專利名稱：一種廣棗凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥制藥領域，具體涉及一種廣棗凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術：
心血管疾病因其發病因素繁多，病理機制復雜，多因久病體虛、勞神過度損傷心氣心陽所至，治療甚為棘手，而被現代醫學稱為人類死亡的主要原因之一。心悸是自覺心慌不安，不能自主，或脈象不齊的一種證候，臨床多見于心臟病、心絞痛，是冠狀動脈供血不足，心肌急劇的暫時缺血和缺氧所引起的臨床綜合癥。研究治療心臟病的藥有很多，如硝酸甘油，其特點是起效迅速，但具有一定的毒副作用；還有一些中成藥，例如復方丹參注射液、藻酸雙酯鈉注射液、脈絡寧注射液等，雖然對心臟病、冠心病、心絞痛等有較好的療效，改變了固體制劑起效慢的不足，但其不良反應的報道也逐年增多，其中報道復方丹參注射液有過敏反應58例、藥疹23例、死亡2例等共131例不良反應，藻酸雙酯鈉注射液有過敏反應31例、白細胞減少25例、胃腸反應23例、死亡1例等共128例不良反應，脈絡寧注射液有過敏反應28例、過敏性休克18例等共68例不良反應。盡管引起不良反應的因素較多，機制也未完全清楚，但臨床迫切的需要安全有效的治療藥物是確定的。
廣棗為漆樹科植物南酸棗Choerospondias axillaries(Roxb.)Burtt et Hill的干燥成熟果實，系蒙古族習用行氣活血、養心安神的藥材，在我國蒙醫藥中應用非常廣泛，主產于廣東。廣棗味甘、酸，性平、膩、重、柔；有清心火行氣活血，養心，安神功能。主要用于氣滯血瘀，胸痹作痛，心悸氣短，心神不安等病癥。現代藥理學研究證實，廣棗總黃酮，能明顯降低鼠耗氧速度和耗氧量，提高耐缺氧能力，擴張冠狀動脈；改善血液流變學各項指標，清除自由基，提高心臟組織中SOD的活性[包保全等.廣棗總黃酮抗氧化作用的實驗研究。中國藥理與臨床。2001，17(2)8]。廣棗總黃酮對心肌缺血有明顯保護作用，明顯縮小心肌梗死范圍，減輕心肌缺血損傷程度，推測其作用機理可能與調節機體各種酶活性有關[唐麗等.廣棗對大鼠急性心肌缺血保護作用研究.中醫藥學報.2003，31(3)50]。廣棗水溶性多糖對急梗犬有改善心肌收縮功能，縮小心肌梗塞面積，減輕心肌損傷的作用，對垂體后葉素引起的大鼠心肌缺血有明顯的保護作用，能明顯對抗BaCl2誘發的大鼠心律失常和CHCL3誘發的小鼠室顫，減慢心率。廣棗在中醫藥中應用廣泛，臨床上多配方使用如廣棗七味丸、復方廣棗注射液等；中國專利中涉及到廣棗應用的專利較多，但絕大多數為復方固體制劑，無涉及到廣棗注射制劑的藥物，CN93110427公開了廣棗的提取液和廣棗粗粉混合制成的固體制劑，尚屬一種比較原始的藥物制劑，有關報道中雖然有廣棗注射液的研究報道，但未見有臨床應用報道，到目前為止尚未見廣棗有效成分制成的凍干粉針劑報道。
發明內容
基于以上因素，本發明采用乙醇提取、大孔吸附樹脂法和超濾法有機結合的方法對廣棗有效部位進行提取純化后，與藥物輔料混合后，經過冷凍干燥制備中藥粉針劑，藥理實驗結果表明，該凍干粉針劑對心血管疾病具有很好的療效，與同類藥物比較，具有更強的藥理作用。
一.工藝制法取廣棗，放入中藥多功能提取罐中，用6-10倍的50％-80％乙醇提取，提取2-4次，每次1-3小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，備用，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP型大孔吸附樹脂柱，用8-12倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度20％-80％、6-8倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮原料，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入6-8倍水，提取2-4次，每次2-4小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使醇度達到50％-70％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到75％-90％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾3-5次，每次超濾1/2-1/3時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾3-5次，每次超濾1/2-1/3時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為2％-5％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
二.藥理實施例實施例1對大鼠離體心臟缺氧性心律失常的影響藥物本發明凍干粉針劑(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)復方廣棗注射液(內蒙古中醫藥研究院提供)生理鹽水(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)實驗方法大鼠24只，體重256±23g，隨機分為3組。制備離體心臟，用容積導電法引導并觀察和記錄心電變化，穩定20分鐘。缺氧對照組改用含純氮K-H灌流液，給藥組用本發明凍干粉針劑注射液、復方廣棗注射液、純氮K-H灌流液，連續觀察20分記錄心律失常出現時間和心臟停搏時間。
本發明凍干粉針劑對大鼠離體心臟缺氧性心律失常的影響對照組8例心臟全部出現心律失常和心臟停搏。本發明凍干粉針劑和可復方廣棗注射液明顯對抗缺氧性心律失常，并呈良好量效關系，可顯著延長心律失常出現時間，明顯降低心律失常發生率，實驗結果還表明本發明凍干粉針劑組與復方廣棗注射液組比較有顯著性差異。實驗結果見表1表1各組制劑對大鼠離體心臟缺氧性心律失常的影響
**P＜0.01；[*]P＜0.05，處理組與陽性對照組比較。
實施例2對大鼠急性心肌缺血保護作用藥物本發明凍干粉針劑(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)復方丹參注射液(上海第一生物藥業有限公司)生理鹽水(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)材料與方法動物Wister大白鼠60只，雄性，體重(300±20)g，由北京中醫藥大學實驗動物中心提供。大鼠按體重隨機分成3組，每組20只。分為模型組，復方丹參陽性藥對照組，本發明凍干粉針劑組。各組均靜脈注射，按文獻方法結扎大鼠的左冠狀動脈前降支造成急性心肌缺血模型。20％烏拉坦(1g/kg，ip)麻醉，分離頸總動脈，并行氣管插術，連接動物呼吸機。左側第四肋間開胸，剪開心包，分離左冠狀動脈前降支，平右心耳作結扎部位。取出心臟稱重，-10℃冰凍30～50min，在心臟結扎線下，平行冠狀溝將心室橫切成5片，生理鹽水沖洗后，置于pH值8.0磷酸緩沖液配制的濃度為1％的氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液中，在38℃恒溫水浴中染色10min，正常心肌染色成暗紅色，梗死心肌染成灰黃色，剪去心肌片被染色的部分，把未被染色的缺血梗死區心肌稱重，計算缺血范圍(缺血梗死面積占全心重的百分比，結果見表2。
表2各組制劑對大鼠急性心肌缺血保護作用
**P＜0.01；[*]P＜0.05，處理組與陽性對照組比較。
結論以上藥理實驗表明，本發明凍干粉針劑對心血管疾病具有很好的藥理作用，與同類藥品比較，具有更好的藥理藥效。
