空氣中的氧在長期保存過程中會對DNA造成損傷， 如果能選擇合適的保存方法使得固定的細胞隔絕空氣，就可以避免長期保存過程中氧對 DNA結構的損傷，從而使細胞中的DNA完整保存下來。將固定后的組織細胞包埋在石蠟中可較好地解決這個問題。從石蠟包埋組織中提取DNA目前也不存在技術上的困難(Goelz SE, 1985 ；Dubeau L, 1986 ；劉水平，2009)。通過一定的方法將穩定保存了 DNA的組織細胞材料與普通紀念物品組合在一起就可以制造一種含有特定個體基因組信息的紀念物品，具備特定的紀念價值。本發明的目的就是提供一種含有特定個體完整細胞的紀念物品，該紀念物品可以作為胚件通過鑲嵌、粘接等方式與其他紀念物品組合在一起，也可以單獨作為一件紀念物品，從而構成一件具有含有該個體全部基因信息的紀念物品。如何使完整細胞中的基因組長期穩定地保存在一種適合個人攜帶、家庭擺設中紀念物品中，并且在需要時還可以方便地將其中保存的細胞取出進行DNA的分析檢測，是本發明要解決的技術問題。
包含人體材料的工藝紀念品已有幾項公開專利。公開專利ZL 02120544. 2公開了一種內含DNA的飾品，將提取于人體細胞的DNA裝于某一囊泡中全封閉于飾品中，該方法得到的DNA只是細胞基因組中的部分DNA，并非完整的全部基因組，并且這種狀態下的DNA常溫下不能長期保存，難以達到作為紀念物長期保存的要求。公開專利CN 1817^53A公開了一種內含DNA的飾品，同樣得到的DNA只是細胞基因組中的部分DNA，并非完整的全部基因組，并且這種狀態下的DNA常溫下不能長期保存，難以達到作為紀念物長期保存的要求。公開專利CN 101711619 A公開了一種包含人體脫離物的體物親情紀念墜，其中所說的人體脫離物未經固定劑處理，不能保存細胞中所含的DNA成分。發明內容
本發明的目的之一是提供一種含有特定個體完整細胞團的紀念物品。在紀念物品中的細胞團細胞中儲存了該個體的全部基因信息。該紀念物可以作為胚件，通過鑲嵌、粘接等方式與其他紀念物品組合在一起，或單獨作為紀念物件，從而構成一件含有該個體全部基因信息的紀念物品。
本發明的目的之二是提供一種含有特定個體完整細胞團的紀念物品的制備方法。 通過該方法將包含有人體全部基因組的組織細胞用固定劑固定、包埋于石蠟和樹脂中，使得細胞中的DNA既得到了完整和長期的保存。
為實現本發明的目的采用的技術方案是 1.固定劑固定處理人體組織細胞將取自人體的組織細胞迅速置于固定劑中低溫下充分固定。
所述的的組織細胞是指從單一人體中獲得的血液細胞、胎盤組織、臍帶組織、臍帶血、闌尾組織、毛囊細胞組織塊。
所述的固定劑是指中性緩沖福爾馬林溶液、乙醇溶液或丙酮。
所述的低溫是指5 10°C之間的溫度。
2.石蠟包埋固定后的組織細胞經脫水劑脫水、二甲苯透明、石蠟透蠟，最后全封閉狀包埋于石蠟中，石蠟塊可做成各種特定形狀。
所述的脫水劑為濃度梯度酒精或丙酮。
所述的透蠟是指將石蠟預先反復煮沸或通過抽真空以去除其中的空氣。
3.樹脂包埋在預先制備的模具中采用無氧空腔隔層間接包被法方式將石蠟塊全封閉于樹脂中。
所述的組織細胞是指從單一人體獲得的血液細胞、胎盤組織、臍帶組織、臍帶血、 闌尾組織或毛囊細胞。
所述的兩層包被方式是指是在石蠟與樹脂之間含有無氧空腔層；無氧空腔層中可同時或分別充有僅帶有顏色的液體或帶有熒光效果的熒光物質液體，以增加紀念物品的美感。
采用含有無氧空腔層包被時，樹脂也可制成一內含空腔的杯狀體結構，并預留一通向空腔的小杯口 ；包埋有組織細胞的石蠟塊可制成小顆粒狀，懸浮在溶解有染料的溶液中通過杯口注入空腔，然后封閉小杯口即可。
