2,4-嘧啶二胺化合物的前藥及其應用的制作方法

專利名稱：2,4-嘧啶二胺化合物的前藥及其應用的制作方法
1.交叉參考
本申請根據35 U.S.C.§119(e)要求了2005年1月19日提交的臨時申請序列號60/645,424、2005年2月18日提交的臨時申請序列號60/654,620的在先權利。這些臨時申請的內容通過參考完整地納入本申請書。
2.發明領域 本發明涉及生物活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥，含有該前藥的藥物組合物，制造該前藥的中間體和合成方法，以及將該前藥和組合物用于各種情況如用于治療或預防各種疾病的方法。
3.
背景技術：
諸如IgE的高親和力受體(FcεRI)和/或IgG的高親和力受體(FcγRI)的Fc受體的交聯，在肥大細胞、嗜堿細胞和其它免疫細胞中激活一個信號級聯，導致產生許多不利后果的化學介質的釋放。例如，這樣的交聯導致I類(立即)過敏性超敏反應的預形成介質(例如組胺)經由脫粒作用從小粒中的儲存位置釋放。它也導致其它介質(包括白三烯素，前列腺素和血小板激活因子(PAF))的合成和釋放，這些介質在炎癥反應中扮演重要角色。在Fc受體交聯時被合成和釋放的其他介質包括細胞因子和一氧化氮。
通過Fc受體(例如FcεRI與/或FcγRI)交聯而激活的信號級聯包含大量細胞蛋白質。酪氨酸激酶是其中最重要的細胞內信號傳播劑。而且，參與跟FcεRI與/或FcγRI受體交聯相關的信號轉導途徑及其它信號轉導級聯的重要酪氨酸激酶是Syk激酶(參看Valent等人，2002，Intl.J.Hematol.75(4)257-362)。
FcεRI和FcγRI受體交聯后所釋放的介質是造成許多不利后果的原因，或者在其中扮演重要角色。最近，已經發現了能抑制FcεRI和/或FcγRI信號級聯并具有許多治療用途的不同種類的2，4-嘧啶二胺化合物。參見，例如，2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US 2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO 03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO 2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)。盡管這些化合物中的許多顯示出良好的生物利用度性質，在一些情況下可能需要調整其溶解性或其它性質，從而使其通過特定給藥途徑的生物利用度實現最優化。
4.發明概述 本發明提供了具有眾多生物活性的2，4-嘧啶二胺化合物的前藥及其治療用途，含有該前藥的組合物，用于合成該前藥的方法和中間體，以及將該前藥用于各種體外和體內情況、包括治療和/或預防至少部分由通過激活Fc受體信號級聯介導的疾病的方法。
所述前藥通常含有在一個或多個伯胺或仲胺基的氮原子上被前基團(progroup)Rp取代的生物活性2，4-嘧啶二胺化合物，所述前基團在使用條件下可代謝或轉化以產生活性2，4-嘧啶二胺。一些實施方案中，所述前基團Rp是含磷前基團。一些實施方案中，所述前基團包括在使用條件下被代謝產生不穩定的α-羥基甲基、α-氨基甲基或α-硫代甲基中間體，然后中間體進一步在體內代謝以產生活性2，4-嘧啶二胺藥物的基團或部分。一些實施方案中，所述前基團包括α-羥基烴基、α-氨基烴基或α-硫代烴基部分，例如在使用條件下代謝產生活性2，4-嘧啶二胺藥物的α-羥基甲基、α-氨基甲基、α-硫代甲基部分。例如，一些實施方案中，所述前基團Rp具有結構式-CRdRd-AR3，式中，各Rd獨立選自氫、氰基、任選取代的(C1-C20)烴基、(C1-C20)全氟烴基、任選取代的(C7-C30)芳基烴基和任選取代的6-30元雜芳基烴基，其中各任選的取代基各自獨立選自氫、烴基、芳基、芳基烴基、雜芳基和雜烴基，或者，兩個Rd與它們所結合的碳原子一起形成含有3-8個碳原子的環烴基；A選自O、S和NR50，其中R50選自氫、烴基、芳基、芳基烴基、雜芳基、雜芳基烴基和環雜烴基，或者R50與R3以及它們所結合的氮原子一起形成3-7元環；R3表示可在體內代謝產生式-CRdRd-AH所示基團的基團，其中Rd和A如之前所定義。
R3不一定要相同，前提是它可在所需的使用條件下如在在胃中的酸性條件下和/或被體內的酶代謝產生式-CRdRd-AH所示的基團，其中A和R如之前所定義。因此，熟練的技術人員將了解，R3實質上可包括任何已知或未知的羥基、胺或硫醇保護基。合適保護基的非限制性例子可在例如《有機合成保護基》(Protective Groups in OrganicSynthesis)，Greene & Wuts，第二版，John Wiley & Sons，紐約，1991中找到(尤其是第10-142頁(醇)、第277-308頁(硫醇)和第309-405頁(胺)，其內容通過引用納入本文)。
在一具體實施方案中，R3和A包括醚鍵、硫醚鍵、甲硅烷醚鍵、甲硅烷硫醚鍵、酯鍵、硫酯鍵、酰胺鍵、碳酸酯鍵、硫代碳酸酯鍵、氨基甲酸酯鍵、硫代氨基甲酸酯鍵或脲鍵、-OCH2SO3R，其中R是氫、烴基、芳基、芳基烴基或金屬鹽(例如，鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽)；-GCH2+N(R51)3M-，其中G是不存在的、-OPO3-、OSO3-或-CO2-，R51是氫、烴基、芳基、芳基烴基、環雜烴基或環雜烴基烴基，M-是抗衡離子，通常是鹵化物離子等(乙酸根、硫酸根、磷酸根等)。具體的示例性實施方案包括但不限于其中R3選自Rf、-C(O)Rf、-C(O)ORf、-C(O)NRfRf和-SiRfRfRf的前基團Rp，其中各Rf各自獨立選自氫、任選取代的低級烴基、任選取代的低級雜烴基、任選取代的低級環烴基、任選取代的低級雜環烴基、任選取代的(C6-C10)芳基、任選取代的5-10元雜芳基、任選取代的(C7-C18)芳基烴基和任選取代的6-18元雜芳基烴基。在一具體實施方案中，各Rf是相同的。
可對前基團Rp的性質進行選擇以調整基礎的(underlying)活性2，4-嘧啶二胺化合物的水溶性和其它特性以實現特定給藥模式下的最優化。還可對其進行選擇以便從身體的特定器官和/或組織如消化道、血液和/或血清中清除，或通過特定器官如肝臟中的酶將其清除。
一些實施方案中，前基團Rp是含磷前基團，包括可在體外被如酯酶、脂肪酶和/或磷酸酶等酶切割的磷酸酯部分。這樣的酶在身體中廣泛存在，位于例如胃和消化道、血液和/或血清中，且實質上存在于所有組織和器官中。這種含有磷酸酯的前基團Rp通常會提高基礎的活性2，4-嘧啶二胺化合物的水溶性，這使得這種含有磷酸酯的前藥非常適合需要水溶性的給藥模式，如口服、含服、靜脈內、肌內和眼給藥模式。
一些實施方案中，前藥中的各含有磷酸酯的前基團Rp具有式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)(OH)或其鹽，式中，Rd如之前的定義，且y是1-3之間的整數，通常是1或2。在一具體實施方案中，各Rd各自獨立選自氫、取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的甲基和取代或未取代的芐基。在另一具體實施方案中，各Rd各自獨立選自氫和未取代的低級烴基。含有磷酸酯的前基團Rp的具體例子包括-CH2-O-P(O)(OH)(OH)和-CH2CH2-O-P(O)(OH)(OH)和/或相應的鹽。
雖然不希望局限于任何操作理論，當示例性含有磷酸酯的前基團Rp中的y是1時，認為這種含有磷酸酯的前藥可在體內被諸如磷酸酶、脂肪酶和/或酯酶的酶轉化成相應的羥基甲基胺，它通過除去甲醛進一步在體內代謝成活性2，4-嘧啶二胺藥物化合物。磷酸酯和甲醛代謝副產品是無害的。
當示例性含有磷酸酯的前基團Rp中的y是2時，認為這種前藥可在體內通過除去磷酸烯醇酯(其隨后再代謝成乙醛和磷酸酯)代謝成活性2，4-嘧啶二胺藥物化合物。磷酸酯和甲醛代謝副產品是無害的。
熟練的技術人員將了解到，某些類型的前體可在體內轉化成磷酸基團。例如，這種前體包括但不限于磷酸酯、亞磷酸鹽和亞磷酸酯。例如，亞磷酸鹽可在體內氧化成磷酸。磷酸酯可在體內水解成磷酸。亞磷酸酯可在體內氧化成磷酸酯，后者又可在體內水解成磷酸。這些磷酸酯前體基團能在體內轉化成磷酸酯的能力導致所述前藥也可含有包含這種磷酸酯前體的前基團。一些實施方案中，所述磷酸酯前體基團可直接代謝成活性2，4-嘧啶二胺藥物而不用首先轉化成磷酸酯前藥。在其它實施方案中，含有包括這種磷酸酯前體的前基團的前藥首先被代謝成相應的磷酸酯前藥，后者然后再通過羥基甲基胺代謝成活性2，4-嘧啶二胺藥物，如上所述。
一些實施方案中，這種磷酸鹽前體基團是磷酸酯。所述磷酸酯可以是無環的或環狀的，并且可以是磷酸三酯或磷酸二酯。這種酯的水溶性通常低于相應的磷酸鹽前藥和相應的活性2，4-嘧啶二胺化合物，因此通常適合需要低水溶性的活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥的遞送模式，這包括，例如，但不限于，通過吸入給藥。可通過適當選擇磷酸酯中酯化基團的數目和性質以對前藥的溶解性進行特殊修飾從而適合特定給藥模式。
磷酸酯基代謝成相應磷酸基團的機制可通過適當選擇酯化部分加以控制。例如，熟知某些酯是酸(或堿)不穩定的，在胃和消化道的酸性條件下生成相應的磷酸鹽。當需要在消化道中將磷酸酯前藥代謝成相應的磷酸鹽前藥時(例如，其中的前藥是口服給予的)，可選擇酸不穩定性磷酸酯前基團。其它類型的磷酸酯是酸和堿穩定的，可通過身體某些組織或器官內酶的作用轉化成相應的磷酸鹽{參見，例如，Erion等，2004，J.Am.Chem.Soc.1265154-5163中描述的各種環磷酸酯，通過引用納入本文)，當需要在身體內的所需靶組織或部位將磷酸酯前藥轉化成相應的磷酸鹽前藥時，可選擇具有所需代謝特性的磷酸酯。
一些實施方案中，前藥中的各含磷酸酯的前基團Rp是由式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)(ORe)或-(CRdRd)y-O-P(O)(ORe)(ORe)表示的無環磷酸酯或其鹽，式中，各Re各自獨立選自取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基(例如，苯基、萘基、4-低級烷氧基苯基、4-甲氧基苯基)、取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基(例如，芐基、1-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烷-1-基)、-(CRdRd)y-ORf、-(CRdRd)y-O-C(O)Rf、-(CRdRd)y-O-C(O)ORf、-(CRdRd)yS-C(O)Rf、-(CRdRd)y-S-C(O)ORf、-(CRdRd)yNH-C(O)Rf、-(CRdRd)yNH-C(O)ORf和-Si(Rd)3，其中，Rd、Rf和y如上文所定義。在一具體實施方案中，各Rd選自氫和未取代的低級烴基，和/或各Re是未取代的低級烷基或芐基。具體的示例性磷酸酯前基團包括但不限于-CH2-O-P(O)(OH)(ORe)、-CH2CH2-O-P(O)(OH)(ORe)、-CH2-O-P(O)(ORe)(ORe)和-CH2CH2-O-P(O)(ORe)(ORe)，其中Re選自低級烷基、異丙基和異丁基。
在其它實施方案中，各含磷酸酯的前基團Rp是式

所示的環磷酸酯，式中，各Rg各自獨立選自氫和低級烴基；各Rh各自獨立選自氫、取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的低級環雜烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基、取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基和取代或未取代的5-14元雜芳基；z是0-2之間的整數；Rd和y如之前所定義。在一具體實施方案中，各含磷酸酯的前基團Rp是式

所示的環磷酸酯，其中Rd、Rh和y如之前所定義。
含有這種環磷酸酯前基團的環磷酸酯前藥在體內代謝成活性藥物化合物的機制部分取決于Rh取代基的性質。例如，各Rh各自獨立選自氫和低級烴基的環磷酸酯前基團在體內被酯酶切割。因此，一些實施方案中，選擇在體內可被酯酶切割的環磷酸酯前基團。這種環磷酸酯前基團的具體實例包括但不限于選自下組的前基團


和
或者，具有其中的Rh取代基是取代或未取代的芳基、芳基烴基和雜芳基的前基團的環磷酸酯前藥通常不被酯酶切割，而被諸如肝臟中的酶如細胞色素P450酶類代謝成活性前藥。例如，經歷由主要在肝臟中表達的細胞色素P450酶(CYP)催化的氧化切割反應的一系列環磷酸酯核苷酸前藥描述于Erion等，2004，J.Am.Chem.Soc.1265154-5163。一些實施方案中，選擇被肝臟中表達的CYP酶切割的環磷酸酯前基團。這種含環磷酸酯的前基團Rp的具體示例性實施方案包括但不限于具有式

的前基團，其中，Rh選自苯基、3-氯苯基、4-吡啶基和4-甲氧基苯基。
像熟練的技術人員將了解的那樣，亞磷酸鹽和亞磷酸酯可在體內被氧化產生相應的磷酸鹽和磷酸酯類似物。這種反應可由例如氧化酶類、氧化還原酶(oxoreductase)類和其它氧化性酶類在體內進行。因此，所述含磷前基團Rp還可包括上述任何磷酸鹽和磷酸酯前基團的亞磷酸鹽和亞磷酸酯類似物。一些實施方案中，所述含磷前基團Rp包括但不限于式-(CRdRd)y-O-P(OH)(OH)、-(CRdRd)y-O-P(OH)(ORe)和-(CRdRd)y-O-P(ORe)(Re)所示的基團或其鹽，其中Rd、Re和y如之前所定義。具體的示例性實施方案包括其中各Rd各自獨立選自氫和未取代的低級烴基和/或各Re各自獨立選自未取代的低級烷基和芐基的基團。具體的示例性無環亞磷酸鹽和亞磷酸酯前基團包括但不限于-CH2-O-P(OH)(OH)、-CH2CH2-O-P(OH)(OH)、-CH2-O-P(OH)(ORe)和-CH2CH2-O-P(ORe)(ORe)，其中各Re選自低級烷基、異丙基和異丁基。具體的示例性環亞磷酸酯前藥包括上述環磷酸酯前基團的亞磷酸鹽類似物。從概念上來說，包含這種亞磷酸鹽和/或亞磷酸酯前基團的前藥化合物可被認為是相應的磷酸鹽和磷酸酯前藥的前藥。
如上所述，認為某些含有磷酸根的前藥在體內經相應的羥基甲基胺代謝。盡管這些羥基甲基胺在體內代謝成相應的活性2，4-嘧啶二胺化合物，它們在pH 7下穩定并可制備以及作為含有羥基烴基的前藥給予。一些實施方案中，這種前藥的各含有羥基烴基的前基團Rp具有式-CRdRd-OH，其中Rd如之前的定義。具體的示例性含有羥基烴基的前基團Rp是-CH2OH。
實質上，任何已知的具有生物活性、因此具有治療活性的2，4-嘧啶二胺化合物可在可用的伯胺或仲胺上用上述一個或多個前基團Rp保護。適當的活性2，4-嘧啶二胺化合物描述于，例如，2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文。在這種2，4-嘧啶二胺化合物中，前基團Rp可連接到任何可用的伯胺或仲胺，包括，例如，2，4-嘧啶二胺部分的N2氮原子、2，4-嘧啶二胺部分的N4氮原子、和/或2，4-嘧啶二胺化合物取代基中所含的伯或仲氮原子。使用含有磷酸根的前基團Rp對于在生理條件下顯示出較弱水溶性(例如，溶解度低于約10μg/ml)的2，4-嘧啶二胺化合物特別有用。雖然不希望局限于任何操作理論，據信，含有磷酸根的前基團對于基礎活性2，4-嘧啶二胺化合物的溶解度有幫助，這又提高了它口服給藥時的生物利用度。據信，所述磷酸鹽前基團Rp被消化道中的磷酸酶代謝，使所述基礎活性藥物被攝取。
已發現，當將下述特定生物活性2，4-嘧啶二胺化合物(化合物1)制成在用星號突出表示的環氮原子上包含式-CH2-O-P(O)(OH)2的前基團Rp時(化合物4)，其水溶性和口服生物利用度顯著提高
化合物1 化合物4 值得注意的是，盡管生理條件下活性藥物(化合物1)在水性緩沖液中的水溶性約為1-2μg/ml，但相同條件下相應的磷酸鹽前藥(化合物4)的溶解度大于5mg/ml，即高出約2000倍。這種升高的水溶性使得在腸道中能更好地溶解，從而有利于口服給藥。預計當將具有類似較低水溶性的其它活性2，4-嘧啶二胺化合物制成磷酸鹽前藥時其水溶性和口服生物利用度也顯示出類似升高。
如上所述，磷酸酯前藥的水溶性通常低于相應的磷酸鹽前藥，因此通常用于需要低水溶性的情況，如通過吸入給藥。對于亞磷酸酯和亞磷酸鹽前藥的相對水溶性也有同樣的規則。
一些實施方案中，這里所述的前藥是在2，4-嘧啶二胺部分的N4氮上被取代或未取代的含氮雙環取代的2，4-嘧啶二胺化合物，所述雙環在下述一個或多個氮原子上含有至少一個這里所述的前基團Rp雙環的氮原子、2，4-嘧啶二胺部分的N2氮和/或2，4-嘧啶二胺部分的N4氮。在具體的示例性實施方案中，所述前藥是結構式(I)所示的化合物
包括其鹽、溶劑合物、水合物和N-氧化物，式中 Y選自CH2、NR24、O、S、S(O)和S(O)2； Z1和Z2各自獨立選自CH和N； R2是任選取代的低級烴基、低級環烴基、低級雜烴基、低級環雜烴基、芳基、苯基或雜芳基； R5是負電基團，如鹵素、氟、氰基、硝基、三鹵甲基和三氟甲基； R17選自氫、鹵素、氟、低級烴基和甲基，或者，R17可與R18一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R18選自氫、鹵素、氟、低級烴基和甲基，或者，R18可與R17一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R19選自氫、低級烴基和甲基，或者，R19可與R20一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R20選自氫、低級烴基和甲基，或者，R20可與R19一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R21、R22和R23各自獨立選自氫和上述前基團Rp；和 R24選自氫、低級烴基或上述前基團Rp，前提是R21、R22、R23和R24中至少有一個必須是前基團Rp。一些實施方案中，R21、R22和R23各為上面列舉的特定前基團之一，且R24是氫。一些實施方案中，R21是上面列舉的特定前基團之一，且R22、R23和R24各自為氫。一些實施方案中，R21、R22和R23各自為上面列舉的特定前基團之一，且R24是低級烴基。
在另一方面，本發明提供了含有一種或多種這里所述的前藥和合適的載體、賦形劑或稀釋劑的組合物。載體、賦形劑或稀釋劑的確切性質將取決于該組合物的所需用途，并可在從獸醫用途適用的或可接受的直至人類用途適用的或可接受的范圍內。所述組合物可任選包含一種或多種其它化合物。
再在另一方面，本發明提供了用于合成這里所述前藥的中間體。對于含有磷酸根或亞磷酸根的前藥，所述中間體通常包含其中的含有磷酸根和/或亞磷酸根的前基團的氧原子被在特定條件下可選擇性除去的保護基屏蔽的前藥。一些實施方案中，所述保護基可在微酸性條件下選擇性除去。一些實施方案中，所述中間體是磷酸酯或亞磷酸酯，它們本身就是可代謝成活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥。在一個例證性實施方案中，所述中間體所包含的前藥中的各Rp前基團獨立為式-(CRdRd)y-O-P(O)(ORi)(ORi)、-(CRdRd)y-O-P(O)(ORi)(OH)、-(CRdRd)y-O-P(OR)(ORi)或-(CRdRd)y-O-P(ORi)(OH)，其中各Ri各自獨立選自低級未取代的烷基、取代或未取代的苯基和取代或未取代的芐基，Rd和y如之前所定義。在一具體實施方案中，所述中間體所包含的磷酸酯和/或亞磷酸酯中的各Ri各自獨立選自低級直鏈直鏈烷基、低級支鏈烷基、異丙基、叔丁基和低級環烷基。
