專利名稱：：無糖基抗－cd154(cd40配體)抗體及其用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及無糖基抗-CD154抗體或其抗體衍生物，其阻斷CD154和CD40分子的相互作用。此外，本發明提供了制備無糖基抗-CD154抗體和抗體衍生物的方法。本發明的抗體和抗體衍生物可用于治療和預防與不需要的免疫反應有關的疾病，以及CD154-CD40相互作用介導的疾病。
背景技術：
：體液和細胞介導的免疫的產生是活化的輔助T細胞與抗原呈遞細胞(“APCs”)和效應T細胞的相互作用的結果。輔助T細胞的活化不僅有賴于抗原特異性T細胞受體(“TCR”)與其相應肽-MHC配體的相互作用，也需要多種細胞粘附分子和共刺激分子的協同結合與活化[Salazar-Fontana，2001]。重要的共刺激分子是CD154(也稱為CD40配體，CD40L，gp39，T-BAM，T-細胞活化分子，TRAP)，其為以活化依賴性、瞬時受限的方式于CD4+T細胞表面表達的II型跨膜蛋白。CD154在活化以后也在CD8+亞組T細胞，嗜堿性細胞，肥大細胞，嗜酸性細胞，天然殺傷細胞，B細胞，巨噬細胞，樹突細胞和血小板上表達。CD154對應受體(counter-receptor)CD40是I型膜蛋白，其構成性并廣泛性地在許多細胞類型表面表達，包括APCs[Foy，1996]。由CD154通過CD40產生的信號啟動一系列事件，導致攜帶CD40受體的細胞活化以及最佳CD4+T細胞激發。更具體地，CD154和CD40之間的相互作用促進B細胞分化成分泌抗體的細胞和記憶B細胞[Burkly，2001]。此外，CD154-CD40相互作用通過巨噬細胞和樹突細胞的活化以及自然殺傷細胞和細胞毒T淋巴細胞的生成促進細胞介導的免疫[Burkly，2001]。CD154在調節體液和細胞介導的免疫反應中的重要性激發了人們對利用該途徑的抑制劑的治療性免疫調節作用的興趣[美國專利5,474,771]。因此，抗-CD154抗體在多種對其它治療蛋白或基因治療，過敏原，自身免疫以及移植的免疫反應模型中有益[美國專利5,474,771；Burkly，2001]。CD40-CD154相互作用在多種試驗誘導的自身免疫病中重要，諸如膠原誘導的關節炎，試驗性過敏性腦脊膜炎(“EAE”)，卵巢炎，結腸炎，藥物誘導的狼瘡腎炎。具體地，所有這些模型中疾病的誘導可通過CD154拮抗劑在抗原給藥時阻斷[Burkly，2001]。利用抗-CD154拮抗劑阻斷疾病也在自發自身免疫病動物模型中見到，包括胰島素依賴性糖尿病以及狼瘡腎炎，以及移植物抗宿主疾病，移植，肺纖維化以及動脈粥樣硬化疾病模型[Burkly，2001]。盡管糖基化抗-CD154抗體可用于預防和治療多種免疫反應相關疾病，一些受試者中，利用它們的治療有時并發血栓栓塞活性[BiogenPressRelease，2001；IDECPressRelease，2001]。盡管該副作用的機制未知，其可能包括抗-CD154抗體或其聚集體對血小板上的FcgRIIa和CD154的聚集(colligation)，導致不適當的血小板活化。與其它Fcγ受體和補體的結合也可強化該效果。因此，不結合效應器受體的抗-CD154抗體的形式對于治療用途可能更為安全和/或更有效。抗-CD154抗體抑制免疫功能的機制比起簡單地與CD154結合以阻斷與CD40的相互作用來更為復雜，實際上包括效應途徑的貢獻。例如，抗體-抗原結合可通過Fc結構域與Fcγ受體或補體組分的結合誘導活化的T細胞的消除。可選，抗體與CD154的結合可通過在攜帶Fcγ受體的細胞表面形成抗體支架而增強。此外，抗體與其作用位點的接近可通過Fcγ受體結合相互作用促進。在糖基化抗體，包括抗-CD154抗體中，附著于Fc二聚體CH2結構域中保守N-連接的位點的聚糖包含在CH2結構域之間，使得糖殘基與相對的CH2結構域上的特異性氨基酸殘基接觸[Jeffries，1998]。體外利用多種糖基化抗體的體內研究證實去除CH2聚糖改變Fc結構使得與Fc受體以及補體蛋白C1Q結合的抗體大大減少[Nose，1983；Leatherbarrow，1985；Tao，1989；Lund，1990；Dorai，1991；Hand，1992；Leader，1991；Pound，1993；Boyd，1995]。體內研究證實無糖基抗體的效應器功能減少。例如，無糖基抗-CD8抗體不能消耗小鼠中攜帶CD8-的細胞[Isaacs，1992]，無糖基抗-CD3抗體不能誘導小鼠或人中的細胞因子釋放[Boyd，1995；Friend，1999]。盡管去除CH2結構域中的聚糖似乎對效應器功能有明顯效果，抗體其它功能和物理特性不變。具體地，顯示聚糖的去除對血清半壽期和抗原結合幾乎沒有到沒有影響[Nose，1983；Tao，1989；Dorai，1991；Hand，1992；Hobbs，1992]。發明簡述該發明中，抗-CD154抗體作用的機制中的Fc效應器功能通過利用抗CD-154抗體來消除，所述抗體中Fc效應器功能通過修飾Fc二聚體CH2結構域中保守的N-連接的位點來降低，導致“無糖基”抗-CD154抗體。所述修飾的實例包括Fc二聚體CH2結構域中保守N-連接的位點的突變，去除與CH2結構域中N-連接位點所連接的聚糖，以及防止糖基化。為說明抗-CD154抗體的抑制作用的機制是否依賴其Fc效應器相互作用，比較抗-CD154抗體及其無糖基對應部分通過阻斷CD154-CD40相互作用抑制數種疾病的能力。本文報道的結果證實了抗-CD154抗體的無糖基形式與抗-CD154抗體的糖基化形式保護作用相當。由于本發明無糖基抗-CD154抗體特征在于效應器功能降低，這些抗體尤其可用于存在不需要的血栓栓塞活性可能性的受試者中。此外，無糖基抗-CD154抗體的降低的Fc效應器功能可降低或消除抗-CD154抗體療法的其它可能的副作用，諸如消除活化的T細胞和經誘導表達CD154的其它細胞群或單核細胞/巨噬細胞的Fc依賴性活化。具體地，本發明提供識別CD154的無糖基抗-CD154抗體。更具體地，本發明提供人源化無糖基抗-CD154抗體—即“無糖基hu5c8”，和鼠無糖基抗-CD154抗體—即“無糖基muMR1”。本發明的一個實施方案中，無糖基hu5c8抗體自NS0無糖基hu5c8細胞系制備，該細胞系于2003年1月14日保藏在美國典型培養物保藏中心(“ATCC”)，10801UniversityBlvd.，Manassas，Virginia(保藏號PTA-4931)，無糖基MR1抗體自NSO無糖基鼠MR1細胞系制備，該細胞系于2003年1月14日保藏在ATCC(保藏號PTA-4934)。本發明一個實施方案中，無糖基抗-CD154抗體能夠抑制CD154和CD40之間的相互作用。本發明另一實施方案中，無糖基抗-CD154抗體能以直接或間接阻斷攜帶CD40的細胞的活化的方式與CD154結合。本發明還提供了抑制受試者中免疫反應的方法，包括給藥受試者無糖基抗-CD154抗體或其抗體衍生物，其中所述抗體或抗體衍生物以有效抑制受試者中的免疫細胞的活化的量給藥。本發明還提供治療或預防受試者中的免疫反應依賴性疾病或病癥的方法，包括給予所述受試者無糖基抗-CD154抗體或其抗體衍生物，所述抗體或抗體衍生物以有效抑制受試者中免疫細胞的活化的量給藥，由此治療或預防所述免疫反應依賴性疾病或病癥。附圖簡述圖1顯示無糖基hu5c8單克隆抗體(“mAb”)和糖基化hu5c8mAb以相同的相對親和力結合人CD154。生物素化的hu5c8mAb與細胞表面CD154的結合與未標記的糖基化hu5c8mAb或無糖基hu5c8mAb的被滴度物(titrations)競爭。利用鏈霉抗生物素-PE檢測的生物素化抗體的平均熒光強度相對于未標記抗體濃度作圖。四參數曲線擬合繪制在一起。圖2顯示無糖基hu5c8mAb具有受損的FcR結合能力。評估抗-CD154抗體，即無糖基hu5c8mAb，在huCD154和FcγRI+細胞(a)或huCD154+CHO細胞與FcγRIII+細胞(b)之間形成橋的能力。熒光標記的FcγR+細胞加入微量滴定板，其中含有糖基化hu5c8mAb或無糖基hu5c8mAb，它們與CD154預結合。結合的FcγR+細胞通過利用激發/發射光譜485/530nm測定每個孔中的相對熒光單位(“RFU”)來檢測。圖3顯示糖基化hu5c8mAb和無糖基hu5c8mAb在獼猴中的血清半壽期相同。糖基化hu5c8mAb和無糖基hu5c8mAb在獼猴血清中的濃度在給予單個20mg/kg靜脈內劑量后測定。每個治療組的平均血清濃度描述為±標準偏差(“SD”)。圖4顯示糖基化hu5c8mAb和無糖基hu5c8mAb抑制對破傷風類毒素(“TT”)的初始免疫反應。描繪了在糖基化hu5c8mAb研究(實心標記)和無糖基hu5c8mAb研究(空心標記)中，獼猴的mAb處理組和鹽水對照組的結果。圖5顯示無糖基hu5c8mAb抑制對TT的后繼免疫反應。描繪了個體獼猴對TT的初始(實心標記)和后繼(空心標記)總體抗體反應(EAUC)。1A組動物在初始和后繼TT攻擊之前接受鹽水。1B組動物在初始TT攻擊之前接受鹽水，在后繼TT攻擊之前接受無糖基hu5c8mAb攻擊。圖6顯示BALB/c小鼠中糖基化鼠嵌合MR1(“muMR1”)和無糖基muMR1抗體的藥物動力學。描繪了糖基化muMR1抗體(菱形符號)和無糖基muMR1抗體(正方形符號)的結果。圖7(A&B)顯示SNF1小鼠中，無糖基抗-CD154抗體降低對單鏈(A)和雙鏈(B)DNA的自身抗體反應。描繪了muMR1抗體(菱形符號)和無糖基muMR1抗體(正方形符號)的結果。對照muIgG2a抗體顯示為三角形符號。圖8顯示無糖基抗-CD154抗體降低SNF1小鼠中腎小球腎炎的發展。描繪muIgG2a(對照)，muMR1和無糖基muMR1處理的小鼠的混合組織學得分。圖9顯示無糖基抗-CD154抗體延緩SNF1小鼠中腎小球腎炎的出現。顯示muMR1抗體(菱形符號)和無糖基muMR1抗體(正方形符號)的結果。對照muIgG2a抗體顯示為三角形符號。圖10顯示無糖基抗-CD154抗體防止SNF1小鼠中血清肌酸酐的增加。顯示muMR1抗體(菱形符號)和無糖基muMR1抗體(正方形符號)的結果。對照muIgG2a抗體顯示為三角形符號。圖11顯示無糖基抗-CD154抗體延緩SNF1小鼠中增加的血尿素氮(“BUN”)水平的出現。顯示muMR1抗體(菱形符號)和無糖基muMR1抗體(正方形符號)的結果。對照muIgG2a抗體顯示為三角形符號。圖12顯示于用同種型對照P1.17抗體處理的小鼠相比，用muMR1抗體處理的抗體不出現試驗性自身免疫腦脊膜炎(“EAE”)癥狀。描繪了muMR1抗體(空心圓)和P1.17對照抗體(實心圓)的結果。圖13顯示用無糖基muMR1抗體處理的小鼠中，無糖基muMR1抗體對于抑制EAE臨床表現的有效性與muMR1抗體相同。結果表示為相對于疾病誘導后天數的殘疾得分(平均值+平均值標準誤-“SEM”)和％初始重量(平均值+SEM)。P1.17是對照Ig。圖14描繪了同種異體的胰島移植后恒河猴中的空腹血葡萄糖(“FBG”)水平。急性排異定義為FBG＞100mg/dl。顯示了無糖基hu5c8mAb(虛線)和糖基化hu5c8mAb(實線)處理的動物。發明詳述為了本發明的描述能夠被更充分理解，給出以下詳述。除非另有定義，所用所有技術和科學術語與本發明所屬領域技術人員理解的含義一樣。以下描述示例性方法和材料，但是類似本文所述方法和材料的那些也可用于本發明實踐并且對于本領域技術人員而言是明顯的。本申請中的各種公開出版物和參考都包含在方括號中。這些公開出版物和參考的公開內容的全部內容都包含在本申請中作為參考，以更充分描述本發明所述領域的狀態。這些參考文件的書目提要條文可見于正文中或在試驗詳述部分后以帶編號的內容列出。如有沖突，以說明書為準。所述材料，方法和實施例僅僅為了舉例而不是限制。說明本領域熟練技術人員已知重組DNA技術的標準參考文獻包括Ausubeletal.，CurrentProtocolsInMolecularBiology，JohnWiley&Sons，NewYork(1998andSupplementsto2001)；Sambrooketal.，MolecularCloningALaboratoryManual，2dEd.，ColdSpringHarborLaboratoryPress，Plainview，NewYork(1989)；Kaufmanetal.，Eds.，HandbookOfMolecularAndCellularMethodsInBiologyAndMedicine，CRCPress，BocaRaton(1995)；McPherson，Ed.，DirectedMutagenesisAPracticalApproach，IRLPress，Oxford(1991)。說明本領域熟練技術人員已知的免疫學常規原則的標準參考文獻包括HarlowandLane，AntibodiesALaboratoryManual，2dEd.，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.(1999)；andRoittetal.，Immunology，3dEd.，Mosby-YearBookEuropeLimited，London(1993).StandardreferenceworkssettingforththegeneralprinciplesofmedicalphysiologyandpharmacologyknowntothoseofskillintheartincludeFaucietal.