專利名稱：：天然(端肽)胎盤膠原組合物的制作方法天然(端肽)胎盤膠原組合物1.在先相關申請本申請要求于2006年10月6日提交的美國臨時專利申請號60/850,131的權益，其通過全文引用并入本發明中。2.發明領域本發明涉及包含膠原，例如人胎盤膠原的組合物，制備該組合物的方法及其使用方法。3.發明背景膠原是在體內形成許多結構的蛋白質，所述組織包括腱、骨骼、牙齒和支持皮膚和內部器官的筋膜。膠原由三條鏈以三螺旋纏繞組成。其結構來源于三種氨基酸的重復。在螺旋中，每隔三個氨基酸就是甘氨酸，并且剩余的氨基酸中多數是脯氨酸或羥脯氨酸。膠原已經在商業上和臨床上經過一段時間的使用。目前，可以使用膠原替代或填充硬結締組織或軟結締組織，例如皮膚、腱、軟骨、骨和間質。固體膠原可以手術植入，且現在可獲得可注射的膠原制劑用于更方便的施用。目前，一些可注射的膠原組合物是可商購的，包括ZYDERM、ZYPLAST、COSMODERM⑧和COSMOPLAST。每種膠原組合物都具有特定的物理性質，所述性質可有利于或不利于其在特定技術中的使用。因此，本領域仍然需要具有其它物理性質的膠原組合物，從而擴展本領域熟練的執業醫師可獲得的組合物的選擇。4.發明概述本發明部分地基于發現膠原組合物可用于例如填充或替代哺乳動物的組織。在某些實施方案中，所述膠原組合物是用來自組織來源的主要高產的膠原來制備的。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物表現出減少的污染，例如被細胞和/或其它蛋白質污染物所污染。在本發明的某些實施方案中，本發明的膠原組合物表現出有利的低毒性。在本發明的某些實施方一方面，本發明提供了包含堿處理、去垢劑處理的端肽膠原的組合物。已發現即使采用哺乳動物組織作為起始來源，此類組合物可以用相對較少的步驟很容易的制備。本發明中提供的某些組合物基本上不含細胞碎片、亞細胞碎片和/或污染蛋白質，例如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、細胞因子和生長因子。本發明中才是^^的某些組合物包含高膠原含量。在某些實施方案中，當與組合物中的蛋白質總量相比時，組合物包含至少90%膠原。在某些實施方案中，所述膠原組合物基本上不含層粘連蛋白和/或纖粘連蛋白(例如所述組合物包含少于各占干重1%的層粘連蛋白和/或纖祐連蛋白，或者不含可檢測的層粘連蛋白和/或纖粘連蛋白)。另一方面，發明提供了本發明的膠原組合物，例如包含大量干細胞的，堿處理、去垢劑處理的端肽膠原。在多個實施方案中，所述干細胞是胚胎干細胞、胚胎生殖細胞、間充質干細胞、骨髓來源的干細胞、造血祖細胞(例如來自外周血、胎兒血、胎盤血、臍帶血、胎盤灌流液等的造血干細胞)、成體干細胞、神經干細胞、肝臟干細胞、胰l泉干細胞、內皮干細胞、心臟干細胞、肌肉干細胞、脂肪干細胞等。在更特定的實施方案中，所述干細胞是胎盤干細胞。在更特定的實施方案中，所述胎盤干細胞是CD3《和/或CD200+。所述胎盤干細胞可以表達CDIO、CD73、CD105、CD200、HLA-G和/或OCT-4，并且缺少CD34、CD38或CD45的表達。所述胎盤干細胞還可以表達HLA-ABC(MHC-1)和HLA-DR。在另一特定的實施方案中，可以與本發明的組合物結合的干細胞是CD200+或HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述胎盤千細胞是CD73+、CD105+和CD200+。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞是CD200+和OCT-4+。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞是CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞是CD73+和CD105+，并且，當處于胎盤細胞群中時，在允許胚樣小體形成的條件下有利于形成一個或多個胚樣小體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞是OCT-4+，并且當處于胎盤細胞群中時，當在允許胚樣小體形成的條件下培養時，有利于在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一個或多個胚樣小體。在與干細胞結合之前或之后，包含干細胞的組合物可以#1制成任何形狀。在一實施方案中，所述組合物成型為層狀，例如干燥層狀，具有兩面，并且所述干細胞存在于所述面的至少一個上。在另一實施方案中，所述組合物;陂制成管狀，并且所述干細胞至少存在于管的內側面或外側面。在另一特定的實施方案中，所述干細胞附著在組合物上。在任何上述實施方案的特定的實施方案中，當與組合物接觸時，干細胞分泌IL-6、IL-8和/或MCP-1(單核細胞趨化性蛋白-1)。另一方面，本發明提供了制備堿處理、去垢劑處理的端肽膠原的方法。雖然胎盤組織的來源可以是任何哺乳動物，但在一些實施方案中使用了人胎盤。所述胎盤組織可以來自胎盤的任何部分，包括羊膜(無論是溶解的或不溶的或兩者都是的)、絨毛膜和臍帶，或者來自完整的胎盤。