本發明涉及一類具有酪氨酸激酶alk選擇性抑制活性的化合物及其藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的溶劑合物，其制備方法、包含該化合物的藥物組合物，以及這些化合物在制備用于預防或治療與生物體內和漸變性淋巴瘤酶的相關的細胞異常增殖、形態變化以及運動功能亢進等相關的疾病，以及與血管新生或癌轉移相關的疾病的藥物，尤其是用于治療或預防腫瘤生長與轉移的藥物中的用途。
背景技術：
：漸變性淋巴瘤酶(alk)是一種受體酪氨酸激酶，隸屬于胰島素受體超家族。最早發現于漸變性大細胞淋巴瘤(alcl)中，約60％-85％的alcl中有alk的表達，而正常的alk專一表達于神經系統中，尤其是新生兒的腦中。人體中alk基因表達水平隨著腦的發育成熟而下降，成熟腦組織中的量很低，表達存在一定的區域性；其它系統尤其是造血系統中未發現alk的表達。alk基因在絕大多數非造血系統腫瘤和正常組織中缺乏表達，表明alk蛋白的分布范圍是極其狹窄的。alk基因位于染色體2p23位點，正常情況下人源的alk可轉錄產生大小6222bp的mrna，由29個外顯子構成，編碼1620個氨基酸序列200kda的i型穿膜蛋白alk。alk基因通常處于休眠狀態，由于與其他基因發生融合而導致細胞惡化發展為惡性腫瘤。然而能和它發生融合的基因有很多，在非小細胞肺癌(non-smallcelllungcancer，nsclc)中主要是與eml4基因(棘皮動物微管相關蛋白樣4)發生融合，棘皮動物微管相關蛋白樣4－間變淋巴瘤激酶(eml4-alk)融合基因在nsclc的發生率為3％～7％。隨著非小細胞肺癌(nsclc)分子生物學研究的不斷深入，基于分子標記物的個體化治療已經從實驗室走到了臨床，并在晚期nsclc患者的治療上取得了顯著的臨床進展。同樣重要的是，除了傳統的病理組織學分類之外，nsclc還可以根據各種分子標記物表達的不同，進行分子表型分類，并以與腫瘤發生、發展相關的驅動性基因為靶點，研發新的藥物，進行有針對性的個體化分子靶向治療，改善患者預后。在理想狀態下，所有nsclc患者應該在治療前進行相關分子標記物的檢測，在充分了解患者腫瘤分子表達特征的情況下實施有針對性的治療，提高治療效果。在這樣的背景下，酪氨酸激酶已成為近年來炙手可熱的分子靶點，其選擇性抑制劑，或圍繞alk的多靶點小分子抑制劑已成為抗腫瘤藥物研究的熱點。目前，pfizer公司開發的小分子抑制劑克唑替尼(crizotinib)已經被美國fda于2011年8月26日批準上市。但是，已有臨床研究表明對crizotinib已經出現了耐藥性，而導致crizotinib耐藥的因素主要有二次突變，旁路信號激活及一些未知因素。2014年針對alk二次突變的艾樂替尼(alectinib)及色瑞替尼(ceritinib)兩個二代抑制劑上市，alk二次突變近20種，而alk的二次突變與egfr二次突變主要為t790m不同，近20種突變除了門控位點l1196m突變稍微常見其它基本幾率相近。但是alectinib及ceritinib尤其是ceritinib僅僅針對少數突變有活性[curropinoncol.2015；27(2):118-24]。這樣alk抑制劑的研發面對著新的挑戰，我們針對ceritinib的溶劑區域，通過直接在ceritinib的哌啶n原子引入柔性片段及去除哌啶環直接在多取代苯環上引入柔性水溶性片段兩種策略進行改造，獲得了一類新的具有較好alk的抑制活性及代謝性質的衍生物。技術實現要素：本發明的一個目的是提供一類以2,4-二氨基嘧啶為母核結構的化合物，其藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的溶劑合物。所述化合物為一類酪氨酸激酶抑制劑，alk具有較好的抑制作用。本發明提供了一種2,4-二氨基嘧啶類衍生物，其結構如下通式(i)所示：其中：r1選自于氫、c1～c3烷基、鹵素；t選自氧、哌啶環；r2，r3共同構成4～10元雜環烷基或3～6元環烷基；該4～10元雜環烷基中雜原子選自氧、氮和硫原子，該4～10元雜環烷基可為飽和或部分不飽和的雜環基，還可以是單環，雙環，橋環或螺環式雜環烷基；r4選自羥基，羥基c1-c3烷基，c1-c3烷基，含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～10元雜環烷基c1-c3烷基，由鹵素取代的含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～10元雜環烷基c1-c3烷基，氨基，含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～10元雜環烷基取代的氨基，由羥基取代的含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～10元雜環烷基取代的c1-c3烷基氨基，由羥基和1至3個c1-c3烷基取代的含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～10元雜環烷基取代的c1-c3烷基氨基，酰胺基，氨基取代的c1-c3烷基酰胺基，羥基取代的c1-c3烷基酰胺基，含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～10元雜環烷基取代的酰胺基。優選的，r1選自于氫、c1～c3烷基；t選自氧、哌啶環；r2，r3共同構成4～6元雜環烷基或3～6元環烷基，該4～6元雜環烷基中雜原子可選自氧和氮原子，該4～6元雜環烷基為飽和的雜環烷基。r4選自羥基，羥基c1-c3烷基，c1-c3烷基，含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基c1-c3烷基，由鹵素取代的含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基c1-c3烷基，氨基，含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的氨基，由羥基取代的含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的c1-c3烷基氨基，由羥基和1至3個c1-c3烷基取代的含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的c1-c3烷基氨基，酰胺基，氨基取代的c1-c3烷基酰胺基，羥基取代的c1-c3烷基酰胺基，含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的酰胺基。進一步優選的，r1選自于氫、甲基；t選自氧、哌啶環；r2，r3可共同構成4-氮雜環己烷基，3-氮雜環丁烷基，環丙基，3-氧雜環丁烷基或4-氧雜環己烷基。