專利名稱：由延胡索和獨一味制成的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種由延胡索或其提取物、獨一味或其提取物制成的藥物組合物及其制備方法和用途。
2、背景技術延胡索(Rhizoma Corydalis)為罌粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖。別名元胡、玄胡索。苦、微辛，溫。入肝、脾經，具有活血，利氣，止痛之功效。用于胸脅、脘腹疼痛、經閉痛經，產后瘀阻，跌撲腫痛。延胡索含多種生物堿，其中延胡索甲素(延胡索堿d-CorydalLne)、乙素(消旋四氫掌葉防已堿d1-Tetrahydropalmatine)、丑素(CorydalisL)及癸素(CorydalisJ)具有鎮痛作用，以乙素最強。乙素為消旋體，其有效成分為左旋乙素，即左旋延胡索乙素(左旋四氫掌葉防已堿、顱痛定、Rotundine)，現已可人工合成，其鎮痛作用較乙素強而毒性小。藥理試驗表明延胡索有良好的鎮痛作用，另外還有鎮靜、催眠作用。
獨一味系藏族習用藥材，為唇形科獨一味屬植物獨一味Lamiophlomis rotate(Benth)Kudo的干燥全草，又名毛膏藥、地膏藥。具有活血止血，祛風止痛、干黃水之功效。用于跌打損傷，外傷出血，風濕痹痛，黃水病。主要化學成分為黃酮或皂苷。藥理作用主要有(1)鎮痛作用對小鼠有明顯的鎮痛作用，能顯著延長小鼠熱板的鎮痛閾時間，還能顯著減少腹腔注射醋酸溶液所致小鼠扭體反應次數。(2)止血作用可顯著縮短出血時間，還有局部止血作用。(3)提高免疫功能的作用獨一味皂苷腹腔注射，能顯著提高巨噬細胞吞噬活性，并能顯著提升E-花環形成率及酸性α-萘酚醋酸酯酶染色陽性率，表明獨一味能顯著提高非特異性免疫和特異性免疫的作用。(4)抗菌作用獨一味皂苷對痢疾桿菌、綠膿桿菌、產氣桿菌、枯草桿菌和乙型溶血型鏈球菌有顯著的抑制作用。(5)抗腫瘤作用獨一味皂苷對S180、艾氏癌、肝癌均有一定的抑制作用，可使荷瘤小鼠的脾臟和胸腺增重。
現利用延胡索和獨一味的相互作用，配伍組方用于治療婦科、外科等疾病還未見報道。
3、發明內容為了滿足臨床需要，本發明提供了一種新的具有活血化瘀、行氣止痛功效的藥物組合物及其制備方法和用途，它主要由延胡索或其提取物、獨一味或其提取物制成，在用于治療經閉痛經、外傷和術后鎮痛止血等方面產生了意想不到的療效。
本發明藥物組合物，其原料藥重量份數為延胡索0.4～10份，獨一味1～25份；優選份數為延胡索1～4份，獨一味2～10份；最佳份數為延胡索2份，獨一味5份。
上述藥物組合物中的原藥材可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。組合物中總提取物的主要的有效成分為延胡索總堿、獨一味總黃酮，總提取物中主要有效成分的總含量不低于20％，最好不低于50％。
上文所述的延胡索可以用適宜的溶劑經過提取加工得到延胡索提取物，提取溶劑優選水或乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續提取法，提取物的主要有效成分為延胡索總堿。
本發明提供了延胡索的優選提取工藝，具體過程如下取延胡索藥材，粉碎成粗粉，加水適量及1/2量稀鹽酸，浸泡0.5小時后，煎煮1.5小時濾過，繼續加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，再加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，合并三次濾液，濃縮至每毫升藥液中含生藥1g，用10％氫氧化鈉溶液調pH至9～10，靜置，離心，取沉淀，加80％乙醇加熱使溶解，濾過，濾液加烯鹽酸調pH值至2～3，精制，離心，取沉淀，真空干燥即得。
通過本工藝制得的延胡索提取物得率為0.5％～3％，提取物中延胡索總堿的含量不低于50％，延胡索乙素的含量不低于1.5％。
除采用上述方法外，還可通過以下方法提取制備，但不僅限于下述方法方法一取延胡索藥材，粉碎成粗粉，加水適量及1/2量烯鹽酸，浸泡0.5小時后，煎煮1.5小時濾過，繼續加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，合并提取液，濃縮至每毫升藥液中含生藥1g，冷后加入乙醇，使含醇量達65％，冷藏12小時，過濾，回收乙醇并濃縮至每毫升藥液含生藥2g，冷卻后再加乙醇使含醇量達85％，冷藏12小時，濾過，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制得的延胡索提取物得率為2.5～4％，提取物中延胡索總堿的含量不低于20％，延胡索乙素的含量不低于0.5％。
方法二取延胡索藥材，粉碎成粗粉，加水適量及1/2量烯鹽酸，浸泡0.5小時后，煎煮1.5小時濾過，繼續加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，再加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，合并三次濾液，濃縮至每毫升藥液中含生藥1g，冷后加入乙醇，使含醇量達85％，冷藏12小時，過濾，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制得的延胡索提取物得率為2～5％，提取物中延胡索總堿的含量不低于30％，延胡索乙素的含量不低于0.6％。
上文所述的獨一味可以用適宜的溶劑經過提取加工得到提取物，其中的溶劑優選水或乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續提取法，提取物的主要有效成分為獨一味總黃酮。