在某些實施方案中，所述胎盤膠原從除去臍帶后的完整人胎盤中制備。在某些實施方案中，所述方法包括胎盤組織的滲透壓沖擊。雖然并非意在通過任何特定的操作理論來束縛，據信滲透壓沖擊可以裂解組織中的細胞，從而有助于除去細胞、細胞組分和血液組分。滲透壓沖擊步驟可以產生具有有利純度的本發明的膠原組合物。可以在本領域技術人員已知的任何滲透壓沖擊條件下進行滲透壓沖擊。在特定的實施方案中，通過在水溶液中培養后在高鹽條件下培養來進行滲透壓沖擊。根據本領域技術人員的判斷可以重復進行培養。在某些實施方案中，重復兩次或多次。在滲透壓沖擊后，可以用去垢劑處理獲得的膠原組合物。所述去垢劑可以是本領域技術人員已知的，能夠溶解組織來源的蛋白質和脂類細胞組分的任何去垢劑。在某些實施方案中，所述去垢劑是離子型的，例如十二烷基疏酸鈉或脫氧膽酸。在某些實施方案中，所述去垢劑是非離予型的，例如TWEEN⑧去垢劑或TRITON-X去垢劑。在某些實施方案中，所述去垢劑是兩性離子的。在某些其它實施方案中，所述去垢劑是十二烷基硫酸鈉(SDS)。在某些實施方案中，所述膠原組合物在對本領域技術人員顯而易見的條件下與去垢劑接觸，從而溶解組織來源的細胞或亞細胞組分。可以根據本領域技術人員的判斷重復去垢劑處理。在某些實施方案中，重復兩次或多次。在某些實施方案中，可以在堿性條件下處理膠原組合物。例如，在某些實施方案中，所述膠原組合物可以與堿性溶液接觸，例如氨水、氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液。在某些實施方案中，在約0.5M氫氧化鈉中培養膠原組合物一段時間，所述時間足以產生本發明的組合物。根據本領城技術人員的判斷可以重復石咸處理。在某些實施方案中，重復兩次或多次。在某些實施方案中，可以以任意順序進行所述方法的步驟。在某些實施方案中，在任何去垢劑處理或堿性條件下處理前，進行至少一個滲透壓沖擊步驟。在某些實施方案中，在去垢劑處理前進行至少一個滲透壓沖擊步驟，其后進行》威處理。在其它方面，本發明提供了通過向需要的哺乳動物施用本發明的膠原組合物，來填充或替代哺乳動物組織的方法。在某些實施方案中，所述哺乳動物是人。可以根據本領域技術人員已知的任何技術來施用膠原組合物。在某些實施方案中，通過注射來施用膠原組合物。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物的流變特性是有利的。在某些實施方案中，所述膠原組合物可以根據美國專利公開號2004/0048796中描述的方法作為胞外基質使用，其內容通過全文引用并入本發明中。在另一方面，本發明提供了用于向需要的哺乳動物施用本發明的膠原組合物的試劑盒。所述試劑盒通常包括被置于包裝內的本發明的膠原組合物以方便地向本領域熟練的醫師分配。所述試劑盒還可以包括向哺乳動物施用本發明的膠原組合物的裝置。所述裝置可以是本領域技術人員已知的、用于施用膠原組合物的任何裝置，例如注射器、注射器和針頭、插管等。在某些實施方案中，所述裝置采用本發明的膠原組合物預裝填。在另一方面，本發明提供了促進傷口愈合的方法，包括使傷口與本發明的膠原組合物4妄觸，其中所述接觸使與未接觸組合物的傷口相比，傷口的外觀產生了可檢測的顯著改善。在特定的實施方案中，所述方法還包括將所述傷口與大量的干細胞接觸。在更特定的實施方案中，所述干細胞與所述傷口的接觸與所述組合物與所述傷口的接觸是分開的。在另一特定的實施方案中，所述組合物包含所述干細胞。在另一特定的實施方案中，所述組合物制成具有兩面的層狀，所述干細胞存在于所述面的至少一個上。在另一特定的實施方案中，所述干細胞附著在組合物上。在上述實施方案的特定的實施方案中，當與組合物^接觸時，干細胞分泌IL-6、IL-8和/或MCP-1(單核細胞趨化性蛋白-1)。在更特定的實施方案中，所述干細胞是胎盤干細胞。在更特定的實施方案中，所述胎盤干細胞是CD34—和/或CD200+。在另一特定的實施方案中，所述傷口是小腿潰瘍。小腿潰瘍可以是靜脈小腿潰瘍、動脈小腿潰瘍、糖尿病小腿潰瘍或褥瘡小腿潰瘍。在另一特定的實施方案中，所述組合物用作傷口填充劑。在另一方面，本發明提供了制造組合物的方法，包括將本發明的膠原組合物與大量的干細胞接觸。在一實施方案中，本方法包括允許至少一些所述大量的干細胞附著在所述組合物上。在另一實施方案中，本方法包括允許所述干細胞在所述組合物上增殖。在特定的實施方案中，本方法包括允許所述干細胞在所述組合物上增殖到匯合。在某些實施方案中，當與所述組合物接觸時，所述干細胞產生可檢測量的IL-6、IL-8和/或MCP-1。在另一特定的實施方案中，本方法包括在所述干細胞已經沉積了可檢測量的至少一種胞外基質蛋白后，使組合物去細胞化。在更特定的實施方案中，所述胞外基質蛋白是膠原蛋白(例如I、II、III或IV型)、纖粘連蛋白或彈性蛋白。根據上文和下列章節中的詳細描述，本發明的組合物、工藝、方法和試劑盒具有向需要的哺乳動物使用膠原組合物的用途。5.圖l:流程圖表示了分離胞外基質(ECM)的方法。圖2A:來自生長在膠原組合物上的胎盤干細胞的IL-6分泌，所述膠原組合物通過不同的方法制造。橫座標組合物類型和細胞在組合物上生長的時間的特定生長條件。