r4選自羥基，羥甲基，甲基、含有選自氧和氮原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基c1-c3烷基、由鹵素取代的含有選自氧和氮原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基c1-c3烷基、氨基、含有選自氧和氮原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的氨基、由羥基取代的含有選自氧和氮原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的c1-c3烷基氨基、由羥基和1至3個甲基取代的含有選自氧和氮原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的c1-c3烷基氨基、酰胺基、氨基取代的c1-c3烷基酰胺基、羥基取代的c1-c3烷基酰胺基、含有選自氧、氮和硫原子中的一個或多個雜原子的4～6元雜環烷基取代的酰胺基。所述通式(i)表示的化合物的藥學上可接受的鹽非限制性地包括無機酸鹽、有機酸鹽、烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽；所述無機酸鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等；所述有機酸鹽包括甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、苯甲酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽等；所述烷基磺酸鹽包括甲基磺酸鹽、乙基磺酸鹽等；所述芳基磺酸鹽包括苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等。所述通式(i)表示的化合物的藥學上可接受的溶劑合物非限制性地包括通式(i)表示的化合物與水、乙醇、異丙醇、乙醚或丙酮等的溶劑合物。本發明的通式(i)表示的化合物更優選為如下具體化合物：本發明還提供了制備所述的通式(i)表示的化合物的方法，其中，有以下三種制備方法：制備方法一：化合物i的制備參考文獻方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)，甲烷磺酸酯iia在有機堿二異丙基乙胺(dipea)作用下與化合物i發生取代反應得到化合物iii；或化合物i與螺環類化合物iib在有機堿二異丙基乙胺(dipea)作用下發生開環反應得到化合物iii；其中，r2，r3共同構成4～10元雜環烷基或3～6元環烷基；該4～10元雜環烷基中雜原子選自氧、氮和硫原子，該4～10元雜環烷基可為飽和或部分不飽和的雜環基；r4定義與前述相同。制備方法二：(1)化合物iv與化合物v在叔丁醇鉀作用下進行取代反應得到化合物vi；(2)化合物vi經鈀碳催化氫化室溫反應得到化合物vii；(3)化合物ix的制備參考文獻方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)，經化合物vii與化合物viii在有機酸樟腦磺酸作用下經取代反應得到化合物ix；(4)化合物ix經過還原氨化反應，取代反應或酰基化反應可得到不同r4取代的化合物x。制備方法三：(1)化合物iv-b與化合物v-b在無機堿作用下進行取代反應得到化合物vi-b；(2)化合物vi-b與化合物v在無機堿作用下發生取代反應得到vii-b；(3)化合物vii-b經過鈀碳催化氫化，室溫下反應得到化合物viii-b；(4)化合物viii-b與化合物viii在有機酸作用下加熱反應或通過pd催化偶聯反應得到化合物ix-b。步驟(1)所述無機堿優選為碳酸鉀；步驟(2)所述無機堿優選為碳酸銫；步驟(4)所述有機酸優選為樟腦磺酸；步驟(4)所述加熱反應的反應溫度優選為135℃，偶聯反應的反應溫度優選為100℃。本發明所制備的這些化合物用于預防或治療與生物體內和漸變性淋巴瘤酶的相關的細胞異常增殖、形態變化以及運動功能亢進等相關的疾病，以及與血管新生或癌轉移相關的疾病，尤其是用于治療或預防腫瘤生長與轉移。本發明提供了所述化合物作為酪氨酸激酶抑制劑的用途。本發明還提供了所述化合物在制備預防和/或治療與生物體內和漸變性淋巴瘤酶的相關的細胞異常增殖、形態變化以及運動功能亢進等相關的疾病，以及與血管新生或癌轉移相關的疾病的藥物中的用途。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述。這些實施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發明的范圍和實質。1h-nmr用varianmercuryamx300型儀測定，所有溶劑在使用前均經過重新蒸餾，所使用的無水溶劑均是按標準方法干燥處理獲得；除說明外，所有反應均是在氮氣保護下進行并tlc跟蹤，后處理時均經飽和氯化鈉水溶液洗滌和無水硫酸鈉干燥過程；產品的純化除說明外均使用硅膠(200-300目)柱色譜法；其中硅膠(200-300目)由青島海洋化工廠生產，gf-254薄層硅膠板由煙臺江友硅膠開發有限公司生產。制備實施例1化合物s1的制備化合物1-1的制備參考文獻方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)。化合物s1的合成：將化合物1-1及(3-(溴甲基)氧雜環丁酮-3-基)甲醇(2eq)溶解在乙腈中，加入(3eq)二異丙基乙胺(dipea)，加熱至90℃回流過夜。反應完全后將反應液冷卻，緩慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物s1。1hnmr(300mhz,dmso)δ9.41(s,1h),8.42(d,j＝8.3hz,1h),8.20(s,1h),8.04(s,1h),7.81(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.64–7.55(m,1h),7.52(s,1h),7.42–7.27(m,1h),6.83(s,1h),4.64–4.48(m,1h),4.39–4.14(m,4h),3.48(d,j＝8.1hz,2h),3.46–3.30(m,1h),2.72(m,1h),2.52–2.43(m,4h),2.31(s,3h),2.28(s,2h),1.85–1.60(m,4h),1.22(d,j＝6.0hz,6h),1.16(d,j＝6.8hz,6h).制備實施例2化合物s2的制備化合物s2的合成：將化合物1-1及3-(溴甲基)-3甲基氧雜環丁酮(2eq)溶解在乙腈中，加入dipea(3eq)，加熱至90℃回流過夜。反應完全后將反應液冷卻，緩慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s2。