，Eds.，Harrison’sPrinciplesOfInternalMedicine，14thEdMcGraw-HillCompames，Inc.(1998)。本發明試劑和方法涉及利用無糖基抗體或其抗體衍生物來抑制免疫反應和治療免疫反應誘導的疾病和病癥-例如自身免疫病，過敏，移植排斥，炎癥，移植物抗宿主疾病，纖維化，和動脈粥樣硬化。更具體地，用于治療具體是人類治療的無糖基抗-CD154抗體，包括人抗體，人源化抗體，嵌合抗體，多克隆抗體和多聚體抗體。抗體抗體是大約MW150kD的糖蛋白，其通過脊椎動物免疫系統的體液分支應答于體內外來分子的存在而產生。功能抗體或抗體衍生物能夠在體外和體內識別并結合其特異性抗原，并啟動任何與抗體結合相關的后繼作用，包括例如，直接細胞毒，補體依賴的細胞毒(“CDC”)，抗體依賴的細胞毒(“ADCC”)，和抗體生成。一旦與抗原結合，抗體活化免疫系統的許多效應器系統中的一或多種，導致感染生物體和其它含有抗原的實體(例如癌細胞)的中和、破壞和消除。盡管天然存在抗體來自單個物種，經改造的抗體和抗體片段可來自一種以上物種的動物，-例如，嵌合抗體。目前，小鼠(鼠)/人嵌合和鼠/非-人靈長類抗體已經產生，但其它物種的組合也是可能的。一個實施方案中，本發明無糖基抗-CD154抗體是嵌合抗體。通常嵌合抗體包括重鏈和/或輕鏈可變區，包括與另一物種(通常為人)的恒定區融合的一個物種(通常為小鼠)的互補決定區(“CDR”)和框架殘基。這些嵌合小鼠/人抗體含有分別大約75％的人氨基酸序列和25％的小鼠氨基酸序列。人序列代表抗體恒定區，小鼠序列代表抗體可變區(并由此含有抗原結合位點)。利用這種嵌合體的基本原理是保持小鼠抗體的抗原特異性但降低小鼠抗體的免疫原性(小鼠抗體將在除小鼠以外的物種中導致針對它的免疫反應)，并由此能夠在人治療中利用所述嵌合體。另一具體實施方案中，本發明無糖基抗-CD154抗體包括嵌合抗體，其含有來自一種抗體的框架區和來自另一種抗體的CDR區。另一更為具體實施方案中，本發明的無糖基抗-CD154抗體包括嵌合抗體，其含有來自不同人抗體的CDR區。另一具體實施方案中，本發明的無糖基抗-CD154抗體包括嵌合抗體，其含有來自至少兩種不同人抗體的CDR區。制備上述所有嵌合抗體的方法是本領域技術人員已知的[美國專利5,807,715；Morrison，1984；Sharon，1984；Takeda，1985]。本發明另一實施方案中，無糖基抗-CD154抗體還包括靈長源化的，人源化的和完全的人抗體。靈長源化的和人源化的抗體通常包括來自移植到非人靈長類或人抗體V區框架中的鼠抗體重和/或輕鏈CDR，通常還包括人恒定區[Riechmann，1988；Co，1991；UnitedStatespatents6,054,297；5,821,337；5,770,196；5,766,886；5,821,123；5,869,619；6,180,377；6,013,256；5,693,761；和6,180,370]。1.人源化的抗體人源化的抗體是通過重組DNA技術制備的抗體，其中結合抗原不需要的人免疫球蛋白輕鏈或重鏈(例如可變區的恒定區和框架區)的一些或全部氨基酸用于取代來自同源非人抗體的輕鏈或重鏈的相應氨基酸。例如，給定抗原的鼠抗體的人源化版本的重鏈和輕鏈上都具有(1)人抗體恒定區；(2)人抗體可變區的框架區；和(3)鼠抗體CDR。必要時，人框架區中的一或多個殘基可被改變成鼠抗體中相應位置的殘基，以保持人源化抗體與抗原的結合親和力。該改變有時稱為“回復突變”。人源化抗體與嵌合人抗體相比，通常較不可能激發人中的免疫反應，因為前者含有少得多的非人組分。制備人源化抗體的方法是抗體領域技術人員已知的[歐洲專利239400；Jones，1986；Riechmann，1988；Verhoeyen，1988；Queen，1989；Orlandi，1989；美國專利6,180,370]。本發明一個實施方案中，人源化的抗體通過將鼠(和其它非-人)CDR移植到人抗體上產生。更具體地，可如下進行(1)編碼重鏈和輕鏈可變區的cDNA分離自雜交瘤；(2)可變區DNA序列包括CDR通過測序確定；(3)編碼CDR的DNA通過定點誘變轉移到人抗體重鏈和輕鏈可變區相應區域；和(4)加入所需同種型(例如，CH同種型1，CL同種型k)的人恒定區基因片段。最后，人源化重鏈和輕鏈基因在哺乳動物宿主細胞(例如，CHO或NSO細胞)中共表達以產生可溶性人源化抗體。有時，將CDR直接轉移到人框架導致所得抗體喪失抗原結合親和力。這是由于在一些同源抗體中，特定的框架區內氨基酸殘基與CDR反應由此影響抗體的總體抗原結合親和力。在所述情況中，將“回復突變”引入受體抗體框架區中是重要的，以便保持同源抗體的抗原結合活性。制備回復突變的常用方法是本領域技術人員已知的[Queen，1989；Co，1991；PCTpatentapplicationWO90/07861；Tempest，1991]。2.人抗體本發明一個實施方案中，抗體和抗體衍生物是完全的人無糖基抗-CD154抗體。本發明更為具體的實施方案中，完全人抗體利用體外激發的人脾細胞[Boerner，1991]和噬菌體展示的抗體文庫[美國專利6,300,064]制備。本發明更為具體的實施方案中，完全人抗體通過庫克隆(repertoirecloning)[Persson，1991；HuangandStollar，1991]制備。此外，美國專利5,798,230描述了從人B細胞制備人單克隆抗體，其中產生人抗體的B細胞通過用表達EB病毒核抗原2(“EBNA2”)的EB病毒或其衍生物感染來永生化，所述EBNA2是永生化所需的蛋白。EBNA2的功能隨后被關閉，導致抗體生成增加。制備完全人抗體的其它方法包括利用非人動物，其內源Ig位點已經失活，并且對于未經重排的人抗體重鏈和輕鏈基因而言是轉基因的。所述轉基因動物可用活化的T細胞或D1.1蛋白[美國專利5,474,771；美國專利6,331,433；美國專利6455,044]免疫，雜交瘤可從來自所述轉基因動物的B細胞生成。這些方法的細節在本領域中描述。見，例如各種與含有人Ig微基因座(miniloci)的轉基因小鼠的GenPharm/Medarex(PaloAlto，CA)公開出版物/專利，包括美國專利5,789,650；與XENOMOUSE小鼠有關的各種Abgenix(Fremont，CA)公開出版物/專利，包括美國專利6,075,181，6,150,584和6,162,963；Green，1997；Mendez，1997；以及各種關于“transomic”小鼠的Kirin(Japan)公開出版物/專利，包括歐洲專利843961和Tomizuka，1997。去糖基化抗體的生成目前存在兩種途徑降低mAb的效應器功能同時保持其Fc部分的其它有價值的性質。一種修飾抗體的方法是突變mAb表面參與效應結合相互作用的氨基酸[歐洲專利239400；Jefferies，1998]。而很可能突變的一些組合將導致效應器功能的適當降低，經過檢測的表面突變體抗體目前顯示保持殘基活性。該方法的其它問題是mAb表面的氨基酸改變可激發免疫原性。本發明涉及效應器功能降低的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其特征在于位于所述抗體Fc部分的CH2結構域中保守N-連接的位點的修飾。本發明一個實施方案中，所述修飾包括位于重鏈糖基化位點的突變以防止該位點的糖基化。因此，本發明一個優選實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物通過突變重鏈糖基化位點，-即，突變N298Q(N297利用KabatEU編號)并在適當宿主細胞中表達制備。例如，該突變可根據生產商推薦用于Amersham-PharmaciaBiotech(Piscataway，NJ，USA)的定點誘變試劑盒的方案實現。所述突變的抗體可在宿主細胞(例如NSO或CHO細胞)中穩定表達然后純化。作為一個實例，純化可利用蛋白A和凝膠過濾層析進行。本領域技術人員清楚其它表達和純化方法也可使用。本發明另一實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物具有降低的效應器功能，其中位于所述抗體或抗體衍生物的Fc部分的CH2結構域中的保守N-連接的位點的修飾包括去除CH2區聚糖，-即，去糖基化。這些無糖基抗-CD154抗體可通過常規方法產生然后酶促去糖基化。抗體的酶促去糖基化的方法是本領域技術人員已知的[Williams，1973；Winkelhake&Nicolson，1976]。本發明另一實施方案中，去糖基化可通過利用糖基化抑制物衣霉素(tunicamycin)[Nose&Wigzell，1983]實現。即所述修飾是防止在所述抗體Fc部分CH2結構域中的保守N-連接的位點的糖基化。本發明的其它實施方案中，重組CD154多肽(或含有所述多肽的細胞或細胞膜)可用作抗原以產生抗-CD154抗體或抗體衍生物，其隨后被去糖基化。所述抗原可與佐劑混合或連接于半抗原以增加抗體生成。無論本發明的無糖基抗體或抗體衍生物的修飾是否通過上述的定點誘變和酶促去糖基化法制備，抗體生成的基礎是本領域技術人員已知的。例如，免疫非人哺乳動物的方案在本領域已經確定[Harlow，1998；Coligan，2001；Zola，2000]。免疫后，本發明的抗體或抗體衍生物可利用任何常規技術制備。見，例如，Howard，2000；Harlow，1998；Davis，1995；Delves，1997；Kenney，1997。本發明一些實施方案中，宿主細胞可以是，例如，(1)細菌細胞，諸如大腸桿菌，新月柄桿菌(Caulobactercrescentus)，鏈霉菌種(Streptomycesspecies)，和鼠傷寒沙門氏菌(salmonellatyphimurium)；(2)酵母細胞，諸如釀酒酵母，粟酒裂殖酵母，巴氏畢赤酵母，甲醇畢赤酵母(Pichiamethanolica)；(3)昆蟲細胞系，諸如來自秋粘蟲(Spodopterafrugiperda)的那些—例如，Sf9和Sf21細胞系，和expresSFTM細胞(ProteinSciencesCorp.，Meriden，CT，USA)—果蠅S2細胞，和HihgFiveCells(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)中的擬尺蠖(Trichoplusia)；或(4)哺乳動物細胞。常見哺乳動物細胞包括COS1和COS7細胞，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，NSO骨髓瘤細胞，NIH3T3細胞，293細胞，HEPG2細胞，HeLa細胞，L細胞，HeLa，MDCK，HEK293，WI38，鼠ES細胞系(例如，來自菌株129/SV，C57/BL6，DBA-1，129/SVJ)，K562，Jurkat細胞，和BW5147。其它有用的哺乳動物細胞系是已知的并可輕易購自美國典型培養物保藏中心(“ATCC”)(Manassas，VA，USA)和CoriellCellRepositories(Camden，NJ，USA)的國立普通醫學研究院(NationalInstituteofGeneralMedicalSciences)(NIGMS)人遺傳細胞庫。這些細胞類型僅僅為代表性的不是窮盡性地列出。本發明另一實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物通過無細胞翻譯制備。本發明另一實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物在含有表達抗體的細胞的生物反應器中產生，以促進大規模生產。本發明另一實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物于在乳汁中表達抗體的轉基因哺乳動物(例如，山羊，母牛，和綿羊)中產生，以促進無糖基抗-CD154抗體的大規模產生[美國專利5,827,690；Pollock，1999]。如上所述，本發明的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物可在原核和真核細胞中制備。本發明由此也提供表達本發明抗體的細胞，包括雜交瘤細胞，B細胞，漿細胞，以及重組修飾以表達本發明抗體的宿主細胞。除了其它考慮(其中一些在上文描述)，可根據宿主細胞株以所需方式加工表達的CD154蛋白的能力來選擇宿主細胞。除了無糖基化，所述多肽的翻譯后修飾包括但不限于，乙酰化，羧化，磷酸化，脂化(lipidation)，和酰化，本發明一方面提供具有一或多種這些翻譯后修飾的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物。抗體修飾給藥時，抗體通常從循環中快速清除，并由此表現出相對較短的藥物活性。因此，需要頻繁注入相對大量的抗體以維持抗體治療的有效性。本發明一個實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物可被修飾(即，與其它部分連接)以增加抗體的完整性并延長其體內壽命。例如，本發明無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物可被修飾以包括可增加穩定性的部分，從而延長抗體血清半壽期。