縱座標每毫升每1000ECM結合細胞的皮克。NC二無纟田月包。Pureco卜純化的膠原。TCPS二組織培養聚苯乙烯。圖2B:來自生長在膠原組合物上的胎盤干細胞的IL-8分泌，所述膠原組合物通過不同的方法制造。橫座標組合物類型和細胞在組合物上生長的時間的特定生長條件。縱座標每毫升每1000ECM結合細胞的皮克。NC二無纟田月包。Pureco卜純化的膠原。TCPS二組織培養聚苯乙烯。圖2C:來自生長在膠原組合物上的胎盤干細胞的MCP-1分泌，所述膠原組合物通過不同的方法制造。橫座標組合物類型和細胞在組合物上生長的時間的特定生長條件。縱座標每毫升每1000ECM結合細胞的皮克。NC二無細胞。Pureco卜純化的膠原。TCPS二組織培養聚苯乙雄。6.本發明的詳細描迷6.1定義如本發明中使用的，下列術語具有下列含義術語"膠原"指本領域技術人員已知的任何膠原。術語"端肽膠原"指本領域技術人員識別的一類膠原類型，含有一個或多個端肽區域。術語"非端肽膠原"指本領域技術人員識別的一類膠原類型，缺少一個或多個端肽區域。在某些實施方案中，可以通過下文詳細討論的蛋白酶消化除去端肽區域。本發明中使用的"生物相容性"或"生物可相容性"指是生物學相容的性質，其不產生毒性、致傷性、或不在活組織中產生免疫應答或排斥。當在體內使用人工材料時，對未知材料的身體應答是首要的考慮，因此，材料的生物相容性是此類材料中重要的設計考慮。本發明中使用的"無熱原"指材料經過檢測，發現含有少于或等于0.5EU/ml的熱原>例如內毒素。1EU是根據參考對照，每毫升約0.1至0.2ng的內毒素。術語"個體"指動物，例如哺乳動物，包括但不限于靈長類(例如人)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔子、大鼠、小鼠等。在某些實施方案中，個體是人。6.2本發明的實施方案本發明涉及膠原組合物、制備膠原組合物的方法、包含膠原組合物的試劑盒及其使用方法。6.2.1本發明的膠原組合物在一實施方案中，本發明提供了用于例如填充或替代哺乳動物的組織的膠原組合物。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物具有有利的耐久性、可注射性和流變性質。在某些其它實施方案中，本發明提供了這樣的膠原組合物，所述組合物具有空間填充性質，和例如有利于和支持與組合物接觸的組織中的脈管生長。在某些其它實施方案中，本發明的組合物是空氣干燥的或冷凍干燥的，并模鑄成有用的構型。在某些其它實施方案中，本發明的組合物是不溶于水的。在本發明的該方面中，所述膠原可以是本領域技術人員已知的任何膠原。在某些實施方案中，所述膠原是哺乳動物的膠原。在特定的實施方案中，所述膠原是人、牛、綿羊、羊、大鼠或袋鼠的膠原。在某些非哺乳動物的實施方案中，所述膠原是魚膠原。雖然膠原可以來自任何這類來源，人膠原是特別的實例。所述膠原可以來自來源的任何部分。有效的來源包括牛皮膚、小牛皮膚、大鼠尾、袋鼠尾和魚皮。在特定的實施方案中，所述膠原是胎盤膠原，例如牛胎盤膠原、綿羊胎盤膠原或人胎盤膠原。一個實例是人胎盤膠原。所述膠原可以是本領域技術人員已知的任何類型的膠原，或此類膠原的混合物。在某些實施方案中，所述膠原位于包含一種或多種類型的膠原的膠原組合物中。特定的膠原包括I型膠原、II型膠原、III型膠原和IV型膠原。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物包含特定量的這類膠原。特定的組合物包括主要量的i型膠原，同時也富含iv型膠原。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物包含介于1%和15%之間的IV型膠原，介于2%和13%之間的IV型膠原，介于3%和12%之間的IV型膠原或介于4%和11%之間的IV型膠原。與此同時，所述膠原組合物可以包含至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%的I型膠原。例如，所述組合物可以包含介于70%和95%之間的I型膠原，介于74%和92%之間的I型膠原或介于80%和90%之間的I型膠原。本發明的相同的膠原組合物可以包含一定量的III型膠原，例如多達1%、多達2%、多達3%、多達4%、多達5%、多達6%或多達7%的III型膠原。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物包含介于2%和15%之間的IV型膠原，介于70%和95%之間的I型膠原和達6%的III型膠原。在某些實施方案中，除膠原外，膠原組合物還包含一種或多種胞外基質蛋白或組分。在特定的實施方案中，所述膠原組合物包含纖粘連蛋白、層粘連蛋白、彈性蛋白和/或糖胺聚糖。在另一特定的實施方案中，所述膠原組合物包含不可檢測的纖粘連蛋白，或不可檢測的層粘連蛋白。在另一特定的實施方案中，所述膠原組合物包含可檢測量的纖粘連蛋白和層粘連蛋白。在另一特定的實施方案中，所述膠原組合物包含占干重約5%或更多的彈性蛋白。在另一特定的實施方案中，所述膠原組合物包含占干重約10%或更多的彈性蛋白。