專利名稱：：見血封喉中的強心苷類化合物的抗腫瘤新用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥
技術領域：
，具體是一類強心苷化合物在制備腫瘤治療藥物中的新用途。
背景技術：
：見血封喉[j"riar紅toc/caWa(Pers.)Lesch.]為桑科見血封喉屬04油'ar/力植物。別名加布、剪刀樹、箭毒木。見血封喉屬植物全世界約有4個種3個變種，分布于東南亞。我國僅產l種，即見血封喉，分布于海南、云南、廣東和廣西等地。據說是世界上木本植物中最毒的樹種之一，生長于海拔300-1000m的山地常綠闊葉雨林和季雨林中。見血封喉鮮樹汁乳白色，有劇毒，入藥用于泄瀉，催吐，強心，還可用作麻醉劑；種子也有毒，入藥解熱止瀉，用于痢疾。見血封喉乳汁和種子的主要成分為強心苷類化合物。強心苷類化合物是治療心力衰竭不可缺少的重要藥物，臨床上用以治療心力衰竭及節律障礙等心臟疾病。對見血封喉中分離得到的強心苷的強心作用已有報道，但未見有抑制腫瘤細胞活性方面的報道。發明人對見血封喉中的強心苷類化合物進行了分離和抗腫瘤活性測試，發現了見血封喉中具有通式(I)的強心苷類化合物在抗腫瘤方面的新用途。
發明內容本發明的目的在于公開一類具有通式(I)的強心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的新用途。具有通式(I)的強心苷類化合物可以利用包括吸附樹脂柱層析、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析，減壓柱層析等多種常規分離手段從見血封喉中獲得，或者通過合成以及半合成手段獲得。采用以單體化合物或者選擇其中任意兩個或者多個單體以任意比例進行組合的復方形式，使之與適宜的賦形劑相結合，按照常規方法制成各種劑型。用于制備治療包括肺癌、腎癌、胃癌、鼻咽癌、膀胱癌、大腸癌、骨腫瘤、乳腺癌、子宮癌、口腔癌、膽癌、膽道癌、膽管癌、胰腺癌、卵巢癌、急性白血病、惡性淋巴瘤、腦瘤等多種癌癥疾病的藥物。其中通式(I)中的強心苷類化合物的結構如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(1)R-2-0-甲基-P-D-海藻糖(2-0-methyl-P-D-fUcose):毒見血封喉苷A(toxicariosideA)(2)R-6-去氧-p-D-古洛糖(6-deoxy-P-D-gulose):a-見血封喉苷(cc-antiarin)(3)R-6-去氧-2-0-甲基-(3-D-阿洛糖(6-deoxy-2-0-methyl-(3-D-allose(javose)):見血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)本發明對通式(I)中的化合物進行了抗腫瘤活性測試，結果表明該類化合物對多種腫瘤細胞株具有較強的抑制作用。具體實施方式下面結合具體實例對本發明作進一步闡述，但不限制本發明。實施例l:強心苷類化合物毒見血封喉苷A(toxicariosideA)，a-見血封喉苷(a-antiarin)，見血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的提取分離見血封喉乳汁(4L)用95W的乙醇室溫浸提3次，減壓回收乙醇至無醇味。將乙醇提取物分散于水中成懸濁液，經石油醚萃取得到石油醚部分(6.87g),然后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部分(8.69g),剩下的水液經過濾后上大孔吸附樹脂(D-101)柱層析，先后用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，經濃縮得到甲醇部分(228.4g)。得到的乙酸乙酯部分和甲醇部分分別過減壓柱分成若干餾分，再經硅膠柱、反相硅膠柱和葡聚糖凝膠柱反復柱層析得到化合物毒見血封喉苷A(14.2g)，a-見血封喉苷(7.96g)和見血封喉爪哇糖苷(8.46g)。實施例2:強心苷類化合物毒見血封喉苷A(toxicariosideA)，a-見血封喉苷(cc-antiarin),見血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的結構鑒定利用光譜技術，包括紫外、紅外、核磁共振及高分辨質譜分析，鑒定了實施例1中的強心苷類化合物毒見血封喉苷，oc-見血封喉苷，見血封喉爪哇糖苷的結構。首次運用2D-NMR技術對某些化合物，如見血封喉爪哇糖苷等糖上的13C-NMR，^-NMR數據進行了歸屬。(見附表1、2)實施例3:強心苷類化合物毒見血封喉苷A(toxicariosideA)，oc-見血封喉苷(a-antiarin)，見血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)的體外抑瘤實驗采用MTT法測試了強心苷類化合物毒見血封喉苷A，oc-見血封喉苷，見血封喉爪哇糖苷對人體的肝癌細胞SMMC-7721、胃癌細胞SGC-7901、乳腺癌細胞MCF-7、慢性骨髓性白血病細胞K562的體外抑瘤活性(結果見附表3)。活性測試方法如下實驗設陰性對照組(水)、DMSO溶劑對照組、陽性對照組(絲裂霉素C)和8個不同濃度(0.8,1.6,3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待測樣品，每個濃度設2個平行。收集對數生長期細胞，血球計數板計數，按每孔4500個癌細胞量接種于96孔平底細胞培養板中，置于5%(302、濕度卯％以上、37'C溫箱中培養。24h后取出加入一定量的待測樣品，繼續培養3d后取出置于顯微鏡下觀察每孔細胞形態，記錄細胞形態變化情況，接著每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡鹽溶液PBS)5037'C反應4h后，將細胞培養液吸出，每孔加入100nLDMSO將Formazane充分溶解，將細胞培養板置于MK3酶標儀上，用570nm波長測各孔的吸光度(A)，按下列公式求生長抑制率。