一些實施方案中，所述中間體包含的活性2，4-嘧啶二胺的伯胺或仲胺基團上的氮原子被式-CRdRd-AH的基團取代，其中Rd和A如之前所定義。
再在另一方面，本發明提供了合成這里所述中間體和/或前藥的方法。含有磷酸鹽的前藥可通過將活性2，4-嘧啶二胺化合物與磷酸酯鹵化物，如式X-(CRdRd)y-O-P(O)(ORj)(ORj)或X-(CRdRd)y-O-P(O)(ORj)(OH)的磷酸酯鹵化物反應而合成，其中各Rj各自獨立為可選擇性除去的保護基；X是鹵化物，如氯化物；Rd和y如之前所定義。一些實施方案中，各Rj是如之前所定義的Re。除去所述可選擇性除去的保護基Rj得到磷酸鹽前藥。一些實施方案中，各Rj是相同的并選自低級直鏈烴基、低級支鏈烴基和低級環烴基。一些實施方案中，各Rj是異丙基或叔丁基。在獲得的是中間體混合物，例如含有不同數量的前基團或在2，4-嘧啶二胺分子的不同位置上含有前基團的中間體混合物的實施方案中，可采用標準分離和/或離析技術(例如柱層析)從混合物中分離所需中間體。或者，可采用標準分離和/或離析技術從不同前藥的混合物中分離所需前藥。
可用類似的方式使活性2，4-嘧啶二胺與磷酸酯鹵化物，如式X-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)(ORe)或X-(CRdRd)y-O-P(O)(ORe)(ORe)的磷酸酯鹵化物反應獲得無環磷酸酯前藥，其中X、Rd、y和Re如之前所定義。此時無需除去酯化基團Re。
可用類似的方式從相應的亞磷酸酯鹵化物，如式X-(CRdRd)y-O-P(ORj)(ORj)、X-(CRdRd)y-O-P(ORe)(OH)、X-(CRdRd)y-O-P(ORe)(ORe)的亞磷酸酯鹵化物制備無環亞磷酸鹽和亞磷酸酯前藥，其中X、Rd，y、Re和Rj如之前所定義。
可將活性2，4-嘧啶二胺化合物與相應的環磷酸酯或環亞磷酸酯鹵化物，如式

的環磷酸酯鹵化物或式

的環亞磷酸酯鹵化物反應制備環磷酸酯和環亞磷酸酯前藥，其中X，R，y，z、Rg和R如之前所定義。
其中Rp是-CRdRd-AR3的實施方案可用常規方法從相應的2，4-嘧啶二胺藥物制備。例如，當A是O時，可將活性2，4-嘧啶二胺化合物與式Rd-C(O)-Rd的醛或酮反應合成中間體，以產生相應的羥基甲基胺中間體(其中Rp是-CRdRd-OH)，其中Rd如之前的定義。然后可采用標準技術將該羥基甲基胺中間體轉化成前藥。根據Rp的定義，所述羥基甲基胺中間體也是本發明的前藥。例如，已將含有仲胺的其他藥物加入甲醛以得到它們相應的可分離的羥基甲基胺加合物，Bansal等，J.Pharmaceutical Sci.1981，70(8)，850-854；Bansal等，J.Pharmaceutical Sci.1981，70(8)，855-856；Khan等，J Pharmaceutical and Biomedical Analysis 1989，7(6)，685-691。或者，可分兩個步驟制備含有羥基烴基的前藥，首先使活性2，4-嘧啶二胺與雙官能親電子試劑如式X1-CRdRd-X2的鹵化物反應，其中X1表示第一個鹵化物，X2表示第二個鹵化物，Rd如之前的定義。在具體的示例性實施方案中，所述鹵化物具有式I-CRdRd-Cl。然后用標準技術將未反應的鹵化物羥基化以得到含有羥基烴基的前藥。
其中A是O、S或NR50的前藥可從相應的N-甲基磷酸酯合成。根據該實施方案，磷酸酯基可用式R3-AH的基團代替，其中R3和A如之前所定義，以產生前藥，下面將更加詳細地討論。
這里所述的許多前藥，尤其是結構式(I)的前藥，可代謝產生2，4-嘧啶二胺化合物，該化合物是免疫細胞如肥大細胞、嗜堿細胞、中性細胞和/或嗜酸性細胞脫粒的有力抑制劑。可按照這里的描述制成前藥并用于這里所述的各種方法的具有類似生物活性的其它2，4-嘧啶二胺化合物描述于2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文。因此，再在另一方面，本發明提供了調節，尤其是抑制這種細胞脫粒的方法。該方法通常包括使脫粒的細胞接觸有效調節或抑制所述細胞脫粒量的這里所述的合適前藥或其可接受的鹽、水合物、溶劑合物、N-氧化物和/或組合物。該方法可在體外進行，前提是要在前基團可代謝生成活性2，4-嘧啶二胺化合物的條件下進行接觸，或者可在體內進行作為治療或預防以細胞脫粒為特征、由細胞脫粒造成或與其有關的疾病的治療方法。
雖然不希望局限于任何操作理論，生化數據證實，這些活性2，4-嘧啶二胺化合物中的多數至少部分通過阻遏或抑制由高親和性Fc受體與IgE(″FcεRI″)和/或IgG(″FcγRI″)交聯啟動的信號轉導級聯而發揮其脫粒抑制效應(參見，例如，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文)。實質上，這些活性2，4-嘧啶二胺化合物是FcεRI-介導的脫粒和FcγRI-介導的脫粒的有力抑制劑。其結果是，在表達這種FcεRI和/或FcγRI受體的任何細胞類型中，這里所述的前藥可用于抑制這些Fc受體的信號級聯，其中所述細胞包括但不限于巨噬細胞、肥大細胞、嗜堿細胞、中性細胞和/或嗜酸性細胞。
所述方法還能夠調節，尤其是抑制作為激活這種Fc受體信號級聯的結果的下游過程。這種下游過程包括但不限于FcεRI-介導的和/或FcγRI-介導的脫粒、產生細胞因子和/或產生和/或釋放脂質調質如白三烯和前列腺素。該方法通常包括使表達Fc受體的細胞(如上述細胞類型之一)接觸有效調節或抑制Fc受體信號級聯和/或受這種信號級聯激活影響的下游過程量的這里所述的前藥或其可接受的鹽、水合物、溶劑合物、N-氧化物和/或組合物。該方法可在體外進行，前提是要在前基團可代謝生成活性2，4-嘧啶二胺化合物的條件下進行接觸，或者可在體內進行作為治療或預防以Fc受體信號級聯為特征、由Fc受體信號級聯造成或與其有關的疾病的治療方法，所述疾病如受到下述因素影響的疾病因脫粒而釋放顆粒狀特定化學調質、細胞因子的釋放和/或合成、和/或脂質調質如白三烯和前列腺素的釋放和/或合成。
再在另一方面，本發明提供了治療和/或預防以作為激活Fc受體信號級聯(如FcεRI和/或FcγRI-信號級聯)結果的化學調質的釋放為特征、由其造成或與其有關的疾病的方法。該方法可在獸醫領域的動物中或在人類中進行。該方法通常包括給予動物對象或人有效治療或預防所述疾病量的這里所述的前藥或其可接受的鹽、水合物、溶劑合物、N-氧化物和/或組合物。如上所述，某些免疫細胞中FcεRI或FcγRI受體信號級聯的激活導致釋放和/或合成作為許多疾病藥理學調質的化學物質。這些疾病中的任何一種可用本發明的方法治療或預防。
例如，在肥大細胞和嗜堿細胞中，FcεRI或FcγRI信號級聯的激活導致立即(即在受體激活1-3分鐘內)通過脫粒過程釋放過敏性和/或I型超敏反應的預成調質(例如，組胺、蛋白酶類如類胰蛋白酶等)。這種過敏性或I型超敏反應包括但不限于對環境和其它應變原(例如，花粉、昆蟲和/或動物毒液、食物、藥物、造影染料等)的過敏反應、過敏樣反應、花粉癥、過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性哮喘、過敏性皮炎、濕疹、蕁麻疹、粘膜病、組織疾病和某些胃腸疾病。
通過脫粒立即釋放預成調質之后是釋放和/或合成多種其它化學調質，其中包括血小板激活因子(PAF)、前列腺素和白三烯(例如，LTC4)以及重新合成和釋放TNFα、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13等細胞因子。這兩個過程中的第一個在受體激活后約3-30分鐘發生；后者在受體激活后約30分鐘-7小時發生。這些“后期”調質被認為部分地負責上述過敏性和I型超敏反應的慢性癥狀，此外還是炎癥和炎性疾病(例如，骨關節炎、炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩病、特發性炎性腸病、腸應激綜合征、痙攣性結腸等)、低級瘢痕形成(例如，硬皮病、纖維化增強、瘢痕疙瘩、手術后瘢痕、肺纖維化、血管性痙攣、偏頭痛、再灌注損傷和后心肌梗死(post myocardialinfarction))以及干燥復征或綜合征的化學調質。所有這些疾病可用這里所述的方法治療或預防。
可用這里描述的方法治療或預防的其它疾病包括與嗜堿細胞和/或肥大細胞病理學有關的疾病。這種疾病的實例包括但不限于皮膚疾病如硬皮病，心臟疾病如后心肌梗死，肺病如肺肌改變或重塑和慢性阻塞性肺病(COPD)，腸道疾病如炎性腸綜合征(痙攣性結腸)，急性髓細胞樣白血病(AML)和免疫性血小板減少性紫癜。
許多活性2，4-嘧啶二胺化合物也是酪氨酸激酶Syk激酶的有力抑制劑。這種2，4-嘧啶二胺的例子描述于，例如，2003年1月31日調節的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文。因此，再在另一方面，本發明提供了調節，尤其是抑制Syk激酶活性的方法。該方法通常包括使Syk激酶或含有Syk激酶的細胞接觸有效調節或抑制Syk激酶活性量的合適的前藥或其可接受的鹽、水合物、溶劑合物、N-氧化物和/或組合物。一實施方案中，所述Syk激酶是分離的或重組Syk激酶。另一實施方案中，所述Syk激酶是由細胞如肥大細胞或嗜堿細胞表達的內源性或重組Syk激酶。該方法可在體外進行，前提是要在前基團可代謝生成活性2，4-嘧啶二胺化合物的條件下進行接觸，或者可在體內進行作為治療或預防以Syk激酶活性為特征、由其造成或與其有關的疾病的治療方法。
雖然不希望局限于任何操作理論，認為這種活性2，4-嘧啶二胺化合物主要通過抑制被FcεRI的γ鏈同源二聚體激活的Syk激酶而抑制細胞脫粒和/或釋放其它化學調質。這一γ鏈同源二聚體由包括FcγRI、FcγRIII和FcαRI在內的其它Fc受體所共享。對于所有這些受體，胞內信號轉導由共有的γ鏈同源二聚體介導。那些受體的結合和聚集導致酪氨酸激酶如Syk激酶的募集和激活。這些常見信號轉導活動的結果是，這里所述的代謝成這種活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥可用來調節，尤其是抑制具有這種γ鏈同源二聚體的Fc受體如FcεRI、FcγRI、FcγRIII和FcαRI的信號級聯以及由這些受體引發的細胞應答。
已知Syk激酶在其它信號級聯中扮演重要角色。例如，Syk激酶是B細胞受體(BCR)信號轉導的效應物(Turner等，2000，Immunology Today 21148-154)，并且是中性白細胞中整聯蛋白(integrin)β(1)、β(2)和β(3)信號轉導的基本成分(Mocsai等，2002，Immunity 16547-558)。作為Syk激酶有力抑制劑的活性2，4-嘧啶二胺化合物可用來調節，尤其是抑制Syk參與的任何信號級聯，例如Fc受體、BCR和整聯蛋白信號級聯，以及由這些信號級聯引發的細胞應答。因此，這里所述的代謝成這種活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥可用來調節這種活性。如本領域所熟知的，被調節或抑制的特定細胞應答將部分地取決于特定細胞類型和受體信號級聯。可用這種前藥調節或抑制的細胞應答的非限制性例子包括呼吸爆發、細胞粘附、細胞脫粒、細胞擴散、細胞遷移、吞噬作用(例如在巨噬細胞內)、鈣離子流(例如在肥大細胞、嗜堿細胞、中性白細胞、嗜酸性細胞和B細胞中)、血小板聚集和細胞成熟(例如在B細胞中)。
因此，在另一方面，本發明提供了一種調節，尤其是抑制Syk在其中扮演角色的信號轉導級聯的方法。該方法通常包括使Syk依賴性受體或表達Syk依賴性受體的細胞接觸有效調節或抑制信號轉導級聯量的這里所述的合適前藥或其可接受的鹽、水合物、溶劑合物、N-氧化物和/或組合物。該方法還可用來調節，尤其是抑制由于特定Syk依賴性信號轉導級聯激活而引發的下游過程或細胞應答。該方法可用于調節任何現在已知或隨后發現Syk在其中扮演角色的信號轉導級聯。該方法可在體外進行，前提是要在前基團可代謝生成活性2，4-嘧啶二胺化合物的條件下進行接觸，或者可在體內進行作為治療或預防以Syk依賴性信號轉導級聯的激活為特征、由其造成或與其有關的疾病的治療方法。
最近的研究顯示，膠原對血小板的激活由與免疫受體相同的途徑介導，其中FcRγ上的免疫受體酪氨酸激酶基序扮演關鍵角色(Watson & Gibbons，1998，Immunol.Today 19260-264)，同時，FcRγ在小鼠泡沫化損傷后發生新內膜增生中扮演關鍵角色，最可能是通過膠原誘導的血小板的激活和白細胞募集(Konishi等，2002，Circulation 105912-916)。因此，這里所述的前藥也可用于抑制膠原誘導的血小板激活以及用于治療或預防與這種血小板激活有關或由其造成的疾病，如血管損傷后的內膜增生和再狹窄。
細胞和動物數據也證實，許多這些活性2，4-嘧啶二胺化合物也可用于治療或預防自身免疫性疾病和/或這種疾病的癥狀{參見，例如，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文}。其結果是，這種活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥同樣可用于治療或預防這種自身免疫性疾病和/或癥狀。該方法通常包括給予患有自身免疫性疾病或有發生自身免疫性疾病風險的對象有效治療或預防所述自身免疫性疾病和/或其相關癥狀的量的這里所述的合適前藥或其可接受的鹽、N-氧化物、水合物、溶劑合物或組合物。可用這種前藥治療或預防的自身免疫性疾病包括那些通常與非過敏性超敏反應(II型、III型和/或IV型超敏反應)有關的疾病和/或那些至少部分由單核細胞中FcγR信號級聯的活化介導的疾病。這種自身免疫性疾病包括但不限于那些通常稱為單器官或單細胞類型自身免疫性疾病的自身免疫性疾病以及那些通常稱為系統性自身免疫性疾病的自身免疫性疾病。通常稱為單器官或單細胞類型自身免疫性疾病的疾病的非限制性例子包括橋本甲狀腺炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血性自身免疫萎縮性胃炎、自身免疫性腦脊髓炎、自身免疫性睪丸炎、古德帕斯徹病、自身免疫性血小板減少癥、交感性眼炎、重癥肌無力、格雷夫斯病、原發性膽汁性肝硬變、慢性活動性肝炎、潰瘍性結腸炎和膜性腎小球病。通常稱為系統性自身免疫性疾病的疾病的非限制性例子包括系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、舍格倫綜合征、萊特爾綜合征、多肌炎-皮肌炎、系統性硬化、結節性多動脈炎、多發性硬化和大皰性類天皰瘡。基于β細胞(體液)或T細胞的其它自身免疫性疾病包括自身免疫性脫發、I型或青少年糖尿病和甲狀腺炎。
5.附圖簡述

圖1提供了說明含磷前藥代謝途徑的過程； 圖2提供了說明環磷酸酯前藥代謝途徑的過程； 圖3說明了示例性環磷酸酯前藥的示例性合成過程；和 圖4-11提供了藥物化合物1和/或前藥化合物4各種藥代動力學數據的圖示。
6.發明詳述 6.1定義 文中，以下術語具有以下含義 “烴基”本身或作為另一取代基的一部分是指含有一定碳原子(例如，C1-C6是指一到六個碳原子)的飽和或非飽和的支鏈、直鏈或環狀一價烴基，它們是由母體烷烴、烯烴或炔烴的單個碳原子上的一個氫原子被消去而得到的。典型的烴基包括但不限于甲基；乙基如乙烷基、乙烯基、乙炔基；丙基如1-丙基、2-丙基、1-環丙基、1-烯-1-丙基、1-烯-2-丙基、2-烯-1-丙基、1-烯-環丙基、2-烯環丙基、1-炔-1-丙基、2-炔-1-丙基等；丁基如正丁烷基、異丁烷基、2-甲基-1-丁烷基、2-甲基-2-丁烷基、1-環丁烷基、1-烯-1-丁基、1-烯-2-丁基、2-甲基1-烯-1-丙基、2-烯-1-丁基、2-烯-2-丁基、1，3-二烯-2-丁基、1-烯-1-環丁基、1-烯-3-環丁烯、1，3-二烯-1-環丁基，1-炔-1-丁基、1-炔-3-丁基、3-炔-1-丁基等。當注明飽和水平時，使用定義如下的命名法“烷基”、“鏈烯基”和/或“炔基”。文中，“低級烴基”指(C1-C8)烴基。
“烷基”本身或作為另一取代基的一部分是指母體烷烴上的單個碳原子上的一個氫原子被消去而得到的飽和的支鏈、直鏈或環狀烴基。典型的烷基包括但不限于甲基；乙基；丙基，如1-丙基、2-丙基(異丙基)、1-環丙基等；丁基，如1-丁基、2-丁基(仲丁基)、2-甲基-1-丙基(異丁基)、2-甲基-2-丙基(t-丁基)、1-環丁基等；等等。文中，“低級烷基”指(C1-C8)烷基。
“鏈烯基”本身或作為另一取代基的一部分是指由母體烯烴上的單個碳原子上的一個氫原子被消去而得到的含有至少一個碳碳雙鍵的不飽和的支鏈、直鏈或環狀烴基。圍繞碳碳雙鍵所述基團可以是順式的也可以是反式的。典型的鏈烯基包括但不限于乙烯基；丙稀基，如1-烯-1-丙基、1-烯-2-丙基、2-烯-1-丙基、2-烯-2-丙基、1-烯-1-環丙基、2-烯-1-環丙基；丁烯，如1-烯-1-丁基、1-烯-2丁基、2-甲基-1-烯-1-丙基、2-烯-1-丁基、2-烯-2-丁基、1，3-二烯-1-丁基、1，3-二烯-2-丁基、1-烯-1-環丁基、1-烯-3-環丁基、1，3-二烯-1-環丁基等；等等。文中，“低級鏈烯基”指(C2-C8)鏈烯基。
“炔基”本身或作為另一取代基的一部分，是指由母體炔烴上的單個碳原子上的一個氫原子被消去而得到的含有至少一個碳碳三鍵的不飽和的支鏈、直鏈或環狀烴基。典型的炔基包括但不限于乙炔基；丙炔基，如1-炔-1-丙基、2-炔-1-丙基，等；丁炔基，如1-炔-1-丁基、1-炔-3-丁基、3-炔-1-丁基等等。文中，“低級炔基”指(C2-C8)炔基。
“烴二基”本身或作為另一取代基的一部分，是指由母體烷烴、烯烴或炔烴上的兩個不同碳原子上各有一個氫原子被消去而得到的、或者是由母體烷烴、烯烴或炔烴上的單個碳原子上有兩個氫原子被消去而得到的、含有一定碳原子(例如，C1-C6是指一到六個碳原子)的飽和的或不飽和的支鏈、直鏈或環狀二價烴基。其中，兩個一價的中心原子或二價中心原子中的每一價都可以與相同的或不同的原子成鍵。典型的烴二基包括但不限于甲二基；乙二基，如1，1-乙二基、1，2-乙二基、1，1-乙二烯基、1，2-乙二烯基；丙二基，如1，1-丙二基、1，2-丙二基、2，2-丙二基、1，3-丙二基、1，1-環丙二基、1，2-環丙二基、1-烯-1，1-丙二基、1-烯-1，2-丙二基、2-烯-1，2-丙二基、1-烯-1，3-丙二基，等；丁二基，如1，1-丁二基、1，2-丁二基、1，3-丁二基、1，4-丁二基、2，2-丁二基、2-甲基-1，1-丁二基、2-甲基-1，2-丁二基、1，1-環丁二基、1，2-環丁二基、1，3-環丁二基、1-烯-1，1-丁二基、1-烯-1，2-丁二基、1-烯-1，3-丁二基、1-烯-1，4-丁二基、2-甲基-1-烯-1，1-丁二基、2-甲亞磺酸基-1，1-丁二基、1，3-二烯-1，1-丁二基、1，3-二烯-1，2-丁二基、1，3-二烯-1，3-丁二基、1，3-二烯-1，4-丁二基、1-烯-1，2-環丁二基、1-烯-1，3-環丁二基、2-烯-1，2-環丁二基、1，3-二烯-1，2-環丁二基、1，3-二烯-1，3-環丁二基、1-炔-1，3-丁二基、1-炔-1，4-丁二基、1，3-二炔-1，4-丁二基等等。當表示具體飽和水平時，使用烷二基、烯二基和炔二基的命名法。當具體表示所指的兩價在同一個碳原子上時，使用“亞烷基”的命名法。一些實施方案中，烴二基為(C1-C8)烴二基。具體的實施方案包括其中中心位于末端碳原子的飽和的非環狀烷二基，例如，甲二基(橋亞甲基)；1，2-乙二基(橋亞乙基)；1，3-丙二基(橋亞丙基)；1，4-丁二基(橋亞丁基)；以及它們的相似物(也參考下文定義的橋烴基)。