在另一特定的實施方案中，所述膠原組合物包含占干重不超過5%的彈性蛋白。本發明的這類膠原組合物可以通過本領域技術人員顯而易見的任何工藝獲得。下列章節中將詳細描述特定的工藝。在某些實施方案中，本發明的這一方面的膠原組合物是交聯的。在某些實施方案中，膠原組合物可以是根據本領域技術人員已知的方法，與交聯劑例如戊二醛交聯的。此類方法專門描述在例如美國專利號4,852,640、5，428,022、5,660,692和5,008,116，以及McPherson等人，1986,JBiomedicalMaterialsRes.20:79-92中，其內容通過全文引用的方式并入本發明中。其它示例性的交聯劑及其用于交聯膠原的使用方法描述在美國專利號5,880,242和6,117,979中，以及在Zeeman等人，2000,JBiomedMaterRes.51(4):541-8，vanWachem等人,2000,JBiomedMaterRes.53(l):18-27，vanWachem等人，1999,JBiomedMaterRes.47(2):270陽7，Zeeman等人，1999,JBiomedMaterRes.46(3):424-33，Zeeman等人，1999,Biomaterials20(10):921-31中，其內容通過全文引用的方式并入本發明中。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物是與1,4-丁二醇二環氧甘油醚交聯的。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物是與京尼平(genipin)交聯的。京尼平是非毒性的、天然存在的交聯劑。其可以從其母本化合物京尼平香中獲得，京尼平脊可以從梔子(Gan/e"/flyosw/"o/des)的果實中分離。京尼平也可以從ChallengeBioproductsCo.,Ltd.,7Alley25，Lane63,TzuChiangSt.404TaichungTaiwanR.O.C.,Tel886-4-3600852處商購獲得。京尼平作為交聯劑的用途詳細描述在美國專利申請公開號20030049301中，其通過全文引用的方式并入本發明中。在其它實施方案中，膠原組合物可以與其它本領域技術人員已知的交聯劑交聯。在其它實施方案中，膠原組合物可以用本領域技術人員已知的任何酶-介導的交聯技術進行交聯。例如，本發明的膠原組合物可以通過轉谷氨酰胺酶，根據本領域技術人員已知的方法進行交聯。轉谷氨酰胺酶催化膠原的谷氨酸和賴氨酸殘基之間的酰胺交聯鍵的形成。此類方法描述在例如Orban等人，2004,J.BiomedicalMaterialsRes.68(4):756-62中，其通過全文引用并入本發明中。頁本發明的膠原組合物可以與單交聯劑或與交聯劑的混合物交聯。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物包含與戊二醛交聯的堿處理的、去垢劑處理的人胎盤膠原。6.3本發明的膠原組合物的制備工藝另一方面，本發明提供了制備本發明的膠原組合物的方法。所述方法可用于例如制備上述本發明的膠原組合物。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物是根據本發明描述的方法從人胎盤中制備的。從人胎盤制備膠原組合物的初始步驟詳細描述在美國專利號5,428,022、5,660,692和5,008,116中，以及在美國專利申請公開號20040048796和20030187515中，其通過全文引用并入本發明中。胎盤組織，可以來自胎盤的任何部分，包括羊膜(不論是可溶的、不可溶的或是二者皆有)、絨毛膜、臍帶或來自完整的胎盤。在某些實施方案中，膠原組合物是從無臍帶的完整人胎盤中制備的。胎盤囊由通過疏松結締組織緊密連接的兩層組成。已知是羊膜層和絨毛膜層。羊膜層是兩層中的最內層，與包圍胎兒的羊水直接接觸，二者共同形成羊膜囊。羊膜層是無血管的，并由覆蓋在基膜上的單層柱狀上皮排列而成，其測量厚度為30-60微米。絨毛膜是囊的外層，是高度細胞化的。脈管樹來源于胎盤并沿絨毛膜層延伸至胎盤膜。絨毛膜層通過疏松結締組織與羊膜層分隔并結合，兩層測量為120-180微米。胎盤膜具有高度負載都多醣的膠原基質，并且其被認為主要作為發育中的胎兒的保護性嚢起作用。所述膜還維持了針對母體循環系統中存在的感染劑和免疫劑的屏障。胎盤膜同時具有主動和被動轉運。大部分小分子和蛋白質可以自由的穿過，但是大型蛋白質例如IgM就不能穿過該基膜。在特定的實施方案中，在新生兒分娩后盡可能快的采集本發明方法中使用的胎盤。在另一特定的實施方案中，在正常的健康嬰兒剖腹產分娩后立刻采集胎盤。有利的，可以在無菌條件下采集胎盤。在某些實施方案中，在任何其它處理前，可以將胎盤自分娩時刻起儲存48小時。在其它實施方案中，在任何其它處理前，胎盤自分娩時刻起儲存了最多5天。有利的，胎盤、臍帶和臍帶血可以從分娩室或出生室轉移到另一個地點，例如實驗室，用于進一步處理。可以在無菌的轉移裝置中轉移胎盤，例如無菌袋或容器，任選的是隔熱的。在某些實施方案中，胎盤儲存在室溫下直至進一步處理前。在其它實施方案中，冷凍胎盤直至進一步處理前，即儲存在約2至8t的溫度下。