三.制備實施例實施例1取廣棗1000克，放入中藥多功能提取罐中，用6倍的50％乙醇提取，提取2次，每次1小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，備用，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-10型大孔吸附樹脂柱，用8倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度20％、6倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮68.97克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入6倍水，提取2次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.15(50℃)，加入乙醇使醇度達到50％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到75％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾3次，每次超濾至1/2時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾3次，每次超濾至1/2時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為2％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液172.41克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑甘露醇7135.42克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
實施例2取廣棗500克，放入中藥多功能提取罐中，用10倍的80％乙醇提取，提取4次，每次3小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-10型大孔吸附樹脂柱，用12倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度80％、8倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮34.49克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入8倍水，提取4次，每次4小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.20(50℃)，加入乙醇使醇濃度達到70％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到90％(V/V)，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾5次，每次超濾至1/3時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾5次，每次超濾至1/3時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為5％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液86.21克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑蔗糖404.08克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
實施例3取廣棗800克，放入中藥多功能提取罐中，用7倍的60％乙醇提取，提取3次，每次3小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-20型大孔吸附樹脂柱，用9倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度40％、7倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮55.18克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入7倍水，提取3次，每次3小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.16(50℃)，加入乙醇使醇度達到55％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到80％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾4次，每次超濾至1/2時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾4次，每次超濾至1/2時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為3％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液137.94克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑乳糖1013.88克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
實施例4取廣棗100克，放入中藥多功能提取罐中，用8倍的70％乙醇提取，提取2次，每次1小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，備用，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-20型大孔吸附樹脂柱，用10倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度50％、8倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮6.90克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入8倍水，提取4次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.17(50℃)，加入乙醇使醇度達到60％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到85％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾3次，每次超濾至1/2時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾5次，每次超濾至1/3時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為4％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液17.24克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑蔗糖109.97克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