“橋烴基”本身或作為另一取代基的一部分，是指由直鏈母體烷基、烯基或炔基上的兩個末端碳原子中的每一個上的一個氫原子被消去而得到、含有兩個末端一價的極性中心的直鏈的飽和的或不飽和的烷二基基團。具體橋烴基中的雙鍵或三鍵的位次(如果存在)在方括號中表示。典型的橋烴基基團包括但不限于橋亞甲基；橋乙烴基，例如橋乙基、橋乙烯基、橋乙炔基；橋丙烴基，例如橋丙基、橋丙[1]烯基、橋丙[1，2]二烯基、橋[1]炔基等；橋丁烴基，例如橋丁基，橋丁[1]烯基、橋丁[2]烯基、橋丁[1，3]二烯基、橋丁[1]炔基、橋丁[2]炔基、橋丁[1，3]二炔基等，以及它們的相似物。當表示具體飽和水平時，使用橋烷基、橋烯基和/或橋炔基命名法。一些實施方案中，橋烴基為(C1-C8)或(C1-C3)橋烴基。具體實施方案包括直鏈的飽和的橋亞烷基，例如，橋亞甲基、橋亞乙基、橋亞丙基、橋亞丁基等等。
“雜烴基”、“雜烷基”、“雜烯基”、“雜炔基”、“雜烴二基”“烴二基”和“雜橋烴基”本身或作為另一取代基的一部分，分別是指其中的一個或多個碳原子獨自地被相同的或不同的雜原子或雜原子基團所取代的烴基、烷基、烯基、炔基、烴二基和橋烴基。典型的能取代碳原子的雜原子或雜原子基團包括但不限于-O-、-S-、-S-O-、-NR’-、-PH-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)NR’-、-S(O)2NR’-等等，還包括它們的聯合體，其中的每一個R’都獨立地表示氫或(C1-C8)烴基。
“環烴基”和“雜環烴基”本身或作為另一取代基的一部分，分別是指環狀的烴基和雜烴基。對于雜烴基而言，雜原子可占據與所述分子的殘余部分相連接的位置。典型的環烴基包括但不限于環丙基；環丁基，如環丁烷基、環丁烯基、環戊基，如環戊烷基、環戊烯基；環己基，如環己烷基、環己烯基等等。典型的雜環烴基包括但不限于四氫呋喃基(如2-四氫呋喃基、3-四氫呋喃基等)、六氫吡啶基(如1-六氫吡啶基、2-六氫吡啶基等)、嗎啉基(如3-嗎啉基、4-嗎啉基等)、哌嗪基(如1-哌嗪基、2-哌嗪基等)等等。
“非環雜原子橋基”是指其中主鏈原子完全是雜原子和/或雜原子基團的二價橋基。典型的非環雜原子橋基包括但不限于-O-、-S-、-S-O-、-NR’-、-PH-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)NR’-、-S(O)2NR’-等等，包括它們的聯合體，其中的每一個R’都獨立地表示氫或(C1-C8)烴基。
“母體芳香環系統”是指不飽和的環狀的或多環系統，它含有共軛的π電子體系。在“母體芳香環系統”的定義中特別包括稠環系統，其中的一個或多個環為芳香環，而且其中有一個或多個環為飽和的或不飽和的環，例如芴、茚滿、茚、苯烯、四氫化萘等。典型的母體芳香環體系包括但不限于蒽烯、亞萘烯、菲烯、蒽、茂并芳庚、苯、1，2-苯并菲、六苯并苯、熒蒽、芴、十六碳烯、己芬、己烯、印地西(indacene)、s-印地西(indacene)、茚滿、茚、萘、并八苯、八苯、八烯、卵烯、五-2，4-二烯、并五苯、并環戊二烯、戊酚、二萘嵌苯、菲那啉(phenalene)、菲、二苯并菲、七曜烯、嵌二萘、皮蒽、玉紅省、四氫化萘、三苯烯、萘等等。
“芳基”本身或作為另一取代基的一部分，是指單價的芳香族碳氫化合物基團，它們含有一定數量的碳原子(例如C6-C15表示6到15個碳原子)，是由母體芳香環體系上的單個碳原子上的一個氫原子被消去而得到的。典型的芳香基包括但不限于衍生自蒽烯、亞萘烯、菲烯、蒽、茂并芳庚、苯、1，2-苯并菲、六苯并苯、熒蒽、芴、十六碳烯、己芬、己烯、印地西(indacene)、s-印地西(indacene)、茚滿、茚、萘、并八苯、八苯、八烯、卵烯、五-2，4-二烯、并五苯、并環戊二烯、戊酚、二萘嵌苯、菲那啉(phenalene)、菲、二苯并菲、七曜烯、嵌二萘、皮蒽、玉紅省、四氫化萘、三苯烯、萘等等及其氫異構體的基團。在優選的實施方案中，芳基為(C6-C15)芳基，其中(C6-C10)較好。具體的示例性芳基包括苯基和萘基。
“芳基芳基”本身或作為另一取代基的一部分，是指單價的碳氫化合物基團，它們是由其中兩個或更多相同或不同的母體芳香環系統通過單鍵直接相連的環系統中的單個碳原子上的一個氫被消去而得到的，其中的那些直接的環連接點的數量比所涉及的母體芳香環系統的數量少一個。典型的芳基芳基包括但不限于聯苯基、三苯基、苯基-萘基、聯萘基、聯苯基-萘基等等。當芳基芳基中的碳原子數是確定的時，該數量為包含每一個母體芳香環的碳原子數。例如，(C6-C15)芳基芳基是指其中每個母體芳香環含有6到15個碳原子的芳基芳基，如聯苯基、三苯基、聯萘基和苯基萘基等。一些實施方案中，芳基芳基的每一個母體芳香環各為(C6-C15)芳香基，更優選(C6-C10)芳香基。具體的示例性芳基芳基包括其中所有母體芳香環體系都相同的芳基芳基，例如聯苯基、三苯基、聯萘基和三萘基等。
“二芳基”本身或作為另一取代基的一部分，是指含有兩個由單鍵直接相連的相同的母體芳基體系的芳基芳基。典型的二芳基包括但不限于聯苯基、聯萘基、聯蒽基等等。一些實施方案中，所述芳香環體系為(C6-C15)芳香環，更典型的是(C6-C10)芳香環。具體的示例性二芳基是聯苯基。
“芳基烴基”本身或作為另一取代基的一部分，是指一個無環的烴基，其中與一個碳原子(特別是末端或sp3碳原子)相連的一個氫被一個芳基取代。典型的芳基烷基包括但不限于苯基、2-苯-1-乙基、2-苯基-1-乙烯基、萘甲基、2-萘基-1-乙基、2-萘基-1-乙烯基、2-萘苯基-1-乙基等等。當指明具體烴基部分時，使用芳烷基、芳烯基和/或芳炔基命名法。一些實施方案中，芳基烴基為(C7-C21)芳基烴基，例如，芳基烴基的烷基、鏈烯基或炔基部分為(C1-C6)且芳基部分為(C6-C15)。在一些具體的實施方案中，芳基烴基為(C7-C13)，例如，芳基烴基的烷基、鏈烯基或炔基部分為(C1-C3)且芳基部分為(C6-C10)。
“母體異芳香環體系”是指其中的一個或多個碳原子各自單獨地被相同的或不同的雜原子或雜原子基團所取代的母體芳香環體系。典型的取代碳原子的雜原子或雜原子基團包括但不限于N、NH、P、O、S、S(O)、S(O)2、Si等。“母體雜芳環體系”的定義中的特別包括稠環體系，其中有一個或多個環為芳環，而且其中一個或多個環為飽和的或不飽和的，例如苯化二氧、苯并呋喃、苯并二氫呋喃、苯并吡喃、吲哚、吲哚啉和氧雜蒽等。“母體雜芳環體系”的定義中也包括那些可識別的環，它們包括常見的取代物，如苯并呋喃酮和1-甲基-1，2，3，4-四唑。“母體雜芳環體系”的定義中特別排除與環狀的聚烯基乙二醇(如環狀的聚乙烯基乙二醇)融合的苯環。典型的母體雜芳環體系包括但不限于氮蒽、苯并咪唑、苯并異唑、苯并二氧、苯并二噁烷、苯并呋喃、苯并呋喃酮、苯并噻重氮、苯并噻唑、苯并三唑、苯并噁嗪、苯并唑、唑啉、咔啉、β-咔啉、苯并二氫吡喃、苯并呋喃、鄰二氮雜萘、呋喃、咪唑、吲唑、吲唑啉、二氫吲哚、異苯并呋喃、異苯并吡喃、異吲哚、異吲哚啉、異喹啉、異噻唑、異唑、吡啶、噁二唑、噁唑、菲啶、鄰二氮雜菲、吩噻、二氮陸圜、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、對苯二酚、喹喔啉、四唑、噻重氮、噻唑、噻吩、三唑、氧雜蒽等等。
“雜芳基”本身或作為另一個取代基的一部分指的是含有一定的環原子數的單價芳香雜環化合物(例如，5-14元的含義是5到14個環原子)，該化合物是從母體芳香雜環體系的單個原子上消去一個氫原子得到的。典型的雜芳基包括但不限于衍生自吖啶、苯并咪唑、苯并異噁唑、苯并二噁烷、苯并二唑、苯并呋喃、苯并吡喃酮、苯并噻二唑、苯并噻唑、苯并三唑、苯并嗪、苯并唑、苯并唑啉、咔唑、β-咔啉、苯并二氫呲喃、苯并呲喃、肉啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氫吲哚、吲嗪、異苯并呋喃、異苯并吡喃、異吲哚、異二氫吲哚、異喹啉、異噻唑、異噁唑、吡啶、噁二唑、噁唑、萘嵌間二氮雜苯、菲啶、鄰二氮雜菲、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、噠嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯嗪、噻唑啉、噻啉、噻啉嗪、噻喔嗪、四唑、噻重氮、噻唑、噻吩、三唑以及(夾)氧雜蒽等等及其加氫異構體的基團。在優選的實施方案中，雜芳基是5-14元雜芳基，尤其優選5-10元雜芳基。
“雜芳基-雜芳基”本身或作為另一個取代基的一部分是指從一個環狀系統中的單個原子上消去一個氫原子得到的單價芳香雜環基團，在這個環狀系統里，兩個或更多相同或不同的母體芳香雜環系統直接以單鍵結合，其中這種直接的環交叉點數量比所涉及的母體芳香雜環體系少一個。典型的雜芳基-雜芳基包括但不限于二吡啶基、三吡啶基、吡啶嘌呤基以及二嘌呤基等等。當原子的數量指明時，該數量是指包含每個母體芳香雜環體系的原子數量。例如，5-15元雜芳基-雜芳基是其中每一個母體芳香雜環系統都包含5-15個原子的雜芳基一雜芳基，如二吡啶基、三吡啶基等。一些實施方案中，每一個母體芳香雜環系統都是一個獨立的5-15元雜芳基，更典型的是5-10元雜芳基。具體的示例性雜芳基-雜芳基包括那些其中所有母體芳香雜環系統是相同的雜芳基-雜芳基。
“二雜芳基”本身或作為另一個取代基的一部分是指含有兩個相同的直接以單鍵結合的母體雜環芳香環系統的雜芳基-雜芳基基團。典型的二雜芳基包括但不限于二吡啶基、二嘌呤基和二喹啉基等等。一些實施方案中，所述芳香雜環系統是5-15元芳香雜環，更典型的是5-10元芳香雜環。
“雜芳基烴基”本身或作為另一個取代基的一部分指的是無環烴基基團，其中與一個碳原子結合(典型的是末端碳sp3碳原子)的一個氫原子被雜芳基取代。當指明具體的烴基部分時，使用雜芳基烷基、雜芳基烯基和/或雜芳基炔基命名法。一些實施方案中，所述雜芳基烴基是6-21元雜芳基烴基，例如，雜芳基烴基的烷基、烯基或炔基部分是(C1-C6)烴基且雜芳基部分是5-15元雜芳基。一些具體的示例性實施方案中，所述雜芳基烴基是6-13元雜芳基烴基，例如，烷基、烯基或炔基部分是(C1-C3)烴基且雜芳基部分是5-10元雜芳基。
除非有其他說明，“鹵素”或“鹵代”本身或作為另一個取代基的一部分是指氟、氯、溴和碘，。
“鹵代烴基”本身或作為另一個取代基的一部分指的是其中一個或更多的氫原子被鹵素取代的烴基。因此，術語“鹵代烴基”包括一鹵代烴基、二鹵代烴基和三鹵代烴基等等，直到全鹵代烴基。例如，短語“(C1-C2)鹵代烴基”包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1-氟乙基、1，1-二氟乙基、1，2-二氟乙基、1，1，1-三氟乙基和全氟乙基等。
以上定義的基團可以帶有在本領域中通常用于創建其他易于識別取代基的前綴和/或后綴。例如，“烷氧基”指具有式-OR”的基團，“烷基胺”指具有式-NHR”的基團，“二烷基胺”指具有式-NR”R”的基團，其中每一個R”都是獨立的烴基。另一個例子，“鹵代烷氧基”指具有式-OR的基團，其中的R是鹵代烷基。
當用來修飾具體基團或根時，“取代的”表示具體基團或根上的一個或多個氫原子各自獨立地被相同或不同的取代基代替。在具體基團或根中可用于取代飽和碳原子上的氫的取代基包括但不限于-R60、鹵素、-O-M+、＝O、-OR70、-SR70、-S-M+、＝S、-NR80R80、-NR70、＝N-OR70、三鹵甲基、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O-M+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)O-M+、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60選自烴基、環烴基、雜烴基、環雜烴基、芳基、芳基烴基、雜芳基和雜芳基烴基；各R70獨立為氫或R60；各R80獨立為R70，或者，兩個R80和它們所結合的氮原子一起形成任選含有1-4個相同或不同的選自O、N和S的其它雜原子的5、6或7元環雜烴基；且各M+是帶有正電荷的抗衡離子，例如獨立選自K+、Na+、+N(R60)4和Li+的正電荷，或者兩個M+組合形成二價抗衡離子，例如選自Ca2+、Mg2+和Ba2+的二價抗衡離子。具體的例子是，-NR80R80表示包括-NH2、-NH-烴基、N-咯烷基和N-嗎啉基。
類似地，可用于在具體基團或根中取代不飽和碳原子上的氫的取代基包括但不限于-R60、鹵素、-O-M+、-OR70、-SR70、-SM+、-NR80R80、三鹵甲基、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2OM+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)O-M+、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80和M+如之前所定義。
除Rp外，用來取代雜烴基和環雜烴基中氮原子上的氫的取代基包括但不限于-R60、-O-M+、-OR70、-SR70、-S-M+、-NR80R80、三鹵甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2OM+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70XOR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70和-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80和M+如之前所定義。
以上所列舉的被稱為“取代的”可用來取代其它基團或原子的取代基的對于精通本領域的技術人員應是顯而易見的。
“保護基”指的是一組原子，當它們連接到一個分子的反應性官能團上時，將會屏蔽、降低或阻止該官能團的反應性。典型的是，在合成的過程中，根據需要，可以選擇性地除去一個保護基。保護基的例子在Greene和Wuts的《有機化學保護基》(Protective Groups in Organic Chemistry)，第三版，1999，John Wiley & Sons，NY和Harrison等人的《有機合成方法的概要》(Compendium of Synthetic Organic Methods)，1-8卷，1971-1996，John Wiley & Sons，NY中可以找到。具有代表性的氨基保護基的例子包括但不限于甲酸基、醋酸基、三氟醋酸基、苯甲基、芐氧基羰基(“CBZ”)、叔丁氧基羰基(“Boc”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙烷磺酰基(“TES”)、三苯甲游基和取代的三苯甲游基、烯丙氧基羰基、9-氟甲氧基羰基(“FMOC”)以及硝基-3，4-二甲氧苯甲基羰基(“NVOC”)等。具有代表性的羥基保護基的例子包括但不限于那些羥基被酰化或烷基化的基團，如苯甲基、三苯甲基醚，以及烷基醚、四氫吡喃醚、三烷基甲硅烷基醚(例如TMS或TIPPS)和烯丙基醚。
“Fc受體”是與免疫球蛋白的Fc部分(含有特殊的恒定區)結合的細胞表面分子家族的成員。每一種Fc受體與一種具體類型的免疫球蛋白結合。例如，Fcα受體(“FcαR”)結合IgA、FcεR結合IgE以及FcγR結合IgG。
FcαR家族包括聚合的Ig受體，該受體參與IgA/IgM、髓系特異性受體(mycloidspecific receptor)RcaRI(也叫CD89)、Fcα/μR和至少兩種選擇性IgA受體的上皮傳輸，(最近的綜述可參見Monteiro & van de Winkel的Annu.Rev.Immunol，2003，在先電子版)。FcαRI在中性白細胞、嗜酸性細胞、單核細胞/巨噬細胞、樹突細胞和肝kupfer細胞上表達。FcαRI包括一個α鏈和在胞質域中攜帶激活基序(ITAM)并磷酸化Syk激酶的FcRγ同源二聚體。
FcεR家族包括兩種類型，稱為FcεRI和FcεRII(也稱為CD23)。FcεRI是在肥大細胞、嗜堿細胞和嗜酸性細胞上發現的的高親和力受體(以大約1010M-1的親和力結合IgE)，其將單體IgE錨定在所述細胞表面。FcεRI擁有一個α鏈，一個β鏈和上述的γ鏈同源二聚體。FcεRII是表達在單核吞噬細胞、B淋巴細胞、嗜酸性細胞和血小板上的低親和力受體。FcεRII包含單獨的一個多肽鏈且不包含γ鏈同源二聚體。
FcγR家族包括三種類型，FcγRI(也稱為CD64)、FcγRII(也稱為CD32)和FcγRIII(也叫CD16)。FcγRI是在肥大細胞、嗜堿細胞、單核細胞、中性細胞、嗜酸性細胞、樹突狀細胞和吞噬細胞上發現的高親和力受體(以108M-1的親和力結合IgG1)，其將單體IgG錨定在所述細胞表面。FcγRI由一個α鏈和與FcαRI，FcεRI共有的γ鏈二聚體組成。
FcγRII是表達在中性白細胞、單核細胞、嗜酸性細胞、血小板和B淋巴細胞上的低親和力受體。FcγRII含有一個α鏈，不包含上述的γ鏈同源二聚體。
FcγRIII是表達在NK細胞、嗜酸性細胞、巨噬細胞、中性白細胞和肥大細胞上的低親和力受體(以5×105M-1的親和力結合IgG1)。它由一個α鏈和與FcαRI、FcεRI和FcγRI共有的γ同源二聚體組成。
熟練的技術人員應當認識到，對這些多種Fc受體的亞基結構和結合特性，以及表達它們的細胞類型，沒有進行完全的特征描述。上述討論僅僅反映了對于這些受體當前技術狀態(參見，如，《免疫生物學健康和疾病的免疫系統》(ImmunobiologyThe Immune System in Health & Disease)，第5版，Janeway等人著，2001年，ISBN0-8153-3642-x，第371頁圖9.30)，并且不表示對可以用這里所述的前藥來調節的各種受體信號級聯加以限制。
“Fc受體介導的脫粒”或“Fc受體誘導的脫粒”是指通過由Fc受體交聯引發的Fc受體信號轉導級聯進行的脫粒過程。
“IgE誘導的脫粒”或“FcεRI介導的脫粒”是指通過由FcεR1結合的IgE的交聯引發的IgE受體信號轉導級聯進行的脫粒過程。所述交聯可以是通過IgE特異性變應原或其他多價結合劑(如抗IgE的抗體)誘導的。在肥大細胞和嗜堿細胞中，導致脫粒的FcεRI信號級聯可分成兩個階段上游和下游。上游階段包括發生在鈣離子動員之前的所有過程。下游階段包括鈣離子動員和所有其下游過程。抑制FcεRI介導的脫粒的化合物可以在FcεRI介導的信號轉導級聯上的任意一個點產生作用。選擇性抑制上游FcεRI介導的脫粒的化合物作用于抑制誘導鈣離子活化點上游部分的FcεRI信號級聯。在細胞檢測中，選擇性抑制上游FcεRI介導的脫粒的化合物抑制諸如肥大細胞或嗜堿細胞等通過IgE特異性變應原或結合劑(如抗IgE的抗體)激活或刺激的細胞脫粒，但是基本不會抑制由繞過FcεRI信號轉導途徑的脫粒劑(如鈣離子載體離子霉素和A23187)活化或激發的細胞脫粒。
“IgG誘導的脫粒”或“FcγRI介導的脫粒”是指通過由FcγRI結合的IgG交聯引發的FcγRI信號轉導級聯進行的脫粒過程。所述交聯可以是由IgG特異性變應原或其他多價結合劑(如抗IgG或其片段的抗體)引發的。如FcεRI信號級聯，在肥大細胞和嗜堿細胞中，FcγRI信號級聯也導致可分為相同兩個階段(即上游和下游)的脫粒。與FcεRI介導的脫粒相似，選擇性抑制上游FcγRI介導的脫粒的化合物作用于誘導鈣離子活化點的上游。在細胞檢測中，選擇性抑制上游FcγRI介導的脫粒的化合物抑制諸如肥大細胞或嗜堿細胞等通過IgG特異性變應原或結合劑(如抗IgG的抗體或片段)激活或刺激的細胞脫粒，但是基本不會抑制由繞過FcγRI信號轉導途徑的脫粒劑(如鈣離子載體離子霉素和A23187)活化或激發的細胞脫粒。