1hnmr(300mhz,dmso)δ9.44(s,1h),8.44(d,j＝8.3hz,1h),8.22(s,1h),8.06(s,1h),7.82(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.65–7.56(m,1h),7.51(s,1h),7.40–7.26(m,1h),6.82(s,1h),4.66–4.49(m,1h),4.39–4.14(m,4h),3.48–3.32(m,1h),2.68(m,1h),2.51-2.42(m,4h),2.31(s,3h),2.26(s,3h),1.88–1.60(m,4h),1.22(d,j＝6.0hz,6h),1.16(d,j＝6.8hz,6h).制備實施例3化合物s3的制備化合物3-1的制備參照文獻方法(wo2013024130)。化合物s3的合成：將化合物1-1及中間體3-1溶解在乙醇中，加入dipea(3eq)，加熱至90℃回流過夜。反應完全后將反應液冷卻，緩慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1得化合物s3。1hnmr(300mhz,dmso)δ9.45(s,1h),8.46(d,j＝8.3hz,1h),8.24(s,1h),8.04(s,1h),7.83(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.65–7.56(m,1h),7.52(s,1h),7.41–7.28(m,1h),6.83(s,1h),4.65–4.49(m,1h),4.13(s,1h),3.73–3.53(m,4h),3.51–3.37(m,1h),3.03(d,j＝11.0hz,2h),2.56(s,1h),2.37–2.20(m,4h),2.11(s,3h),1.78–1.52(m,6h),1.37(d,j＝13.0hz,2h),1.22(d,j＝6.0hz,6h),1.16(d,j＝6.8hz,6h).制備實施例4化合物s4的制備化合物4-3的合成：將(1-羥甲基環丙基)-叔丁氧羰基氨基溶解于四氫呋喃[thf]溶液中低溫下加入叔丁醇鉀(1.5eq)，攪拌30min后加入4-氟-2-異丙氧基-1-硝基苯(1.3eq)，加熱至50℃過夜。反應完全后將反應液冷卻，倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，pe[石油醚]:ea[乙酸乙酯](體積比)＝5:1得化合物4-3。化合物4-4的合成：將化合物4-3溶解于甲醇中，加入20％的鈀碳，催化氫化6h。反應完全后，抽濾除去鈀碳，濾液旋干上柱，展開劑為pe:ea(體積比)＝5:1得化合物4-4。化合物4-5的制備參照文獻方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)。化合物s4的合成：將化合物4-4及化合物4-5(2eq)溶解于正丁醇中，加入2eq的樟腦磺酸[d-csa]，加熱至135℃反應6h。反應完全后，將反應液冷卻至室溫，減壓旋出正丁醇，加水稀釋，用nahco3調ph至7-8。用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝20:1得化合物s4。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.57(d,j＝8.3hz,1h),8.12(s,1h),8.05(d,j＝8.8hz,1h),7.89(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),7.64–7.56(m,1h),7.34(s,1h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),6.55(d,j＝2.5hz,1h),6.36(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),4.56(p,j＝6.0hz,1h),3.80(s,2h),3.21(q,j＝6.9hz,1h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.30(d,j＝6.8hz,6h),0.78–0.71(m,2h),0.64(d,j＝4.7hz,2h).制備實施例5化合物s5的制備化合物5-1的合成：將5-氟-4-甲基-2-硝基苯酚與碳酸銫(1.5eq)溶解于n,n-二甲基甲酰胺中，滴加2-溴丙烷(1.5eq)，加熱至65℃，5h后反應完全。將反應液冷卻至室溫倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，pe:ea(體積比)＝10:1，得化合物5-1。化合物5-2的合成：將化合物4-1溶解于thf溶液中，低溫下加入叔丁醇鉀(1.5eq)，攪拌30min后加入(1.3eq)化合物5-1，加熱至50℃過夜。反應完全后將反應液冷卻，倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，pe:ea(體積比)＝5:1得化合物5-2。化合物5-3的合成：將化合物5-2溶解于甲醇中，加入20％的鈀碳，催化氫化6h。反應完全后，抽濾除去鈀碳，濾液旋干上柱，展開劑為pe:ea(體積比)＝5:1得化合物5-3。化合物s5的合成：將化合物5-3及化合物4-5(2eq)溶解于正丁醇中，加入(2eq)的樟腦磺[d-csa]，加熱至135℃反應6h。反應完全后，將反應液冷卻至室溫，減壓旋出正丁醇，加水稀釋，用nahco3調ph至7-8。用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1得化合物s5。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.51(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.92(d,j＝6.8hz,2h),7.65–7.56(m,1h),7.34(s,1h),7.24(d,j＝7.3hz,1h),6.46(s,1h),4.50(p,j＝6.1hz,1h),3.80(s,2h),3.26(p,j＝6.9hz,1h),2.13(s,3h),1.91(s,2h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h),0.74(s,2h),0.66(s,2h).制備實施例6化合物s6的制備化合物s6的合成：將化合物s4及3-氧雜環丁酮(5eq)溶解于干燥的二氯甲烷中，攪拌30min后加入氰基硼氫化鈉(4eq)，加熱至40℃過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s6。