本發明提供了獨一味的優選提取工藝，具體過程如下取獨一味藥材，粉碎，加水煎煮二次，每次2小時，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.03～1.08的稀浸膏，將此稀浸膏加于已處理好的大孔樹脂(D101型，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水沖洗，再用2倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去沖洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.08～1.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。
通過本工藝制得的提取物得率為0.5～2％，獨一味提取物中總黃酮的含量不低于50％，木犀草素的含量不低于不低于1％。
除采用上述方法外，還可通過以下方法提取制備，但不僅限于下述方法
方法一取獨一味藥材，加水煎煮二次，每次2小時，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.03～1.08的稀浸膏，將此稀浸膏加于已處理好的大孔樹脂(D101型，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的獨一味提取物得率為1.5～3％，提取物中總黃酮的含量不低于35％，木犀草素的含量不低于0.7％。
方法二取獨一味藥材，粉碎，加水煎煮二次，每次1.5小時，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.03～1.08的稀浸膏，將此稀浸膏加于已處理好的大孔樹脂(D101，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去沖洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的獨一味提取物得率為3～6％，提取物中總黃酮的含量不低于30％，木犀草素的含量不低于0.5％。
本發明藥物組合物除可用上述藥材直接投料制得外，還可以由延胡索提取物、獨一味提取物投料制成，其中延胡索提取物中延胡索總堿含量不低于20％，最好不低于50％，延胡索乙素的含量不低于0.5％，最好不低于1.5％；獨一味提取物中獨一味總黃酮含量不低于30％，最好不低于50％，木犀草素的含量不低于0.5％，最好不低于1％。按照提取物相對于藥材的得率計算，其重量份數為延胡索提取物2～300份，獨一味提取物5～500份；優選份數為延胡索提取物5～120份，獨一味提取物10～200份；最佳份數為延胡索提取物10～60份，獨一味提取物25～100份。
以上組成是按重量份作為配比的，如大規模生產可以千克或以噸為單位，小規模生產也可以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上重量配比的比例是經過科學篩選得到的，對于特殊病人，可以相應調整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發明藥物組分的用量是經過發明人進行大量摸索總結得出的，各組分用量在上述重量份范圍內都具有較好的療效。
上述藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型，如注射劑、口服常釋劑型、緩釋控釋劑型、顆粒劑、丸劑、口服液體劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、吸入劑、栓劑、軟膏劑等。本發明藥物組合物優選劑型為注射劑或口服制劑。
本發明的藥物組合物可采用現有制藥領域中的常規方法生產，需要的時候可以添加各種藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、粘合劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發明藥物組合物在制成注射劑時，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調節滲透壓的等滲調節劑，例如氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸納、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如甘露醇、葡萄糖等。
上述藥物組合物，具有活血、止血、行氣、止痛、抗菌、抗炎、抗腫瘤、提高免疫功能、利尿利膽等作用。
本發明組合物的優點在于1、提供了一種新的用于治療婦科和外科等疾病的中藥復方，滿足了臨床的需要。
2、對延胡索和獨一味的相互作用和配伍組方進行了藥理學研究，結果表明與單用延胡索或獨一味相比，本發明組合物可顯著增高小鼠的痛閾值，可使脾臟和胸腺的系數明顯增大，可使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數明顯增高，可明顯縮短正常小鼠的出血時間。
3、通過對本發明組合物不同配比的小鼠醋酸扭體藥效學研究，篩選出了本發明組合物的優選配比。
4、本發明組合物既可由延胡索和獨一味藥材直接投料制成任一制劑，也可由延胡索、獨一味單提或混提物投料加工制成任一制劑，滿足了大生產的需要。
5、對本發明組合物進行了急性毒性試驗，結果表明本發明組合物毒性小，安全范圍大。
6、對本發明藥物組合物進行的穩定性試驗結果表明各項指標均比較穩定，保證了臨床用藥的安全。
7、延胡索和獨一味臨床用藥療效確切，且兩者合并用藥后用藥量減少，具有廣闊的應用前景。