在其它實施方案中，在進一步處理前，胎盤在無菌條件下儲存達5天。在特定的實施方案中，如本領域技術人員已知的，在無菌條件下處理和加工胎盤。實驗室可以裝備HEPA過濾系統(根據超凈室分級的定義，具有級別1000或更高)。在特定的實施方案中，在使用實驗室來進行本發明的方法前，啟動HEPA過濾系統至少1小時。在某些實施方案中，胎盤是排盡血的，即完全除盡分娩后剩余的臍帶血。在某些實施方案中，胎盤是70%放血的、80%放血的、90%放血的、95%放血的或99%放血的。本發明涵蓋了利用本領域技術人員已知的標準技術，在分娩前對預產婦進行可傳播疾病的篩選，所述疾病包括但不限于HIV、HBV、HCV、HTLV、梅毒、CMV和其它已知污染胎盤組織的病毒性病原體。有利的，所述方法可用于按照聯邦藥品管理局制定的管理條例來篩選可傳播的疾病。預產婦可以在分娩前一個月內，特別是分娩前兩周內，在分娩前一周內，或在分娩時進行篩選(例如采集用于診斷目的的血樣)。僅僅采用從上述病原體的檢測陰性或無反應的母親供體中收集的組織用于生產本發明的膠原組合物。有利的，可以獲得胎盤膜供體的完整的父系史、醫療史和社會史，包括例如詳細的家族史。在某些實施方案中，所述供體采用本領域技術人員已知的標準的血清學和細菌檢測來篩選。可鑒別病原體的任何實驗或診斷檢測都包含在本發明方法的范圍內，但優選的是結合了高精確度和高通量的檢測。在特定的實施方案中，本發明涵蓋了利用本領域技術人員已知的用于抗原和/或抗體的標準技術篩選供體。抗原和抗體的非限制性實例包括抗體篩選(ATY)、丙氨酸氨基轉移酶篩選(ALT)、肝炎核心抗體(核酸和ELISA);乙肝表面抗原、丙肝病毒抗體、mV-l和HIV-2、HTLV-1和HTLV-2、梅毒檢觀'(RPR)、CMV抗體檢測、和丙肝和HIV檢測。使用的檢測可以是本領域技術人員已知的基于核酸的檢測或基于ELISA的檢測。本發明還涵蓋了利用本領域技術人員已知的標準方法檢測來自新生兒的臍帶的血液(參見例如Coto畫lo等人，2002,Clin.Lab.48(56):27181;Maine等人，2001,ExpertRev.Mol.Diagn.,1(1):1929;Nielsen等人，1987,JClin.Microbiol.25(8):140610;其通過全文引用并入本發明中)。在一實施方案中，利用本領域技術人員已知的標準方法，對來自新生兒的臍帶的血液檢測其細菌病原體(包括但不限于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌)和真菌。在特定的實施方案中，利用本領域技術人員已知的標準方法確定新生兒的臍帶血液的血型和Rh因子。在另一實施方案中，利用本領域技術人員已知的標準方法，從新生兒的臍帶血液中獲得不同的CBC。在另一實施方案中，利用本領域技術人員已知的標準方法，從新生兒的臍帶血液中獲得好氧菌培養物。只有從具有正常限度內的CBC(例如沒有與正常水平的總異常或偏差)，血清學和細菌學檢測陰性，以及感染性疾病和污染物測試陰性或無反應性的供體中收集的組織，才用于生產本發明的膠原組合物。一旦獲得人胎盤組織，就可以根據下列步驟進行處理，從而制備本發明的膠原組合物。雖然下列步驟是以時間順序表示的，但是本領域技術人員可以認識到一些步驟的順序可以互換而不超過本發明的范圍。此外，根據本發明的理想的膠原組合物的性質，某些步驟表示為可任選的。通常認為對本領域技術人員顯而易見的技術，例如蛋白質組合物的緩沖液交換、沉淀、離心、重懸、稀釋和濃縮是不需要詳細解釋的。下文實施例中描述了示例性的制備過程。胎盤的任何部分，或完整的胎盤，都可以在本發明的方法中使用。在某些實施方案中，從完整的胎盤制備膠原組合物。然而，在某些實施方案中，可以從胎盤的絨毛膜或羊膜部分獲得膠原組合物。在某些實施方案中，本發明涵蓋了處理胎盤膜使臍帶與胎盤分離，以及從絨毛膜分離羊膜。在特定的實施方案中，在切碎胎盤膜之前，從絨毛膜上分離羊膜。羊膜和絨毛膜的分離可以從胎盤膜的邊緣開始進行。在另一實施方案中，利用鈍性分離來分離羊膜和絨毛膜，例如用手指套。在羊膜從絨毛膜和胎盤上分離后，使用例如剪刀切斷臍帶柄，并與胎盤分離。在某些實施方案中，當在不撕裂組織的條件下就不能分離羊膜和絨毛膜時，本發明還涵蓋了將羊膜和絨毛膜作為一片從胎盤上切離，然后再將其剝離。羊膜、絨毛膜或完整的胎盤在用于本發明的方法之前是可以儲存的。儲存技術對本領域技術人員是顯而易見的。示例性的儲存技術描述在美國專利申請公開號20040048796和20030187515中，其通過全文引用并入本發明中。在本發明的某些方法中，胎盤組織是去細胞化的。胎盤組織可以根據本領域技術人員已知的任何技術去細胞化，例如在美國專利申請公開號20040048796和20030187515中詳細描述的，其通過全文引用并入本發明中。在某些實施方案中，胎盤組織進行了滲透壓沖擊。滲透壓沖擊步驟可以產生具有有利純度的本發明的膠原組合物。雖然并非意在被任何特定操作理論約束，據信滲透壓沖擊可以破壞組織中的細胞，從而有利于除去細胞、細胞組分和血液組分。根據本領域技術人員的判斷，滲透壓沖擊可以是任何凈化步驟的補充，或者可以是唯一的凈化步驟。