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.54(s,1h),8.59(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),8.07(d,j＝8.8hz,1h),7.92(d,j＝7.9hz,1h),7.65–7.58(m,1h),7.38(s,1h),7.26(d,j＝8.2hz,1h),6.52(d,j＝2.6hz,1h),6.33(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),4.82(t,j＝6.9hz,2h),4.62–4.54(m,1h),4.44(t,j＝6.6hz,2h),4.17(q,j＝7.0hz,1h),3.66(s,2h),3.24(q,j＝6.8hz,1h),1.39(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h),0.77(q,j＝4.6,4.1hz,2h),0.64(q,j＝4.4hz,2h).制備實施例7化合物s7的制備化合物7-2的合成：將化合物s5及1-boc-3-氮雜環丁酮(5eq)溶解于干燥的二氯甲烷中，攪拌30min后加入氰基硼氫化鈉(4eq)，加熱至40℃過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1得化合物7-2。化合物s7的合成：將化合物7-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝20:1得化合物s7。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.51(s,1h),8.56(d,j＝8.4hz,1h),8.12(s,1h),7.92(d,j＝7.8hz,2h),7.66–7.61(m,1h),7.34(s,1h),7.30(d,j＝7.9hz,1h),6.35(s,1h),4.52–4.44(m,1h),4.14(t,j＝10.2hz,3h),3.80(d,j＝9.6hz,2h),3.67(s,2h),3.30–3.22(m,1h),2.12(s,3h),1.37–1.30(m,12h),0.74(d,j＝5.8hz,2h),0.64(d,j＝4.0hz,2h).制備實施例8化合物s8的制備化合物s8的合成：將化合物s5及6-1溶解于干燥的二氯甲烷中，攪拌30min后加入氰基硼氫化鈉(4eq)，加熱至40℃過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s8。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.44(s,1h),8.50(d,j＝8.3hz,1h),8.06(s,1h),7.86(d,j＝9.7hz,2h),7.54(t,j＝7.8hz,1h),7.28(s,1h),7.17(s,1h),6.30(s,1h),4.75(t,j＝6.9hz,2h),4.39(dt,j＝13.3,6.4hz,3h),4.17–4.09(m,1h),3.58(s,2h),3.23–3.15(m,1h),2.08(s,3h),1.27(dd,j＝10.2,6.5hz,12h),0.74–0.65(m,2h),0.58(d,j＝4.2hz,2h).制備實施例9化合物s9的制備化合物s9的合成：將化合物s4與3-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加熱至80℃反應過夜。反應完全后減壓旋出乙醇，拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1，得化合物s9。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.55(s,1h),8.60(dd,j＝8.6,1.2hz,1h),8.14(s,1h),8.08(d,j＝8.9hz,1h),7.92(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.62(ddd,j＝8.7,7.3,1.7hz,1h),7.38(s,1h),7.27–7.23(m,1h),6.55(d,j＝2.7hz,1h),6.40(dd,j＝8.9,2.7hz,1h),4.58(p,j＝6.0hz,1h),3.85(s,2h),3.77(dt,j＝8.4,2.7hz,4h),3.29–3.20(m,1h),2.68(s,2h),1.60–1.51(m,2h),1.45(d,j＝2.3hz,2h),1.39(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),0.80–0.73(m,2h),0.70–0.63(m,2h).制備實施例10化合物s10的制備化合物10-1的制備參照文獻方法(wo2013024130)。化合物10-2的合成：將化合物s5及中間體10-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加熱至80℃反應過夜。反應完全后減壓旋出乙醇，拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1，得化合物10-2。化合物s10的合成：將化合物10-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和碳酸氫鈉溶液中和，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝20:1得化合物s10。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.50(s,1h),9.36(s,1h),8.56(d,j＝8.3hz,1h),8.13(s,1h),7.92(d,j＝10.0hz,2h),7.62(t,j＝7.9hz,1h),7.36(s,1h),7.28(s,1h),6.44(s,1h),4.51(p,j＝6.1hz,1h),3.83(s,2h),3.39–3.21(m,5h),2.82(s,2h),2.08(s,3h),1.91(q,j＝10.2,5.8hz,2h),1.68(d,j＝13.5hz,2h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.31(d,j＝6.9hz,6h),0.80(s,2h),0.69(s,2h).制備實施例11化合物s11的制備化合物11-1的制備參照文獻方法(wo2013024130)。化合物s11的合成：將化合物s5與中間體11-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加熱至80℃反應過夜。反應完全后減壓旋出乙醇，拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝30:1，得化合物s11。