以下試驗例來進一步闡述本發明所述藥物的有益效果，這些試驗例包括本發明藥物組合物的藥效學試驗，本發明藥物組合物以下簡稱YD。以下試驗例中延胡索藥材均根據實施例1中延胡索提取物的制備工藝制備，獨一味藥材根據實施例2中獨一味提取物的制備工藝制備。
試驗例1 藥效學試驗——YD對小鼠醋酸扭體的影響受試動物 昆明小鼠，130只，雌雄各半，隨機分為13組，每組10只，體重22～26g。
供試品 空白對照組氯化鈉注射液，山東長富潔晶藥業有限公司；陽性對照組鹽酸曲馬多注射液，遼寧天龍藥業有限公司，規格2ml0.1g；延胡索組延胡索注射液，自制；獨一味組獨一味注射液，自制；YD組延胡索和獨一味重量比分別為1g+2g、1g+5g、1g+10g、2g+2g、2g+5g、2g+10g、4g+2g、4g+5g、4g+10g，各劑量組注射液自制。
方法 將小鼠隨機分為空白對照組、陽性對照組、延胡索組、獨一味組、YD各劑量注射液組，每組10只，雌雄各半。按下表所示劑量，試驗組腹腔注射給藥，空白對照組腹腔注射等容積生理鹽水，陽性對照組于試驗前腹腔注射鹽酸曲馬多注射液，均給藥一次。各組動物給藥1h后，腹腔注射0.7％醋酸溶液0.2ml/只。以腹部內凹，臀部提高，伸展后肢為扭體指標，觀察注射后15min內扭體反應次數和第一次扭體出現時間(潛伏期)，并按下式計算鎮痛率。鎮痛率＝(對照組扭體次數-給藥組扭體次數)/對照組扭體次數×100％。
表1 組合物對小鼠醋酸扭體的影響(x±s，n＝10)
注與空白對照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與延胡索組相比，ap＜0.01；與獨一味組相比，bp＜0.01；試驗結果與結論 試驗結果見表1。
與空白對照組相比，延胡索組、獨一味組可顯著延長小鼠扭體的潛伏期(p＜0.01)，顯著減少小鼠的扭體次數(p＜0.01)，鎮痛率顯著提高(p＜0.01)；YD各劑量組可極顯著延長小鼠扭體的潛伏期(p＜0.001)，極顯著減少小鼠的扭體次數(p＜0.001)，鎮痛率極顯著提高(p＜0.001)。YD各劑量組分別與延胡索組、獨一味組相比顯著延長小鼠扭體的潛伏期(p＜0.01)，顯著減少小鼠的扭體次數(p＜0.01)，鎮痛率顯著提高(p＜0.01)，提示延胡索與獨一味兩者合用有協同增效的作用。且當延胡索與獨一味重量配比為延胡索(1～4g)+獨一味(2～10g)時效果顯著，尤其以延胡索(2g)+獨一味(5g)時效果最好。
試驗例2 YD對小鼠痛閾值的影響受試動物 選痛閾值在5～30S的雄性小鼠70只，體重23～29g，隨機分為7組，每組10只。
供試品 空白對照組氯化鈉注射液，山東長富潔晶藥業有限公司；陽性對照組鹽酸嗎啡注射液，東北制藥集團公司沈陽第一制藥廠，規格1ml∶10mg；延胡索組延胡索注射液，自制；獨一味組獨一味注射液，自制；YD組自制(處方和制備方法參見實施例4水針劑處方2)，分為低、中、高三個劑量組。
方法 將將小鼠隨機分為空白對照組、陽性對照組、延胡索組、獨一味組、YD低劑量組、YD中劑量組、YD高劑量組，每組10只。按下表所示劑量試驗組腹腔注射給藥，空白對照組不予給藥給予等容積生理鹽水。給受試組于給藥后1、2、3小時分別測定小鼠的痛閾值二次，取平均值，記錄結果。
試驗結果與結論 試驗結果見表2。
(1)與空白對照組相比，延胡索組和獨一味組可使小鼠的痛閾值明顯增高(p＜0.05)；陽性對照組、YD低劑量組可使小鼠的痛閾值顯著增高(p＜0.01)；YD中、高劑量組可使小鼠的痛閾值極顯著增高(p＜0.001)。
(2)與陽性對照組相比，YD中劑量組可使小鼠的痛閾值明顯增高(p＜0.05)；YD高劑量組可使小鼠的痛閾值顯著增高(p＜0.01)。
(3)與延胡索組相比，YD低、中、高劑量組均可顯著增高小鼠的痛閾值(p＜0.01)。
(4)與獨一味組相比，YD低、中、高劑量組均可顯著增高小鼠的痛閾值(p＜0.01)。
試驗結果表明，延胡索和獨一味配伍用藥后可顯著增高小鼠的痛閾值，療效明顯優于單用延胡索和獨一味，提示兩者有協同增效的作用。
表2 組合物對小鼠痛閾值的影響(x±s，n＝10)
注與空白對照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與陽性對照組相比，ap＜0.05，bp＜0.01；與延胡索組相比，cp＜0.01；與獨一味組相比，dp＜0.01。
試驗例3 YD對幼年小鼠免疫功能的影響受試動物 幼年雄鼠70只，每只8～12g，每組10只供試品 空白對照組氯化鈉注射液，山東長富潔晶藥業有限公司；陽性對照組地塞米松磷酸鈉注射液，上海通用藥業股份有限公司，規格1ml∶2mg；延胡索組延胡索注射液，自制；獨一味組獨一味注射液，自制；YD組自制(處方和制備方法參見實施例4水針劑處方2)，分為低、中、高三個劑量組。
方法 將幼鼠隨機分為空白對照組，陽性對照組，延胡索組，獨一味組，YD低劑量組，YD中劑量組、YD高劑量組。各給藥組每日腹腔注射給藥，給藥量如表3所示。給藥第13天，所有動物腹腔注射給予等體積的淀粉溶液。第14天，所有動物腹腔注射給予0.5％雞紅細胞0.1ml/10g。1h時后，處死動物。取腹腔液涂片，甲醇固定，姬氏染色，在油鏡下觀察100個腹腔巨噬細胞有多少吞噬了雞紅細胞，吞噬多少個雞紅細胞，計數吞噬率和吞噬指數。剪開胸腔和腹腔一摘取脾臟和胸腺，剔除周圍的結締組織后，在1g/萬的電子天秤上稱各個動物的脾臟和胸腺重量。
表3 YD對幼鼠免疫器官重量系數的影響(n＝10，X±S)
注與空白對照組相比，*p＜0.01，**p＜0.001；與陽性對照組相比，&p＜0.001；與延胡索組相比，ap＜0.05，bp＜0.01；與獨一味組相比，cp＜0.05，dp＜0.01。