本發明一些實施方案中，無糖基抗-CD154抗體通過與水溶性聚合物諸如聚乙二醇，聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物，羧甲基纖維素，葡聚糖，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮基或聚脯氨酸共價連接而被修飾—所有這些經修飾的蛋白與相應未經修飾的蛋白相比，在靜脈內注射以后，在血液中顯示實質上更長的半壽期[Abuchowski，1981；Anderson，1992；Newmark，1982；Katre，1987]。抗體修飾也可增加蛋白在水溶液中的溶解性，消除聚集，增加蛋白的物理和化學穩定性，大大降低蛋白的免疫原性和抗原性。結果，所需體內生物活性可通過與未經修飾的蛋白相比，以較低頻率或以較低劑量給藥所述聚合物-蛋白質加成物來實現。本發明一些實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體通過用檢測標記物來標記得到修飾，該標記物例如，放射活性同位素，酶，染料或生物素。本發明一些實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物通過偶聯于治療劑得到修飾，該治療劑例如，放射同位素或放射性核素(例如，111In或90Y)，毒素部分(例如，破傷風類毒素或蓖麻蛋白)，類毒素或化療劑[美國專利6,307,026]。本發明一些實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物通過與顯像劑偶聯得到修飾。顯像劑可包括例如標記性部分(例如，生物素，熒光部分，放射活性部分，組氨酸標記或其它肽標記)用于易化分離或檢測。抗體衍生物本發明還涉及無糖基抗-CD154抗體衍生物。所有這些上述關于無糖基抗-CD154抗體的方法和藥劑都用于可制備本發明的無糖基抗-CD154抗體衍生物。本發明一些實施方案中，無糖基抗-CD154抗體衍生物包括異聚體抗體復合體和抗體融合物，諸如雙特異性抗體，半二聚體(hemidimeric)抗體，多價抗體(即，四價抗體)和單鏈抗體。半二聚體抗體由Fc部分和一個Fab部分組成。單鏈抗體由單個蛋白鏈中的蛋白間隔物連接的可變區組成。本發明一些實施方案中，本發明的無糖基抗-CD154抗體衍生物還包括含有一或多個免疫球蛋白輕鏈和/或重鏈的蛋白質，諸如這些鏈的單體和同源或異源多聚體(例如二聚體和三聚體)，其中這些鏈可選由二硫鍵鍵合或者是交聯的。這些抗體衍生物能夠與一或多種抗原結合。根據另一實施方案，本發明包括完整抗體的無糖基化抗原結合片段，諸如Fab，Fab’，F(ab’)2和F(v)抗體片段。另一實施方案中，本發明包括完整抗體的抗原結合片段，諸如Fab，Fab’，F(ab’)2和F(v)抗體片段。細胞系本發明還提供了產生本文公開的無糖基抗-CD154抗體的細胞系。一種這樣的細胞系，其產生無糖基hu5c8抗體，于2003年1月14日根據國際認可的用于專利程序的布達佩斯條約的規定保藏于ATCC，10801UniversityBlvd.，Manassas，Virginia，20110-2209，U.S.A.，ATCC保藏號PTA-4931。第二種這樣的細胞系，其產生嵌合型鼠無糖基mu5c8抗體，于2003年1月14日根據國際認可的用于專利程序的布達佩斯條約的規定保藏于ATCC，10801UniversityBlvd.，Manassas，Virginia，20110-2209，U.S.A.，ATCC保藏號PTA-4934。治療方法本發明一個實施方案中，無糖基抗-CD154抗體或其抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物，能夠抑制受試者中的免疫反應。所述抗體，抗體衍生物或藥物組合物以有效抑制量給予受試者。抗體，抗體衍生物或藥物組合物的“有效抑制量”是有效抑制其給予的受試者中的CD154-CD40相互作用的任何量。測定“抑制量”的方法是本領域技術人員已知的并有賴于以下因素，包括但不限于所涉及的受試者類型，受試者大小，所遞送的治療劑。本發明具體實施方案中，無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能與CD154蛋白分子結合。本發明具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能與CD154蛋白結合，后者與ATCC細胞系PTA-4931產生的無糖基hu5c8特異性結合。本發明具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能與CD154表位結合，所述表位與ATCC細胞系PTA-4931產生的無糖基hu5c8特異性結合，其中所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物的特征在于N298Q的突變(利用EUKabat編號為N297)。本發明具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物不與效應器受體結合。本發明另一更為具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能與CD154蛋白結合，后者與ATCC細胞系PTA-4931產生的無糖基hu5c8特異性結合，且其中所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物或藥物組合物不與效應器受體結合。本發明具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物不導致血栓形成。本發明另一更為具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能與CD154蛋白結合，后者與ATCC細胞系PTA-4931產生的無糖基hu5c8特異性結合，且其中所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物或藥物組合物不導致血栓形成。本發明另一具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能通過抑制CD154-CD40相互作用抑制免疫反應。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制炎癥。為本發明的目的，炎性反應的特征在于紅、腫、熱和痛，作為毛細血管擴張以及水腫和吞噬性白細胞遷移的后果。炎性反應的一些實例包括關節炎，接觸性皮炎，超-IgE綜合征，炎性腸病，過敏性哮喘，和特發性炎性反應[Gallin，1989]。關節炎的一些實例包括類風濕性關節炎，非類風濕性炎性關節炎，與萊姆病相關的關節炎和炎性骨關節炎。特發性炎性疾病的一些實例包括銀屑病和系統性紅斑狼瘡。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制器官移植受體的排斥作用。本發明另一更為具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能夠抑制心臟、腎、肝、皮膚、胰島細胞和骨髓的受體的排斥作用。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制受體中的移植物抗宿主疾病。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制受試者中的過敏反應-例如，干草熱或對青霉素或其它藥物的過敏。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制患有自身免疫病的受試者中的自身免疫反應。自身免疫病的實例包括，但不限于，類風濕性關節炎，重癥肌無力，系統性紅斑狼瘡，Graves病，特發性血小板減少性紫癜，溶血性貧血，糖尿病，炎性腸病，克隆氏病，多發性硬化，銀屑病和藥物誘導的自身免疫病，-例如，藥物誘導的狼瘡。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制患有來自感染性疾病的自身免疫反應的受試者中的自身免疫反應。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制患有來自Reiter綜合征，脊柱關節炎，萊姆病，HIV感染，梅毒或結核病的自身免疫反應的受試者中的自身免疫反應。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制受試者中的纖維化。纖維化的一些實例包括肺纖維化或纖維變性疾病。肺纖維化的一些實例包括繼發于成人呼吸窘迫綜合征的肺纖維化，藥物誘導的肺纖維化，特發性肺纖維化，或過敏性肺炎(hypersensitivitypneumonitis)。纖維變性疾病的一些實例包括丙型肝炎；乙型肝炎；肝硬化；繼發于毒素傷害的肝硬化；繼發于藥物的肝硬化；繼發于病毒感染的肝硬化；以及繼發于自身免疫病的肝硬化。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制胃腸疾病。胃腸疾病的一些實例包括食管運動障礙，炎性腸病和硬皮病。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制血管疾病。血管疾病的一些實例包括動脈粥樣硬化或再灌注損傷。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制T細胞癌癥(例如T細胞白血病或淋巴瘤)患者中的T細胞腫瘤細胞的增殖。所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物或藥物組合物可以以有效抑制受試者中T細胞腫瘤細胞增殖的量給藥受試者。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能抑制HTLVI病毒對受試者T細胞的病毒感染。所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或藥物組合物可以以有效抑制病毒感染的量給予受試者。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能顯像受試者中的腫瘤細胞或贅生細胞，其表達ATCC細胞系PTA-4931產生的無糖基hu5c8特異性識別的蛋白。顯像受試者中的腫瘤細胞或贅生細胞的方法包括以下步驟在允許抗體或抗體衍生物與腫瘤細胞或贅生細胞表面的蛋白形成復合體的條件下，給予受試者有效量的無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物，或藥物組合物；顯像任何形成的抗體/蛋白復合體或抗體衍生物/復合體，由此顯像受試者中的任何腫瘤細胞或贅生細胞。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物能檢測受試者中的腫瘤細胞或贅生物細胞的存在，其表達ATCC細胞系PTA-4931產生的無糖基hu5c8特異性識別的蛋白。檢測受試者中的腫瘤細胞或贅生物細胞存在的方法包括以下步驟在允許抗體或抗體衍生物與蛋白形成復合體的條件下，給予受試者有效量的無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物，或藥物組合物；從受試者清除任何未結合的顯像劑；和檢測形成的抗體/蛋白復合體或抗體衍生物/復合體，所述復合物的存在表明受試者中腫瘤細胞和贅生物細胞的存在。藥物組合物本發明提供藥物組合物，其包括本文所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物。本發明一個實施方案中，所述藥物組合物包括一或多種無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物。本發明另一實施方案中，所述藥物組合物還包括可藥用載體，佐劑，遞送載體，緩沖液或穩定劑。本發明更為具體的實施方案中，所述可藥用載體是磷酸鹽緩沖的鹽水，生理鹽水，水，檸檬酸鹽/蔗糖/Tween配制劑和乳劑-例如，油/水乳劑。本發明一個實施方案中，所述藥物組合物可在微被囊裝置中遞送從而降低和防止對蛋白的宿主免疫反應。所述抗體或抗體衍生物也可以在膜諸如脂質體中微被囊化的形式來遞送。本發明一個實施方案中，所述藥物組合物可以為無菌注射制備物的形式，例如無菌可注射水性或油性懸液。該懸液可根據本領域已知技術利用適宜的分散劑，濕潤劑和懸浮劑來配制。本發明一個實施方案中，所述藥物組合物可口服，局部或靜脈內遞送。本發明另一更為具體實施方案中，對于口服給藥，所述藥物組合物配制在適宜的膠囊，片劑，含水懸液或溶液中。所述組合物的口服給藥用固體制劑可含有適宜載體或賦形劑，諸如玉米淀粉，凝膠，乳糖，阿拉伯樹膠，蔗糖，微晶纖維素，高嶺土，甘露醇，磷酸二鈣，氯化鈉，或褐藻酸。可使用的崩解劑包括，但不限于，微晶纖維素，玉米淀粉，羥基乙酸淀粉鈉，和褐藻酸。可使用的片劑粘合劑包括阿拉伯樹膠，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，聚乙烯吡咯烷酮(PovidoneTM)，羥丙基甲基纖維素，蔗糖，淀粉和乙基纖維素。可使用的潤滑劑包括硬脂酸鎂，硬脂酸，硅酮流體，滑石，石蠟，油，和硅膠。本發明另一更為具體實施方案中，對于局部應用，所述藥物組合物可配制在適宜的軟膏中。局部應用的組合物制劑的一些實例包括滴劑，酊劑，洗劑，乳膏，溶液和軟膏，其中含有活性組分以及各種支持劑和載體。