1hnmr(300mhz,cdcl3δ9.53(s,1h),8.59(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.93(d,j＝9.1hz,2h),7.63–7.57(m,1h),7.36(s,1h),7.27–7.23(m,1h),6.45(s,1h),4.55–4.47(m,1h),3.92–3.81(m,4h),3.25(q,j＝6.9hz,1h),2.66(s,2h),2.12(s,3h),1.46(d,j＝13.1hz,2h),1.37(d,j＝6.0hz,6h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),1.18(s,3h),1.16(s,3h),1.09(t,j＝12.2hz,2h),0.75(d,j＝4.5hz,2h),0.67(d,j＝4.6hz,2h).制備實施例12化合物s12的制備化合物s12的合成：將化合物s5與中間體3-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加熱至80℃反應過夜。反應完全后減壓旋出乙醇，拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1，得化合物s12。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.58(d,j＝8.5hz,1h),8.13(s,1h),7.99–7.86(m,2h),7.65–7.56(m,1h),7.35(s,1h),7.24(d,j＝8.3hz,1h),6.46(s,1h),4.51(p,j＝6.2hz,1h),3.84(s,2h),3.77(d,j＝8.1hz,4h),3.31–3.23(m,1h),2.71(s,2h),2.11(s,3h),1.60–1.51(m,2h),1.44(d,j＝12.8hz,2h),1.37(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),0.76(d,j＝3.8hz,2h),0.66(d,j＝6.4hz,2h).制備實施例13化合物s13的制備化合物13-2的合成：將化合物s4、1-n-boc-3-吖丁啶羧酸(1.3eq)及o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯[tbtu](1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，室溫攪拌過夜。反應完全后，反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物13-2。化合物s13的合成：將化合物13-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物s13。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.45(s,1h),8.48(d,j＝8.4hz,1h),8.02(s,1h),7.81(d,j＝8.0hz,2h),7.74(s,1h),7.50(t,j＝8.3hz,1h),7.15(d,j＝7.3hz,1h),6.39(s,1h),4.43–4.37(m,1h),4.17(d,j＝17.0hz,4h),3.91(s,2h),3.76(s,1h),3.64(d,j＝7.0hz,1h),3.21–3.12(m,1h),1.97(s,3h),1.23(d,j＝1.9hz,6h),1.21(d,j＝2.7hz,6h),0.87(s,4h).制備實施例14化合物s14的制備化合物14-1的合成：將化合物s4、13-1(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后，反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物14-1。化合物s14的合成：將化合物14-1溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物s14。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.53(s,1h),8.56(d,j＝8.3hz,1h),8.13(s,1h),8.05(d,j＝8.9hz,1h),7.92(dd,j＝7.9,1.6hz,1h),7.63(ddd,j＝8.7,7.4,1.7hz,1h),7.36(s,1h),7.30(s,1h),6.53(dd,j＝12.5,2.6hz,2h),6.37(dd,j＝8.9,2.7hz,1h),4.55(td,j＝6.1,2.8hz,1h),4.02(s,2h),3.76(dt,j＝26.7,7.7hz,4h),3.33–3.20(m,2h),2.41(s,1h),1.37(d,j＝6.1hz,6h),1.31(d,j＝6.9hz,6h),1.00–0.91(m,4h).制備實施例15化合物s15的制備化合物15-2的合成：將化合物s5、boc-l-脯氨酸(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后，反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物15-2。化合物s15的合成：將化合物15-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物s15。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.50(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),8.05(s,1h),7.91(d,j＝9.7hz,2h),7.61(d,j＝7.9hz,1h),7.32(s,1h),7.23(d,j＝7.4hz,1h),6.45(s,1h),4.50(dt,j＝12.2,6.2hz,1h),4.06–3.93(m,2h),3.67(dd,j＝9.1,5.4hz,1h),3.26(p,j＝6.8hz,1h),2.99(dt,j＝10.2,6.7hz,1h),2.86(dt,j＝10.1,6.3hz,1h),2.10(s,4h),1.83(dt,j＝12.4,6.0hz,1h),1.71–1.61(m,2h),1.39–1.28(m,12h),0.95(d,j＝4.1hz,2h),0.91(d,j＝3.7hz,2h).制備實施例16化合物s16的制備化合物16-2的合成：將化合物s5、boc-甘氨酸(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后，反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物16-2。化合物s16的合成：將化合物16-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝30:1得化合物s16。