表4 YD對幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響(n＝10，X±S)
注與空白對照組相比，*p＜0.01，**p＜0.001；與陽性對照組相比，&p＜0.001；與延胡索組相比，ap＜0.05，bp＜0.01；與獨一味組相比，cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗結果與結論 試驗結果見表3、表4。
(1)對幼鼠免疫器官重量系數的影響與空白對照組相比，延胡索組、獨一味組均可使脾臟和胸腺的系數顯著增大(p＜0.01)；YD低、中、高劑量組均可使脾臟和胸腺的系數極顯著增大(p＜0.001)。與陽性對照組相比，延胡索組、獨一味組和YD低、中、高劑量組均可使脾臟和胸腺的系數極顯著增大(p＜0.001)。與延胡索、獨一味組相比，YD低劑量組均可使脾臟和胸腺的系數明顯增大(p＜0.05)；YD中、高劑量組組均可使脾臟和胸腺的系數顯著增大(p＜0.01)。
(2)對幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響與空白對照組相比，延胡索組、獨一味組均可使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數顯著增高(p＜0.01)；YD低、中、高劑量組均可使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數極顯著增高(p＜0.001)。與陽性對照組相比，延胡索組、獨一味組和YD低、中、高劑量組均可使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數極顯著增高(p＜0.001)。與延胡索、獨一味組相比，YD低劑量組均可使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數明顯增高(p＜0.05)；YD中、高劑量組組均可使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數顯著增高(p＜0.01)。
試驗結果表明，延胡索和獨一味配伍用藥可使幼鼠的脾臟和胸腺的系數顯著增大，使幼鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數顯著增高，且效果明顯優于單用延胡索和獨一味。提示兩者有協同增效的作用。
試驗例4 YD對正常小鼠出血時間的影響受試動物 昆明種小白鼠，18～22g，共60只，隨機分為6組，每組10只供試品 空白對照組氯化鈉注射液，山東長富潔晶藥業有限公司；延胡索組延胡索注射液，自制；獨一味組獨一味注射液；YD組自制(處方和制備方法參見實施例4水針劑處方2)，分為低、中、高三個劑量組。
方法 將小鼠隨機分為6組，每組10只，分別為空白對照組、延胡索組、獨一味組和YD低、中、高劑量組，稱重，標記，連續給藥7天，末次給藥后固定，測定小鼠尾長度并標記，30～40分鐘后分別將小鼠尾尖3mm處橫斷，待血液自行溢出開始計時，每隔30s用濾紙吸去血滴，直至血液自然停止，計算出血時間。
表5 YD對正常小鼠出血時間的影響(n＝10，X±S)
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與延胡索組相比，ap＜0.05，bp＜0.01；與獨一味組相比，cp＜0.05，dp＜0.01。
試驗結果與結論 試驗結果見表5。
(1)與空白對照組相比，延胡索組、獨一味組可明顯縮短正常小鼠的出血時間(p＜0.05)；YD低劑量組可顯著縮短正常小鼠的出血時間(p＜0.01)；(2)與延胡索組、獨一味組相比，YD低劑量組可明顯縮短正常小鼠的出血時間(p＜0.05)；YD中、高劑量組可顯著縮短正常小鼠的出血時間(p＜0.01)。
試驗結果表明，延胡索與獨一味配伍應用后可縮短正常小鼠的出血時間，療效優于單用延胡索或獨一味，提示兩者有協同增效的作用。
試驗例5 小鼠注射給藥急性毒性試驗(1)試驗方法供試品組合物注射液，來源于實施例4水針劑處方2。
受試動物小鼠，每組雌雄各60只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項目死亡數、一般狀態、體重、剖檢、半數致死劑量。
(2)試驗結果按照急性毒性試驗要求進行預試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測出藥物的半數致死量，也未見明顯的毒性反應，故進行日最大給藥量試驗。給藥劑量尾靜脈注射0.2ml/10g，腹腔注射0.2ml/10g，一日1次。
死亡數未出現死亡。
一般狀態未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后2、4、6、8、10、12、14天測量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結論本實驗中未出現死亡，本組合物注射液對雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.2ml/10g，相當于50kg體重人日最大用量10ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
試驗例6 組合物注射液穩定性試驗供試品組合物注射液，來源于實施例4水針劑處方2。
考察項目性狀、pH值、澄明度、有關物質、標示含量；并在加速試驗6個月和長期試驗期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素試驗強光照射試驗取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內放置10天。