生長抑制率(％)=(1——用鄉TOAM陰性對照組平均A值7以樣品濃度為橫坐標，以抑制率為縱坐標，作圖并求出抑制率為50%時樣品的濃度(1<350)，樣品活性結果即以半數抑制濃度(ICso)表示。實施例4:強心苷類化合物毒見血封喉苷A(toxicariosideA)10g與微晶纖維素80g及硬脂酸鎂10g混合，混合物用單沖壓片機打成直徑5mm，重量200mg的片劑。本片劑中每片含毒見血封喉苷A20mg。結合病癥，每次l-2片，每日服用2-3次。實施例5:強心苷類化合物ot-見血封喉苷(a-antiarin)與見血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)各40g與乳糖110g及硬脂酸鎂10g混合，以每500mg填充膠囊。本膠囊劑中，每個膠囊含ct-見血封喉苷和見血封喉爪哇糖苷各100mg。結合病癥，每次l-2個，每日服用3-4次。附表l、實施例2中的毒見血封喉苷A,a-見血封喉苷，見血封喉爪哇糖苷的理化常數毒見血封喉苷A:白色針狀結晶，+0.24(c0.23，MeOH),UV(MeOH)Xmax216，296nm";IR(KBr)3401，2943,2890，1734，1638，1066cm";HRMS(CI，ammonia,140eV)m/z([M+l])+581.2953calc'dforC30H45Oii581.2949.a-見血封喉苷白色固體，[a]g-4.0(MeOH)，Mp238-240°，HRMS(CI,ammonia,140eV)m/z([M+l])+566.644calc'dforC30H44Ou566.273.見血封喉爪哇糖苷無色膠狀物質，[a]g+5.4(c,0.9in80%MeOH.)，Mp206-212°,HRMS(CI，ammonia,140eV)m/z([M+l])+580.671calc'dforC30H44Ou580.288.附表2、實施例2中的毒見血封喉苷A,(x-見血封喉苷，見血封喉爪哇糖苷的"C-NMR數據Position毒見血封喉苷A(inCD3OD)ot-見血封喉苷(inCD3OD)見血封喉爪哇糖苷(inCD3OD)119.117.819.2225.924.626.075.372.074.7437.636.137.9575.173.375.0635.831.635.3725.424.025.4842.1楊42.1937.335.137.21057.055.255.81131.534.531.51275.272.774.21355.854.057.01485.983.986.21532.630.532,61628.326.628.31746.844.946,8189.89.210.019209.8208.6209.820178.3176.9177.32175.473.375.422118.0116.2117.923177.3173.8178.3r102.199.498.22'82.569.281.83,75.470.7175.24,73.471.9670.85'72.172.768,76'16.717.819.6OMe61.357.0附表3、實施例1-3中的毒見血封喉苷A,ct-見血封喉苷，見血封喉爪哇糖苷體外抑瘤結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權利要求1、具有通式(I)的強心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的用途。通式(I)的強心苷類化合物的結構式(1)R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖(2-O-methyl-β-D-fucose)毒見血封喉苷A(toxicariosideA)(2)R＝6-去氧-β-D-古洛糖(6-deoxy-β-D-gulose)α-見血封喉苷(α-antiarin)(3)R＝6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖(6-deoxy-2-O-methyl-β-D-allose(javose))見血封喉爪哇糖苷(antiarojavoside)2、如權利要求l所述的強心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的用途，其特征在于釆用通式(I)的強心苷類化合物，以單體化合物或者選擇其中任意兩個或者多個單體以任意比例進行組合的復方形式，使之與適宜的賦形劑相結合，按照常規方法制成各種劑型在制備腫瘤治療藥物中的應用。3、如權利要求1所述的強心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的用途，其特征在于采用以單體化合物或者復方形式所制成的制劑，可用于制備治療包括肝癌、肺癌、腎癌、胃癌、鼻咽癌、膀胱癌、大腸癌、骨腫瘤、乳腺癌、子宮癌、口腔癌、膽癌、膽道癌、膽管癌、胰腺癌、卵巢癌、急性白血病、惡性淋巴瘤、腦瘤等多種癌癥疾病的藥物。全文摘要本發明涉及醫藥
技術領域：
，具體是具有通式(I)的強心苷類化合物在制備腫瘤治療藥物中的新用途，其中R＝2-O-甲基-β-D-海藻糖、6-去氧-β-D-古洛糖或6-去氧-2-O-甲基-β-D-阿洛糖。上述強心苷類化合物可利用多種常規分離手段從見血封喉中分離獲得或者通過合成以及半合成手段獲得。文檔編號A61K31/7048GK101156865SQ200710181278公開日2008年4月9日申請日期2007年10月26日優先權日2007年10月26日發明者干玉娟,戴好富,梅文莉申請人:中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所