本發明一個實施方案中，局部半固體軟膏制劑通常包括在載體中的濃度約1-20％，-例如，5-10％的活性成份，所述載體諸如藥物乳膏基質。本發明一個實施方案中，吸入藥物組合物和透皮藥物組合物也可輕易制備。本發明一個實施方案中，在水或其它含水載體中制備的口服給藥的藥物組合物的液體制劑可含有多種懸浮劑，諸如甲基纖維素，藻酸鹽，黃芪膠，果膠，kelgin，角叉菜膠(carrageenan)，阿拉伯樹膠，聚乙烯吡咯烷酮，和聚乙二醇。本發明藥物組合物的液體制劑也可包括溶液，乳劑，糖漿或酏劑，其含有與活性化合物一起的濕潤劑，甜味劑，和著色劑以及調味劑。所述藥物組合物的各種液體和粉末制劑可通過吸入待治療哺乳動物的肺中的常規方法來制備。本發明一個實施方案中，注射用藥物組合物的液體制劑可包含各種載體，諸如植物油，二甲基乙酰胺，二甲基甲酰胺，乳酸乙酯，碳酸乙酯，豆蔻酸異丙酯，乙醇，多元醇-即甘油，丙二醇，液體聚乙二醇，等。一些實施方案中，所述組合物包括檸檬酸鹽/蔗糖/tween載體。對于靜脈內注射，組合物的水溶性版本可通過滴注方法給藥，由此含有抗真菌劑和生理可接受的制劑的藥物制劑被輸注。生理可接受的賦形劑可包括，例如5％葡萄糖，0.9％鹽水，林格溶液和其它適宜賦形劑。所述組合物的適宜不溶性形式可作為含水基質或可藥用油基質中的懸液配制并給藥，所述基質諸如長鏈脂肪酸的酯-例如油酸乙酯。本發明一個實施方案中，所述藥物組合物包括在可藥用載體中的約0.1-90％重量(諸如1-20％或1-10％)的無糖基抗-CD154抗體或其抗體衍生物。本發明一個實施方案中，每種藥物組合物中抗體或抗體衍生物的最佳百分比根據制劑本身以及具體病變和相關治療方案中的所需治療效果而不同。藥物制劑在本領域已經完全確定[Gennaro，2000；Ansel，1999；Kibbe，2000]。醫學領域熟練技術人員已知的常規方法可用于將所述藥物組合物給予受試者。本發明一些實施方案中，所述藥物組合物還包括免疫抑制性或免疫調節性化合物。例如，所述免疫抑制性或免疫調節性化合物可為以下物質之一通過CD28中斷T細胞共刺激信號的藥劑；中斷鈣調磷酸酶信號的藥劑，皮質類固醇，抗增生藥劑，與在免疫細胞表面上表達的蛋白質特異性結合的抗體，所述免疫細胞包括但不限于CD45，CD2，IL2R，CD4，CD8和RANKFcR，B7，CTLA4，TNF，LTγ，以及VLA-4。本發明一些實施方案中，所述免疫抑制性和免疫調節性化合物是他克莫司(tacrolimus)，西羅莫司(sirolimus)，霉酚酸酯(mycophenolatemofetil)，mizorubine，脫氧精胍菌素(deoxyspergualin)，布喹那鈉(brequinarsodium)，來氟米特(leflunomide)，雷怕霉素(rapamycin)或azaspirane。本發明的其它實施方案中，抗體，抗體衍生物或包含它們的藥物組合物可單獨包含在容器，包裝或分配器中或作為試劑盒的一部分，所述試劑盒具有標簽和給藥說明。給藥和遞送途徑無糖基抗-CD154抗體或其抗體衍生物以及本發明的藥物組合物可以以任何醫學接受的方式給予受試者。為本發明的目的，“給藥”指本領域技術人員已知的給藥抗體，抗體衍生物和藥物組合物的任何標準方法，并且不應限于本發明提供的實施例。本發明一些實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過使用標準方法經靜脈內、皮下、腹膜內、肌內、髓內、腦室內、經硬膜外內、動脈內、血管內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、脊髓內、腫瘤內、腦內、腸內、肺內、粘膜內、子宮內、舌下、或在炎癥位點或腫瘤生長位點進行局部注射來給藥。本發明一些實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過包括口服，經鼻，經眼，經直腸或局部的途徑來給予受試者。另一更為具體實施方案中，本發明所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可以以膠囊、片劑、含水懸液或溶液的形式經口服給藥受試者。另一更為具體實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過應用乳膏、軟膏等經局部給藥受試者。本發明的其它實施方案中，本發明所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過利用霧化器，干粉吸入器或定量吸入器來吸入而給藥。本發明其它實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過以下方式來給予受試者持續釋放給藥，諸如在手術過程中直接應用的可降解植入物的儲器式注射，或將輸注泵或生物相容性持續釋放植入物植入受試者中。另一更為具體實施方案中，本發明所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過可注射儲器的給藥途徑(injectabledepotroute)給藥，諸如利用1，3，或6個月的儲器式可注射或可生物降解物質和方法。另一更為具體實施方案中，本發明所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可通過將含有抗體，抗體衍生物和藥物組合物的透皮貼劑給予受試者皮膚來給藥受試者，并使得所述貼劑與受試者皮膚接觸，通常每貼1-5小時。本發明的其它實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可以以任何劑量每kg體重以及醫學可接受的任何劑量頻率給藥受試者。可接受的劑量包括約0.01和200mg/kg受試者體重的范圍。其它實施方案中，本發明所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物可以以每天到每隔一個月的間隔重復給藥。本發明一個實施方案中，所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物和藥物組合物如需要可每天給藥多個劑量以獲得總的所需日劑量。治療方法的有效性可通過監測受試者的已知體征或疾病癥狀來評估。對于本發明的所有實施方案，有效產生所需效果的本發明所述無糖基抗-CD154抗體，其抗體衍生物以及藥物組合物的劑量和給藥頻率將有賴于多種因素，諸如待治療疾病的性質，受試者大小，治療目的，所用具體藥物組合物，以及治療醫師的判斷。本發明所述無糖基抗-CD154抗體，其抗體衍生物以及藥物組合物可作為單個劑量針對特定指征給藥，諸如防止受試者對暴露了較短時間的抗原的免疫反應，所述抗原諸如在一天的治療中給藥的外源抗原。所述治療的實例包括聯合給藥本發明的抗體或抗體衍生物以及治療劑，例如，抗原性藥物(antigenicpharmaceutical)，過敏原或血液產品，或基因治療載體。在抗原長期存在的指征中，諸如在控制對移植的組織或長期給藥的抗原性藥物的免疫反應中，本發明的抗體或抗體衍生物或藥物組合物間隔給藥，持續醫學上指示的較長時間，從數天或數周到受試者的一生。本發明一個實施方案中，可通過上述方法治療的受試者是動物。優選所述動物是哺乳動物。可被治療的哺乳動物的實例包括，但不限于，人，非人靈長類，嚙齒類(包括大鼠，小鼠，倉鼠和豚鼠)，母牛，馬，綿羊，山羊，豬，狗，和貓。優選，所述哺乳動物是人。本發明可基于以下實施例更好理解。然而，本領域技術人員將輕易理解所討論的具體方法和結果僅僅是本發明的舉例，如在本發明隨后的實施方案中具體描述的。試驗詳述實施例以下實施例舉例說明了本發明的方法和產品。對所述條件和參數的適宜的變動和改造在分子生物學領域是常見的，并且是本領域技術人員顯而易見的，它們在本發明的精神和范圍內。實施例1無糖基hu5c8抗體的產生和評估無糖基hu5c8mAb的產生和表達為降低hu5c8mAb的效應器功能，無糖基形式通過改變重鏈CH2結構域中經典的N連接的Asn位點為Gln殘基來產生。競爭結合試驗證實了與糖基化hu5c8mAb相比，無糖基hu5c8mAb結合細胞表面CD154的能力沒有改變(圖1)。利用橋接試驗形式(bridgingassayformat)，在體外測定效應器功能。與糖基化hu5c8mAb相比，無糖基hu5c8mAb與FcγRI的相對結合減弱25倍(圖2A)。在達到5mg/ml的濃度時，不能證實無糖基hu5c8mAb與FcγRIII的殘余結合，而正常糖基化hu5c8mAb在相同的試驗形式中顯示EC50為50ng/ml(圖2B)。獼猴中無糖基hu5c8mAb的藥物動力學給予單劑量20mg/kghu5c8mAb和無糖基hu5c8mAb后，對來自兩個獨立試驗的血清濃度-時間圖進行藥物動力學分析，所述分析利用兩個隔室模型(compartmentmodel)，其具有一級清除率常數(firstordereliminationrateconstant)(WinNolinProfessionalSoftwarev3.1，PharsightCorp.，Cary，NC)。圖3含有藥物動力學圖，圖1含有hu5c8mAb和無糖基hu5c8mAb的平均藥物動力學參數。hu5c8mAb的清除和體積分布比無糖基hu5c8mAb稍大。表1將20mg/kg的hu5c8或無糖基hu5c8單劑量靜脈內給藥獼猴A以后的平均藥物動力學參數A數據顯示為數學平均值±標準偏差，對于hu5c8處理組而言n＝3，對于無糖基hu5c8而言n＝4。B最大血清濃度，C系統清除率，D穩態分布體積，E終期血清半壽期。方法-實施例11.抗體生成hu5c8mAb的選擇，克隆和人源化在以前已經描述。分別見Lederman，1992和Karpusas，2001。hu5c8mAb雜交瘤可獲自ATCC(HB10916)。利用Amersham-PharmaciaBiotech(Piscataway，NJ，USA)的試劑盒，根據生產商推薦的方案，通過獨特位點消除誘變，在糖基化hu5c8mAb中進行重鏈糖基化位點突變N298Q(N297，利用EU編號)。產生的無糖基hu5c8在NSO骨髓瘤細胞中穩定表達并通過蛋白A和凝膠過濾層析純化。產生無糖基hu5c8抗體的細胞系得自ATCC(PTA-4931)。SDS-PAGE和分析性凝膠過濾層析顯示所述蛋白形成預期的二硫鍵連接的四聚體。2.CD154結合試驗對huCD154+D1.1細胞(Dr.LeonardChess，ColumbiaUniversity饋贈，也可得自ATCC(CRL-10915)進行基于FACS的競爭結合試驗。0.1mg/ml生物素化的hu5c8mAb與細胞表面CD154的結合與hu5c8mAb和無糖基hu5c8mAb的被滴定液(titration)競爭。細胞結合的生物素化hu5c8mAb用鏈霉抗生物素-藻膽紅素(PE)(BD-PharMingenSanDiego，CA，USA)檢測。相對結合親和力可從四參數曲線擬合的IC50值推定。3.CD154-FcγR橋接測定FcγR結合親和力利用基于抗體形成抗原與攜帶FcγR的細胞之間的“橋接”的能力的試驗測定(見下文)。FcγRI(CD64)橋接試驗通過用1mg/ml重組可溶人CD154(Biogen，Karpusas，1995)的PBS溶液在4℃包被96孔MaxisorbELISA板(Nalge-NuncRochester，NY，USA)過夜，隨后用1％BSA的PBS溶液封閉來進行。hu5c8mAb(糖基化和無糖基)的被滴定液隨后與CD154在37℃結合30分鐘，洗滌該板，測定熒光標記的U937(CD64+)細胞的結合。U937細胞在含有10％FBS，10mMHEPES，L-谷氨酰胺，和青霉素/鏈霉素的RPMI培養基中生長，以1∶2分裂，并在用1000單位/mlIFNγ測定前活化一天以增加FcγRI表達。FcγRIII(CD16)橋接試驗利用生長于96孔組織培養板(CorningLifeSciencesActon，MA，USA)中的表達CD154的單層中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(Biogen)進行，并測定用CD16(DanaFarberInstitute，Boston，MA，USA饋贈)轉染的熒光標記的Jurkat細胞的mAb依賴性結合。CHO-CD154+細胞以1×105細胞/ml接種于96孔板中，在含有10％透析的FBS，100nM氨甲喋呤，L-谷氨酰胺，和青霉素/鏈霉素(所有試劑均來自Gibco-BRLRockville，MD，USA)的α-MEM中生長到滿底。生長在含有10％FBS，400mg/ml遺傳霉素(Geneticin)，10mMHEPES，丙酮酸鈉，L-谷氨酰胺，和青霉素/鏈霉素(所有試劑得自Gibco-BRL)的RPMI中的CD16+Jurkat細胞在進行所述測定以前1∶2分裂。在對于FcγRI和FcγRIII受體的實驗中，攜帶Fc受體的細胞用2′，7′-雙-(2-羧基乙基)-5-(和-6)-羧基熒光素乙酰氧基甲基酯(BCECF-AM)(MolecularProbesEugene，OR，USA)在37℃標記20分鐘。洗滌去除過量BCECF-AM，1×105標記的細胞在測定中在37℃保溫30分鐘。未結合的FcγR+細胞通過洗滌數次去除，并在Cytofluor2350FluorescentMicroplateReader(MilliporeCorporationBedford，MA，USA)上讀板，激發波長485nm，發射波長530nm。