高溫試驗取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫試驗取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述試驗，分別于第5、10天取樣測定。比較性狀后測試各項指標，并將結果與0天比較。
結果光照4500Lx條件下放置10天，除有關物質略有升高外，其它各項指標均無明顯變化。高溫60℃條件下放置10天，各項指標無明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項指標無明顯變化。
2、加速試驗方法置溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月。在試驗期間分別于第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀后，測試各項指標，將結果與0個月比較；并在6個月末增加無菌和熱原檢查。
結果溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月，除有關物質略有增加，標示含量略有下降外，其它各項指標均無明顯變化，加速試驗6個月末，熱原、無菌檢查均符合規定。
3、長期試驗方法置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月，比較外觀后，測試各項指標，將結果與0個月比較；并在18個月末增加無菌和熱原檢查。
結果溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月，各項指標均無明顯變化，長期試驗18個月末，熱原、無菌檢查均符合規定。
結論由上述考察結果得出結論，各項試驗中，組合物注射液均比較穩定。
綜上所述，本發明提供的由延胡索或其提取物與獨一味或其提取物制成的組合物具有協同增效作用，明顯優于延胡索或獨一味單獨給藥的藥效。對組合物進行的急性毒性試驗表明本發明組合物低毒，安全性高；對組合物注射液進行的穩定性試驗結果表明，本發明提供的組合物注射液的各項指標均比較穩定，可以用于放大生產。
具體實施方式
以下通過實施例來進一步闡述本發明藥物組合物的制備方法，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實施例3～10中的延胡索提取物源于實施例1中三批延胡索提取物中的第二批，獨一味提取物源于實施例2中三批獨一味提取物中的第二批。
實施例1 延胡索提取物的制備取延胡索藥材，粉碎成粗粉，加水適量及1/2量稀鹽酸，浸泡0.5小時后，煎煮1.5小時濾過，繼續加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，再加水適量及1/4量稀鹽酸，煎煮1小時濾過，合并三次濾液，濃縮至每毫升藥液中含生藥1g，用10％氫氧化鈉溶液調pH至9～10，靜置，離心，取沉淀，加80％乙醇加熱使溶解，濾過，濾液加烯鹽酸調pH值至2～3，精制，離心，取沉淀，真空干燥即得。
延胡索提取物的鑒別取延胡索對照藥材1g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。另取延胡索提取物0.1g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液即得。吸取上述三種溶液各2ul，分別點于同一用0.1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘缸中約3分鐘后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中在與對照藥材、對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。
延胡索提取物的含量測定延胡索總堿的含量測定吸收波長的選擇 取延胡索乙素標準液，按標準曲線項下操作，于53W紫外可見分光光度計測定波長在350～500nm范圍內的吸收度，結果在405nm處有最大吸收。
標準曲線的繪制 精密稱取干燥至恒重的延胡索乙素標準品10mg，置100ml容量瓶中，加0.05M的硫酸溶液0.1ml，加少許水使溶解，加水至刻度，搖勻，使每ml相當于100ug。精密量取配制好的標準液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，置60ml分液漏斗中，加水至5ml，加入緩沖液5ml，溴麝香草酚藍溶液1ml，精密加入氯仿10ml，振搖，放置使分層，分取氯仿層于具塞試管中，離心。領取5ml水以同樣操作作空白對照。置53W紫外可見分光光度計于波長405nm處測定吸收度。計算回歸方程。
樣品測定 取延胡索提取物0.1g，置100ml容量瓶中加水至刻度，搖勻，使溶解，然后精密量取稀釋液2ml，置60ml分液漏斗中，按標準曲線下操作，測定樣品中總堿的含量。
延胡索乙素的含量測定色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1％磷酸溶液(三乙胺調pH值6.0)(55∶45)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數按延胡索乙素峰計算應不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取延胡索乙素的對照品適量，加甲醇制成每1ml含46ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取延胡索提取物50mg，加甲醇30ml，超聲提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解轉移至5ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續濾液即得。