本發明所述的樹脂是指本領域技術人員公知的用于制造工藝品的環氧樹脂、聚甲基丙烯酸甲酯樹脂或不飽和聚酯樹脂。
本發明產生了以下有益效果1、本發明通過將包含有人全基因組的組織細胞選用合適的固定劑固定、包埋于石蠟和樹脂中，使得細胞中的DNA既得到了完整和長期的保存，又便于單獨作為紀念物品或以胚件的形式與其他物件通過鑲嵌、粘接等方式組合在一起，使得該物件上保存了細胞提供者的完整細胞并因此而保存了細胞提供者的全部基因信息，極大地增強了該紀念物件的情感載體意義，因而大大增加了該紀念物件的紀念價值。長期永久保存自身生命是人類的根本愿望，本發明解決了將包含人全部基因信息的組織細胞長期穩定保存在一種合適物品中的技術問題，解決了人類長期以來渴望解決的長期保存自身生命信息的技術難題。
2、本發明對于人類遺傳資源的保護也有重大價值。一般情況下，人們只是在醫院進行病理檢查中才對身體病變部位組織細胞進行取材檢驗，目的是檢查該部位組織細胞是否出現某種病變，取下的組織細胞在檢測后大都丟棄或短暫保存后丟棄。本發明將人的組織細胞經固定處理后保存于紀念物件中，使得人們可以樂意和方便地長期保存自身或他人的基因資源，這些保存下來的人類遺傳資源可以為將來的科學研究提供材料。特別是在現代社會越來越多的人不愿生育的情況下，一些珍貴的人類遺傳資源有可能通過這種方式得以保存下來。
圖1是組織細胞逐層包被于石蠟和樹脂中的紀念物幣狀正面結構示意圖。
圖2是實施例5的組織細胞逐層包被于石蠟、樹脂中的紀念物掛件狀的結構示意圖。結構示意圖中，組織細胞包埋于石蠟中，含組織細胞的石蠟塊切成小顆粒狀，再包埋于樹脂中，石蠟與樹脂之間有帶顏色的液體。
具體實施方式
以下結合附圖以實施例方式對本發明作進一步闡述，但并不因此而限制本發明的范圍。
圖1中，1是樹脂；2是組織細胞；3是石蠟；4是同時或分別充有帶顏色的液體和有熒光效果的熒光物質液體。
圖2中，1是樹脂；2是組織細胞；3是石蠟；4是同時或分別充有帶顏色的液體和有熒光效果的熒光物質液體。
實施例1步驟1.取材固定抽取人靜脈血廣10 mL于肝素處理過的離心管中，1000 rpm離心 5min，去掉上層上清液，留下細胞沉淀，將5 mL預冷緩沖福爾馬林固定液(4 °C)加入到細胞沉淀中固定細胞10 min，期間輕輕振蕩使沉淀分散；步驟2.脫水、透明和石蠟包埋固定完成后加入梯度濃度酒精脫水，酒精濃度梯度為 75% — 85% — 95% — 100% — 100%,每次脫水10 min,然后IOOOrpm離心5 min使細胞沉淀下來；然后使用二甲苯進行透明處理，程序為1/2純酒精+1/2 二甲苯一二甲苯一二甲苯，每次5 min，然后IOOOrpm離心5 min使細胞沉淀；透蠟的程序為1/2 二甲苯+石蠟一石蠟一石蠟，每次10 min, 50^60 °C下進行，每次用膠頭吸管從離心管底部吸取細胞進入下一道程序；包埋先將反復煮沸去除空氣的石蠟置于60 °C熔化，倒入模具中置于室溫下，待石蠟呈半凝固狀態時，吸取透蠟好的血細胞滴入，呈半凝固狀態時再次加入60 °C熔化的石蠟是充滿整個模具，置于室溫中下凝固后即完成石蠟包埋過程，石蠟塊可雕刻成特定形狀，也可事先制備特定形態的模具；步驟3.在預先制備的模具中，樹脂先制成一內含空腔的杯狀體結構，并預留一通向空腔的小杯口 ；包埋有組織細胞的石蠟塊可制成小顆粒狀，懸浮在溶解有染料的溶液中，通過杯口注入空腔，然后封閉小杯口即可。溶液可為液體石蠟、有熒光效果的熒光物質液體或水性儲存液，依染料的極性來選擇。
實施例2將實施例1中步驟1的固定劑改為95%酒精，步驟2中梯度酒精脫水直接從100%開始。 其它同實施例1。