實施例2無糖基hu5c8抗體抑制初始和后繼體液反應抑制獼猴中對破傷風類毒素(TT)抗原的初始體液免疫反應各自為單劑量的20mg/kg的無糖基hu5c8mAb和糖基化hu5c8mAb(根據實施例1制備)抑制對TT的初始抗體反應的能力在分別的實驗中評估。與鹽水處理的對照組相比，給藥無糖基hu5c8mAb或糖基化hu5c8mAb導致總體初始免疫反應(EAUC)分別降低70％和77％。圖4圖示TT抗體在整個42天中的效價，表明無糖基hu5c8mAb對初始體液反應的抑制程度與糖基化hu5c8mAb相似，但是其FcγR結合能力降低。人源化的mAbs的免疫原性是它們在該非人靈長類模型中的有效性的另一測量指標。四只用單劑量20mg/kg無糖基hu5c8mAb處理的動物中有三只在藥物從血清清除之后不久，于第82天左右出現了低滴度的抗-hu5c8抗體，與存在無糖基mAb時的體液反應的抑制一致(數據未顯示)。作為初始反應抑制的另一測量指標，腹股溝淋巴結活檢顯示無糖基hu5c8mAb治療的動物中生發中心(“GC”)的存在與對照相比顯著減少。在治療的動物中，GC很少見并且很小，占據皮質的20％以下。對照動物具有多個GC，以及中度到明顯的反應性二級濾泡。觀察到的淋巴結的中度到重度再生不良與以前對糖基化hu5c8mAb觀察到的(數據未顯示)一致。將單劑量20mg/kg糖基化或無糖基hu5c8mAb給藥獼猴以后血液學參數沒有總體改變，淋巴細胞總數沒有明顯改變。此外，CD4/CD8T細胞比例不變，表明廣泛的CD4+T細胞消耗沒有出現(數據未顯示)。抑制獼猴中對破傷風類毒素(TT)抗原的后繼體液反應單劑量20mg/kg無糖基hu5c8mAb抑制后繼體液反應的能力通過將第二次TT攻擊給予8只鹽水對照動物來評估，所述動物在以前所述的無糖基hu5c8mAb研究階段中具有正常初始反應。第二次TT攻擊以前，這些動物中有4只接受20mg/kg無糖基hu5c8mAb(組1B)，四只接受鹽水(組1A)。后繼免疫反應的特征在于開始較快并且比初始免疫反應的程度強。計算單個動物的后繼反應相對于初始反應的程度(EAUC后繼/EAUC初始)(表2)。圖5顯示總體初始和后繼個體免疫反應。應注意到個體動物的免疫反應程度存在明顯差異。平均而言，鹽水對照(組1A)中的后繼TT攻擊產生的總體抗體反應比它們對該抗原的初始反應高6.5倍，而接受無糖基hu5c8mAb的動物(組1B)產生的總體后繼抗體反應平均而言比它們的初始反應僅高2.0倍。因此，給藥無糖基hu5c8mAb與鹽水對照相比，前者導致后繼抗體反應的程度降低70％。表2獼猴中對破傷風類毒素的總體初始和后繼免疫反應(EAUC)A1A組動物在初始和后繼TT攻擊之前接受鹽水。1B組動物在初始TT攻擊之前接受鹽水，在后繼TT攻擊之前接受無糖基hu5c8。B后繼反應的程度通過后繼EAUC與初始EAUC的比值表示。方法-實施例21.對TT的體液免疫反應利用與實施例1中同樣的獼猴，在獼猴中進行兩個獨立的研究。收集來自每個研究的血清樣品并將用于免疫分型的全血保持在室溫，在取血日進行分析。該無糖基hu5c8mAb研究包括兩個處理組。組1包括4只雄性和四只雌性動物，其在第一天接受鹽水并作為未處理的對照。組2包括兩只雄性和兩只雌性動物，其在第一天經靜脈內接受單劑量20mg/kg無糖基hu5c8mAb(如上所述)。處理4小時以后，所有動物經肌內(IM)接受5Lf(限量絮凝化劑量(limesflocculatingdose))吸收的TT。在第一天處理前后以及直到給藥后(post-dosing)第190天的選定日子采血。在第15天取淋巴結活檢樣品。糖基化hu5c8mAb研究包括五組處理組，每組含有三個雌性樣品。第一天，第一組接受鹽水(未處理的對照)，第二到五組分別接受單劑量的0.2，1，5或20mg/kg糖基化hu5c8mAb，其可得自ATCC(CRL-10915)。處理4小時后，所有動物接受單次IM注射的5Lf吸收的TT。第一天處理前后以及直到給藥后第42天的選定日子，從所有組采血。為允許這兩個獨立研究的可比性，選定的血清樣品在抗TTELISA實驗中并列比較。在上述無糖基研究中初次TT攻擊后第230天，對照組1分成兩組。組1A作為未經處理的對照，組1B用無糖基hu5c8mAb處理評估其抑制后繼免疫反應的能力。動物如下處理組1B在第一天經靜脈內接受單劑量20mg/kg無糖基hu5c8mAb。組1A在第一天經靜脈內接受等體積的磷酸鹽緩沖的鹽水。處理后四小時，所有動物接受IM劑量的5Lf吸收的TT。第一天處理前后以及直到給藥后第85天的選定日期采血。2.評估免疫反應利用非隔室分析(noncompartmentalanalysis)評估免疫反應。計算的免疫參數包括最大效價值(Emax)，達到該最大值的時間(tmax)，以及從抗原給藥到最后的取樣時間點對所給予的抗原的總體抗體反應(EAUC(0-最后))。利用具有初始消除率常數的兩隔室模型進行藥物動力學分析(WinNolinProfessionalSoftwarev3.1，PharsightCorp.，Cary，NC，USA)。確定的藥物動力學參數包括最大血清濃度(Cmax)，系統清除速率(Cl)，穩態分布體積(Vss)和抗體的終期半壽期(t1/2)。統計學分析，包括數學平均值，標準偏差和幾何平均值利用MicrosoftExcelversion5.0軟件(MicrosoftCorp.，Redmond，WA，USA)計算。3.獼猴的免疫分型利用雙色全血染色方案然后用FACS分析進行淋巴細胞免疫分型。簡而言之，在室溫將100μlEDTA-處理的全血與標記的mAb的以下組合之一室溫保溫20minCD20-FITC克隆2H7(BD-PharmingenSanDiegoCA，USA)和CD2-PE克隆RPA-2.10(BD-Pharmingen)，CD3-FITC克隆SP-34(BD-Pharmingen)和CD4-PE克隆OKT4(OrthoDiagnosticSystemsRaritan，NJ，USA)，或CD3-FITC和CD8-PE克隆DK-25(DakoCorporationCarpinteria，CA，USA)。紅細胞用2ml1XFACS裂解溶液(Becton-DickinsonFranklinLakes，NJ，USA)裂解。淋巴細胞用1％的多聚甲醛固定，并用配備Cellquest軟件的FACScan(Becton-Dickinson)分析。總淋巴細胞數目通過所有CD2和CD20陽性細胞的數目之和確定。B細胞鑒定為CD20陽性細胞。T細胞亞組鑒定為CD3和CD4或CD3和CD8雙陽性。總淋巴細胞、B細胞、CD4+T細胞和CD8+T細胞表示為淋巴細胞分析門內的陽性細胞百分比。計算每組數據的CD4/CD8比例。4.hu5c8mAb藥物動力學的ELISA.ELISA板(Nalge-NuncRochester，NY，USA)用5μg/ml重組可溶人CD154(Biogen，seealsoKarpusas1995)在PBS中、4℃包被過夜并用2％驢血清阻斷。(JacksonImmunoResearchLaboratoriesWestGrove，PA，USA-Catalog#017-000-121)。血清連續稀釋液和8-500ng/ml的hu5c8的標準曲線在室溫保溫1小時的過程中制得。結合的hu5c8mAb利用驢抗-人IgG辣根過氧化物酶(HRP)(JacksonImmunoResearchLaboratoriesWestGrove，PA，USA)檢測，然后用3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(“TMB”)底物試劑盒(PierceBiotechnologyRockland，IL，USA)顯示。在450nm利用Spectromax讀板儀(MolecularDevicesSunnyvale，CA，USA)讀板。用SoftmaxPro軟件(MolecularDevices)將稀釋的血清逆擬合(back-fit)到標準品的四參數曲線擬合的線性部分。5.測定抗-hu5c8抗體反應的ELISAELISA板(CorBing-Costar)用1μg/ml無糖基hu5c8mAb(上述)在碳酸氫鹽緩沖液pH9.6中、4℃保溫過夜并用1％BSA封閉。獼猴血清的連續稀釋液在室溫保溫1.5h。結合的抗-hu5c8mAb利用100ng/ml生物素化的hu5c8mAb然后用鏈霉抗生物素-HRP(PierceBiotechnology)檢測，然后用TMB底物試劑盒(PierceBiotechnology)顯示。在450nm利用Spectromax讀板儀(MolecularDevices)讀板。抗體效價定義為產生超過放血前的值(prebleedvalue)＞0.100O.D.單位的最高稀釋度的倒數。6.抗-TT反應的ELISAELISA板(Corning-Costar)用5μ/mlTT(MassachusettsPublicHealthBiologicLaboratoriesBoston，MA，USA)碳酸氫鹽緩沖液pH9.6中、4℃保溫過夜。連續稀釋的獼猴血清加入封閉的板，在室溫放置2小時。結合的抗-TT抗體用兔抗-猴IgG-HRP(Cappel-OrganonTeknikaDurham，NC，USA)檢測，然后用TMB底物試劑盒(PierceBiotechnology)顯示。在450nm利用Spectromax讀板儀(MolecularDevicesSunnyvale，CA，USA)讀板。用SoftmaxPro軟件(MolecularDevices)為每種連續稀釋的血清樣品產生四參數曲線擬合。抗體效價定義為產生超過放血前的值0.100O.D.單位的稀釋度的倒數。7.血液學收集EDTA鉀抗凝的血液樣品并每月分析以下血液學參數總白細胞計數，紅細胞計數，血紅蛋白濃度，血細胞比容，平均細胞容積(meancorpuscularvolume)，平均細胞血紅蛋白(meancorpuscularhemoglobin)，平均細胞血紅蛋白濃度，血小板計數和血涂片評估(包括差別)。8.淋巴結活檢無糖基hu5c8mAb的初始TT反應研究的第15天，從所有動物采集腹股溝淋巴結。清理淋巴結組織，包埋在石蠟中，切片并封固于玻璃載片上。載玻片用蘇木精和伊紅染色。所述載玻片通過目測分析生發中心的存在，并基于生發中心的頻率和大小定量評估。實施例3無糖基muMR1抗體抑制狼瘡性腎炎系統性紅斑狼瘡(“SLE”)是自發出現的自身免疫病，主要見于女性，特征在于多種病理性抗核自身抗體的產生。在狼瘡腎炎中，腎損傷主要由細胞和體液免疫機制共同介導，包括沉積在腎小球中并活化補體級聯反應的免疫復合物的形成，其導致腎小球腎炎。以前確定在人和小鼠SLE中產生的抗核抗體都是由所選自身免疫Th細胞和B細胞的群體之間的同源反應(cognateinteraction)驅動的。[Kalledetal.，1998]。以前的研究證實，對于確診患有狼瘡腎炎的(SWRxNZB)F1(SNF1)小鼠，用抗-CD154mAb長期治療的倉鼠MR1(haMR1)，在5.5月齡開始治療可延長生存期并降低嚴重腎炎的發病率。在該實施例中，描述了該模型中兩種鼠嵌合MR1mAbs的有效性。鼠嵌合MR1(“muMR1”)由融合于鼠IgG2a重鏈和kappa輕鏈恒定區的原始倉鼠重鏈和輕鏈可變區組成。無糖基形式的muMR1通過突變IgG2aFc的CH2結構域中N連接的糖基化位點產生。利用這兩種抗體，在狼瘡腎炎中評估Fc糖基化對抗-CD154mAbs的作用。該實施例的結果證實，嵌合mAbs，muMR1和無糖基muMR1，都保留了抑制自身抗體反應的能力。具體地，類似于野生型，親本倉鼠MR1，與用鼠IgG2a對照mAb處理的小鼠相比，兩種鼠源化的抗體都保持最小化用它們處理的小鼠中腎炎癥，纖維化，硬化和血管炎的能力。muMR1和無糖基muMR1的藥物動力學muMR1和無糖基muMR1抗體的藥物動力學分析揭示，兩種抗體都顯示在BALB/c小鼠血清中的相同動力學圖譜(圖6)。具體，這些嵌合分子在正常小鼠中的血清半壽期估計為～9天，類似倉鼠MR1(數據未示)。自身抗體反應的分析與對照動物相比，用muMR1或無糖基muMR1的處理大大降低了對dsDNA和ssDNA的自身抗體反應(圖7A&B)。組織學分析腎組織學分析證實，五只同種型對照動物中有3只患有嚴重的末期腎病，特征為評分方案中所述的多種特征。處理組動物中除了極少數以外疾病嚴重性明顯較低。野生型(n＝11)和無糖基(n＝12)muMR1處理的動物之間的差異很小，但是野生型的綜合疾病評分稍低。圖8顯示了該組腎的綜合組織學評分。用無糖基muMR1處理的所有動物中，大多數患有輕微的早期腎小球改變，小管間質改變很少或不明顯。所有用muMR1(n＝11)處理的動物有輕微早期改變，沒有明顯小管間質改變。從這些結果明顯可見，muMR1和無糖基muMR1都可有效防止以狼瘡腎炎為特征的組織學改變。B和T細胞區中淋巴樣擴大程度通過對每只經過處理的動物的每個脾進行組織學分析評估。鑒定次級濾泡較難，因為存在與冷凍切片制備有關的人工行為結果。脾淋巴樣區擴大程度和腎疾病得分之間沒有明顯相關性。然而，與muMR1處理的動物相比，在同種型對照和無糖基muMR1-處理的動物中，小動脈周圍的淋巴細胞鞘(PALS)擴大的程度似乎明顯得多(數據未示)。腎功能分析為評估腎功能，測定每只動物的蛋白尿(PU)水平，以及血清肌酐和血尿素氮(BUN)。嵌合muMR1mAbs延遲SNF1動物中嚴重腎炎的發作，如通過測定尿中蛋白質含量所示的那樣。當與對照動物相比時，抗-CD154處理的小鼠在6-9個月之間的時間點的PU值較低(圖9)。然而，在～10月齡，所有組的PU值指示腎衰(圖9)。