“離子載體誘導的脫粒”或“離子載體介導的脫粒”指如肥大細胞或嗜堿細胞的細胞在暴露于鈣離子載體(如離子霉素或A23187)時發生的脫粒。
“Syk激酶”指的是眾所周知的在B細胞和其它造血細胞中表達的72kDa的非受體(胞質)脾蛋白酪氨酸激酶。Syk激酶包括與磷酸化的免疫受體酪氨酸基激活基序(“ITAM”)結合的串聯的兩個一致的Src-同源性2(SH2)結構域、，一個“接頭”結構域和一個催化域(Syk激酶的結構和功能的綜述，可參見Sada等，J.Biochem(東京)，130177-186；也可參見Turner等，2000，Immunology Today，21148-154)。Syk激酶已作為B細胞受體(BCR)信號轉導的效應物被廣泛研究(Turner等，2000，同上)。Syk激酶對于多種蛋白質的酪氨酸磷酸化至關重要，所述多種蛋白質調節源自免疫受體的重要的途徑，如鈣離子動員和促有絲分裂原蛋白激酶(MAPK)級聯和脫粒。Syk激酶在中性白細胞中的整聯蛋白(integrin)信號轉導中起了重要的作用(參見，例如，Mocsai等，2002，Immunity 16547-558)。
文中，Syk激酶包括來自任何動物物種(包括但不限于人類、猿、牛、豬和嚙齒動物等)的認為屬于Syk家族的激酶。特別包括自然發生的和人造的異構體、剪切體、等位基因的變體和突變體。這些Syk激酶的氨基酸順序是已知的并可在GENBANK上獲得。編碼人類Syk激酶不同異構體的mRNAs的具體例子可以在GENBANK登錄號gi|21361552|ref|NM_003177.2|，gi|496899|emb|Z29630.1|HSSYKPTK[496899]和gi|15030258|gb|BC011399.1|BC011399[15030258]中找到，這些序列通過參考納入本文。
熟練的技術人員應當認識到，屬于其它家族的酪氨酸激酶可能具有在三維結構上和類似于Syk的活性部位或結合“口袋”。這種結構相似的結果是，預計這里稱為“Syk模擬物”的這樣的激酶能催化由Syk磷酸化的底物。因此，應當認識到，這里所述的前藥可以調節，尤其是抑制這樣的Syk模擬物、這樣的Syk模擬物發揮作用的信號轉導級聯、受這樣的Syk模擬物影響的生物反應、以及Syk模擬物依賴性信號級聯。
“Syk依賴性信號級聯”指的是Syk激酶在其中起作用的信號轉導級聯。這種Syk依賴性信號級聯的非限制性例子有FcαRI、FcεRI、FcγRI、FcγRIII、BCR和整聯蛋白信號級聯。
“自身免疫性疾病”指的是那些通常與非過敏性超敏反應相關的疾病(II型、III型和IV型超敏反應)，這通常是患者自己的體液和/或細胞介導的免疫應答對一種或更多的內源和/或外源免疫原性物質產生應答的結果。這種自身免疫性疾病和過敏性(I型或IgE介導的)超敏反應相關的疾病是有區別的。
6.2前藥化合物 如概述中所述，本發明提供了生物活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥，如以下文獻中描述的各種2，4-嘧啶二胺化合物2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO 03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文。由于這些化合物能抑制上游Fc受體信號級聯以及Syk激酶和Syk激酶依賴性信號級聯，人們對這些2，4-嘧啶二胺化合物的前藥特別感興趣。所述前藥通常包括這種其中的一個或多個可利用的伯胺或仲胺基團被前基團Rp掩蔽的活性2，4-嘧啶二胺化合物，所述前基團在體內代謝產生活性2，4-嘧啶二胺藥物。如概述部分所述且將在下面更詳細討論的，所述前基團的性質可以改變，并且除了其他因素以外，會根據前藥所需的水溶性、其預定給藥模式和/或其代謝成活性2，4-嘧啶二胺化合物的預定機制或部位而改變。
例如，已發現特定的活性2，4-嘧啶二胺藥物(下面的化合物1)當被制成磷酸鹽前藥(下面的化合物4)時具有極好的水溶性 化合物結構溶解性 化合物1

1-2μg/ml 化合物4

＞5mg/ml 當口服給予試驗動物時，這種前藥化合物4相比相應的活性藥物化合物1還顯示出更好的生物利用度。實際上，不同于藥物化合物1，前藥化合物4的吸收與劑型無關。在對大鼠進行的藥代動力學研究中，從溶液(例如，PEG-400溶液和羧甲基纖維素溶液)和粉末(包裝在硬明膠膠囊中)中前藥化合物4的吸收同樣好。雖然不希望局限于任何操作理論，據信，前藥化合物4改進的口服生物利用度及其不依賴于劑型的吸收至少部分是由于其較高的水溶性。預計具有類似的低水溶性并因此具有低口服生物利用度的其它活性2，4-嘧啶二胺化合物當配制成磷酸鹽前藥時也會顯示出類似的水溶性和口服生物利用度的升高。
相反，預計活性藥物化合物1的相應的磷酸酯前藥的水溶性將低于活性化合物1。因此，預計水溶性低于相應的活性2，4-嘧啶二胺化合物的活性2，4-嘧啶二胺化合物的磷酸酯前藥有其適用于需要低水溶性的應用和劑型，如適用于吸入遞送的劑型。
預計將受益于作為前藥、尤其是作為磷酸鹽前藥的劑型的一類活性2，4-嘧啶二胺化合物包括其中2，4-嘧啶二胺部分的N4-取代基是式

所示的取代或未取代的含氮雜芳環的2，4-嘧啶二胺，其中，Z1和Z2各自獨立選自CH，N和Y選自CH2、NH、O、S、S(O)和S(O)2。這種前藥可在以下位置含有前基團Rp雜芳環非芳環氮之一或兩者，2，4-嘧啶二胺部分的N2-氮，2，4-嘧啶二胺部分的N4-氮原子和/或附于2，4-嘧啶二胺部分N2氮原子的取代基中的任何可利用的氮原子。
在一個例證性實施方案中，所述前藥是結構式(I)所示的化合物
包括其鹽、溶劑合物、水合物和N-氧化物，式中 Y選自CH2、NR24、O、S、S(O)和S(O)2； Z1和Z2各自獨立選自CH和N； R2選自被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的低級烴基、被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代低級環烴基、被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的環己基、被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的3-8元環雜烴基、被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的(C6-C14)芳基、被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的苯基以及被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的5-15元雜芳基； R5選自鹵素、氟、氰基、硝基、三鹵甲基和三氟甲基； R8選自Ra、Rb、被一個或多個(例如1到4個)相同或不同的Ra或Rb取代的Ra、被一個或多個相同或不同的Ra或Rb取代的-ORa、-B(ORa)2、-B(NRcRc)2、-(CH2)m-Rb、-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-Rb、-O-CHRaRb、-O-CRa(Rb)2、-O-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-CH[(CH2)mRb]Rb、-S-(CHRa)m-Rb、-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-C(O)NH-(CHRa)mRb、-O-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-O-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-S-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-NH-(CH2)m-Rb、-NH-(CHRa)m-Rb-、-NH[(CH2)mRb]、-N[(CH2)mRb]2、-NH-C(O)-NH-(CH2)m-Rb、-NH-C(O)-(CH2)m-CHRbRb和-NH-(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)m-Rb； R17選自氫、鹵素、氟、低級烴基和甲基，或者，R17可與R18一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R18選自氫、鹵素、氟、低級烴基和甲基，或者，R18可與R17一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R19選自氫、低級烴基和甲基，或者，R19可與R20一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； R20選自氫、低級烴基和甲基，或者，R20可與R19一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環； 各Ra各自獨立選自氫、低級烴基、低級環烴基、環己基、(C4-C11)環烴基烴基、(C6-C10)芳基、苯基、(C7-C16)芳基烴基、芐基、2-6元雜烴基、3-8元環雜烴基、嗎啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、4-11元環雜烴基烴基、5-10元雜芳基和6-16元雜芳基烴基； 各Rb是獨立選自下組的適當基團＝O、-ORa、(C1-C3)鹵烷氧基、＝S、-SRa、＝NRa、＝NORa、-NRcRc、鹵素、-CF3、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、-S(O)2ORa、-S(O)NRcRc、-S(O)2NRcRc、-OS(O)Ra、-OS(O)2Ra、-OS(O)2ORa、-OS(O)2NRcRc、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRcRc、-C(NH)NRcRc、-C(NRa)NRcRc、-C(NOH)Ra、-C(NOH)NRcRc、-OC(O)Ra、-OC(O)ORa、-OC(O)NRcRc、-OC(NH)NRcRc、-OC(NRa)NRcRc、-[NHC(O)]nRa、-[NRaC(O)]nRa、-[NHC(O)]nORa、-[NRaC(O)]nORa、-[NHC(O)]nNRcRc、-[NRaC(O)]nNRcRc、-[NHC(NH)]nNRcRc和-[NRaC(NRa)]nNRcRc； 各Rc各自獨立選自保護基和Ra，或者，結合到相同氮原子的兩個Rc與該氮原子一起形成5-8元環雜烴基或雜芳基，該基團可任選含有一個或多個相同或不同的其它雜原子并可被一個或多個(例如1到4個)相同或不同的Ra基團任選取代； R21、R22和R23各自獨立選自氫和前基團Rp； R24選自氫、低級烴基和前基團Rp； 各m各自獨立為1-3的整數；和 各n各自獨立為0-3個整數，前提是R21、R22、R23和R24中至少有一個是前基團。
在這里所述的前藥尤其是結構式(I)的前藥中，R21、R22和R23各自表示氫或前基團Rp。同時，R24表示氫、低級烴基或前基團Rp。因此，所述前藥可包含單個Rp前基團、兩個Rp前基團、三個Rp前基團或者更多個Rp前基團，這部分取決于Y的性質以及R2取代基是否含有任何R前基團。一些實施方案中，優選這里所述的前藥尤其是結構式(I)的前藥僅含有一個Rp基團。不局限于任何操作理論，含有一個以上Rp前基團的前藥中的不同Rp可能以不同速度代謝。含有單個Rp前基團的前藥將避免這種差異性的代謝動力學。含有一個Rp前基團的結構式(I)所示前藥的具體實施方案是結構式(Ia)所示的化合物
式中，Y1選自CH2、NR24、O、S、S(O)和S(O)2；且Z2、R2、R5、R17、R18、R19、R20、R24和Rp如上文的定義，前提是R2不包含任何Rp基團。
這里所述的前藥中存在的任何Rp前基團的性質不是成功的關鍵，前提是它在使用條件下水解產生活性2，4-嘧啶二胺化合物。最近發現，以下結構所示的含有磷酸根的前藥
在體內代謝成如下所示的相應的活性2，4-嘧啶二胺化合物(化合物1)
盡管不希望局限于任何操作理論，據信，這種前藥經下述相應的羥基甲基胺中間體代謝成活性化合物1
已知這種羥基甲基胺化合物在其體內水解產生甲醛和所述活性藥物的生理條件和各種pH范圍下不穩定。基于這種發現，據信，含有可在體內代謝(例如通過胃的酸性條件和/或通過消化道或身體內的其它器官和/或組織或體液中存在的酶)以產生上述羥基甲基胺中間體的羥基“保護”基的前藥會同樣代謝成活性2，4-嘧啶二胺藥物。
此外，預計這種羥基甲基胺中間體的氨基和硫代類似物在生理條件下也不穩定，并也會在體內水解成活性2，4-嘧啶二胺(2，4-pyrimdiendiamine)藥物。因此，還預計相應的氨基和硫代化合物以及其中的α-氨基和α-硫代基團被可在生理使用條件下被除去以產生α-氨基和α-硫代基團的“保護”基掩蔽的化合物將同樣是合適的前藥。
因此，一些實施方案中，結構式(I)和(Ia)的前藥中的前基團Rp具有式-CRdRd-A-R3，其中各Rd獨立選自氫、氰基、-C(O)Re、-C(O)ORe、-C(O)NReRe、-C(ORe)(ORe)、任選取代的(C1-C20)烴基、(C1-C20)全氟烴基、任選取代的(C7-C30)芳基烴基和任選取代的6-30元雜芳基烴基，其中各Re各自獨立選自氫、烴基(例如低級烴基)、芳基(例如苯基或萘基)、芳基烴基(例如芐基)、雜芳基和雜芳基烴基；A選自O、S和NR50，其中R50選自Rd和環烴基，或者與R3一起即R50和R3以及它們所結合的氮原子形成一3-7元環；R3與A一起在使用條件下代謝成式-CRdRdAH的中間體基團，其中Rd和A如之前所定義。如上所述，Rp基團為式-CRdRd-AH的結構式(I)和(Ia)的化合物在體內自發水解以產生活性2，4-嘧啶二胺藥物。
R3基團代謝以產生中間體基團-CRdRd-A-H的機制并不重要，并可通過例如在胃的酸性條件下和/或通過身體的消化道和/或組織或器官中存在的酶的水解而引起。實際上，可選擇在身體內的特定部位代謝的R3基團。例如，許多酯可在胃中的酸性條件下被切割。設計成在胃中被化學切割成活性2，4-嘧啶二胺的前藥可采用包含這種酯的前基團。或者，可將前基團設計成在酶如酯酶、酰胺酶、脂肪酶(lipolase)、磷酸酶(包括ATP酶和激酶等)存在時被代謝以產生式-CRdRd-A-H中間體基團。包含能夠在體內代謝以產生這種中間體基團的聯接的前基團是已知的，包括，例如但不限于，醚、硫醚、甲硅烷醚、甲硅烷硫醚、酯、硫酯、碳酸酯、硫代碳酸酯、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、脲、硫脲、氨甲酰等。一些情況下，可選擇被氧化酶類如肝臟中的細胞色素P450氧化成可代謝的基團的“前體”基團。
可對R3基團的性質進行選擇以賦予前藥所需特性。例如，親脂基團可用來降低水溶性而親水基團可用來提高水溶性。采用這種方法可獲得對所選給藥模式進行具體調整的前藥。也可將R3基團設計成賦予前藥其它特性，如改進的被動腸吸收、改進的轉運(transport)介導的的腸吸收、保護免遭快速代謝(緩釋前藥)、組織選擇性遞送、靶組織中被動富集、靶向特異性運載體等。能夠賦予前藥這些特性的基團是熟知的，并描述于，例如，Ettmayer等，2004，J.Med.Chem.47(102393-2404)，其內容通過引用納入本文。這些參考資料中描述的所有基團可用于這里所述的前藥。
一些實施方案中，R3選自-Rf、-C(O)Rf、-C(O)NRfRf和-SiRfRfRf，其中的Rf基團經過選擇以賦予前藥所需的生物利用度、切割和/或尋靶特性。在一具體實施方案中，Rf基團經過選擇以賦予前藥高于基礎活性2，4-嘧啶二胺藥物的水溶性。因此，一些實施方案中，Rf基團經過選擇以使它們與它們所結合的雜原子或基團一起具有親水特性。如本領域所熟知的，這種親水基團可帶電或不帶電。一個具體的例子是，Rf基團可選自氫、任選取代的低級烴基、任選取代的低級雜烴基、任選取代的低級環烴基、任選取代的低級雜環烴基、任選取代的(C6-C10)芳基、任選取代的5-10元雜芳基、任選取代的(C7-C18)芳基烴基和任選取代的6-18元雜芳基烴基。如本領域所熟知的，任何所述取代基的性質可有很大變化。一些實施方案中，任何所述取代基獨立選自上文定義的Rb。
在一具體實施方案中，式(I)和/或(Ia)的前藥的前基團具有式-CRdRd-A-R3，其中，R3選自-(CH2)i-Rb、-C(O)Ra、-C(O)-(CH2)i-Rb、-C(O)O-Ra和-C(O)O-(CH2)i-Rb，其中X、Ra、Rb和Rd如之前所定義，i是0-6的整數。提高水溶性的示例性前基團的具體的非限制性例子包括，例如但不限于，親水基團，如被胺、醇、羧酸、磷酸、亞砜、糖、氨基酸、硫醇、多元醇、醚、硫醚和季銨鹽中的一個或多個取代的烴基、芳基(arylk)、芳基烴基或環雜烴基。
一類重要的前基團包括含有磷酸基的前基團，例如，式-(RdRd)y-O-P(O)(OH)2所示的含有磷酸鹽的前基團，其中Rd如上文所定義，y是1-3的整數，通常為1或2。在一具體實施方案中，各Rd各自獨立選自氫，取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基和取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基。
雖然不希望局限于任何操作理論，據信，這種含有磷酸鹽的前基團Rp同時作為堿性和酸性磷酸酶的底物，使得它們在生理使用條件下從前藥中除去。由于在人類的消化道中富含堿性磷酸酶，在存在堿性磷酸酶時可被切割的含有磷酸根的前基團Rp特別適合配制供口服給藥的含有磷酸根的前藥。適用于供口服給藥的前藥的含有磷酸鹽的前基團Rp的具體例子包括但不限于式-(RdRd)y-O-P(O)(OH)2的基團，其中，各Rd各自獨立選自氫和未取代的低級烷基。這種含有磷酸鹽的前基團的示例性實施方案包括但不限于-CH2-O-P(O)(OH)2和-CH2CH2-O-P(O)(OH)2。
盡管人們對適合口服給藥的含有磷酸鹽的前藥感興趣，熟練的技術人員將了解，由于磷酸酶在體內廣泛分布，含有含磷酸根前基團，的前藥可通過其它給藥途徑給予。例如，在用大鼠血漿以及大鼠肝和腸微粒體制品進行的體外試驗中發現，示例性前藥化合物4可代謝成活性藥物化合物1，這說明磷酸酶也存在于血漿中。因此，唯一的要求是，所選擇的具體的含有磷酸鹽的前基團Rp應在所需使用條件下可除去。
雖然不希望局限于任何操作理論，據信，當y是1時，含有磷酸根的前藥，如結構式(Ia)所示的前藥，可經由相應的羥基甲基胺代謝成活性2，4-嘧啶二胺化合物。代謝過程示于圖1A。參考圖1A，通過酶水解從磷酸鹽前藥16上除去磷酸得到相應的羥基甲基胺18，該物質再在體內經水解產生甲醛和活性2，4-嘧啶二胺化合物10。
參考圖1B，當y為2時，據信，磷酸鹽前藥26體內水解產生活性2，4-嘧啶二胺10和磷酸烯醇酯，后者再體內水解成乙醛和磷酸。
再參考圖1A，熟練的技術人員將了解，盡管羥基甲基胺18在生理條件下代謝產生活性2，4-嘧啶二胺化合物10，它在pH7下穩定，并因此可以作為活性化合物10的含羥基烴基的前藥制備及給藥。因此，在結構式(I)的前藥的一些實施方案中，Rp是式-CRdRd-OH所示的含羥基烴基的前基團，其中R如之前的定義。在具體的示例性實施方案中，Rp是-CH2OH。