按照上述工藝制得三批延胡索提取物，其含量和得率見表6。
表6 延胡索提取物的含量測定結果和得率
實施例2 獨一味提取物的制備取獨一味藥材，粉碎，加水煎煮二次，每次2小時，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.03～1.08的稀浸膏，將此稀浸膏加于已處理好的大孔樹脂(D101型，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水沖洗，再用2倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去沖洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.08～1.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。
獨一味提取物的鑒別取獨一味提取物50mg，加乙醇5ml，超聲處理25分鐘，濾過濾液蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取獨一味對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105℃加熱約15分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
獨一味提取物的含量測定總黃酮的含量測定對照品溶液的制備 取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品0.2g，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微熱使溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，再加水6ml，再加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，再加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應的溶液為空白。照紫外-可見分光光度法，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。
測定法 取獨一味提取物50mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴微熱，并時時振搖30分鐘，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，放置4小時，精密量取上清夜1ml，置25ml量瓶中，照標準曲線項下的制備方法，自“加水6ml”起，依法測定吸光度，從標準曲線上，讀出供試品溶液的量，計算，即得。
木犀草素含量測定色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動相，檢測波長為350nm。理論板數按木犀草素峰計算應不低于1500。
對照品溶液的制備 精密稱取木犀草素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取獨一味提取物50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加2.5mol/L鹽酸甲醇溶液20ml，超聲處理30分鐘，放冷，用2.5mol/L鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，置50ml圓底燒瓶中，于90℃水浴中加熱水解30分鐘，放冷，轉移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
按照上述工藝制得三批獨一味提取物，其含量和得率見表7。
表7 獨一味提取物的含量測定結果和得率
實施例3 YD粉針劑的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)聚山梨酯80 50g甘露醇 200g無菌注射用水加至2000ml共制備 1000支處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)聚山梨酯80 80g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)聚山梨酯80 100g甘露醇 500g無菌注射用水加至5000ml共制備 1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將延胡索提取物、獨一味提取物加入配液量30％無菌注射用水中加熱溶解完全。甘露醇加配液量30％的無菌注射用水加熱攪拌溶解完全，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液，合并上述溶液，補加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定并調節溶液的pH值。
6)經0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機中冷凍干燥。預凍-45℃5小時，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時，然后升溫至25℃真空干燥3小時。