可以采用本領域技術人員已知的任何滲透壓沖擊條件來進行滲透壓沖擊。此類條件包括，將組織培養在高滲透勢、或者低滲透勢、或者交替的高滲和低滲透勢的溶液中。高滲透勢溶液可以是本領域技術人員已知的任何高滲透勢溶液，例如包含NaCl(例如0.2-1.0M)、KC1(例如:0.2-1.0或2.0M)、疏酸銨、單糖、二糖(例如20%蔗糖)、親水聚合物(例如聚乙二醇)、甘油等中的一種或多種的溶液。在一些實施方案中，氯化鈉溶液是至少0.25M、0.5M、0.75M、1.0M、1.25M、1.5M、1,75M、2M或2.5MNaCl。在一些實施方案中，氯化鈉溶液是約0.25-5M,約0.5-4M,約0.75-3M，或約1.0-2.0MNaCl。低滲透勢溶液可以是本領域技術人員已知的任何低滲透勢溶液，例如水，如根據本領域技術人員已知的任何方法去離子化的水。在一些實施方案中，滲透壓沖擊溶液包含具有低于50mMNaCl的滲透勢的水。在某些實施方案中，滲透壓沖擊是在氯化鈉溶液中之后再使用水溶液。在某些實施方案中，氯化鈉溶液是至少0.5MNaCl。在某些實施方案中，氯化鈉溶液是至少0.75MNaCl。在一些實施方案中，氯化鈉溶液是至少1.0MNaCl。在一些實施方案中，氯化鈉溶液是至少1.5MNaCl。在一些實施方案中，氯化鈉溶液是至少2.0MNaCl。在一些實施方案中，在一次0.5MNaCl處理后再用水洗滌。在某些實施方案中，在兩次0.5MNaCl處理后再用水洗滌。在一些實施方案中，在一次2MNaCl處理后再用水洗滌。根據本領域技術人員的判斷可以重復這些順序。在一些實施方案中，從滲透壓沖擊所獲得的膠原組合物可以用去垢劑來培養。雖然并非意在被任何操作理論約束，據信去垢劑可以破壞組合物中可能存在的細胞、細胞膜、亞細胞膜和細胞碎片。去垢劑可以是本領域技術人員已知的任何能夠破壞細胞膜或亞細胞膜的去垢劑。在某些實施方案中，去垢劑是離子型的。例如，在某些實施方案中，去垢劑是脫氧膽酸鹽或十二烷基硫酸鈉。在下列有效的實例中，示例性的去垢劑處理使用脫氧膽酸。在某些實施方案中，去垢劑是兩性離子型的。在某些實施方案中，去垢劑是非離子型的。例如，在某些實施方案中，去垢劑可以是TWEEN⑧去祐劑，例如TWEEN-20，或tritonX去祐劑，例如tritonX100。在本領域技術人員判斷適合從組合物中除去不需要的組分的條件下，使膠原組合物接觸去垢劑。下列有效的實例將提供示例性條件。根據本領域技術人員的判斷，可以在任何溫度下進行去垢劑處理。在某些實施方案中，在約0-30。C，約5-25t，約5-2(TC，或約5-15。C下進行去垢劑處理。在某些實施方案中，在約0。C，約5t，約1(TC，約15。C，約20°C，約25。C或約30。C下進行去垢劑處理。在特定的實施方案中，在約5-15t下進行去垢劑處理。根據本領域技術人員的判斷，去垢劑處理可以進行合適的時間。在某些實施方案中，去祐劑處理可以進行約1-24小時，約2-20小時，約5-15小時，約8-12小時，或約2-5小時。在某些實施方案中，從去垢劑處理所獲得的膠原組合物可以在堿性條件下培養。雖然并非意在被任何操作理論約束，據信堿處理可以除去可能污染組合物的病毒顆粒。在某些實施方案中，堿洗滌用于除去內毒素。堿性條件可以是本領域技術人員已知的任何堿性條件。特別是可以使用已知除去病毒顆粒的在任何pH的任何堿。用于堿處理的特定的堿包括生物相容性的石咸、揮發性^喊和本領域技術人員已知的、可以從膠原組合物中簡單且安全的除去的堿。堿可以是濃度為例如0.2-1.0M，本領域技術人員已知的任何有機石威或無機;威。在某些實施方案中，堿選自氨水、氫氧化鉀和氫氧化鈉。在某些實施方案中，在氫氧化鈉溶液中進行^f成處理。氫氧化鈉溶液可以是0.1MNaOH、0.25MNaOH、0.5MNaOH或1MNaOH。在特定的實施方案中，在O.lM或0.5MNaOH中進行堿處理。根據本領域技術人員的判斷，可以在任何溫度下進行堿處理。在某些實施方案中，在約0-30°C，約5-25°C,約5-20°C，或約5-15°C下進行石威處理。在某些實施方案中，在約0°C，約5°C，約10°C,約15°C，約20°C，約25t或約30。C下進行堿處理。在特定的實施方案中，在約5-15。C下進行石威處理。根據本領域技術人員的判斷，堿處理可以進行合適的時間。在某些實施方案中，堿處理可以進行約1-24小時，約2-20小時，約5-15小時，約8-12小時，或約2-5小時。可以使用不同的去垢劑或NaOH洗滌步驟來產生多種不同的終ECM材料。例如，在某些實施方案中，可以用約0.1M、0.2M、0.3M、0.4M或約0.5MNaOH處理含有膠原的組織約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或約24小時。在某些其它實施方案中，本發明的膠原組合物是不用堿處理生產的。當所述方法用于胎盤組織時，與使用包括i成處理的方法生產的膠原組合物相比，省略堿處理步驟將導致膠原組合物含有相對較多量的彈性蛋白、纖粘連蛋白和/或層粘連蛋白。在某些實施方案中，膠原組合物可以被干燥。干燥有利于膠原組合物的儲藏和包裝。干燥還可以使細胞組分更易于從組合物中除去。此外，在任何上述步驟后，可以在后續步驟前干燥膠原組合物。