這些結果提示抗-CD154治療延遲蛋白尿的開始。圖10顯示SNF1小鼠血清中的肌酐水平，圖11顯示SNF1小鼠血清中的BUN水平。對照組動物在7.25-10.5月齡，其血清肌酐和BUN水平升高。反之，用糖基化muMR1治療的小鼠在整個研究中保持穩定，其血清肌酐或BUN沒有實質的升高或降低。無糖基muMR1治療的動物保持正常血清肌酐水平到～9月齡，那時觀察到輕微增加。類似地，該組中的BUN水平在11月齡升高。生存評估抗-CD154mAb治療延長SNF1小鼠生存期。在11月齡，超過90％治療的小鼠存活，而對照僅有56％存活。到第14個月，所有對照小鼠都死亡，但分別有86％和75％的muMR1和無糖基muMR1小鼠仍存活。(數據未示)總體來看，這些試驗證實用muMR1或無糖基muMR1長期治療腎炎SNF1小鼠的存活期延長，自身抗體產生減少，腎病發展延緩。糖基化和無糖基muMR1獲得的稍有不同的結果表示Fc糖基化對狼瘡中抗-CD154mAb的有效性的影響較小。因此，無糖基抗-CD154mAb代表對狼瘡腎炎的有效治療。方法-實施例31.小鼠BALB/c，SWR和NZB小鼠購自TheJacksonLaboratory(BarHarbor，ME)。(SWRxNZB)F1(SNF1)雜合體在Biogen的動物飼養裝置中，在常規圈養條件下喂養。雌性SNF1小鼠用于所有狼瘡研究。BALB/c小鼠用于藥物動力學(“PK”)研究。2.抗體MR1雜交瘤(ATCC#CRL-2580)(其產生Armenian倉鼠抗-小鼠CD154mAb)購自美國典型培養物保藏中心(Rockville，MD)。3.治療方案所有注射通過經腹膜內途徑給予。狼瘡研究包括接受PI.17muIgG2a的SNF1小鼠對照組和接受嵌合抗-CD154mAbs之一的治療的SNF1組。前6周中每周一次給予單劑量500μgmAb，然后每月一次單次注射500μg直到動物死亡或研究終止。研究在動物為～5.5月齡時開始，每月一次收集血清樣品。對于PK研究，BALB/c小鼠接受單劑量100μgmuMR1或無糖基muMR1，4小時后以及第1，2，4，7，9，11和14天收集血樣。4.ELISA測定法為檢測血清嵌合MR1mAbs，NUNCMaxisorp板用5μg/ml重組可溶鼠CD154在4℃保溫過夜。第二天封閉所述板，加入稀釋的血清，然后加入辣根過氧化物酶偶聯的抗-小鼠IgG2a(SouthernBiotech)，并用TMB底物顯示。反應用2N硫酸終止，并在450nm在Spectramax讀板儀(MolecularDevices，CA)上讀板。抗-單鏈DNA(ssDNA)和抗-雙鏈(“dsDNA”)ELISA利用NUNCMaxiSorp板進行。所述板在4℃用10μg/ml甲基化BSA(CalbiochemCorp，LaJolla，CA)包被過夜然后用5μg/mlI級小牛胸腺DNA(SIGMA，St.Louis，MO)在25℃包被2小時。小牛胸腺DNA用超聲剪切然后在使用前用SI核酸酶消化。對于抗-ssDNA測定法，DNA煮沸10分鐘，然后在冰上冷凍備用。封閉后，將血清樣品的連續稀釋物加入并在室溫保溫2小時。自身抗體用山羊抗小鼠IgG-堿性磷酸酶(SIGMA，ST.LOUIS，MO)檢測并用對硝基苯基磷酸鹽(SIGMA，ST.LOUIS，MO)在1M二乙醇胺緩沖液中顯示。在405nm讀板，并通過利用已知量的抗-DNAmAb205或mAb5c6獲得標準曲線，所述抗體對ss-和dsDNA都特異。抗-DNA效價定義為超過背景0.1OD單位的稀釋度的倒數。5.組織學腎和脾冷凍切片和福爾馬林固定的石蠟包埋組織用蘇木精-伊紅(“H&E”)染色炎性浸潤。腎也用馬森三色法(MassonTrichrome)染色纖維化并用周期酸性(Periodicacid)Schiff染色(PeriodicAcidSchiffstain)(“PAS”)染色基底膜增厚。染色的組織切片通過獸醫病理學家評分。狼瘡腎炎的組織病理學分級總分基于腎小球，間質和小管的改變。級別0到4+基于受檢結構(即腎小球，血管等)受影響的百分比，具體如下0，沒有明顯損傷；1+，1％-30％結構受損；2+，30％-60％結構受損；3+，＞60％結構受損到一定程度；4+，＞60％結構嚴重受損。6.尿和血清的分析每只小鼠的尿的分析用Albustix(BayerCorp.，Tarrytown，NY)每周監測以測定蛋白尿(“PU”)。蛋白尿水平評分如下0.5+，15-30mg/dl；1+，30mg/dl；2+，100mg/dl；3+，300mg/dl；4+，＞2000mg/dl。整個研究過程中，在COBAS化學分析儀(Roche)上間歇測定血清肌酐和血尿素氮(BUN)以測定腎功能以及PU。實施例4無糖基muMR1抗體抑制試驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)免疫時封閉CD40配體可抑制EAE發展[Samoilova，1997]。在該實施例中，分析muMR1和無糖基muMR1抗體抑制EAE的能力。該實施例還評估了通過抗-CD154mAb抑制EAE是否與主動抑制機制相關，以及其由有賴于抗體的Fc依賴性相互作用的機制介導的程度。該實施例的結果證實了無糖基muMR1mAb與野生型糖基化倉鼠MR1mAb作為EAE抑制物在阻斷臨床疾病的發展中同樣有效。更具體地，所有MR1mAbs完全抑制疾病發展，如通過平均最大得分和平均疾病嚴重度評估的那樣，只有倉鼠MR1-處理組中的一只小鼠例外。這些結果提示抗-CD154mAbs對抗EAE的保護作用的潛在機制似乎與T調節誘導無關。它們也顯示mAb的Fc依賴性效應器功能對臨床有效性沒有較大的影響，但似乎對EAE自身免疫環境中的抑制的潛在機制有貢獻。用糖基化muMR1抑制臨床EAE圖12表明，與同種型對照P1.17治療的小鼠相比，muMR1治療的小鼠在初始肽免疫之后不顯示疾病癥狀。muMR1治療的動物在80天的隨診期中不顯示臨床癥狀(數據未示)。當小鼠用在完全弗氏佐劑乳化的PLP139-151再免疫時，P1.17-治療的動物中臨床癥狀的嚴重性增加。在第0，2，和4天已經用muMR1治療過的小鼠在再次攻擊之后出現EAE，其嚴重性等同于P1.17-治療的小鼠中的EAE的第一階段。這些結果證實抗-CD154mAb治療不導致主動抑制。我們還研究了20×106個脾細胞的轉移是否會導致初始受體小鼠recipientmice)對隨后的主動EAE誘導的抗性，情況不是這樣(數據未示)。所述脾細胞收集自經EAE誘導并用muMR1治療后1或3周的小鼠。用無糖基muMR1抑制臨床EAE圖13和表3證實，給藥3個劑量200μg時，與對照IgP1.17相比，muMR1和無糖基muMR1mAbs有效抑制整個隨診期間的EAE臨床征象。在這方面，muMR1和無糖基muMR1抗體與倉鼠MR1同樣有效(數據未示)。給藥低劑量的這些抗體沒有顯示出抗體之間在抑制EAE的能力方面存在較大的差異。抑制CNS炎性浸潤為評估抗體在抑制中樞神經系統(“CNS”)中的炎性浸潤方面是否存在差異，將4-5個小鼠分成一組，不同的組用不同量的抗體(muMR1和無糖基muMR1，或3個劑量的200μg和P1.17對照Ig)治療，在第16天，用同種型對照抗體治療的小鼠中的疾病活性達到高峰時，處死這些小鼠。表3糖基化不是抗-CD154的抑制效應所需的1.疾病進展顯示在圖1中。對于每只單獨的小鼠，整個監測期過程中最大殘疾得分和累計得分在計算組平均值之前分別評估。§與P1.17治療的小鼠相比，p＜0.0005；§§與P1.17治療的小鼠相比，p＜0.05。#與P1.17治療的小鼠相比，p＝0.002；##與P1.17治療的小鼠相比，p＜0.02。*與25μgmuMR1相比，p＝0.05。如表4所示，所述抗體在抑制疾病進展早期過程中，抑制CNS中炎性浸潤進展的能力方面沒有差異。由于不確定小鼠在缺乏EAE征象的情況下是否出現亞臨床活性，在該試驗終點(第58天)分析來自每組6-14只小鼠的CNS組織。與用200μgmuMR1治療的小鼠相反，P1.17-治療的小鼠和用200μg無糖基MR1治療的小鼠顯示輕度炎性浸潤主要位于小腦的證據(表5)。然而，利用低劑量抗體的治療揭示，無糖基MR1與其糖基化形式相似(有時比其糖基化形式的保護作用更強)。這些結果證實兩種抗體都可同等抑制臨床EAE的進展。方法-實施例41.EAE的誘導雌性SJL小鼠(10-12周齡，Harlan)用在完全弗氏佐劑(Difco，Detroit，MI)中乳化的50μgPLP139-151經皮下免疫。三天后，對小鼠靜脈內注入109熱殺死的百日咳桿菌(B.pertussis)生物體(RIVM，Bilthoven，TheNetherlands)。EAE的進展通過每天評估體重和殘疾得分來監測。得分范圍自0無癥狀，0.5尾緊張(tonus)部分喪失，1尾緊張完全喪失，2四肢衰弱，2.5局部麻痹，3后肢完全麻痹，3.5膈和后肢完全麻痹，大小便失禁，4垂死，至5由于EAE導致死亡。表4抗-CD154對CNS浸潤的影響(第16天)表5抗-CD154對CNS浸潤的影響(第58天)2.抗體生成倉鼠抗-小鼠CD154mAbMR1的重鏈和輕鏈的可變區通過RT-PCR從雜交瘤總RNA克隆。倉鼠/小鼠嵌合mAb的表達載體通過利用標準重組DNA技術，將鼠IgG2a或鼠kappa恒定區cDNAs(來自抗-人CD154mAb-即，糖基化hu5c8的重鏈和輕鏈的全長cDNA克隆)分別改造到重鏈和輕鏈的可變區上來構建。通過流式細胞術和免疫沉淀證實，瞬時表達的嵌合MR1mAb(稱為muMR1)具有(recapitulate)倉鼠mAb的CD154結合性質。無糖基嵌合MR1(稱為aglyMR1)被構建成通過對重鏈進行定點誘變來改變Fc的N-連接的糖基化位點中的天冬酰胺殘基(在KabatEU命名法中為N297)為谷氨酰胺殘基。構建含有用于免疫球蛋白輕鏈和重鏈的CMV-IE啟動子驅動型串聯轉錄盒以及谷氨酰胺合成酶基因作為選擇標記的穩定表達載體，用于muMR1和aglymuMR1IgG2a，kappamAbs。表達載體被轉染入NSO細胞，通過在不含谷氨酰胺的培養基中選擇來分離穩定的克隆。MuMR1和無糖基MR1在蛋白A瓊脂糖上從生物反應器細胞上清液中通過親和力純化然后在Sephacryl300上進行大小排阻層析以去除聚集體。層析樹脂購自AmershamPharmaciaBiotech(Piscataway，NJ)。通過SDS-PAGE顯示，mAbs純度＞95％，內毒素分析保證這些試劑對于體內應用的安全性。體外試驗發現，MuMR1和無糖基MR1對細胞表面muCD154的相對親和力相同，并且它們在BALB/c小鼠體內的藥物動力學半壽期相同(數據未示)。根據與Biogen的約定，鼠IgG2a同種型對照mAb，P1.17(ATCC#TIB-10)是由ProtosImmunoresearch(Burlingame，CA)純化自腹水的蛋白A。3.抗-CD154抗體的遞送在第0，2和4天，每只小鼠接受200μlPBSi.p.，其中還含有以下物質組1＝PBS(對照)；組2＝200μgmuMR1；組3＝200μg倉鼠Ig(Ig對照)；組4＝200μg鼠源化的MR1；組5＝200μgP1.17IgG2a對照；組6＝200μg無糖基muMR1。一些試驗中，小鼠在第80天用在完全弗氏佐劑中乳化的50μgPLP139-151再免疫。4.疾病評估每天稱重小鼠，在整個56天的過程中，根據以下評分系統監測臨床活動(clinicalactivity)0無癥狀，0.5尾緊張部分喪失，1尾緊張完全喪失，2四肢衰弱，2.5局部麻痹，3后肢完全麻痹，3.5膈和后肢完全麻痹，大小便失禁，4垂死，5由于EAE導致死亡。5.組織學每只小鼠的腦組織和脊髓在10％福爾馬林中固定并在石蠟中包埋。從每只單獨的小鼠獲得間隔100μm的3-6張脊髓切片(4μm)和6張腦切片(每張包括小腦，大腦，腦干，和蛛網膜下隙)，并在用蘇木精染色之后，分析炎性浸潤的程度。每張單獨的切片根據以下評分0＝無浸潤；1＝偶發的輕度血管周圍浸潤(每張切片少于兩處炎性損傷)；2＝多灶，輕度血管周圍浸潤；4＝多灶，嚴重血管周圍浸潤，伴有向實質中的擴散。基于所有切片的平均情況，將小鼠分類為無、偶發、中度或嚴重浸潤。6.統計學分析結果通過One-WayANOVA分析，然后利用LSD檢驗通過post-hoc分析。P-值＜0.05被認為顯著。實施例5無糖基hu5c8抗體抑制胰島細胞移植以前的研究表明，用20mg/kg誘導/維持-劑量方案的糖基化hu5c8治療的恒河猴保持腎同種異體移植物功能，并且在6個月的給藥期間不出現排斥發作，而接受腎同種異體移植物的未經治療的猴子在8天之內迅速排斥它們的移植物[Kirk，1999]。Kirk的研究小組的相關試驗中，證實無糖基hu5c8對治療移植排斥無效。與Kirk的發現明顯相反，本發明的結果證明了無糖基化形式的hu5c8mAb實際上可有效治療其它背景中的移植排斥。恒河猴中的胰島細胞同種異體移植物以前證明，糖基化hu5c8使得胰島植入以及保持同種異體移植物的存活成為可能[Kenyon，1999]。四只20mg/kg誘導/維持方案治療的恒河猴在移植后＞213，＞255，＞269，和＞341天獲得胰島素非依賴性。本研究的結果顯示接受胰島同種異體移植物的未經治療的對照猴子在第8天顯示急性排斥，如到第11-14天出現的持續高血糖和c肽(內源性胰島素生成的產物)生成缺乏所證實的那樣(數據未示)。與未經治療的對照動物相反，圖14顯示用無糖基hu5c8的誘導/維持方案(上文所述)可成功治療兩只恒河猴之一。