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.50(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.92(d,j＝6.4hz,2h),7.70(s,1h),7.61(t,j＝8.4hz,1h),7.33(s,1h),7.23(d,j＝7.5hz,1h),6.47(s,1h),4.50(p,j＝6.0,5.5hz,1h),4.01(s,2h),3.29(d,j＝5.6hz,2h),3.25(d,j＝6.9hz,1h),2.10(s,3h),1.58(s,2h),1.33(dd,j＝8.6,6.5hz,12h),0.99(d,j＝3.4hz,2h),0.97–0.91(m,2h).制備實施例17化合物s17的制備化合物s17的合成：將化合物s5、羥基乙酸(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常溫攪拌過夜。反應完全后，反應完全后將反應液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝20:1得化合物s17。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.53(s,1h),8.58(d,j＝8.3hz,1h),8.07(s,1h),7.91(d,j＝7.8hz,1h),7.76(s,1h),7.61(t,j＝7.5hz,1h),7.24–7.19(m,1h),7.00(s,1h),6.49(s,1h),4.48(dt,j＝12.2,5.5hz,1h),4.04(s,2h),3.95(s,2h),3.30–3.21(m,1h),2.11(s,3h),1.32(t,j＝6.0hz,12h),1.02–0.91(m,4h).制備實施例18化合物s18的制備化合物18-1的合成：將化合物3-溴甲基-3-羥甲基-1-氧雜環丁烷、1-叔丁氧羰基哌嗪(1.5eq)、碳酸鉀(2eq)及碘化鉀(0.2eq)溶解于乙腈中，加熱至75℃反應4h。反應完全后將碳酸鉀過濾掉，濾液旋干拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝50:1得化合物18-1。化合物18-2的合成：將化合物18-1、化合物5-1(1.2eq)及碳酸銫(2eq)溶解于dmf中，加熱至65℃反應5h，反應完全后，將至室溫。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝100:1得化合物18-2。化合物18-3的合成：將化合物20-3溶解于甲醇中，加入20％的鈀碳，催化氫化6h。反應完全后，抽濾除去鈀碳，濾液旋干上柱，展開劑為pe:ea＝6:1得化合物18-3。化合物s18的合成：將化合物18-3、化合物4-5(1.1eq)、2-二環己基磷-2',4',6'-三異丙基聯苯[x-phos](0.05eq)、三(二亞芐基丙酮)二鈀[pd2(dba)3](0.075eq)及碳酸鉀(2eq)溶于1,4-二氧六環中，加熱至100℃回流。6h后反應完全。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝50:1得化合物s18。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.14(s,1h),7.99–7.89(m,2h),7.60(t,j＝7.8hz,1h),7.37(s,1h),7.23(s,1h),6.54(s,1h),4.63–4.47(m,5h),4.17(s,2h),3.26(dt,j＝13.6,6.9hz,1h),3.14(s,4h),2.91(s,2h),2.72(s,4h),2.05(s,3h),1.39(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h).制備實施例19化合物s19的制備化合物19-2的合成：將化合物1-2、3-氟丫丁啶鹽酸鹽(1.5eq)、碳酸鉀(2eq)及碘化鉀(0.2eq)溶解于乙腈中，加熱至75℃反應4h。反應完全后將碳酸鉀過濾掉，濾液旋干拌樣上柱，展開劑為ch2cl2:meoh(體積比)＝50:1得化合物19-2。化合物19-3的合成：將化合物19-2、化合物5-1(1.2eq)及碳酸銫(2eq)溶解于dmf中，加熱至65℃反應5h，反應完全后，將至室溫。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝100:1得化合物19-3。化合物19-4的合成：將化合物19-3溶解于甲醇中，加入20％的鈀碳，催化氫化6h。反應完全后，抽濾除去鈀碳，濾液旋干上柱，展開劑為pe:ea(體積比)＝6:1得化合物19-4。化合物s19的合成：將化合物19-4、化合物4-5(1.1eq)、x-phos(0.05eq)、pd2(dba)3(0.075eq)及碳酸鉀(2eq)溶于1,4-二氧六環中，加熱至100℃回流。6h后反應完全。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh＝50:1得化合物s19。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.95–7.86(m,2h),7.60(ddd,j＝8.8,7.4,1.6hz,1h),7.37(s,1h),7.26–7.20(m,1h),6.53(s,1h),5.21–5.14(m,1h),4.97(q,j＝5.1hz,1h),4.59–4.50(m,5h),4.10(s,2h),3.74–3.64(m,2h),3.36–3.22(m,3h),3.01(s,2h),2.07(s,3h),1.38(d,j＝6.0hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h).制備實施例20化合物s20的制備化合物20-2的合成：將化合物1-2、3,3-二氟丫丁啶鹽酸鹽(1.5eq)、碳酸鉀(2eq)及碘化鉀(0.2eq)溶解于乙腈中，加熱至75℃反應4h。反應完全后將碳酸鉀過濾掉，濾液旋干拌樣上柱，展開劑為ch2cl2:meoh(體積比)＝50:1得化合物20-2。化合物20-3的合成：將化合物20-2、化合物5-1(1.2eq)及碳酸銫(2eq)溶解于dmf中，加熱至65℃反應5h，反應完全后，將至室溫。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝100:1得化合物20-3。化合物20-4的合成：將化合物20-3溶解于甲醇中，加入20％的鈀碳，催化氫化6h。反應完全后，抽濾除去鈀碳，濾液旋干上柱，展開劑為pe:ea(體積比)＝6:1得化合物20-4。化合物s20的合成：將化合物20-4、化合物4-5(1.1eq)、x-phos(0.05eq)、pd2(dba)3(0.075eq)及碳酸鉀(2eq)溶于1,4-二氧六環中，加熱至100℃回流。6h后反應完全。將反應液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥后拌樣上柱，ch2cl2:meoh(體積比)＝50:1得化合物s20。