再參考圖1A，熟練的技術人員還將了解，可在體內水解磷酸酯前藥如磷酸酯前藥20和/或通過體內氧化亞磷酸鹽前藥如亞磷酸鹽前藥24來產生磷酸鹽前藥。這種磷酸酯和亞磷酸鹽前藥可通過體內氧化或水解亞磷酸酯前藥如亞磷酸酯前藥22而產生。相應的磷酸鹽前藥26的磷酸酯、亞磷酸鹽和亞磷酸酯前藥在圖1B中分別用化合物30、34和32表示。因此，熟練的技術人員將了解，含有可在體內代謝成磷酸基的磷酸鹽前體的前藥也包括在本發明之內。
在這種前藥的一些實施方案中，含磷前基團Rp包括亞磷酸基。這種含有亞磷酸基的前藥的具體的示例性實施方案包括其中的前基團Rp為式-(CRdRd)y-O-P(OH)(OH)的前藥化合物，其中Rd和y如之前所定義。
在這種前藥的其它實施方案中，含磷前基團Rp包括無環磷酸酯或亞磷酸酯基。這種無環磷酸酯和亞磷酸酯前藥的具體的示例性實施方案包括前基團Rp為式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)(ORe)、-(CRdRd)y-O-P(O)(ORe)2、-(CRdRd)y-O-P(OH)(ORe)和-(CRdRa)y-O-P(ORe)2的前藥，其中Re選自取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基(例如，苯基、萘基、4-低級烷氧基苯基、4-甲氧基苯基)、取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基(例如，芐基、1-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烷-1-基)、-(CRdRd)yORf、-(CRdRd)y-O-C(O)Rf、-(CRdRd)y-O-C(O)ORf、-(CRdRd)yS-C(O)Rf、-(CRdRd)yS-C(O)ORf、-(CRdRd)yNH-C(O)Rf、-(CRdRd)y-NH-C(O)ORf和-Si(Rd)3，其中各Rf各自獨立選自氫、未取代的或取代的低級烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基和取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基，Rd和y如之前所定義。
再在其它實施方案中，含磷酸鹽前體的含磷前藥是其中的含磷前基團Rp包含式

的環磷酸酯的前藥，其中各Rg各自獨立選自氫和低級烴基；各Rh各自獨立選自氫、取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的低級環雜烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基、取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基和取代或未取代的5-14元雜芳基；z是0-2的整數；Rd和y如之前所定義。
再在其它實施方案中，含有磷酸鹽前體的含磷前藥是其中的含磷前基團Rp包含式

的環亞磷酸酯的前藥，其中的Rg、Rh、Rd、y和z如之前所定義。
一些實施方案中，對這種環磷酸酯和亞磷酸酯前藥上的取代基Rh進行選擇以使前基團在體外被酯酶代謝。這種磷酸酯和亞磷酸酯前基團的具體例子包括那些其中各Rh各自獨立選自氫、低級烴基、甲基、乙基和丙基的基團。一些實施方案中，這種前基團選自
這些磷酸酯和亞磷酸酯許多都是酸不穩定的(acid label)，當口服給予時可在胃和/或腸的酸性條件下代謝成相應的磷酸鹽和亞磷酸鹽。
因此，在這里所述的含磷前藥中，可對所用具體含磷前基團Rp的性質進行選擇以使該前藥配合特定送藥模式，等等。
任何特定前基團Rp用于所需給藥模式的適用性可通過生化試驗確定。例如，如果要通過注射將前藥給予特定組織或器官，且在該組織或器官中表達的各種磷酸酶的性質是已知的，則可在生化試驗中用分離的磷酸酶對所述具體前藥的代謝進行檢測。或者可用組織和/或器官提取物對所述特定前藥代謝成活性2，4-嘧啶二胺化合物進行檢測。當在靶組織或器官中表達的磷酸酶的性質未知，或者當通常不方便獲得分離的磷酸酶時，使用組織和/或器官提取物特別方便。熟練的技術人員將能夠用這種體外試驗方便地選擇具有適合特定應用的代謝特性(如動力學)的前基團Rp。當然，也可在體外動物模型中對特定前藥的合適代謝進行檢測。
一些實施方案中，所述前藥是結構式(I)或(Ia)所示的前藥，其具有選自下組的一個或多個特征 (i)R5是氟； (ii)R2是被一個或多個相同或不同的R8基團任選取代的苯基； (iii)R2是3，4，5-三(低級烷氧基)苯基； (iv)R2是3，4，5-三甲氧基苯基； (v)Y或Y1是O；Z1是CH，Z2是N；R17和R18各自為甲基；R19和R20一起形成氧代基團；和 (vi)Rp是式-CH2OH的含有羥基烴基的前基團，或是式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)2的含有磷酸根的前基團，或其磷酸酯、亞磷酸鹽或亞磷酸酯類似物，其中的y是1或2，且各Rd各自獨立選自氫和未取代的低級烴基，或 (vii)Rp選自-CH2OH、CH2-SH、-CH2-NH2、-CH2-NHR50、-CH2-N(R50)2、-CH2-A-Rf、-CH2-A-C(O)Rf、-CH2-A-C(O)ORf和-CH2-A-C(O)NRfRf，其中的A、R50和Rf如之前所定義。
一些實施方案中，結構式(I)和(Ia)的前藥具有兩個或三個上述特征。在一具體實施方案中，所述前藥具有特征(i)、(iii)和(v)。在另一具體實施方案中，所述前藥具有特征(i)、(iv)和(v)。再在另一具體實施方案中，所述前藥具有特征(i)、(iii)、(v)和(vi)或(vii)。再在另一具體實施方案中，所述前藥具有特征(i)、(iv)、(v)和(vi)或(vii)。再在另一具體實施方案中，Rp是式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)2的含有磷酸鹽的前基團。
在這里所述的所有含有可被取代的取代基替代物(如一些取代基替代物可表示為Rd、Re、Rf、Rg、Rh、Ri和Rj)的化合物中，所述取代基通常各自獨立選自上文結合結構式(I)所述的Rb基團。在一具體實施方案中，任何所述取代基各自獨立選自羥基、低級烷氧基、(C6-C14)芳氧基、低級烷氧基烴基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基和鹵素。
精通本領域的技術人員將了解，許多這里所述的前藥以及這里特別描述和/或例舉的各種前藥種類可顯示出互變異構、構象異構、幾何異構和/或光學異構現象。例如，前藥可包含一個或多個手性中心和/或雙鍵，結果可能以立體異構體出現，如雙鍵異構體(也就是幾何異構體)、對映結構體、非對映異構體和它們的混合物，如外消旋混合物。另一個例子是，前藥可能以多種互變異構體形式存在，包括烯醇式、酮式和它們的混合物。同許多化合物的命名一樣，在說明書和權利要求中提出的式和圖，只代表可能的互變異構體、構象異構體、光學異構體或幾何異構體中的一種，應該清楚本發明包括這里描述的具有一種或多種應用的前藥的任何互變異構體、構象異構體、光學異構體和/或幾何異構體，以及這些不同異構體的各種混合物。如果圍繞2，4-嘧啶二胺部分的旋轉受到限制，也可能存在阻轉異構體并同樣具體包含在本發明的化合物里。
此外，精通本領域的技術人員認同，當由于化合價要求或其他原因導致供選擇的取代基列表包括不能取代一個特殊的基團的成員時，則認為文中的取代基列表含有那些適合取代特殊基團的取代基。例如，精通本領域的技術人員認同，雖然所有列出的供選擇的Rb可用于取代一個烷基，某些供選擇的取代物，如＝O，不能用來取代苯基。應當理解只意味著有可能的取代基組合。
這里所述的前藥可以通過它們的化學結構或化學名稱來確定。化學結構和化學名稱相沖突時，化學結構對具體前藥的確定起決定性作用。
依據各種取代物的特性，這里所述的前藥可以是鹽的形式。這種鹽包括藥物用鹽(“藥學上可接受的鹽”)和適于獸醫使用的鹽等等。如本領域內所熟知的，這樣的鹽可以是從酸或堿衍生而來的。
一實施方案中，所述鹽是藥學上可接受的鹽。通常，藥學上可接受的鹽是充分保留母體化合物一個或多個所需要的醫藥活性，并且適合對人體給藥的鹽。藥學上可接受的鹽包括由無機酸或有機酸形成的酸加成鹽。適合形成藥學上可接受的酸加成鹽的無機酸包括但不限于氫鹵酸(例如，鹽酸、氫溴酸、碘化氫等等)、硫磺酸、硝酸和磷酸等。適合形成藥學上可接受的酸加成鹽的有機酸包括但不限乙酸、三氟乙酸、丙酸、己酸、環戊烷丙酸、羥基乙酸、草酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、羥基丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、棕櫚酸、安息香酸、3-(4-羥苯甲酸)安息香酸、苯乙烯酸、苯基乙醇酸、烷基磺酸(例如，甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸等)、芳基磺酸(例如，苯基磺酸、4-氯苯基磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯基磺酸、環烷基磺酸(如樟腦磺酸)、4-甲基二環[2.2.2]-辛烷-2-烯-1-羧酸辛烷、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷醇基磺酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羥基萘酸、水楊酸、硬脂酸和粘康酸等)。
藥學上可接受的鹽也包括存在于母體化合物中的酸質子被金屬離子(如堿性金屬離子、堿性稀土金屬離子或鋁離子)取代、或者與有機堿(如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺、嗎啉、哌啶、二甲胺和二乙胺等)配位形成的鹽。
如本領域熟知的，這里所述的前藥以及其鹽也可以是水合物、溶劑合物和N-氧化物的形式。除非另有說明，短語“前藥”是指包括這種鹽、水合物、溶劑合物和/或N-氧化物。具體的示例性鹽包括但不限于單鈉鹽和二鈉鹽、單鉀鹽和二鉀鹽、單鋰鹽和二鋰鹽、單烴基氨基和二烴基氨基鹽、單鎂鹽、單鈣鹽以及銨鹽。
6.3合成方法 這里所述的前藥及其中間體可用市售原料和/或用常規合成方法制備的原料通過各種不同合成途徑合成。通常可用于和/或適用于合成活性2，4-嘧啶二胺化合物的合適的示例性方法可在以下文獻中找到美國專利No.5,958,935，2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO 03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)，其內容通過引用納入本文。這些活性2，4-嘧啶二胺化合物可用作合成所述前藥的原料。描述合成磷酸鹽前藥化合物4及其合成中間體的具體例子提供于實施例部分。所有這里所述的前藥可通過常規使用該方法而合成。
例如，結構式(I)和/或(Ia)所示前藥的一些實施方案可將相應的活性2，4-嘧啶二胺(即結構式(I)和/或(Ia)所示的其中各Rp是氫的化合物)與醛或酮反應得到α-羥基甲基胺，然后再使其與親電子試劑反應以產生前藥而制備。一種示例性的這種類型的合成示于下面的方案(I) 方案(I)
在方案(I)中，Y1、Z1、Z2、R2、R5、R17、R18、R19和R20如對結構式(I)或(Ia)的定義。R3和Rd如上文中的定義。根據方案(I)，活性2，4-嘧啶二胺10與酮12反應產生以下四種產物的混合物未反應的原料10(未顯示)和化合物14a、14b和14c。在這個階段，可用標準色譜技術將產物相互分離。與疏電R3反應產生前藥15a、15b和15c。
如上所述，α-羥基甲基胺14a、14b和14c可轉化成各種不同類型的前藥15a、15b和15c。例如，α-羥基甲基胺可在存在強酸催化劑或含碳鹵化物(例如，CH3Br)時與醇反應以產生相應的醚衍生物(例如，其中的R3是Rf的化合物，其中Rf如之前的定義)。
在存在強酸催化劑或羧酸酐或羧酸鹵化物(例如帶有合適的酸中和劑)時使α-羥基甲基胺14a、14b和14c與羧酸反應產生相應的酯衍生物(例如，其中的R3是-C(O)Rf的化合物，其中Rf如上文所定義)。
使α-羥基甲基胺14a、14b和14c與鹵代甲酸酯(例如，Cl-C(O)OCH3)反應產生相應的碳酸酯衍生物(例如，其中的R3是-C(O)ORf的化合物，其中Rf如之前的定義)。
使α-羥基甲基胺14a、14b和14c與鹵代甲酰胺(例如，Cl-C(O)N(CH3)2)反應產生相應的氨基甲酸酯或氨基甲酸乙酯衍生物(例如，其中的R3是-C(O)NRfRf的化合物，其中Rf如之前的定義)。
熟練的技術人員將了解，也可使用其它羥基保護基，其中包括例如Greene和Wuts的《有機化學保護基》，第二版，John Wiley & Sons，紐約，第10-142頁中描述的各種不同羥基保護基，其內容通過引用納入本文。
或者，結構式(I)和(Ia)所示的前藥可通過相應的磷酸酯的親核取代合成。這種合成途徑的一個例子示于下面的方案(II) 方案II
根據方案(II)，在存在碳酸銫時使活性2，4-嘧啶二胺10與氯甲基磷酸二叔丁酯13反應產生以下四種產物的混合物未反應的原料10(未顯示)和磷酸酯17a、17b和17c，這些本身是這里所述的前藥。當R2是3，4，5-三甲氧基苯基時，磷酸酯17a是主要產物。該磷酸酯17a與R3-AH(其中A是O、S或NR50)反應產生前藥19。少量磷酸酯17b和17c可類似地反應產生相應的前藥。
如下述方案(III)所述，氯甲基磷酸二叔丁酯13可從磷酸二叔丁酯制備 方案(III)
根據方案(III)，如Krise等，1990，J.Med.Chem.423793-3794的描述，磷酸二叔丁酯9獲自相應的亞磷酸二叔丁酯7。如Mantyla等，2002，Tet.Lett.433793-3794所述，磷酸鹽9與氯甲基氯硫酸酯11(購自Synergetica，Inc.，Sicklerville，NJ 08081)反應生成氯甲基磷酸二叔丁酯13，后者無需純化即可用于上述方案(II)。
盡管上述方案描述了含有單個前基團的前藥的合成，也可通過調節所用試劑12或13的當量數而獲得含有多個前基團的前藥。
作為方案(I)的另一種替代方案，羥基甲基胺14a可分兩個步驟制備，首先使活性2，4-嘧啶二胺10與雙官能親電子試劑如氯-碘代甲烷(1-CH2Cl)反應產生氯-甲基中間體，然后通過其與堿性氫氧化物或與各種親核試劑如醇鹽、胺或硫化物反應將其羥基化以產生Rp。進行這種類型可用來合成這里所述前藥的反應的具體條件描述于，例如，Bansal等，1981，J.Pharm.Sci.70(8)850-854和Bansal等，1981，J.Pharm.Sci.70(8)855-857，其內容通過引用納入本文。
可用來合成結構式(Ia)所示示例性磷酸鹽前藥16的示例性合成途徑示于下面的方案(IV)。該方法通常適合合成這里所述的所有磷酸鹽前藥。
方案(IV)
在方案(IV)中，Y1、Z1、Z2、R2、R5、R17、R18、R19和R20如對結構式(I)或(Ia)的定義。根據方案(IV)，在存在碳酸銫時使活性2，4-嘧啶二胺10與氯甲基磷酸二叔丁酯13反應生成以下四種產品的混合物未反應的原料10(未顯示)和化合物17a、17b和17c。當R2是3，4，5-三甲氧基苯基時，化合物17a是主要產物。在這個階段，可用標準色譜技術將主要產物與次要產物分離。除去叔丁基產生所述產物16和雜質18與10的混合物。可用標準技術分離所需產物16。
獲得磷酸鹽前藥16的另一種方法示于下面的方案(V)。
方案(V)
根據方案(V)，活性2，4-嘧啶二胺10反應再次產生以下四種產物的混合物未反應的嘧啶二胺10(未顯示)、主要產物17a和次要產物17b和17c。主要產物17a可通過結晶分離(見實施例章節中的適當條件)，將其溶于乙酸和水的混合物(4∶1AcOH∶H2O)并在65℃加熱約3小時以產生作為主要產物的磷酸酯前藥16。
盡管方案(IV)和(V)例舉了其中的磷酸鹽前基團為-CH2-O-P(O)(OH)2的磷酸鹽前藥的合成，熟練的技術人員將了解，含有其它磷酸鹽前基團的磷酸鹽前藥可采用相同的方法用合適的試劑13方便地獲得。磷酸酯前藥、亞磷酸鹽前藥和亞磷酸酯前藥也可通過常規適用方法用合適的磷酸酯、亞磷酸鹽和亞磷酸酯鹵化物13合成。合成環磷酸酯前藥的示例性方法示于圖3，該前藥可作為前藥用于這里所述的各種方法或者可轉化成磷酸鹽前藥。此外，雖然方案(I)和(III)以化合物16作為所需產物進行描述，但在前藥分子的其它位置具有前基團的前藥也可通過分離例如次產物17a或17b和/或通過調節所用試劑13的當量數方便地獲得。
參考圖3，用文獻中描述的方法可將二醇21轉化成相應的環磷酸鹽23。可用所描述的三種方法中的任何一種將環磷酸鹽23轉化成相應的氯甲基磷酸酯25。可在之前描述的合成化合物17a-c的條件下通過與25加成而將化合物1轉化成環磷酸酯衍生物27、29和31。可在如合成化合物16所述的酸性條件下進行處理或者用例如鈀催化劑通過氫化將環磷酸酯衍生物27、29和31轉化成相應的磷酸鹽衍生物。
熟練的技術人員將了解，一些情況下，用作原料的活性2，4-嘧啶二胺化合物可含有在合成中需要保護的官能團。所用保護基的準確性質將取決于要保護的官能團的性質，并且對于精通本領域的技術人員是顯而易見的。選擇合適保護基的指導以及其連接和除去的合成方案可在例如Greene和Wuts的《有機合成保護基》，第三版，John Wiley & Sons，Inc.，紐約(1999)以及其中引用的參考資料(以后稱為“Greene &Wuts”)中找到。
6.4抑制Fc受體信號級聯 許多這里所述的前藥，尤其是結構式(I)和(Ia)的前藥，可代謝成活性2，4-嘧啶二胺化合物，該化合物除了其他作用，抑制導致細胞脫粒的Fc受體信號級聯。一個具體的例子是，這些活性化合物抑制導致免疫細胞如中性白細胞、嗜酸性細胞、肥大細胞和/或嗜堿細胞脫粒的FcεRI和/或FcγRI信號級聯。肥大細胞和嗜堿細胞在變應原誘導的疾病(包括例如過敏性鼻炎和哮喘)中都扮演中心角色。接觸變應原(例如可以是花粉或寄生蟲)后，被IL-4(或IL-13)以及觸發IgE類特異性抗體合成的其它信使激活的B細胞合成變應原特應性IgE抗體。這些變應原特應性IgE結合到高親和性FcεRI。與抗原結合后，FcεRI結合的IgE發生交聯并激活IgE受體信號轉導途徑，從而導致細胞脫粒及隨后釋放和/或合成許多化學調質，其中包括組胺、蛋白酶(例如類胰蛋白酶和糜蛋白酶)、脂質調質如白三烯(例如LTC4)、血小板激活因子(PAF)和前列腺素(例如PGD2)和包括TNF-α、IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-8、GMCSF、VEGF和TGF-β在內的一系列細胞因子。肥大細胞和/或嗜堿細胞釋放和/或合成的這些調質負責變應原誘導的早期和晚期應答，并與導致持續炎癥狀態的下游事件直接關聯。
FcεRI信號轉導途徑中發生的導致經脫粒而釋放預成調質及釋放和/或合成其它化學調質的分子事件是熟知的。FcεRI是一種雜四聚受體，它由結合IgE的α亞單位、β亞單位和兩個γ亞單位(γ同二聚體)構成。FcεRI結合的IgE在多價結合劑(包括，例如，IgE特應性變應原或抗IgE抗體或片段)作用下交聯誘導Src相關激酶Lyn的快速結合和活化。Lyn使胞內β和γ亞單位上基于免疫受體酪氨酸的激活基序(ITAM)磷酸化，從而導致其它Lyn向β亞單位募集及Syk激酶向γ同二聚體募集。這些通過分子內和分子間磷酸化作用激活的受體相關的激酶使該途徑的其它組分如Btk激酶、LAT和磷脂酶C-γ(PLC-γ)磷酸化。激活的PLC-γ啟動導致蛋白激酶C激活和Ca2+活動化的途徑，這兩者都是脫粒所需的。FcεRI交聯還激活三類主要的促分裂原激活蛋白(MAP)激酶，即ERK1/2、JNK1/2和p38。這些途徑的激活對于促炎癥介質如TNF-α和IL-6以及脂質調質白三烯C4(LTC4)的轉錄調節是重要的。