盡管兩只猴子在第7天都經歷了高血糖和初始排斥，當用胰島素治療猴子并持續無糖基hu5c8治療時，兩只猴子之一顯示同種異體移植物的部分功能，如第28天(空心菱形)通過c肽存在測定的那樣，并保持到第45天。這些結果提示無糖基化抗-CD154mAbs可用于移植背景中的治療方案。然而，由于移植過程中的免疫反應非常強，即涉及體液，細胞和炎性免疫反應，有可能無糖基抗-CD154抗體在與免疫抑制劑和免疫調節化合物聯合遞送時最為有效。例如，中斷經由CD28的T細胞共刺激信號的藥劑，中斷鈣調磷酸酶信號的藥劑，皮質類固醇，抗增生藥劑，和其它特異性結合在免疫細胞表面表達的蛋白質的抗體，包括但不限于CD45，CD2，IL2R，CD4，CD8和RANKFcR，B7，CTLA4，TNF，LTβ，和VLA-4。方法-實施例51.胰島細胞同種異體移植這些研究如上所述進行[Kenyon，1999]。簡而言之，同種異體反應性供體-受體恒河猴對基于陽性混合淋巴細胞培養反應性選擇。受體在第0天接受完全胰島切除以及門內(intraportal)同種異基因胰島移植。2.抗體治療劑量方案利用在-1，0，3，10和18天的20mg/kg的誘導以及在每個月第28天開始的一個劑量的20mg/kg的維持來進行。3.移植物功能評估胰島移植物功能每天通過禁食和餐后血糖水平來監測。胰島衰竭(原發性無功能或急性排斥)定義為缺乏禁食與刺激的c肽生成(內源性胰島素產物)。原發性無功能定義為移植的組織不能在移植后緊接的時期內發揮作用，并且特征為持續高血糖以及血糖控制不穩定。急性排斥發作定義為禁食血糖＞100mg/dL，餐后血糖＞150-175mg/dL。總體移植物功能通過監測維持正常血糖水平所需的外源胰島素量來評估。實施例6無糖基hu5c8(抗-CD154)抗體防止抗-CD154-介導的T-細胞同種異體反應性的用途靶向T細胞上的CD154的單克隆抗體已經顯示部分防止體外以及體內同種異體反應性。然而，不清楚抗-CD154mAb的抑制活性是否有賴于阻斷刺激性CD40-CD154相互作用或可選有賴于直接經由CD154遞送抑制信號。為評估阻斷刺激性CD40-CD154相互作用對人T細胞的體外同種異體反應性的效果，所述效果與刺激CD154(即，直接通過CD154遞送抑制信號)相反，將未分級分離的PBMC或純化的CD4+T細胞，與同種異基因HLA錯配的刺激細胞(CD40陽性細胞)在存在可溶或固定于培養孔的人源化的抗-CD154mAb(hu5c8，BiogenInc.，MA，USA)的條件下共培養。大多數阻斷試驗利用遺傳改造的可溶性抗-CD154(無糖基化hu5c8)變體進行，所述變體的Fc效應器功能降低并由此其與CD154交聯的能力降低。用于該實施例中的無糖基化hu5c8與本申請中全文描述的無糖基hu5c8mAb相同。見，例如實施例1，和見上文。可溶但非包被的抗-CD154抗體抑制原代混合的淋巴細胞培養物(“MLC”)(40±23％vs3±18％抑制，n＝4)中同種異基因T細胞增殖。類似地，次級MLC(n＝5試驗)中同種異體抗原特異性T淋巴細胞的增殖通過用CD154阻斷來激發(利用可溶抗體)而受到抑制，然而，其可通過CD154(包被的抗體)刺激而增加。此外，包被的抗-CD154抗體的刺激強烈增加同種異體抗原特異性CTL效應物的產生，而CTL不受CD154阻斷的影響。為檢測抗-CD154的刺激活性是否需要B7-CD28共刺激相互作用，在CTLA4-Ig這種可抑制B7分子與CD28結合的分子存在的條件下進行MLC。存在CTLA4-Ig下的激發分別抑制初級和次級MLC中同種異體抗原特異性T淋巴細胞的增殖75±14％(n＝3)和64±28％(n＝6)，并抑制CTL產生48±23％(n＝2)。包被的抗-CD154抗體的信號明顯增加初級(58±0.6％，n＝2)和次級(61±49％，n＝6)MLC中同種異體抗原特異性T細胞的殘余CD28-非依賴性增殖，但是并不完全消除CTLA4-Ig-誘導的抑制。然而，CTLA4-Ig對CTL生成的抑制效應被CD154刺激(通過包被的抗-CD154抗體)消除。與含有或不含有CTLA4-Ig的對照培養物相比，CD25，HLA-DR和CD95在同種異體反應性T細胞上的表達通過刺激CD154(n＝2)明顯增加。我們的數據顯示固定在培養板上時，抗-CD154抗體可促進，而不是阻斷T細胞同種異體反應性。通過可溶性無糖基hu5c8mAb阻斷CD154不能增強體外T細胞活化并由此在體內有利，并且基于這些發現，無論單獨使用或與其它阻斷共刺激途徑的分子聯用，其在移植試驗模型中可有效降低體內同種異體抗原T細胞反應。本領域技術人員將理解，可對本發明優選實施方案進行多種改變和修飾而不偏離本發明的精神。意圖將所有這種改變包含在本發明范圍內。參考文獻1.Salazar-Fontana，L.I.，andB.E.TBierer2001.Curr.Opin.Hemat.85.2.Foy，T.M.，A.Aruffo，J.Bajorath，J.E.Buhlmann，andR.J.Noelle1996.Ann.Rev.Immunol.14591.3.Burkly，L.C.2001.InAdv.Exp.Med.Bio.，Vol.489.D.M.Monroe，U.Hedner，M.R.Hoffman，C.Negrier，G.F.Savidge，andG.C.I.White，eds.KluwerAcademic/PlenumPublishers，p.135.4.Nose，M.，andH.Wigzell1983.Proc.Nat.Aca.ofSci.USA806632.5.Leatherbarrow，R.J.，T.W.Rademacher，R.A.Dwek，J.M.Woof，A.Clark，D.R.Burton，N.Richardson，andA.Feinstein1985.Mol.Immunol.22407.6.Tao，M.H.，andS.L.Morrison1989.J.Immunol.1432595.7.Lund，J.，T.Tanaka，N.Takahashi，G.Sarmay，Y.Arata，andR.Jefferis1990.Mol.Immunol.271145.8.Dorai，H.，B.M.Mueller，R.A.Reisfeld，andS.D.Gillies1991.Hybridoma10211.9.Hand，P.H.，B.Calvo，D.Milenic，T.Yokota，M.Finch，P.Snoy，K.Garmestani，O.Gansow，J.Schlom，andS.V.Kashmiri1992.Cancer.Immunol.Immunother.35165.10.Leader，K.A.，B.M.Kumpel，A.G.Hadley，andB.A.Bradley1991.Immunology72481.11.Pound，J.D.，J.Lund，andR.Jefferis1993.Mol.Immunol.30233.12.Boyd，P.N.，A.C.Lines，andA.K.Patel1995.Mol.Immunol.321311.13.Isaacs，J.D.，M.R.Clark，J.Greenwood，andH.Waldmann.1992.J.Immunol.1483062.14.Friend，P.J.，G.Hale，L.Chatenoud，P.Rebello，J.Bradley，S.Thiru，J.M.Phillips，andH.Waldmann1999.Transplantation681632.15.Hobbs，S.M.，L.E.Jackson，andJ.Hoadley.1992.Mol.Immunol.29949.16.Morrisonetal.1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA81(21)6851-5.17.Sharonetal.1984.Nature309(5966)364-7.18.Takedaetal.1985.Nature314(6010)452-4.19.Riechmannetal.1988.Nature332(6162)323-7.20.Coetal.1991.Nature351(6326)501-2.21.Jonesetal.1986.Nature321522-525.22.Riechmannetal.1988.Nature332323-327.23.Verhoeyenetal.1988.Science2391534-1536.24.Queenetal.1989.Proc.Nat.Acad.Sci.USA8610029.25.Orlandietal.1989.Proc.Natl.Acad.Sci.USA863833.26.Coetal.1991.Proc.Nat.Acad.Sci.USA882869-2873.27.Tempest1991.Biotechnology9266-271.28.Boerneretal.1991.J.Immunol.14786-95.29.Perssonetal.1991.Proc.Nat.Acad.Sci.USA882432-2436.30.HuangandStollar1991.J.Immunol.Methods141227-236.31.Greenetal.1994.NatureGenetics713-21.32.Mendezetal.1997.NatureGenetics15(2)146-56.33.Williams，R.C.etal.1973.J.Immunol.111(6)1690-8.34.Winkelhake&Nicolson1976.J.Biol.Chem.251(4)1074-80.35.Nose，M.，andH.Wigzell.1983.Proc.Natl.Acad.Sci.USA806632.36.Harlowetal.(eds.)1998.抗體ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratory.37.Coliganetal.(eds.)2001.CurrentProtocolsinImmunology.JohnWiley&Sons，Inc.38.Zola2000.MonoclonalAntibodiesPreparationandUseofMonoclonalAntibodiesandEngineeredAntibodyDerivatives(BasicsFromBackgroundtoBench)，SpringerVerlag.39.Howardetal.(eds.)2000.BasicMethodsinAntibodyProductionandCharacterization，CRCPress.40.Davis(ed.)1995.MonoclonalAntibodyProtocols，Vol.45，HumanaPress.41.Delves(ed.)1997.AntibodyProductionEssentialTechniques，JohnWiley&SonLtd.42.Kenney1997.AntibodySolutionAnAntibodyMethodsManual，Chapman&Hall.43.Pollocketal.1999.J.Immunol.Meth.231(1-2)147-57.44.Abuchowskietal.1981.In“EnzymesasDrugs”.45.Holcenbergetal.(ed.)1981.Wiley-Interscience，NewYork，NY，367-383(1981).46.Anderson，W.F.1992.HumanGeneTherapy.Science256808-813.47.Newmarketal.1982.J.Appl.Biochem.4185-189.48.Katreetal.1987.Proc.Natl.Acad.Sci.USA841487-1491.49.Gallin1989.FundamentalImmunology，Chapter26，RavenPress，2dEd.，pp.721-733，NewYork.50.Samoilova，E.B.etal.1997.J.Mol.Med.，75603，1997.51.Kirk，A.D.，L.C.Burkly，D.S.Batty，R.E.Baumgartner，J.D.Berning，K.Buchanan，J.H.Fechner，Jr.，R.L.Germond，R.L.Kampen，N.B.Patterson，S.J.Swanson，D.K.Tadaki，C.N.TenHoor，L.White，S.J.Knechtle，andD.M.Harlan1999.Nat.Med.5686.52.Kenyon，N.S.，M.Chatzipetrou，M.Masetti，A.Ranuncoli，M.Oliveira，J.L.Wagner，A.D.Kirk，D.M.Harlan，L.C.Burkly，andC.Ricordi.1999.Proc.Natl.Acad.Sci.USA968132.權利要求1.無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其特征在于位于所述抗體Fc部分的CH2結構域中保守的N-連接的位點的修飾。2.權利要求1的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述修飾包括重鏈糖基化位點中的突變，其中所述突變防止在該位點的糖基化。3.