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.49(s,1h),8.56(d,j＝8.6hz,1h),8.12(s,1h),7.94–7.86(m,2h),7.62–7.54(m,1h),7.33(s,1h),7.21(d,j＝8.3hz,1h),6.51(s,1h),4.58–4.46(m,5h),4.08(s,2h),3.68(dd,j＝14.4,7.5hz,2h),3.33(d,j＝6.9hz,1h),3.23(q,j＝6.8hz,2h),2.99(s,2h),2.24–2.17(m,1h),2.05(s,3h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.30(d,j＝6.9hz,6h).實驗實施例：分子受體酪氨酸激酶alk分子水平活性評價1.受體氨酸激酶alk分子水平酶活抑制初步評價實驗(1)酶反應底物poly(glu,tyr)(摩爾比4:1)用無鉀離子的pbs(10mm磷酸鈉緩沖液，150mmnacl，ph7.2-7.4)稀釋成20μg/ml，125μl/孔包被酶標板，置37℃反應12-16小時。棄去孔中液體。洗板，用200μl/孔的t－pbs(含0.1％tween-20的無鉀離子的pbs)洗板三次，每次5分鐘。于37℃烘箱中干燥酶標板1-2小時。(2)每孔加入用反應緩沖液(50mmhepesph7.4，50mmmgcl2，0.5mmmncl2，0.2mmna3vo4，1mmdtt)稀釋的atp溶液49μl，每孔中加入1μl化合物，加入待測試化合物，再加入50μl用反應緩沖液稀釋的各激酶域重組蛋白啟動反應，每次實驗需設無atp對照孔兩孔。置37℃搖床(100rpm)反應1小時。棄去孔中液體，t-pbs洗板三次。(3)加入抗體py99100μl/孔(抗體用含bsa5mg/ml的t-pbs1:500稀釋)，37℃搖床反應0.5小時。棄去孔中液體，t-pbs洗板三次。(4)加入辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠二抗100μl/孔(抗體用含bsa5mg/ml的t-pbs1:2000稀釋)，37℃搖床反應0.5小時。棄去孔中液體，t-pbs洗板三次。(5)加入2mg/ml的opd顯色液100μl/孔(用含有0.03％h2o2的0.1m檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液(ph＝5.4)稀釋)，25℃避光反應1-10分鐘。(6)加入2mh2so450μl/孔中止反應，用可調波長式微孔板酶標儀versamax讀數，波長為490nm。(7)結果分析2.受體酪氨酸激酶alk酶活抑制ic50評價實驗化合物對受體酪氨酸激酶alk酶活抑制水平見下表：化合物抑制率(％)ic50(μm)化合物抑制率(％)ic50(μm)s196@0.1μm<0.01s289@0.1μm<0.01s389@0.1μm<0.01s470@0.1um<0.1s593@0.1μm<0.1s681@0.1μm<0.1s7112@0.1μm<0.01s894@0.1μm<0.01s990@0.1μm<0.1s10109@0.1μm<0.01s1179@0.1μm<0.1s1299@0.1μm<0.01s13112@0.1μm<0.01s1487@0.1μm<0.1s1590@0.1μm<0.01s1687@0.1μm<0.1s1774@0.1μm<0.1s1889@0.1μm<0.1s1965@0.1μm<0.1s2051@0.1μm<0.1實驗實施例：部分化合物受體酪氨酸激酶alk細胞水平活性評價化合物對su-dhl-1細胞的增殖抑制作用以cck-8細胞計數試劑盒(dojindo)檢測。具體步驟如下：處于對數生長期的su-dhl-1細胞按合適密度接種至96孔培養板中，每孔90μl，培養過夜后，加入不同濃度的化合物作用72hr，并設定溶劑對照組(陰性對照)。待化合物作用細胞72h后，化合物對細胞增殖的影響采用cck-8細胞計數試劑盒(dojindo)檢測，每孔加入10μlcck-8試劑，置于37℃培養箱中放置2-4小時后，用全波長式微孔板酶標儀spectramax190讀數，確定測定波長為450nm。采用以下列公式計算化合物對腫瘤細胞生長的抑制率(％)：抑制率(％)＝(od對照孔-od給藥孔)/od對照孔×100％化合物對su-dhl-1細胞的增殖抑制率見下表：細胞水平活性測試結果顯示化合物s1、s2、s3的抑制活性均強于ceritinib。實驗實施例：部分化合物大鼠藥動學研究試驗1.給藥方案sd大鼠21只，雄性，體重200-220g，隨機分成6組，每組4或3只，灌胃或靜脈給予化合物s1、s2、s3，具體安排見下表：試驗前禁食12h，自由飲水。給藥后2h統一進食。2.采血時間點及樣品處理：灌胃給藥：給藥后0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0和24h；靜脈給藥：給藥后5min，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0和24h；在以上設定時間點經大鼠眼球后靜脈叢取靜脈血0.3ml，置肝素化試管中，11000rpm離心5min，分離血漿，于–20℃冰箱中冷凍。3.樣品測試和數據分析采用lc/ms/ms法測定大鼠血漿中s1、s2和s3的濃度。采用winnonlin6.3軟件(美國pharsight公司)的非房室模型計算給藥后的藥代動力學參數。達峰濃度cmax和達峰時間tmax為實測值；藥時曲線下面積auc0-t值：采用梯形法計算；auc0-∞＝auc0-t+ct/ke，ct為最后一個可測得時間點的血藥濃度；ke為消除速率常數；消除半衰期t1/2＝0.693/ke；清除率cl＝d/auc0-∞；穩態分布容積vss＝cl×mrt；絕對生物利用度f＝(auc灌胃×d靜脈)/(auc靜脈×d灌胃)×100％。4.試驗結果三個化合物顯示出較好的藥代動力學性質。實驗實施例：化合物小鼠體內藥效試驗1、對人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用(1)劑量設置化合物s1，s3均設置兩個劑量組，分別為50mg/kg和10mg/kg組。陽性對照藥物crizotinib劑量為50mg/kg。(2)動物scid小鼠，雌性，4-5周齡，體重14±2g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，質量合格證編號：no.11401300013295。生產許可證號：scxk(京)2014-0004。藥物所使用許可合格證編號：syxk(滬)2013-0049。每組動物數：陰性對照組10只，給藥組5只。(3)細胞株人淋巴瘤karpas-299細胞株由我室保存。將該細胞接種scid小鼠右側腋窩皮下，細胞接種量為5×106/只，形成移植瘤后再在scid小鼠體內傳2代后使用。