實施例3步驟1.取材固定抽取人靜脈血廣10 mL于肝素處理過的離心管中，IOOOrpm離心5 min,去掉上層上清液，留下細胞沉淀，加入4°C丙酮固定10 min,離心，去上清液；步驟2.脫水、透明和石蠟包埋將細胞沉淀用丙酮分別在4°C和室溫脫水各15 min, 再分別用苯甲酸甲酯和二甲苯透明，每次15min，透蠟、石蠟包埋程序同實施例1 ； 步驟3.樹脂包埋同實施例1步驟3。
實施例4步驟1.取材固定抽取人靜脈血廣10 mL于肝素處理過的離心管中，IOOOrpm離心 5min，去掉上層上清液，留下細胞沉淀，將5 mL預冷緩沖福爾馬林固定液(4 °C)加入到細胞沉淀中固定細胞10 min,期間輕輕振蕩使沉淀分散，IOOOrpm離心5min，去掉上層上清液；5%質量濃度的瓊脂加熱溶解，冷卻至50 °C左右時滴加到固定后的細胞上，輕輕搖動離心管使細胞懸浮于瓊脂中，瓊脂塊凝固后適當修剪，去除多余瓊脂；步驟2.脫水、透明和石蠟包埋固定完成后加入梯度濃度酒精脫水，酒精濃度梯度為 75% — 85% — 95% — 100% — 100%,每次脫水15 min ；然后使用二甲苯進行透明處理，程序為 1/2純酒精+1/2 二甲苯一二甲苯一二甲苯，每次15 min ；透蠟的程序為1/2 二甲苯+石蠟 —石蠟一石蠟，每次10 min, 50^60 °C下進行，每次用鑷子夾取瓊脂塊進入下一道程序；包埋將通過反復煮沸去除空氣的石蠟置于60 ！熔化，倒入模具置于室溫下，待石蠟呈半凝固狀態時，將透蠟好的瓊脂塊放入，呈半凝固狀態時再次加入60 ！熔化的石蠟至充滿整個模具，置于室溫中下凝固后即完成石蠟包埋過程，石蠟塊可雕刻成特定形狀，也可事先制備特定形態的模具；步驟3.同實施例1步驟3。
實施例5步驟1.選用上述實施例廣4中任一方法制備的石蠟塊，修切成小顆粒狀；6步驟2.在預先制備的模具中，樹脂先制成一內含空腔的杯狀體結構，并預留一通向空腔的小杯口 ；包埋有組織細胞的石蠟塊可制成小顆粒狀，懸浮在溶解有染料的溶液中，通過杯口注入空腔，然后封閉小杯口即可。溶液可為液體石蠟、有熒光效果的熒光物質液體或水性儲存液，依染料的極性來選擇。結構示意見圖2。
實施例6步驟1.選用上述實施例廣4中任一方法制備的石蠟塊，修切成小顆粒狀； 步驟2.預先使用一特定的模具制備一個留有導入小孔的帶空腔的樹脂工藝品；將一定量的水溶性染料溶解于水溶液中，抽真空去除溶液中的空氣，然后將溶液和包埋有細胞的石蠟顆粒經小孔注入到樹脂工藝品的空腔中，封閉小孔即可。
實施例7步驟1.取材固定取離體后的胎盤組織或臍帶組織，切成廣3 mm3左右的小塊，迅速投入預冷緩沖福爾馬林固定液(4 °C)中固定10 min ；步驟2.脫水、透明和石蠟包埋固定完成后加入梯度濃度酒精脫水，酒精濃度梯度為 75% — 85% — 95% — 100% — 100%,每次脫水15 min ；然后使用二甲苯進行透明處理，程序為 1/2純酒精+1/2 二甲苯一二甲苯一二甲苯，每次15 min ；透蠟的程序為1/2 二甲苯+石蠟 —石蠟一石蠟，每次10 min, 50^60 °C下進行，每次用鑷子夾取組織塊進入下一道程序；包埋將通過反復煮沸去除空氣的石蠟置于60 ！熔化，倒入模具置于室溫下，待石蠟呈半凝固狀態時，將透蠟好的組織塊放入，呈半凝固狀態時再次加入60 ！熔化的石蠟是充滿整個模具，置于室溫中下凝固后即完成石蠟包埋過程，石蠟塊可雕刻成特定形狀，也可事先制備特定形態的模具；步驟3.同實施例1步驟3。
實施例8將實施例7中步驟1的固定劑改為95%酒精，步驟2梯度酒精脫水直接從100%開始。 其它同實施例7。