FcγRI信號級聯被認為與FceRI信號級聯共享某些通用元件。重要的是，像FcεRI一樣，FcγRI包含被磷酸化并募集Syk的γ同二聚體，并和FcεRI一樣，FcγRI信號級聯激活導致脫粒(以及其他事件)。其它共享γ同二聚體并可被活性2，4-嘧啶二胺化合物調節的Fc受體包括但不限于FcαRI和FcγRIII。
適合證實特定2，4-嘧啶二胺化合物活性的體外和細胞試驗描述于2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO 03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)。
如上所述，可在體外和/或體內試驗中證實特定藥物在所需使用條件下代謝成活性2，4-嘧啶二胺化合物的能力。
6.5用途和組合物 如上所述，當將這里所述的前藥，如結構式(I)和(Ia)的前藥，給予動物和人類時代謝成能抑制Fc受體信號級聯(尤其是那些包含γ同二聚體的Fc受體如FcεRI和/或FcγRI的信號級聯)的活性化合物，這種信號級聯導致細胞經脫粒或其它過程而釋放和/或合成化學調質。還討論過，該活性化合物也是Syk激酶的有力抑制劑。作為這些活性的結果，這些活性化合物的前藥可在體外、體內和離體使用以調節或抑制Syk激酶、Syk激酶發揮作用的信號級聯、Fc受體信號級聯以及受到這種信號級聯影響的生物反應。例如，一實施方案中，該前藥可用來在體外或體內抑制Syk激酶，事實上可抑制任何表達Syk激酶的細胞類型。還可用它們來調節Syk激酶在其中發揮作用的信號轉導級聯。這種Syk依賴性信號轉導級聯包括但不限于FcεRI、FcγRI、FcγRIII、BCR和整聯蛋白信號轉導級聯。所述前藥可用來在體外或體內調節，尤其是抑制受這種Syk依賴性信號轉導級聯影響的細胞或生物反應。這種細胞或生物反應包括但不限于呼吸爆發、細胞粘附、細胞脫粒、細胞擴散、細胞遷移、細胞聚集、吞噬作用、細胞因子的合成和釋放、細胞成熟和Ca2+流。重要的是，該前藥可作為治療或預防完全或部分由Syk激酶活性介導的疾病的治療方法用來在體內抑制Syk激酶。可用所述前藥治療或預防的由Syk激酶介導的疾病的非限制性例子是下文中詳細討論的那些。
另一實施方案中，所述前藥可作為治療或預防以這種Fc受體信號級聯的化學調質的釋放或合成或者脫粒為特征、由其造成和/或與其有關的疾病的治療方法用來調節或抑制Fc受體信號級聯和/或FcεRI-和/或FcγRI-介導的脫粒。這種治療可給予動物或人類。以這種調質的釋放、合成或者脫粒為特征、由其造成或與其有關并因此可用該活性化合物治療或預防的疾病包括，例如但不限于，特應性或過敏性超敏或過敏反應、過敏(例如過敏性結膜炎、過敏性鼻炎、特應性哮喘、特應性皮炎和食物過敏)、低級瘢痕形成(例如硬皮病、纖維化增強、瘢痕疙瘩、手術后瘢痕、肺纖維化、血管性痙攣、偏頭痛、再灌注損傷和后心肌梗死)、與組織破壞有關的疾病(例如COPD、心支氣管炎(cardiobronchitis)和后心肌梗死)、與組織發炎有關的疾病(例如腸應激綜合征、痙攣性結腸和炎性腸病)、炎癥和瘢痕形成。
最近的研究顯示，膠原對血小板的激活由與免疫受體相同的途徑介導，其中FcRγ上的免疫受體酪氨酸激酶基序扮演關鍵角色(Watson & Gibbons，1998，Immunol.Today 19260-264)，同時，FcRγ在小鼠泡沫化損傷后發生新內膜增生中扮演關鍵角色，很可能是通過膠原誘導的血小板的激活和白細胞募集(Konishi等，2002，Circulaion 105912-916)。因此，這里所述的前藥可用來抑制膠原誘導的血小板激活并用來治療或預防與這種血小板激活有關或由其造成的疾病，如血管損傷后的內膜增生和再狹窄。
除了上述眾多疾病，細胞和動物實驗數據證實，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)中描述的活性2，4-嘧啶二胺化合物也可用于治療或預防自身免疫性疾病以及與這種疾病有關的各種癥狀。因此，這些活性化合物的前藥可用于治療或預防此類疾病和/或癥狀。可用這種前藥治療或預防的自身免疫性疾病的類型通常包括那些與作為體液和/或細胞介導的對內源和/或外源免疫原或抗原的反應的結果發生的組織損傷有關的疾病。這種疾病通常被稱為與非過敏型(即II型、III型和/或IV型)超敏反應有關的疾病。
如上所述，I型超敏反應通常由于肥大細胞和/或嗜堿細胞在接觸特定外源抗原后釋放藥理學活性物質如組胺而導致。如上所述，這種I型反應在包括過敏性哮喘、過敏性鼻炎等在內的許多疾病中扮演角色。
當免疫球蛋白與細胞或組織的抗原性組分或與已經變得與細胞或組織密切結合的抗原或半抗原發生反應時發生II型超敏反應(也稱為細胞毒、依賴于溶細胞補體或細胞刺激的超敏反應)。通常與II型超敏反應有關的疾病包括但不限于自身免疫性溶血性貧血、胎兒溶血癥和古德帕斯徹病。
III型超敏反應(也稱為毒性復合物、可溶性復合物或免疫復合物超敏反應)由于可溶性循環抗原-免疫球蛋白復合物在血管或組織中沉積而導致，并伴有免疫復合物沉積部位的急性炎癥反應。原型III型反應疾病的非限制性例子包括Arthus反應、類風濕性關節炎、血清病、系統性紅斑狼瘡、某些類型的腎小球腎炎、多發性硬化和大皰性類天皰瘡(bullous pemphingoid)。
IV型超敏反應(通常稱為細胞、細胞介導的、延遲型、或結核菌素型超敏反應)由因接觸特定抗原而致敏T-淋巴細胞造成。與IV型反應有關的疾病的非限制性例子是接觸性皮炎和同種異體移植物排斥。
與上述任何一種非過敏性超敏反應有關的自身免疫性疾病可用結構式(I)和(Ia)的前藥治療或預防。具體地說，該方法可用來治療或預防那些通常以單器官或單細胞類型的自身免疫性疾病為特征的自身免疫性疾病，其中包括但不限于橋本甲狀腺炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血性自身免疫性萎縮性胃炎、自身免疫性腦脊髓炎、自身免疫性睪丸炎、古德帕斯徹病、自身免疫性血小板減少癥、交感性眼炎、重癥肌無力、格雷夫斯病、原發性膽汁性肝硬變、慢性活動性肝炎、潰瘍性結腸炎和膜性腎小球病，以及那些通常涉及系統性自身免疫性疾病的自身免疫性疾病，其中包括但不限于系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎、舍格倫綜合征、萊特爾綜合征、多肌炎-皮肌炎、系統性硬化、結節性多動脈炎、多發性硬化和大皰性類天皰瘡。
熟練的技術人員會看到上面列出的許多自體免疫的疾病有嚴重的并發癥，癥狀的改善顯示了很重要的治療效果，甚至在潛在的自身免疫性疾病不能改善的病例中也是如此。許多癥狀，和它們潛在的疾病狀態都是單核細胞中活化FcγR信號級聯的結果。由于結構式(I)和(Ia)的前藥被代謝成2，4-嘧啶二胺化合物，該物質是單核細胞和其他細胞中這樣的FcγR信號的有效抑制劑，這些方法找到了其與上述自身免疫性疾病相關的許多不利癥狀的治療和/或預防中的使用價值。
一個特例是，類風濕性關節炎(RA)一般會導致全身性紅腫、疼痛、喪失運動能力和關節軟弱。類風濕性關節炎的特點是與淋巴細胞密集的滑膜慢性紅腫。通常只有一個細胞層厚的滑膜劇烈細胞化，呈現一種類似于淋巴組織的形式，包括樹狀細胞、T-、B-和NK細胞、巨噬細胞和漿細胞群。這個過程和包括免疫抗原-免疫球蛋白復合體形成的免疫病理機制的積累，最終導致了關節完整性的破壞，導致關節處或附近的畸形、永久的功能喪失和/或骨侵蝕。這種方法可能用于治療或改善任何一個、幾個或所有這些類風濕性關節炎癥狀。因此，對于類風濕性關節炎，當與類風濕性關節炎相關的癥狀有所減少或改善時，不管治療有沒有導致對潛在類風濕性關節炎的伴隨治療和/或循環類風濕因子(“RF”)數量的減少，所述方法被認為提供了治療收益(下文中討論的更多)。
美國風濕病學協會(ACR)已經開發了定義RA改善和臨床癥狀緩解的標準。參數ACR20(獲得20％臨床改進的ACR標準)要求關節的觸痛和腫脹計數得到20％的改善，并要求以下5種參數中有3種得到20％的改善患者的整體評價、醫師的整體評價、患者對疼痛的評價、失能程度以及急性階段反應物的水平。這些標準已擴展到改善50％和70％，分別表示為ACR50和ACR70。其它標準包括Paulu標準和X光片改善(radiographic progression)(例如Sharp評分)。
一些實施方案中，當患者顯示出ARC20時，實現了對RA患者的治療益處。在具體的實施方案中，ARC可以達到ARC50或者甚至ARC70。
系統性紅斑狼瘡(“SLE”)通常伴有如發燒、關節疼痛(關節痛)、關節炎和漿膜炎(胸膜炎或心包炎)的癥狀。對于SLE，當伴隨SLE的癥狀有所減少或改善時，不管治療有沒有導致潛在SLE的伴隨治療，認為這些方法提供了治療收益。
多發性硬化(“MS”)通過擾亂視覺靈敏度、刺激復視覺、擾亂運動功能以影響行走和手的使用、產生大小便失禁、痙攣和感官欠缺(觸覺，疼痛和溫度敏感度)來弱化病人。對于多發性硬化，當伴隨多發性硬化的弱化有所改善或減少時，不管治療有沒有導致潛在多發性硬化的伴隨治療，認為這些方法提供了治療收益。
當用來治療或預防這樣的疾病時，這里所述的前藥可單獨給予、作為一種或多種前藥的混合物給予、或者與用于治療這種疾病和/或與這種疾病有關的癥狀的其它藥劑混合或聯合給予。所述前藥也可與用于治療其它癥狀或疾病的藥劑混合或聯合給予，如類固醇、膜穩定劑、5LO抑制劑、白三烯合成和受體抑制劑、IgE同種型轉換抑制劑或IgE合成抑制劑、IgG同種型轉換抑制劑或IgG合成抑制劑、β-激動劑、類胰蛋白酶抑制劑、阿司匹林、COX抑制劑、氨甲葉酸、抗-TNF藥物、瑞涂辛(retuxin)、PD4抑制劑、p38抑制劑、PDE4抑制劑和抗組胺劑等等。所述前藥可以化合物本身的形式或作為含有前藥的藥物組合物給予。
含有所述前藥的藥物組合物可以通過傳統的混合、消溶、粒化、做成糖衣丸、研磨、乳化、形成膠囊、誘捕或凍干的過程進行生產。這些組合物可以以傳統的方式使用一種或多種生理上可接受的載體、稀釋液、賦形劑或有助于將前藥處理成制藥中可使用的制劑的輔助劑調配出來。
如上所述，所述前藥可被制成藥物組合物本身或被制成水合物、溶劑合物、N-氧化物或藥學上可接受的鹽的形式。典型地，這種鹽在水溶液中的溶解性比在相應的自由酸和堿中的溶解性更好，但是也有可能形成比在相應的自由酸和堿中的溶解性差的鹽。
藥物組合物可以采用適合任何一種給藥方式的形式，包括，如局部的、眼睛的、口服的、口腔的、身體組織的、鼻子的、注射的、皮膚的、直腸的、陰道的給藥方式等等，或者是適合吸入或吹入給藥的形式。
對于局部使用，所述前藥劑型可以是本領域內熟知的溶液、凝膠體、藥膏、乳膏、懸浮液等等。
全身性劑型包括那些為注射用(如皮下、靜脈內、肌內、胸內的或腹膜內的)設計的劑型，以及那些為透皮、透粘膜口服或肺部給藥設計的劑型。
有用的可注射制劑包括水性或油性介質中活性化合物的無菌懸浮液、溶液或乳劑。所述組合物也可以包括調配劑，如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。注射用劑型可以是單位劑量的形式，如安瓿或多劑量容器的形式，并可以包含其他防腐劑。
或者，注射用劑型可以以粉末的形式提供，用于使用前與適當的介質重構，所述介質包括但不限于，無菌的無熱原水、緩沖液、葡萄糖溶液等等。最后，任何本領域已知的技術(如凍干)可用于所述活性化合物的干燥，并在使用前重構。
對于透粘膜給藥，在該劑型中使用適合透過這個屏障的滲透劑。這樣的滲透劑是本領域內已知的。
對于口服給藥，藥物組合物可采取如錠劑、藥片或膠囊的形式，這些是通過傳統的方式，用制藥學上可接受的賦形劑如接合劑(預糊化玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或者羥丙基甲基纖維素)、填充劑(如乳糖，微晶纖維素或磷酸氫鈣)、滑潤劑(如硬脂酸鎂、滑石粉或硅石粉)、分解劑(如馬鈴薯淀粉或羥基乙酸淀粉鈉)、潤濕劑(如十二烷醇硫酸鈉)來制備的。所述片劑可以通過本領域內熟知的方法，用例如糖、薄膜或腸衣包被。其中的前基團具有式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)2，其中各Rd各自獨立選自氫和低級烴基且y為1或2，且在生理pH下顯示出的水溶性約為0.1-1000mg/ml的磷酸鹽前藥尤其適合以藥片或膠囊的形式口服給藥。當給Sprague-Dawley大鼠口服膠囊時，前藥化合物4顯示出約為30％的藥物1的生物利用度(見圖5)，其吸收與活性藥物化合物1的吸收幾乎相等(見圖6)。預計水溶性特性類似于那些前藥化合物4的其它磷酸鹽前藥也具有類似的藥代動力學特性。
前藥化合物4(以及其它含有磷酸根的前藥)的具體的示例性片劑配方含有約50-400mg前藥化合物(或其鹽)、約0.05-0.5重量％膠體二氧化硅、約0.5-5.0重量％交聯羧甲基纖維素鈉、0.25-5.0重量％硬脂酸鎂和約20-80重量％微晶纖維素。如果需要，片劑可用膜如羥丙甲基纖維素膜、羧甲基纖維素或果糖包衣，所述膜中可任選含有著色劑如FD&C藍#1、PD&C綠#3、FD&C黃#6和二氧化鈦。
用于口服給藥的液體制劑可以采取如酏劑、溶液、糖漿或懸浮液的形式，或者可以以干燥產物的形式存在，使用與水或其他合適的介質重構。這種液體制劑可以通過傳統的方法，用藥學上可接受的添加劑如懸浮劑(如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或硬化食用脂肪)、乳化劑(卵磷脂或阿拉伯樹膠)、非水介質(如杏仁油、油脂、普通酒精，聚乙二醇類化合物或者分餾的植物油)、防腐劑(如甲基或丙基-p-羥基安息香酸或山梨酸)來制備。該組合物也可按需含有緩沖鹽、防腐劑、調味劑、色素和甜味劑。
眾所周知，可適當配制口服給藥的制劑以實現可控的前藥釋放。
用于口腔的組合物可以采取傳統形式的片劑或錠劑劑型。
對于直腸和陰道給藥路徑，所述前藥可以制備成含有傳統栓劑堿如可可脂或其他甘油酯的溶液(為了灌腸劑的持久)栓劑或藥膏劑型。
對于鼻給藥或通過吸入或吹入給藥，所述前藥可以通過使用適當壓縮氣體(如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氟碳化合物、二氧化碳或其他氣體)從加壓袋或噴霧器中以氣霧噴射的方式很方便地遞送。在加壓氣霧的情況下，劑量單位可以通過提供釋放計量量的閥來確定。在吸入器或吹藥器中使用的膠囊和藥筒(如由凝膠組成的膠囊和藥筒)可以配制成含有所述化合物和適當的粉末基礎物(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的劑型。
對于眼給藥，所述前藥可以是適合眼用的溶液、乳狀液、懸浮液等等的劑型。本領域內已知各種適合將化合物對眼給藥的介質。具體的非限制性例子描述于美國專利No.6,261,547；美國專利No.6,197,934；美國專利No.6,056,950；美國專利No.5,800,807；美國專利No.5,776,445；美國專利No.5,698,219；美國專利No.5,521,222；美國專利No.5,403,841；美國專利No.5,077,033；美國專利No.4,882,150；和美國專利No.4,738,851。
對于緩釋投藥，所述前藥可以配制成作為儲備制劑通過植入或肌內注射給藥的劑型。所述前藥可以與合適的聚合或疏水材料(如在可接受的油中以乳劑形式)或離子交換樹脂配制劑型，或是低溶解性的衍生物形式(如低溶解性鹽)。或者，可以利用透皮投藥系統，它被制成用于透皮吸收的緩慢釋放所述前藥的具有粘性的盤或片。最后，可以使用滲透加強劑提高前藥穿過皮膚的滲透性能。合適的透皮貼描述于，例如，美國專利No.5,407,713.；美國專利No.5,352,456；美國專利No.5,332,213；美國專利No.5,336,168；美國專利No.5,290,561；美國專利No.5,254,346；美國專利No.5,164,189；美國專利No.5,163,899；美國專利No.5,088,977；美國專利No.5,087,240；美國專利No.5,008,110；和美國專利No.4,921,475。
另外，也可以使用其他藥物傳輸系統。脂質體和乳劑是熟知的可以用于前藥傳輸的投藥載體的例子。雖然通常以較高的毒性為代價，也可以使用某些有機溶劑如二甲亞砜(DMSO)。
如果需要，所述藥物組合物可以存在于在可以包含一個或多個含有前藥的單位劑量的包裝或分配器中。所述包裝可以例如由金屬或塑料薄片組成，如水泡眼包裝。所述包裝或分配器可以帶有服用說明。
6.6有效劑量 通常使用一定有效劑量的這里所述的前藥或其組合物以達到預期的效果，例如，用有效治療或預防正在治療的具體疾病的劑量的藥物。該前藥可以治療性給藥以實現治療收益，或是預防性給藥以實現預防收益。治療收益是指根除或改善正在被治療的疾病的潛在病癥，和/或根除或改善一個或更多伴隨潛在疾病的癥狀，使得患者報告感覺或癥狀好轉，盡管患者可能仍然受到潛在疾病的折磨。例如，用一種化合物對患有過敏癥的患者給藥，不僅當過敏反應根除或改善時，而且當患者聲稱在接觸變應原后與過敏反應有關的癥狀的嚴重性或持續時間減輕時，所述給藥提供了治療收益。另一個例子是，對哮喘的治療收益包括在哮喘發作后呼吸狀況改善或者發生哮喘的頻率或嚴重性降低。對RA的治療收益也包括上述ACR20、ACR50或ACR70。無論是否實現改善，治療收益通常也包括疾病進程的停止或延緩。
對于預防性給藥，前藥被給予具有先前描述的疾病之一發病風險的患者。例如，如果不知道病人是否對一種具體藥物過敏，可以在給予所述藥物之前給予所述前藥以避免或改善對該藥物的過敏反應。或者，預防性給藥可以用于避免被診斷有潛在疾病病人的病情發作。例如，所述前藥可在預期接觸變應原之前給予過敏癥患者。前藥也可預防性地給予重復接觸已知會造成上述疾病之一的物質的健康個體以預防這種疾病的發作。例如，前藥可給予經常接觸到會引起過敏癥的變應原(如橡膠)的健康個體，以預防過敏癥的發生。或者，前藥可以在參與引發哮喘的活動之前給哮喘患者服用以減輕或完全避免哮喘癥狀的嚴重性。
前藥的用量取決于多種因素，包括如所要治療具體癥狀、給藥模式、所需收益是否是預防性或治療性，所要治療的癥狀的嚴重程度以及病人的年齡和體重，具體前藥的生物利用度、所選給藥途徑下轉化成活性藥物的轉化率和效率等等。如何確定具體應用和給藥模式下前藥的有效劑量是精通本領域的技術人員熟知的。
有效劑量開始可從體外活性和代謝試驗估算。例如，用于動物的前藥的初始劑量可以是使代謝物活性化合物的循環血液或血漿濃度達到或超過體外試驗中測得的特定化合物的IC50，所述體外試驗如體外CHMC或BMMC以及以下文獻中描述的其它體外試驗2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)。考慮到特定前藥在所需給藥途徑下的生物利用度，計算達到這種循環血液或血漿濃度的循環劑量是熟練的技術人員熟知的。為得到指導，讀者可參考Goodman和Gilman的《治療的藥物基礎》(Goodman and Gilman′s The Pharmaceutical Basis ofTherapeutics，最新版本，Pagamonon Press)第1章第1-46頁Fingl和Woodbury寫的“一般原則”(General Principles)及其中引用的參考文獻。