(4)實驗方法取生長旺盛期的瘤組織剪切成1.5mm3左右，在無菌條件下，接種于scid小鼠右側腋窩皮下。scid小鼠皮下移植瘤用游標卡尺測量移植瘤直徑，待腫瘤平均體積生長至約130mm3左右后將動物隨機分組。s1、s350mg/kg和10mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天。陽性對照藥pf234106650mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天。溶劑對照組則給等量溶劑。整個實驗過程中，每周2次測量移植瘤直徑，同時稱量小鼠體重。腫瘤體積(tumorvolume，tv)的計算公式為：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分別表示長、寬。根據測量的結果計算出相對腫瘤體積(relativetumorvolume，rtv)，計算公式為：rtv＝vt/v0。其中v0為分籠給藥時(即d0)測量所得腫瘤體積，vt為每一次測量時的腫瘤體積。抗腫瘤活性的評價指標為：(1)相對腫瘤增殖率t/c(％)，計算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治療組rtv；crtv：陰性對照組rtv；(2)腫瘤體積增長抑制率gi(％)，計算公式如下：gi(％)＝[1-(tvt-tv0)/(cvt-cv0)]×100％，tvt為治療組每次測量的瘤體積；tv0為治療組分籠給藥時所得瘤體積；cvt為對照組每次測量的瘤體積；cv0為對照組分籠給藥時所得瘤體積；(3)瘤重抑制率，計算公式如下：瘤重抑制率％＝(wc-wt)/wc×100％，wc：對照組瘤重，wt：治療組瘤重。(5)結果化合物s150mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天，對人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生長有極其顯著的抑制作用，第14天所得t/c百分數為6.03％，而10mg/kg劑量組，每天口服給藥一次，連續給藥14天，對人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生長則無明顯抑制作用，第14天所得t/c百分數為84.37％。化合物s350mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天，對人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生長有極其顯著的抑制作用，第14天所得t/c百分數為0.00％，至實驗結束時，全部5只受試小鼠腫瘤均完全消退。10mg/kg劑量組，每天口服給藥一次，連續給藥14天，對人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生長亦有顯著的抑制作用，第14天所得t/c百分數為23.66％。給藥方式及測試結果見下表：2、化合物對nih/3t3-alk-l1196m裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用(1)劑量設置s3設置兩個劑量組，分別為50mg/kg和10mg/kg組。陽性對照藥物crizotinib劑量為100mg/kg；ceritinib和alectinib均設置一個劑量組，為50mg/kg。(2)動物balb/ca裸小鼠，雌性，4-5周齡，體重17±2g，中科院上海藥物研究所生產，生產許可證號：scxk(滬)2013-0017。上海藥物所使用許可證編號：syxk(滬)2013-0049。每組動物數：陰性對照組12只，給藥組6只。(3)細胞株將nih/3t3-alk-l1196m細胞株接種裸小鼠右側腋窩皮下，細胞接種量為5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠體內傳1代后使用。(4)實驗方法取生長旺盛期的瘤組織剪切成1.5mm3左右，在無菌條件下，接種于裸小鼠右側腋窩皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游標卡尺測量移植瘤直徑，待腫瘤平均體積生長至約150mm3左右后將動物隨機分組。s3設置兩個劑量組，分別為50mg/kg和10mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天。陽性對照藥crizotinib100mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天；ldk378和ch542480250mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天。溶劑對照組則給等量溶劑。整個實驗過程中，每周2次測量移植瘤直徑，同時稱量小鼠體重。腫瘤體積(tumorvolume,tv)的計算公式為：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分別表示長、寬。根據測量的結果計算出相對腫瘤體積(relativetumorvolume，rtv)，計算公式為：rtv＝vt/v0。其中v0為分籠給藥時(即d0)測量所得腫瘤體積，vt為每一次測量時的腫瘤體積。抗腫瘤活性的評價指標為1)相對腫瘤增殖率t/c(％)，計算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治療組rtv；crtv：陰性對照組rtv；2)腫瘤體積增長抑制率gi(％)，計算公式如下：gi(％)＝[1-(tvt-tv0)/(cvt-cv0)]×100％，tvt為治療組每次測量的瘤體積；tv0為治療組分籠給藥時所得瘤體積；cvt為對照組每次測量的瘤體積；cv0為對照組分籠給藥時所得瘤體積；3)瘤重抑制率，計算公式如下：瘤重抑制率(％)＝(wc-wt)/wc×100％，wc：對照組瘤重，wt：治療組瘤重。(5)結果化合物s350mg/kg組，每天口服給藥一次，對nih/3t3-alk-l1196m裸小鼠皮下移植瘤的生長有極其顯著的抑制作用，連續給藥14天，第14天所得t/c百分數為1.42％；10mg/kg組，每天口服給藥一次，連續給藥14天，對nih/3t3-alk-l1196m裸小鼠皮下移植瘤的生長有明顯的抑制作用，第14天所得t/c百分數為37.05％。測試結果見下表：新化合物的哌啶n原子引入柔性水溶性基團及去除哌啶環直接在多取代苯環上引入柔性水溶性片段，很大程度上降低了ceritinib的clogp值(ceritinibclogp值高達5.62)，并同時降低化合物的剛性，改善其藥代動力學性質。代表性化合物的測試結果顯示，新化合物經alk分子水平，細胞水平，體內代謝研究及體內藥效甚至包括alkl1196m突變模型均顯示出與ceritinib相當甚至更好的結果，因此是非常有潛力的alk抑制劑。當前第1頁12