可以根據對本領域技術人員顯而易見的任何干燥技術迸行干燥。美國專利公開號2004/0048796中描述了有效的干燥技術，其內容通過全文引用并入本發明中。示例性的干燥技術包括冷凍干燥、真空干燥、加熱(例如低于約50°C)冷凍干燥，如下列有效實例中所示。在某些實施方案中，可以在無菌條件下進行任何上述步驟。在特定的實施方案中，在無菌條件下進行堿處理和所有后續步驟。在其它實施方案顯而易見的技術來無菌化。在某些實施方案中，本發明提供了包括上述的滲透壓沖擊、冷凍干燥、去培劑處理、水洗滌、冷凍干燥、堿處理、水洗滌和冷凍干燥步驟的方法。在某些實施方案中，這些步驟是順序進行的。在某些實施方案中，去垢劑是1%脫氧膽酸。在某些實施方案中，堿處理是0.5NNaOH處理4小時。在某些實施方案中，重復第一次水洗滌(共兩次洗滌)。在某些實施方案中，第二次水洗滌重復兩次(共三次水洗滌)。在某些實施方案中，去祐劑是1%脫氧膽酸，堿處理是0.5NNaOH處理4小時，重復第一次水洗滌(共兩次洗滌)且第二次水洗滌重復兩次(共三次水洗滌)。在某些實施方案中，此類方法可以^是^洪包含約0.59%糖胺聚糖、約3.5%彈性蛋白、少量或無纖粘連蛋白，以及少量或無層粘連蛋白的組合物。在某些實施方案中，本發明提供了包括上述的滲透壓沖擊、堿處理和水洗滌步驟的方法。在某些實施方案中，這些步驟是順序進行的。在某些實施方案中，i威處理是0.5NNaOH處理4小時。在某些實施方案中，此類方法可以提供包含約0.28%至約0.38%糖胺聚糖、約3.2%至約4.7%彈性蛋白、少量或無纖粘連蛋白，以及少量或無層粘連蛋白的組合物。在某些實施方案中，本發明提供了包括上述的滲透壓沖擊、去垢劑處理和水洗滌步驟的方法。在某些實施方案中，這些步驟是順序進行的。在某些實施方案中，去垢劑是1%脫氧膽酸。在某些實施方案中，此類方法可以提供包含約0.4%糖胺聚糖、約12%彈性蛋白、約0.6%纖粘連蛋白，以及約0.16%層粘連蛋白的組合物。6.3.1任選的其它處理在某些實施方案中，本發明的膠原組合物可用作無端肽(atel叩eptide)膠原組合物的來源。無端肽膠原組合物可用于本領域技術人員顯而易見的無端肽膠原的任何用途。在此類實施方案中，膠原組合物可與能夠從膠原中部分或完全除去端肽的酶接觸。所述酶可以是本領域技術人員已知的、能夠從膠原中除去端肽的任何蛋白水解酶。在某些實施方案中，所述酶是胃蛋白酶或木瓜蛋白酶。通常，所述酶在本領域技術人員已知的、適合除去端肽的條件下接觸月史原組合物。用除去端肽的酶處理膠原組合物的方法詳細描述在美國專利號4,511,653、4,582,640、5,436,135和6,548,077中，其內容通過全文引用并入本發明中。通常，所述酶在本領域技術人員已知的、適合除去端肽的條件下接觸膠原組合物。此類條件包括例如，在合適的pH、合適的酶濃度、在合適的溶液體積、合適的溫度下，使酶與膠原組合物接觸合適的時間。根據本領域技術人員的判斷，膠原組合物可以在低pH條件下與酶接觸。在某些實施方案中，膠原組合物在pH約1-3或約2-3下接觸胃蛋白酶。在某些實施方案中，在升高的溫度下使酶接觸膠原組合物。雖然并非意在被任何操作理論約束，據信升高的溫度可以提高最終膠原組合物中的I型膠原的產量。在某些實施方案中，膠原組合物在約在約15-40°C，約20-35°C,約25-30。C，約20-30°C或約23-27°C下與胃蛋白酶接觸。在特定的實施方案中，膠原組合物在約23-27。C下與胃蛋白酶接觸一段足以除去端肽的時間。根據本領域技術人員的判斷，膠原組合物與酶接觸一段足以除去端肽的時間。在某些實施方案中，膠原組合物與胃蛋白酶接觸至少5、10、15、20、25或30小時。在某些實施方案中，其與胃蛋白酶接觸至少約5-30小時、約10-25小時、或約20-25小時。在某些實施方案中，其與胃蛋白酶接觸約8、16、24或32小時。根據本領域技術人員的判斷，膠原組合物與適合除去端肽的量的酶接觸。在某些實施方案中，約0.1g、0.5g、l.Og、2.0g或5.0g胃蛋白酶/kg冷凍胎盤與膠原組合物接觸。在其它實施方案中，約0.1g、0.5g、1.0g、2.0g或5.0g胃蛋白酶/胎盤與膠原組合物接觸。在某些實施方案中，膠原組合物與約0.1-10.0g/L、約0.5-5g/L、約1-2.5g/L或約0.5-1.5g/L胃蛋白酶接觸。在某些實施方案中，膠原組合物與約O.lg/L、約0.2g/L、約0.5g/L、約1.0g/L、約2.0g/L、5g/L或10g/L胃蛋白酶接觸。在特定的實施方案中，膠原組合物與約0.5-1.0g/L胃蛋白酶在pH約2-3的乙酸溶液中，在約23°C-27°C下接觸約16-24小時。根據本領域技術人員的判斷，膠原組合物以合適的溶液體積:胎盤比與酶接觸以除去端肽。觀察到與胎盤的高體積比可以使胃蛋白酶的效果最大化。在某些實施方案中，每個胎盤使用約1、2、4或8倍體積的乙酸溶液。在特定的實施方案中，每個胎盤使用約2倍體積的乙酸溶液。如果需要，本發明的膠原組合物還可以通過纖絲化(fibrillation)進一步處理。可以通過本領域技術人員已知的纖絲化膠原的任何技術來進行纖絲化。