9)凍干結束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例4 YD水針劑的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)聚山梨酯80 50g注射用水加至2000ml共制備 1000支處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)聚山梨酯80 80g注射用水加至2000ml共制備 1000支處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)聚山梨酯80 100g注射用水加至2000ml共制備 1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將延胡索提取物、獨一味提取物加入配液量20％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將聚山梨酯80加熱使溶解完全。
3)合并上述兩溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定并調節溶液的pH值。
6)經0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例5 YD輸液的制備氯化鈉輸液處方
處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)聚山梨酯80 50g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)聚山梨酯80 80g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)聚山梨酯80 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將延胡索提取物、獨一味提取物加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全。聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液加入木犀草素加熱溶解。
3)合并上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定并調節溶液的pH值。
6)經0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
葡萄糖輸液處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)聚山梨酯80 25g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)聚山梨酯80 50g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將延胡索提取物、獨一味提取物加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液。
3)合并上述溶液，補加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經砂濾棒過濾脫炭。測定并調節溶液的pH值。
6)經0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實施例6 本發明組合物片劑的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片制備工藝1)將延胡索提取物和獨一味提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將延胡索提取物、獨一味提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗。
9)按照化驗確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例7 YD膠囊劑的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)淀粉40.0g微晶纖維素 100.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g共制備 1000粒處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g共制備 1000粒處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)淀粉20.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g共制備 1000粒制備工藝1)將延胡索提取物和獨一味提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將延胡索提取物、獨一味提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗。