前藥的初始劑量也可從體內數據如動物模型估算。用于測試活性代謝物治療或預防上述各種疾病的功效的動物模型是本領域熟知的。超敏或過敏反應的合適動物模型描述于Foster，1995，Allergy 50(增刊21)6-9，討論34-38和Tumas等，2001，J.Allergy Clin.Immunol.107(6)1025-1033。過敏性鼻炎的合適動物模型描述于Szelenyi等，2000，Arzneimittelforschung 50(11)1037-42；Kawaguchi等，1994，Clin.Exp.Allergy 24(3)238-244和Sugimoto等，2000，Immunopharmacology 48(1)1-7。過敏性結膜炎的合適動物模型描述于Carreras等，1993，Br.J.Ophthalmol.77(8)509-514；Saiga等，1992，Ophthalmic Res.24(1)45-50；and Kunert等，2001，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.42(11)2483-2489。系統性肥大細胞增多癥的合適動物模型描述于O′Keefe等，1987，J.Vet.Intern.Med.l(2)75-80和Bean-Knudsen等，1989，Vet.Pathol.26(1)90-92。超IgE綜合征的合適動物模型描述于Claman等，1990，Clin.Immunol.Immunopathol.56(1)46-53。B細胞淋巴瘤的合適動物模型描述于Hough等，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9513853-13858和Hakim等，1996，J.Immunol.157(12)5503-5511。特應性疾病如特應性皮炎、特應性濕疹和特應性哮喘的合適動物模型描述于Chan等，2001，J.Invest.Dermatol.117(4)977-983和Suto等，1999，Int.Arch.Allergy Immunol.120(Suppl 1)70-75。測試生物利用度和/或前藥代謝成活性代謝物的合適動物模型也是熟知的。一般技術人員通常可根據這種信息確定適合對人給藥的特定前藥的劑量。其它合適的動物模型描述于實施例部分。
劑量范圍通常為約0.0001mg/kg/天、0.001mg/kg/天或0.01mg/kg/天到約100mg/kg/天，但可以更高或更低，這除了其他因素以外，取決于活性代謝物的活性、前藥的生物利用度、其代謝動力學或其它藥代動力學特性、給藥模式以及上述各種其它因素。可根據個人調節劑量和間隔以提供足以維持治療或預防效果的前藥和/或活性代謝物的血漿水平。例如，前藥可每周給予一次、每周給予若干次(例如每兩天一次)、每天一次或每天多次，這除了其他因素以外，取決于給藥模式、所治療的具體病癥以及處方醫生的判斷。當局部給藥或選擇性攝入時，如局部給藥時，前藥和/或活性代謝物的有效局部濃度可能與血漿濃度無關。熟練的技術人員不需要過度實驗就能夠最佳化有效的局部劑量。
優選地，所述前藥將代謝成會提供治療或預防收益而不會造成實質性毒性的活性化合物。活性代謝物和其它代謝物以及未代謝的前藥的毒性可用標準藥學程序確定。毒性效應和治療(或預防)效應的劑量比是治療指數。優選具有高治療指數的前藥。
已經描述了本發明，下面的實施例僅是為了例證而非限制。
7.實施例 7.1前藥化合物4的合成 7.1.1 N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物3)
將N4-(2，2-二甲基-3-氧代-4H-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(1，1.0g，2.12mmol)，Cs2CO3(1.0g，3.07mmol)和氯甲基磷酸二叔丁酯(2，0.67g，2.59mmol)的丙酮(20mL)溶液在氮氣下室溫攪拌。通過LC/MS監測反應過程。除了原料(化合物1)，粗制反應混合物顯示出三個保留時間接近的產物峰，其M++H為693(次要-1)，693(主要3)和477(次要-2)。將內容物攪拌4天(70％消耗)后濃縮反應混合物并用水稀釋。通過過濾收集所形成的淡黃色沉淀并將其干燥。粗制固體通過硅膠柱層析純化(用10％NEt3/CH2Cl2預處理然后用己烷洗脫)，用70％EtOAc/己烷-100％EtOAc梯度洗脫。將含有化合物1、M++H 693的組分收集并濃縮。用與上文所述類似的方式再純化所得粗制白色固體，但用30％-50％-75％-100％EtOAc/己烷洗脫。收集到的M++H 693的主要產物峰為白色固體(270mg，18％)，它被定性為N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物3)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，9.17(s，1H)，8.16(d，1H，J＝2.6Hz)，7.76(d，1H，J＝8.5Hz)，7.44(d，1H，J＝8.5Hz)，7.02(s，2H)，5.78(d，1H，J3PH＝6.1Hz)，3.64(s，6H)，3.58(s，3H)，1.45(s，6H)，1.33(s，9H)。LCMS保留時間14.70min.；純度95％；MS(m/e)693(MH+)。31PNMR(DMSO-d6)-11.36。
7.1.2 N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物4) 0℃氮氣下，用5分鐘將三氟乙酸(1.5mL)逐滴加入溶于CH2Cl2(10mL)的N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物3，120mg，0.173mmol)。將內容物攪拌1.5小時。通過LC/MS監測反應混合物的反應過程。原料被完全消耗之后將反應混合物濃縮、干燥并用乙醚研磨。將醚層傾析出并干燥以得到粗制固體。對粗制固體進行LC/MS分析顯示出三個峰，其M++H分別為581、471和501。通過制備型HPLC層析純化收集對應于M++H 581的峰。將各組分凍干并干燥以提供53mg(52％)乳白色絮狀固體，其被定性為N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物4)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.21(br s，2H)，8.16(d，1H，J＝2.6Hz)，7.93(d，1H，J＝8.5Hz)，7.39(d，1H，J＝8.5Hz)，7.05(s，2H)，5.79(d，1H，J3PH＝6.6Hz)，3.67(s，6H)，3.59(s，3H)，1.44(s，6H)。LCMS保留時間8.52min.；純度95％；MS(m/e)581(MH+)。31P NMR(DMSO-d6)-2.17。
7.2前藥化合物4的其它合成方法 下面提供了另一種減輕對柱層析和HPLC純化需求的合成前藥化合物4的方法。
7.2.1合成N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物3)
將N4-(2，2-二甲基-3-氧代-4H-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物1，19.73g，41.97mmol)、Cs2CO3(15.04g，46.16mmol)和氯甲基磷酸二叔丁酯(13.0g，50.38mmol)的DMF(100mL)溶液在氮氣下室溫攪拌。通過在線LC/MS監測反應過程。除了原料(化合物1)，粗制反應混合物顯示出兩個保留時間接近的產物峰(比例為1∶6.5)，其M++H為693(次要-1)和693(主要)。隨著反應的進行，最初的黃色反應混合物變為橄欖綠色。如下進行操作 1).將內容物攪拌30小時之后(92％消耗)將反應混合物倒在冰水(400mL)上并加入鹽水溶液(200mL)攪拌內容物。濾出所形成的暗黃色細顆粒，用水洗滌并干燥過夜。
2).將固體(35g)溶于MTBE(500mL)并用水(400mL)洗滌。含水層用MTBE(2×350mL)萃取直到TLC上無UV。將合并的有機層用無水Na2SO4干燥并傾析出。注意步驟2可直接進行，但萃取回溶液的DMF會對結晶步驟造成困難。
3).暗紅色清澈溶液用10g活性碳處理，將其煮沸并過濾。
4).通過常規加熱將暗紅色清澈溶液濃縮至體積為400mL并用于結晶。過濾結晶成顆粒的固體，將此顆粒碾成粉末，用MTBE(400mL)洗滌并在高真空下干燥。母液的操作見步驟7。固體的重量17g；純度90％(化合物3)，6.26％(化合物1)，1.8％(少量，M+693)。
5).在此階段，將固體溶于500ml乙醚并加熱至沸。冷卻并過濾以除去未溶解的材料。將濾液濃縮。
6).將上述濃縮液在MTBE(300mL)中結晶。濾出形成的白色固體，用MTBE(100mL)洗滌并在高真空下干燥以提供所需的N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物3)，其純度為97％。1H NMR(DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，9.17(s，1H)，8.16(d，1H，J＝2.6Hz)，7.76(d，1H，J＝8.5Hz)，7.44(d，1H，J＝8.5Hz)，7.02(s，2H)，5.78(d，1H，J3PH＝6.1Hz)，3.64(s，6H)，3.58(s，3H)，1.45(s，6H)，1.33(s，9H)。LCMS保留時間14.70min.；純度95％；MS(m/e)693(MH+)。31P NMR(DMSO-d6)-11.36。固體的重量15.64g(產率55％)；純度97％(R935787)，3％(化合物1)。
7).將母液濃縮并重復步驟5和6以得到化合物3。
7.2.2合成N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物4) 將溶于AcOH∶H2O(225mL，4∶1)的N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物3)(15.0g，21.67mmol)在65℃(油浴溫度)加熱。通過在線LC/MS監測反應過程。加熱1小時后反應混合物轉變成淡棕白色固體。此時大部分化合物3轉變成單去叔丁基(mono des t-butyl)產物。加熱3小時后觀察到SM被消耗且中間體(單去叔丁基化的)完全轉化成產物。
將反應混合物冷卻，倒在冰水(200mL)上，攪拌20分鐘并過濾。干凈的白色濾餅依次用水(600ml)和丙酮(200mL)洗滌，干燥2小時，然后在干燥器中的P2O5上以高真空干燥。固體的重量12.70g；純度97％(化合物3)和3％(化合物1)1H NMR表明存在乙酸(1∶1) 為除去乙酸，將該固體置于乙腈(300mL)并通過rotovap真空濃縮。該過程用乙腈和甲苯(3×300mL)重復2次。所得固體于50℃在高真空下干燥。
最后將固體置于丙酮(400mL)，過濾并干燥以提供N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物4)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.21(br s，2H)，8.16(d，1H，J＝2.6Hz)，7.93(d，1H，J＝8.5Hz)，7.39(d，1H，J＝8.5Hz)，7.05(s，2H)，5.79(d，1H，J3PH＝6.6Hz)，3.67(s，6H)，3.59(s，3H)，1.44(s，6H)。LCMS保留時間8.52min.；純度95％；MS(m/e)581(MH+)。31PNMR(DMSO-d6)-2.17。
7.3合成N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺單鈣鹽(化合物6)
室溫下，邊攪拌內容物邊將NaHCO3(0.17g，2.02mmol)的水(10mL)溶液逐滴加入N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]噁嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(0.5g，0.86mmol)的水(5mL)懸浮液中。形成的澄清溶液在室溫下用逐滴加入的CaCl2的水(10mL)溶液(0.11g溶于10mL水，0.99mmol)處理。加入導致反應混合物中沉淀出白色固體。完全加入后，將內容物攪拌30分鐘，過濾，用水(40mL)洗滌并干燥。將干凈的白色固體置于水(30mL)中并在攪拌板(stir plate)上加熱至沸。將溶液冷卻，過濾并干燥。收集白色固體并再在80℃于高真空下干燥32小時以得到0.41g(83％)N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺單鈣鹽(化合物6)。
7.4合成前藥化合物8
將N4-(2，2-二甲基-4-[(二-叔丁基膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(按上述方法制備)(0.2g，0.29mmol)加入MeOH(5mL)和Et2O(5mL)的混合物。室溫下邊攪拌內容物邊一次性加入2NNaOH水溶液(0.023g，0.58mmol)。通過LC/MS監測反應過程。攪拌8小時后濾出沉淀的固體并干燥以得到N4-(2，2-二甲基-4-甲氧基甲基-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺(化合物8)，其為白色固體(0.11g，74％)。1H NMR(DMSO-d6)δ9.47(s，1H)，9.15(s，1H)，8.16(d，1H，J＝3.8Hz)，7.87(d，1H，J-8.5Hz)，7.37(d，1H，J＝8.5Hz)，7.03(s，2H)，5.40(s，2H)，3.66(s，6H)，3.59(s，3H)，3.27(s，3H)，1.44(s，6H)。LCMS保留時間12.88min.；純度92％；MS(m/e)515(MH+)。
7.5活性2，4-嘧啶二胺化合物在動物中耐受 之前已經證實了許多生物活性2，4-嘧啶二胺化合物在低于它們顯示出毒性的劑量下在動物中發揮其活性的能力(參見，例如，2003年1月31日提交的美國申請序列號10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的國際申請序列號PCT/US03/03022(WO 03/063794)，2003年7月29日提交的美國申請序列號10/631,029(＿＿)，國際申請序列號PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美國申請序列號10/903,263(US2005/0234049)，以及國際申請序列號PCT/US2004/24716(＿＿)。
在一組核心研究(呼吸、CNS、心血管和HERG)中研究了活性化合物1的安全藥理學。在心血管研究中發現，當劑量為50mg/kg時心率略微降低同時RR間隔升高，在CNS(Irwin)研究中還發現，當劑量為50mg/kg時對少數行為參數有輕微影響。另外，安全藥理學研究證明化合物1被良好耐受。GLP毒理學研究包括消極致突變性和致畸性研究(Ames、染色體畸變和小鼠微核)。在對大鼠和猴子進行的28天的毒性研究中，已證實較高劑量會對血液學、肝轉氨酶(僅在大鼠中產生輕微影響)、脾和胸腺的大小(僅大鼠)和骨髓細胞構成(大鼠和猴子)產生可逆影響。對大鼠進行的免疫表型研究顯示，高劑量大鼠中CD3+細胞的比例顯著降低，而恢復之后CD45RA+細胞顯著升高。在組織病理學中值得關注的只有高劑量時骨髓細胞構成的輕微減少。在抗KLH抗體評價中沒有證據表明對體液免疫產生不良影響。未觀測到不良影響水平(NOAEL)為，大鼠10-30mg/kg/天，猴子100mg/kg/天。
7.6藥物化合物1在體外試驗中具有生物活性 化合物1以劑量依賴性方式阻斷FcεRI依賴的臍帶血衍生的原代人肥大細胞(CHMC)的活化，通過測量脫粒時釋放的類胰蛋白酶的活性得知，其EC50約為43nM。化合物1不抑制離子霉素誘導的CHMC的脫粒。離子霉素是一種繞過早期FcR信號轉導誘導CHMC脫粒的鈣離子載體，從而說明化合物1是FcR信號特異的且本身不針對脫粒。化合物1還抑制依賴于FcεRI的LTC4(EC50＝39nM)及所有測試的細胞因子(EC50從158nM到462nM)的產生和釋放。
7.7藥物化合物1對類風濕性關節炎的動物模型有效 化合物1在IC-介導的血管水腫(大鼠中的Arthus反應)、小鼠中的膠原抗體誘導的關節炎以及膠原誘導的關節炎的大鼠模型中的生物活性。
7.7.1 Arthus反應 包括血管炎、血清病、系統性紅斑狼瘡、RA和腎小球腎炎在內的許多人自身免疫性疾病中會發生IC-介導的急性炎性組織損傷。IC-介導的組織損傷的經典實驗模型是反向被動Arthus(RPA)反應。真皮內注射OVA特異性抗體(兔抗OVA IgG)之后再靜脈內注射抗原(卵清蛋白，OVA)導致IC在血管周圍沉積并發生以注射部位的水腫、中性白細胞浸潤和出血為特征的快速炎癥反應(Szalai等，2000，J.Immunol.164(1)463-468)。
在給予抗原/抗體前1小時使大鼠口服一次化合物1以劑量依賴性方式減輕了皮膚RPA反應和炎性水腫。從組織活檢可知，相比載體對照，口服給予10mg/kg化合物1對Evans藍色染料的血管外滲漏(OD610)產生80％抑制。
7.7.2膠原抗體誘導的關節炎 在小鼠膠原抗體誘導的關節炎(CAIA)模型中評價了化合物1的抗炎活性，該模型中，給予小鼠抗II型膠原抗體雞尾酒以誘導關節炎(Teroto等，1992，J.Immunol.148(7)2103-2108；McCoy等，2002，J.Clin.Invest.110(5)651-658；Kagari等，2002，J.Immunol.169(3)1459-1466)。這種被動模型不同于傳統的迅速出現疾病癥狀的嚙齒動物膠原誘導的關節炎(CIA)模型(在IV注射抗體24-48小時內出現)，可在CIA易感性小鼠品系和CIA抗性小鼠品系中誘導關節炎，并且能夠評價不依賴于抗體產生的炎癥。
通過尾靜脈靜脈內注射Arthrogen-CIA單克隆抗體混合物(Chemicon International，Inc.，Temecula，CA)，2天后再腹膜內注射LPS以在Balb/c小鼠中誘導CAIA。給予抗體4小時內開始口服化合物1治療(第0天)。每日評價后爪關節炎的嚴重性(每只爪0-4分，計算兩只后爪的總分)。在第5天，鹽水和載體對照組都達到它們的臨床評分峰值，發病率為100％。
在用化合物1治療的動物中明顯發現炎癥和腫脹減輕，同時關節炎發展得更加緩慢。相比僅用載體治療的動物，用化合物1治療(b.i.d.)明顯減輕了臨床關節炎(p＜0.05)，盡管更低劑量水平的化合物1表現出降低關節炎嚴重性、發病率和發病時間的趨勢，但差異并不顯著(p＞0.05)。
7.7.3膠原誘導的關節炎 IC介導的組織損傷的一種實驗模型是嚙齒動物的CIA(Kleinau等，2000，J.Exp.Med.1911611-1616)。將II型膠原(CII)注射到嚙齒動物造成以遠端關節軟骨和骨的炎性破壞并伴隨周圍組織的腫脹為特征的免疫反應。大鼠的CIA通常被用來評價可能被用作治療類風濕性關節炎以及其他慢性炎性癥狀的藥物的化合物并是通過給小鼠或大鼠的易感品系注射用不完全弗氏佐劑(IFA)配制的CII而誘導的。給予這種乳劑會引起以滑液增生、單核細胞浸潤、血管翳形成以及軟骨和骨破壞為特征的多關節炎。已經證實，由于B細胞缺陷小鼠不會發生關節炎，因此CII抗體是小鼠中CIA的先決條件(Svensson等，1998，Clin.Exp.Immunol.111521-526)。