權利要求2的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述修飾包括突變N298Q(N297，利用EUKabat編號)。4.權利要求1的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述修飾包括去除CH2結構域聚糖。5.權利要求1的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述修飾包括防止在CH2結構域的糖基化。6.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物不與效應受體結合。7.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物不導致血栓形成。8.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述抗體選自單克隆抗體，多克隆抗體，鼠抗體，嵌合抗體，靈長化的抗體，人源化的抗體，和完全人抗體組成的組。9.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述抗體選自多聚體抗體，異源二聚體抗體，半二聚體抗體，四價抗體，雙特異性抗體，Fab，Fab′，Fab′2，F(v)抗體片段，單鏈抗體，或其衍生物。10.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述抗體是通過ATCC保藏號PTA-4931的細胞系產生的無糖基hu5c8。11.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述抗體或抗體衍生物用可檢測標記物標記。12.權利要求11的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述可檢測標記物是放射活性同位素，酶，染料或生物素。13.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述抗體或抗體衍生物偶聯于治療劑。14.權利要求13的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述治療劑是放射性同位素，放射性核素，毒素，類毒素或化療劑。15.權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述抗體或抗體衍生物偶聯于顯像劑。16.權利要求15的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述顯像劑是標記部分。17.權利要求15的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物，其中所述顯像劑是生物素，熒光部分，放射活性部分，組氨酸標記或肽標記。18.包含權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物的藥物組合物。19.權利要求18所述藥物組合物，還包括可藥用載體。20.權利要求18所述藥物組合物，還包括免疫抑制性和免疫調節性化合物。21.產生權利要求1-5之一的無糖基抗-CD154抗體或抗體衍生物的細胞系。22.權利要求21的細胞系，其中所述細胞系產生無糖基hu5c8(ATCC保藏號PTA-4931)。23.抑制受試者中的免疫反應的方法，其通過給藥受試者有效抑制量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物進行。24.權利要求23的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或藥物組合物抑制CD154與CD40的結合。25.權利要求23的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或藥物組合物能夠特異性結合可由無糖基hu5c8特異性識別的蛋白質，無糖基hu5c8通過ATCC保藏號PTA-4931的細胞系產生。26.權利要求23的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體，抗體衍生物或藥物組合物特異性結合與無糖基hu5c8(ATCC保藏號PTA-4931)特異性結合的表位。27.抑制受試者中炎性反應的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物，或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物進行。28.權利要求27的方法，其中所述炎性反應選自關節炎，接觸性皮炎，高-IgE綜合征，炎性腸病，過敏性哮喘和特發性炎性疾病組成的組。29.權利要求28的方法，其中所述關節炎選自類風濕性關節炎，非類風濕性炎性關節炎，萊姆病相關性關節炎和炎性骨關節炎組成的組。30.權利要求28的方法，其中所述特發性炎性疾病選自銀屑病和系統性紅斑狼瘡組成的組。31.抑制受試者中的移植排斥的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。32.權利要求31的方法，其中的移植排斥涉及移植的心臟，腎，肝，皮膚，胰島細胞或骨髓。33.抑制受試者中的移植物抗宿主疾病的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。34.抑制受試者中的過敏性反應的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。35.權利要求34的方法，其中所述過敏性反應選自枯草熱或對青霉素或其它藥物的過敏組成的組。36.抑制受試者中的自身免疫反應的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。37.權利要求36的方法，其中所述自身免疫反應源自感染性疾病。38.權利要求36的方法，其中所述自身免疫反應源自Reiter綜合征，脊柱關節炎，萊姆病，HIV感染，梅毒或結核。39.權利要求36的方法，其中所述自身免疫反應選自類風濕性關節炎，重癥肌無力，系統性紅斑狼瘡，Graves病，特發性血小板減少性紫癜，溶血性貧血，糖尿病，炎性腸病，克隆氏病，多發性硬化，銀屑病和藥物誘導的自身免疫病，藥物誘導的狼瘡組成的組。40.抑制受試者中的纖維化的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。41.權利要求40的方法，其中所述纖維化選自肺纖維化和纖維變性疾病組成的組。42.權利要求41的方法，其中所述肺纖維化選自繼發于成人呼吸窘迫綜合征的肺纖維化，藥物誘導的肺纖維化，特發性肺纖維化，和過敏性肺炎組成的組。43.權利要求41的方法，其中所述纖維變性疾病選自丙型肝炎；乙型肝炎；肝硬化；繼發于毒素傷害的肝硬化；繼發于藥物的肝硬化；繼發于病毒感染的肝硬化；以及繼發于自身免疫病的肝硬化組成的組。44.抑制受試者由HTLVI病毒所致的T細胞的病毒感染的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。45.抑制受試者中的胃腸疾病的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。46.權利要求45的方法，其中所述胃腸疾病選自食管運動障礙，炎性腸病和硬皮病組成的組。47.抑制受試者中的血管疾病的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。48.權利要求47的方法，其中所述血管疾病選自動脈粥樣硬化或再灌注損傷組成的組。49.抑制患有T細胞癌的受試者中的T細胞腫瘤細胞的增殖的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。50.抑制HTLVI病毒對受試者的T細胞的病毒感染的方法，其通過給藥受試者抑制有效量的權利要求1-5之一所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或者含有所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物來進行。51.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物選自單克隆抗體，多克隆抗體，鼠抗體，嵌合抗體，靈長源化的抗體，人源化的抗體，和完全人抗體組成的組。52.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物選自多聚體抗體，異源二聚體抗體，半二聚體抗體，四價抗體，雙特異性抗體，Fab，Fab′，Fab′2，F(v)抗體片段，單鏈抗體，或其衍生物。53.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物以醫學可接受的任何方式給藥所述受試者。54.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物通過經靜脈內、皮下、腹膜內、肌內、髓內、腦室內、經硬膜外內、動脈內、血管內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、脊髓內、腫瘤內、腦內、腸內、肺內、粘膜內、子宮內、舌下、或在炎癥位點或腫瘤生長位點經局部注射來給藥所述受試者。55.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物通過選自口服，經鼻，經眼，經直腸和局部途徑組成的組的途徑給藥所述受試者。56.權利要求55的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物以膠囊，片劑，含水懸液或溶液的形式給藥所述受試者。57.權利要求55的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物通過應用乳膏，軟膏或類似的制劑局部給藥所述受試者。58.權利要求55的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物通過利用霧化器，干粉吸入器或計量的吸入器吸入而給藥所述受試者。59.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物通過持續釋放給藥而給藥所述受試者。60.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物與治療劑一起給藥所述受試者。61.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物以每天多個劑量給藥所述受試者。62.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物以從每天到每隔一個月的間隔重復給藥所述受試者。63.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物根據醫學指示從數天或數周到受試者一生的較長時間給藥所述受試者。64.權利要求23-50之一的方法，其中所述無糖基抗-CD154抗體或無糖基抗-CD154抗體衍生物或包含所述抗體或抗體衍生物的藥物組合物與免疫調節或免疫抑制化合物一起給藥所述受試者。65.權利要求64的方法，其中所述免疫調節或免疫抑制性化合物選自(a)中斷通過CD28的T細胞共刺激信號的藥劑；(b)中斷鈣調磷酸酶信號的藥劑，(c)皮質類固醇，(d)抗增生藥劑；和(e)與在免疫細胞表面上表達的蛋白質特異性結合的抗體，所述免疫細胞包括但不限于CD45，CD2，IL2R，CD4，CD8和RANKFcR，B7，CTLA4，TNF，LT，以及VLA-4。66.權利要求64的方法，其中所述免疫抑制性和免疫調節性化合物選自他克莫司，西羅莫司，霉酚酸酯，mizorubine，脫氧精胍菌素，布喹那鈉，來氟米特，雷怕霉素或azaspirane組成的組。67.在表達由ATCC保藏號PTA-4931的細胞系產生的無糖基hu5c8所特異性識別的蛋白質的受試者中顯像腫瘤細胞和贅生物細胞的方法，包括以下步驟(a)在允許抗體或抗體衍生物與腫瘤細胞或贅生物細胞表面的蛋白質之間形成復合體的條件下，將有效量的權利要求18所述藥物組合物給予受試者；和(b)使形成的抗體/蛋白質復合體或抗體衍生物/復合體顯像，由此使得受試者中的任何腫瘤細胞或贅生物細胞成像。68.檢測表達由ATCC保藏號PTA-4931的細胞系產生的無糖基hu5c8所特異性識別的蛋白質的受試者中腫瘤細胞或贅生物細胞的存在的方法，包括以下步驟(a)在允許抗體或抗體衍生物與腫瘤細胞或贅生物細胞表面的蛋白質之間形成復合體的條件下，將有效量的權利要求18所述藥物組合物給予受試者；(b)從受試者清除任何未結合的顯像劑；和(c)檢測形成的任何抗體/蛋白質復合體和抗體衍生物/復合體，所述復合體的存在表明受試者中存在腫瘤細胞和贅生物細胞。全文摘要本發明涉及無糖基抗－CD154抗體或抗體衍生物，其特征在于在所述抗體Fc部分C文檔編號A61K39/395GK1835976SQ200480023231公開日2006年9月20日申請日期2004年6月14日優先權日2003年6月13日發明者弗雷德里克·R·泰勒,克里斯托弗·D·本杰明,琳達·C·伯克利,埃倫·A·加伯申請人:比奧根艾迪克Ma公司