9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實施例8 YD顆粒劑的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)糖粉2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)糖粉2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)糖粉2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝1)將蔗糖、延胡索提取物和獨一味提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將延胡索提取物、獨一味提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實施例9 YD軟膠囊劑的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂600g蜂蠟500g共制備 1000粒處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂500g蜂蠟500g共制備 1000粒處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)大豆油 1000.0g大豆磷脂300g蜂蠟500g共制備 1000粒制備工藝將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入延胡索提取物、獨一味提取物研勻，壓制成軟膠囊即可。
實施例10 YD口服液的制備處方處方1延胡索提取物9.3g(相當于延胡索藥材1kg)獨一味提取物17.0g(相當于獨一味藥材2kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml共制備 1000支處方2延胡索提取物18.6g(相當于延胡索藥材2kg)獨一味提取物42.5g(相當于獨一味藥材5kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml共制備 1000支處方3延胡索提取物37.2g(相當于延胡索藥材4kg)獨一味提取物85.0g(相當于獨一味藥材10kg)尼泊金甲酯 1.0g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml共制備 1000支制備工藝1)將延胡索提取物、獨一味提取物加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全。將尼泊金甲酯和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
2)合并上述溶液，補加純化水水至全量。
3)過0.8um的微孔濾膜過濾。
4)半成品化驗。
5)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
權利要求
1.一種新的用于婦科和外科疾病的藥物組合物，其特征在于其原料藥的重量份數為延胡索0.4～10份，獨一味1～25份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其原料藥的重量份數為延胡索1～4份，獨一味2～10份。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于其原料藥的重量份數為延胡索2份，獨一味5份。
4.如權利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于延胡索、獨一味可以用適宜的溶劑和方法通過單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。
5.如權利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中所含的主要有效成分為延胡索總堿、獨一味總黃酮，總提取物中主要有效成分的總含量不低于20％。
6.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于還可以由下列原料藥制成延胡索提取物2～300份，獨一味提取物5～500份。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于其原料藥重量份數為延胡索提取物5～120份，獨一味提取物10～200份。
8.如權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于其原料藥重量份數為延胡索提取物10～60份，獨一味提取物25～100份。
9.如權利要求6～8所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的延胡索提取物中延胡索總堿的含量不低于20％，延胡索乙素的含量不低于0.5％；獨一味提取物中總黃酮的含量不低于30％，木犀草素的含量不低于0.5％。
10.如權利要求1、2、3、6、7、8所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以與藥學上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，公開了一種新的藥物組合物及其制備方法和用途，包括延胡索、獨一味，其重量份數為延胡索0.4～10份，獨一味1～25份；該藥物組合物也可以延胡索和獨一味的單提或混提物投料制得，其重量份數為延胡索提取物2～300份，獨一味提取物5～500份。該藥物組合物可制成各種臨床上或藥學上可接受的劑型，優選注射劑和口服制劑；具有活血、止血、行氣、止痛、抗菌、抗炎、抗腫瘤、提高免疫功能、利尿利膽等作用。
文檔編號A61P15/00GK101028344SQ200610042439
公開日2007年9月5日 申請日期2006年2月27日 優先權日2006年2月27日
發明者黃振華 申請人:黃振華