實施例9步驟1.取材固定取離體后的胎盤組織或臍帶組織，切成廣3 mm3左右的小塊，迅速投入4°C丙酮固定10 min，離心，去上清液；步驟2.脫水、透明和石蠟包埋將細胞沉淀用丙酮分別在4°C和室溫脫水各15min，再分別用苯甲酸甲酯和二甲苯透明，每次15min。透蠟、石蠟包埋程序同實施例1 ； 步驟3.樹脂包埋同實施例1步驟3。
權利要求
1.一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于(1)固定劑固定處理人體組織細胞將取自人體的組織細胞迅速置于固定劑中低溫下充分固定；(2)石蠟包埋固定后的組織細胞經脫水劑脫水、二甲苯透明、石蠟透蠟，最后全封閉狀包埋于石蠟中，石蠟塊可做成各種特定形狀；3.樹脂包埋在預先制備的模具中采用無氧空腔隔層間接包被法方式將石蠟塊全封閉于樹脂中。
2.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的組織細胞是指從單一人體中獲得的血液細胞、胎盤組織、臍帶組織、臍帶血、闌尾組織、毛囊細胞組織塊。
3.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的固定劑是指中性緩沖福爾馬林溶液、乙醇溶液或丙酮。
4.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的低溫是指5 10°C之間的溫度。
5.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的脫水劑為濃度梯度酒精或丙酮。
6.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的透蠟是指將石蠟預先反復煮沸或通過抽真空以去除其中的空氣。
7.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的無氧空腔隔層間接包被法是指是在石蠟與樹脂之間含有無氧空腔層，無氧空腔層中可同時或分別充有僅帶有顏色的液體或帶有熒光效果的熒光物質液體。
8.根據權利要求7所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的無氧空腔層包被，樹脂先制成一內含空腔的杯狀體結構，并預留一通向空腔的小杯口 ；包埋有組織細胞的石蠟塊可制成小顆粒狀，懸浮在溶解有染料的溶液中通過杯口注入空腔，然后封閉小杯口即可。
9.根據權利要求1所述的一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法，其特征在于所述的樹脂是指本領域技術人員公知的用于制造工藝品的環氧樹脂、聚甲基丙烯酸甲酯樹脂或不飽和聚酯樹脂。
全文摘要
本發明涉及一種間接包被法制備儲存人體基因信息的紀念物品的制備方法。其特征在于其特征在于(1)將取自人體的組織細胞迅速置于固定劑中低溫下充分固定;(2)固定后的組織細胞經脫水劑脫水、二甲苯透明、石蠟透蠟，最后全封閉狀包埋于石蠟中，石蠟塊可做成各種特定形狀;(3)在預先制備的模具中采用無氧空腔隔層間接包被法方式將石蠟塊全封閉于樹脂中。本發明通過將包含有人全部基因組的組織細胞包埋于石蠟和樹脂中，使得細胞中的DNA既得到了完整和長期的保存，又便于單獨作為紀念物品，極大地增強了該紀念物件的情感載體意義，解決了人類長期以來渴望解決的長期保存自身生命信息的技術難題。
文檔編號A44C27/00GK102511979SQ20111045844
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月31日 優先權日2011年12月31日
發明者張彥定, 肖義軍 申請人:福建師范大學