在第0天用天然雞CII/IFA免疫同基因LOU大鼠。在關節炎癥狀發作時(第10天)開始進行口服藥物治療。用四種劑量水平(1、3、10和30mg/kg，每天通過p.o.管飼法給予)之一的載體對照或化合物1處理總共59只大鼠。用基于關節炎癥程度的標準化方法每天評價后肢的臨床關節炎嚴重性。在研究結束時(第28天)獲得后肢的高分辨率數字式X光照片。還對這些肢進行組織病理學變化分析。通過ELISA一式四份測量天然CII的IgG抗體。在高劑量(30mg/kg)組中發現，治療開始7天內關節炎的嚴重性顯著降低(p＜0.05)，且在研究中持續改善。在第28天時，用載體處理的動物的臨床評分為6.08±0.67，而用30mg/kg化合物1處理的組為2.54±0.98(p＜0.001)。在研究結束時(第28天)進行盲試X光照片，證明關節損傷顯著減輕3.66±0.71(載體)比1.63±0.67(化合物1)(p＜0.02)(E.Brahn.2004)。盲試組合物組織病理學研究證實了血管翳和糜爛的消退經過修正的平均Mankin評分為11.8±0.9(載體)比3.7±0.9(30mg/kg化合物1)(p＜0.001)。在化合物1治療的大鼠中天然CII抗體未減少。
7.8前藥化合物具有口服生物利用度 測試了前藥化合物4的口服生物利用度。對于該研究，將前藥溶于各種載體用于大鼠中靜脈內和口服給藥(例如PEG 400溶液和CMC懸浮液)。在注明的情況下，用相同的載體配制及給予活性代謝物化合物1化合物(藥物)。給予前藥和/或藥物之后，獲得并提取血漿樣品。通過高效液相色譜/串聯質譜(LC/MS/MS)法測定前藥和/或藥物的血漿濃度。基于血漿濃度數據進行藥代動力學分析。感興趣的藥代動力學參數包括清除率(CL)、穩態分布容積(Vss)、終末半衰期(t1/2)和口服生物利用度(％F)。
這些不同藥代動力學實驗的結果示于圖4-12。
參考圖4，顯示了對Spraque-Dawley大鼠進行IV和PO給藥的PK曲線。對于IV給藥，將化合物4溶于PEG-400并以1mg/kg的劑量給予。觀察到前藥化合物4迅速消失并在頸靜脈血漿樣品中發現藥物1。用相同載體口服給予，不存在全身性前藥化合物4，但觀察到高水平藥物代謝物化合物1。
圖5總結了圖4所述研究的PK參數。前藥化合物4被迅速清除并部分轉變為藥物化合物1。以4mg/kg的劑量口服，測定生物利用度為29.9％。這種生物利用度數值是基于之前以1mg/kg的IV注射劑量給予藥物1的研究中獲得的數據(數據未顯示)。
圖6比較了Sprague-Dawley大鼠口服藥物化合物1(2.5mg/kg，用PEG-400配制)或前藥化合物4(4mg/kg，用PEG-400配制)后的藥物1的出現量。AUC/劑量值幾乎相等，說明前藥化合物4與藥物化合物1同樣吸收。
圖7顯示了對化合物1和化合物4進行原位預測計算出的cLogD對pH的圖。化合物1高度親脂(liphophyllic)且僅可微弱電離(在pH＝7.5的磷酸緩沖液中測得的溶解度小于1mcg/ml，數據未顯示)。相反，化合物4在中性pH值下有高極性。測得的溶解度值與pH＝7.5時預測的cLogD值一致。
圖8證明前藥化合物4在37℃時在酸性和中性條件下穩定。
圖9圖示了微粒體制品中前藥化合物4向藥物1的轉變。在獲自Xenotech的微粒體制品中前藥化合物4不能轉變為藥物1。在隨后用獲自不同來源的腸和肝微粒體進行的研究中，觀察到化合物4轉化為化合物1(數據未顯示)。
圖10圖示了前藥化合物4在大鼠血漿中不穩定-觀察到水解成藥物1，并認為轉化成化合物1由磷酸酶催化。用對-硝基苯基磷酸酯-一種已知的磷酸酶底物證實大鼠血漿中存在磷酸酶活性。
圖11圖示了用不同載體配制的前藥化合物4的吸收。不同于藥物化合物1，前藥化合物4的吸收與劑型無關。溶液劑型(PEG-400和羧甲基纖維素(CMC))中前藥化合物4和硬明膠膠囊中的粉末同樣吸收。
基于藥代動力學數據，用三種測試載體(PEG-400溶液；CMC溶液；以及膠囊中的粉末)配制的前藥化合物4的口服生物利用度(％F)測定為約為30％。
權利要求
1.含有2，4-嘧啶二胺部分和至少一個前基團Rp的前藥化合物或其鹽、溶劑合物、水合物或N-氧化物，所述前基團Rp共價連接到2，4-嘧啶二胺部分的伯或仲氨基氮原子上。
2.如權利要求1所述的前藥化合物，其為如結構式(I)所示的化合物
包括其鹽、溶劑合物、水合物和N-氧化物，式中
Y選自CH2、NR24、O、S、S(O)和S(O)2；
Z1和Z2各自獨立選自CH和N；
R2選自任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的(C1-C6)烴基、任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的(C3-C8)環烴基、任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的環己基、任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的3-8元環雜烴基、任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的(C6-C14)芳基、任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的苯基以及任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的5-15元雜芳基；
R5選自鹵素、氟、氰基、硝基、三鹵甲基和三氟甲基；
R8選自Ra、Rb、被一個或多個相同或不同的Ra或Rb取代的Ra、被一個或多個相同或不同的Ra或Rb取代的-ORa、-B(ORa)2、-B(NRcRc)2、-(CH2)m-Rb、-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-Rb、-O-CHRaRb、-O-CRa(Rb)2、-O-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-CH[(CH2)mRb]Rb、-S-(CHRa)m-Rb、-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-C(O)NH-(CHRa)mRb、-O-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-O-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-S-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-NH-(CH2)m-Rb、-NH-(CHRa)m-Rb-、-NH[(CH2)mRb]、-N[(CH2)mRb]2、-NH-C(O)-NH-(CH2)m-Rb、-NH-C(O)-(CH2)m-CHRbRb和-NH-(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)m-Rb；
R17選自氫、鹵素、氟、低級烴基和甲基，或者，R17可與R18一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環；
R18選自氫、鹵素、氟、低級烴基和甲基，或者，R18可與R17一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環；
R19選自氫、低級烴基和甲基，或者，R19可與R20一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環；
R20選自氫、低級烴基和甲基，或者，R20可與R19一起形成氧代(＝O)基團，或者與它們所結合的碳原子一起形成含有3-7個碳原子的螺環；
各Ra各自獨立選自氫、低級烴基、低級環烴基、環己基、(C4-C11)環烴基烴基、(C6-C10)芳基、苯基、(C7-C16)芳基烴基、芐基、2-6元雜烴基、3-8元環雜烴基、嗎啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、4-11元環雜烴基烴基、5-10元雜芳基和6-16元雜芳基烴基；
各Rb是獨立選自下組的適當基團＝O、-ORa、(C1-C3)鹵烷氧基、＝S、-SRa、＝NRa、＝NORa、-NRcRc、鹵素、-CF3、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、-S(O)2ORa、-S(O)NRcRc、-S(O)2NRcRc、-OS(O)Ra、-OS(O)2Ra、-OS(O)2ORa、-OS(O)2NRcRc、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRcRc、-C(NH)NRcRc、-C(NRa)NRcRc、-C(NOH)Ra、-C(NOH)NRcRc、-OC(O)Ra、-OC(O)ORa、-OC(O)NRcRc、-OC(NH)NRcRc、-OC(NRa)NRcRc、-[NHC(O)]nRa、-[NRaC(O)]nRa、-[NHC(O)]nORa、-[NRaC(O)]nORa、-[NHC(O)]nNRcRc、-[NRaC(O)]nNRcRc、-[NHC(NH)]nNRcRc和-[NRaC(NRa)]nNRcRc；
各Rc各自獨立選自保護基和Ra，或者，結合到相同氮原子的兩個Rc與該氮原子一起形成5-8元環雜烴基或雜芳基，該基團可任選含有一個或多個相同或不同的其它雜原子并可任選被一個或多個相同或不同的Ra基團取代；
R21、R22和R23各自獨立選自氫和前基團Rp；
R24選自氫、低級烴基和前基團Rp；
各m各自獨立為1-3的整數；和
各n各自獨立為0-3個整數，前提是R21、R22、R23和R24中至少有一個是前基團。
3.如權利要求2所述的前藥化合物，其特征在于，R5是氟。
4.如權利要求2所述的前藥化合物，其特征在于，R2是任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的苯基。
5.如權利要求4所述的前藥化合物，其特征在于，R2是3，4，5-三(低級烷氧基)苯基。
6.如權利要求5所述的前藥化合物，其特征在于，R2是3，4，5-(三甲氧基)苯基。
7.如權利要求2所述的前藥化合物，其特征在于，Y是O，Z1是CH，Z2是N，R17和R18各自為甲基，且R19和R20一起形成氧代基團。
8.如權利要求7所述的前藥化合物，其特征在于，R2是任選被一個或多個相同或不同的R8基團取代的苯基。
9.如權利要求8所述的前藥化合物，其特征在于，R2是3，4，5-三(低級烷氧基)苯基。
10.如權利要求9所述的前藥化合物，其特征在于，R2是3，4，5-(三甲氧基)苯基。
11.如權利要求10所述的前藥化合物，其特征在于，僅R21是前基團Rp。
12.如權利要求11所述的前藥化合物，其特征在于，所述前基團Rp包括酯鍵、硫酯鍵、醚鍵、硫醚鍵、甲硅烷醚鍵、硫代甲硅烷醚鍵、碳酸酯鍵、硫脲鍵、酰胺鍵、硫代酰胺鍵、氨基甲酸酯鍵和脲鍵中的至少一個。
13.如權利要求11所述的前藥化合物，其特征在于，所述前基團Rp包括磷酸基。
14.如權利要求13所述的前藥化合物，其特征在于，所述前基團Rp具有式-(CRdRd)y-O-P(O)(OH)2或其鹽，式中，y是1-3的整數；各Rd各自獨立選自氫、任選取代的低級烴基、任選取代的(C6-C14)芳基或任選取代的(C7-C20)芳基烴基；其中，任選的取代基各自獨立選自羥基、低級烷氧基、(C6-C14)芳氧基、低級烷氧基烴基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基和鹵素，或者，結合到相同碳原子的兩個Rd與它們所結合的碳原子一起形成含有3-8個碳原子的環烴基。
15.如權利要求14所述的前藥化合物，其特征在于，所述前基團Rp選自-CH2-O-P(O)(OH)2和-CH2CH2-O-P(O)(OH2)以及它們的鹽。
16.如權利要求11所述的前藥化合物，其特征在于，所述前基團Rp包括磷酸酯基。
17.如權利要求16所述的前藥化合物，其特征在于，所述前基團Rp選自-(CRdRd)y-O-P(O)(ORe)(OH)、-(CRdRd)y-O-P(O)(ORe)(ORe)、
或其鹽，式中，各Re各自獨立選自取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基(例如，苯基、萘基、4-低級烷氧基苯基、4-甲氧基苯基)、取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基(例如，芐基、1-苯乙烷-1-基、2-苯乙烷-1-基)、-(CRdRd)yORf、-(CRdRd)y-O-C(O)Rf、-(CRdRd)y-O-C(O)ORf、-(CRdRd)yS-C(O)Rf、-(CRdRd)yS-C(O)ORf、-(CRdRd)yNH-C(O)Rf、-(CRdRd)yNH-C(O)ORf和-Si(Rd)3，其中，各Rf各自獨立選自氫、未取代的或取代的低級烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基和取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基；
各Rg各自獨立選自氫或低級烴基；各Rh各自獨立選自氫、取代或未取代的低級烴基、取代或未取代的低級環雜烴基、取代或未取代的(C6-C14)芳基、取代或未取代的(C7-C20)芳基烴基和取代或未取代的5-14元雜芳基；z是0-2的整數；Rd和y如權利要求14所定義。
18.如權利要求11所述的前藥化合物，其特征在于，Rp選自-CH2-O-P(O)(OH)2、-CH2CH2-O-P(O)(OH)2、-CH2OH和其鹽。
19.如權利要求2所述的前藥化合物，其具有結構(III)
式中，各R30、R31和R32各自獨立選自氫、低級烴基、低級鏈烯基、低級炔基、(C6-C14)芳基、苯基、5-14元雜芳基、(C7-C20)芳基烴基、芐基、7-20元雜芳基烴基、-OR、氯、氟、溴、氰基、硝基、-C(O)R、-C(O)OR、-NRR、-S(O)2NRR、-C(O)NRR、-N(R)S(O)2R和-NC(O)OR，其中，各R各自獨立選自氫和低級烴基；且Rp選自-CH2-O-P(O)(OH)2、-CH2CH2-O-P(O)(OH)2、-CH2OH和其鹽。
20.如權利要求19所述的前藥化合物，其特征在于，R30、R31和R32各自為甲氧基。
21.一種含有權利要求1所述前藥化合物和可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑的組合物。
22.一種給予對象如結構式(IV)所示的2，4-嘧啶二胺化合物，包括其鹽、水合物、溶劑合物和N-氧化物的方法
式中，Z1、Z2、R2、R5、R17、R18、R19和R20如權利要求2所定義，Y2選自CH2、NH、O和S，所述方法包括給予所述對象如權利要求2所述的前藥化合物。
23.一種在對象中抑制細胞脫粒的方法，所述方法包括給予所述對象有效抑制脫粒量的如權利要求2所述的前藥化合物。
24.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述疾病選自過敏性疾病，低級瘢痕形成，與組織破壞有關的疾病，與組織發炎有關的疾病、炎癥和瘢痕形成。
25.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述疾病是類風濕性關節炎。
26.一種在對象中抑制Syk激酶活性的方法，所述方法包括給予所述對象抑制Syk激酶活性有效量的如權利要求2所述的前藥化合物。
27.一種在對象中抑制Fc受體信號轉導級聯的方法，所述方法包括給予所述對象抑制Fc受體信號轉導級聯有效量的如權利要求2所述的前藥化合物。
28.如權利要求27所述的方法，其特征在于，所述Fc受體選自FcαRI、FcγRI、FcγRIII和FcεRI。
29.一種在對象中治療或預防自身免疫性疾病和/或一種或多種與其相關的癥狀的方法，所述方法包括給予所述對象治療或預防所述自身免疫性疾病有效量的如權利要求1所述的前藥化合物。
30.如權利要求29所述的方法，其特征在于，所述自身免疫性疾病選自通常稱為單器官或單細胞類型自身免疫性疾病的自身免疫性疾病以及通常認為與系統性自身免疫性紊亂相關的自身免疫性疾病。
31.如權利要求29所述的方法，其特征在于，所述自身免疫性疾病選自橋本甲狀腺炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血性自身免疫萎縮性胃炎、自身免疫性腦脊髓炎、自身免疫性睪丸炎、古德帕斯徹病、自身免疫性血小板減少癥、交感性眼炎、重癥肌無力、格雷夫斯病、原發性膽汁性肝硬變、慢性活動性肝炎、潰瘍性結腸炎、膜性腎小球病、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、舍格倫綜合征、萊特爾綜合征、多肌炎-皮肌炎、系統性硬化、結節性多動脈炎、多發性硬化和大皰性類天皰瘡。
32.一種在對象中治療類風濕性關節炎的方法，所述方法包括給予所述對象治療有效量的如權利要求2所述的前藥化合物。
33.如權利要求32所述的方法，其特征在于，所給予的前藥化合物的量可有效地使相應藥物的血漿濃度達到或超過在體外試驗中測定的藥物抑制Syk的IC50。
34.如權利要求32所述的方法，其特征在于，所述前藥化合物是如結構式(V)所示的化合物，和/或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑合物和/或N-氧化物
35.一種用于合成如權利要求2所述前藥的化合物，該化合物具有結構式(VI)所示的結構
包括其鹽、溶劑合物、水合物和N-氧化物，式中
Y3選自CH2、NR26、O、S、S(O)和S(O)2；
R2、R5、R17、R19、R19、R20，Z1和Z2如權利要求2所定義；和各R26各自獨立選自氫和含磷前基團，前提是，至少一個R26不是氫。
36.如權利要求35所述的化合物，該化合物是結構式(VII)所示的化合物
包括其鹽、水合物、溶劑合物和N-氧化物，式中，R2、R5、Z2、R17、R18、R19、R20和R21如之前所定義，且Y4選自CH2、NH、O和S。
37.如權利要求35所述的化合物，其特征在于，R26選自-CH2-O-P(O)(ORf)2、-CH2CH2-O-P(O)(ORf)2和其鹽，其中，各Rf是相同或不同的低級烴基。
38.如權利要求37所述的化合物，其具有結構(VIII)
式中，R26選自-CH2-O-P(O)(OtBu)2、-CH2CH2-O-P(O)(OtBu)2和其鹽。
39.N4-(2，2-二甲基-4-[(二氫膦酰氧基)甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺及其鹽和溶劑合物。
40.N4-(2，2-二甲基-4-[羥基甲基]-3-氧代-5-吡啶并[1，4]嗪-6-基)-5-氟-N2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2，4-嘧啶二胺及其鹽和溶劑合物。
全文摘要
本發明提供了生物活性2，4-嘧啶二胺化合物的前藥，含有該前藥的組合物，合成該前藥的中間體和方法以及將該前藥用于各種應用的方法。
文檔編號A61P37/00GK101115761SQ200680002643
公開日2008年1月30日 申請日期2006年1月19日 優先權日2005年1月19日
發明者R·辛格, S·伯漢米迪帕提, E·馬蘇達 申請人:里格爾藥品股份有限公司