實施例5取廣棗300克，放入中藥多功能提取罐中，用9倍的75％乙醇提取，提取4次，每次1小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，備用，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-10型大孔吸附樹脂柱，用11倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度75％、8倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮20.70克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入7倍水，提取4次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.18(50℃)，加入乙醇使醇度達到65％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到85％(V/V)，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾5次，每次超濾1/2時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾5次，每次超濾1/2時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為2％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液51.72克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑乳糖256.76克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
實施例6取廣棗1500克，放入中藥多功能提取罐中，用10倍的75％乙醇提取，提取4次，每次2小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，備用，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-10型大孔吸附樹脂柱，用12倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度55％、7倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮103.46克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入8倍水，提取2次，每次4小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.19(50℃)，加入乙醇使醇度達到50％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到90％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾5次，每次超濾1/2時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾5次，每次超濾1/2時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為2％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液258.62克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑乳糖1212.16克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
實施例7取廣棗1200克，放入中藥多功能提取罐中，用10倍的80％乙醇提取，提取2次，每次1小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，備用，濾渣干燥備用；取無醇清膏，干燥，上HP-10型大孔吸附樹脂柱，用12倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度65％、6倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮82.76克，備用；取干燥濾渣與水洗脫液合并，放入中藥多功能提取罐中，加入7倍水，提取3次，每次3小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.16(50℃)，加入乙醇使醇度達到70％(V/V)，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到75％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，沉淀用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，用截留分子量3000的超濾膜超濾4次，每次超濾1/2時，加蒸餾水至原體積，得濃縮液，濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾4次，每次超濾1/3時，加蒸餾水至原體積，收集超濾液，真空濃縮，使溶液糖度為3.5％，得到廣棗水溶性多糖濃縮液206.89克，備用。取廣棗總黃酮和凍干賦形劑甘露醇1779.29克溶解于廣棗水溶性多糖濃縮液中，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
權利要求
1.一種廣棗凍干粉針劑，其特征在于該中藥制劑是由單味中藥廣棗提取純化的廣棗總黃酮和廣棗水溶性多糖與藥物輔料組成，其中廣棗總黃酮為4-6.5重量份，廣棗水溶性多糖為10-16.5重量份，凍干粉賦形劑77-86重量份，其中凍干粉賦形劑為蔗糖、甘露醇或乳糖中的一種。
2.根據權利要求1所述的廣棗凍干粉針劑，其特征在于廣棗總黃酮5重量份，廣棗水溶性多糖為15重量份，凍干粉賦形劑80重量份，
3.根據權利要求1或2所述的廣棗凍干粉針劑，其特征在于凍干粉賦形劑為甘露醇。
4.一種廣棗凍干粉針劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)取廣棗，用6-10倍的50％-80％乙醇提取，提取2-4次，每次1-3小時，提取液合并，回收乙醇至盡，得到無醇清膏，濾渣干燥備用；(2)取(1)無醇清膏，干燥，上大孔吸附樹脂柱，用8-12倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液備用，再用濃度20％-80％、6-8倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，得到廣棗總黃酮；(3)取(1)中干燥濾渣與(2)中水洗脫液合并，提取2-4次，每次2-4小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使醇濃度度達到50％-70％，靜置沉淀，過濾，濾液再加乙醇使醇濃度達到75％-90％，靜置沉淀，過濾，合并沉淀，用蒸餾水溶解，使溶液中每毫升折合生藥材1克，過濾后，得濾液；(4)取(3)中濾液，用截留分子量3000的超濾膜超濾3-5次，得濃縮液；濃縮液再用截留分子量為10萬的超濾膜超濾3-5次，收集濾液，真空濃縮得到廣棗水溶性多糖濃縮液；(5)取廣棗總黃酮和凍干賦形劑溶于廣棗水溶性多糖濃縮液，用0.45um微孔濾膜進行過濾，分裝西林瓶中，按中藥凍干粉針劑的要求冷凍干燥制備成廣棗凍干粉針制劑。
5.根據權利要求4，所述的大孔吸附樹脂為HP型大孔吸附樹脂。
6.根據權利要求4、5所述的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂分離為HP-10型大孔吸附樹脂分離。
7.根據權利要求4，所述超濾方法為超濾濃縮液體積為原藥液體積的1/2-1/3時，加蒸餾水至原體積，繼續超濾。
全文摘要
本發明公開了一種廣棗凍干粉針劑及其制備方法，其特征在于該粉針劑是由廣棗的有效部位和凍干賦形劑組成；其中廣棗有效部位是通過乙醇提取、大孔吸附樹脂法和超濾法有機結合的方法進行純化得到的，本發明還公開了一種廣棗凍干粉針劑的制備方法，其特征是將提取純化的廣棗有效部位與藥物輔料混合，冷凍干燥制備成中藥粉針劑，藥理實驗結果表明，該凍干粉針劑對心血管疾病具有很好的療效，與同類藥物比較，具有更強的藥理作用。
文檔編號A61P9/10GK1562097SQ200410008758
公開日2005年1月12日 申請日期2004年3月17日 優先權日2004年3月17日
發明者張晴龍 申請人:北京乾露春科技有限公司