膠原組合物的纖絲化詳細地描述在美國專利號4,511,653、4,582,640和5,436,135中，其內容通過全文引用并入本發明中。如果需要，在纖絲化前，可以根據標準技術濃縮膠原組合物。當需要時，本發明的膠原組合物可以是交聯的。在某些實施方案中，在交聯前纖絲化膠原組合物。可以使用本領域技術人員已知的任何交聯劑交聯，例如上述章節中討論的交聯劑。在某些實施方案中，交聯劑可以是戊二醛，可以根據本領域技術人員已知的戊二醛交聯膠原的方法進行交聯。在其它實施方案中，交聯劑可以是1,4-丁二醇二環氧甘油醚或京尼平。在特定的實施方案中，交聯劑是1，4-丁二醇二環氧甘油醚。在某些實施方案中，為了例如改善穩定性，交聯劑和膠原之間的共價鍵可被還原。可以通過將本發明的膠原組合物與本領域技術人員已知的任何還原劑接觸，來實施還原作用。在某些實施方案中，還原劑是硼氬化鈉、亞疏酸氫鈉、p-巰基乙醇、巰基乙酸、巰乙胺、千硫醇、甲苯疏酚、二疏蘇糖醇或磷化氫例如三丁基氧化膦。硼氫化鈉是有效的實例。在某些實施方案中，在用還原劑還原前，膠原是交聯的。膠原組合物的還原作用和交聯的膠原組合物詳細地描述在美國專利號4,185,011、4,597,762、5,412,076和5,763,579中，其內容通過全文引用并入本發明中。在某些實施方案中，膠原組合物還可以根據本領域技術人員已知的方法，通過機械剪切進一步加工。示例性的剪切技術描述在美國專利號4,642,117中，其內容通過全文引用并入本發明中。在某些實施方案中，用本領域技術人員已知的組織勻漿器剪切膠原組合物。在某些實施方案中，可以采用步驟限制本發明的膠原組合物中的蛋白酶活性。添加劑例如金屬離子螯合劑，如1,10-菲咯啉和乙二胺四乙酸(EDTA)創造了不適宜多種蛋白水解酶的環境。提供蛋白酶例如膠原酶的亞優化條件可以幫助保護膠原組合物免受降解。通過配制組合物以消除或限制溶液中可用的鈣離子和鋅離子的量，可以實現蛋白酶的亞優化條件。多種蛋白酶在存在4丐離子和鋅離子的條件下是活化的，而在缺少鈣離子和鋅離子的環境中則喪失其大部分活性。有利的，膠原組合物在選定的pH條件、鈣離子和鋅離子的可利用性降低、存在金屬離子螯合劑以及使用膠原酶特異性蛋白水解抑制劑的條件下制備。例如，膠原組合物可以包括緩沖的水溶液，pH5.5至8，或pH7至8，不含鈣離子和鋅離子，并包括金屬離子螯合劑如EDTA。此外，在處理膠原組合物的過程中，也可以控制溫度和時間參數來限制蛋白酶活性。6.4膠原組合物的表征6.4.1生物化學特征本領域已知的和本發明中示例的生物化學檢測，可用于確定本發明的膠原組合物的生物化學組成。本發明涵蓋了用于確定樣品的總蛋白含量的生物化學檢測，例如吸光值檢測和比色檢測。吸光值檢測包括但不限于以下檢測，所述檢測是測量280nm的吸光值(參見例如Layne，E,SpectrophotometricandTurbidimetricMethodsforMeasuringProteins,MethodsinEnzymology3:447-455,(1957);Stoscheck,CM,QuantitationofProtein,MethodsinEnzymology182:50-69,(1990);其通過全文引用并入本發明中)；205nm的吸光值；和基于樣品的消光系數的檢測(參見例如Scopes,RK,AnalyticalBiochemistry59:277,(1974);Stoscheck,CM.QuantitationofProtein,MethodsinEnzymology182:50-69，(1990);其通過全文引用并入本發明中)。本發明涵蓋了確定本發明的膠原組合物中特定蛋白質總含量的方法，包括但不限于膠原(例如I型、III型、IV型膠原)、層粘連蛋白、彈性蛋白、纖粘連蛋白和糖胺聚糖。比色檢測包括但不限于修飾的Lowry檢測、雙縮l尿檢測、Bradford檢測、BicinchoninicAcid(Smith)檢觀'K參見例4口Stoscheck，CM,QuantitationofProtein,MethodsinEnzymology182:50-69(1990))。在特定的實施方案中，利用Bradford染料結合檢測(Bradford,M.,AnalyticalBiochemistry,72,248(1976);其通過全文引用并入本發明中)來測量本發明的膠原組合物的總蛋白含量。本發明方法中使用的示例性Bradford檢測可以包含以下可以利用通過BIO-RAD,Hercules,CA,USA可獲得的Bradford染料結合檢測來緣行的檢測。蛋白質檢測是基于染料考馬斯亮藍R-250對應不同蛋白質濃度的顏色改變。所述檢測涉及通過(在595納米)測量一系列已知濃度的人膠原標準來建立標準校準曲線。通過參照標準曲線，確定測試樣本，例如羊膜樣本中的膠原濃度。以允許測量0.2-1.4mg/mL范圍內的膠原濃度的標準形式進行檢測，并且作為微測定，測量蛋白質濃度高達25|ag。對于標準檢測，將溶解在100mM檸檬酸(pH2.4)中的膠原，以0.1-1mg/mL濃度，總體積為0.1mL等分到1.5mL微離心管中。每一管添加1mL的考馬斯藍染料。渦旋樣品并允許置于室溫10分鐘。測量595納米(nm)的吸光值。對于^L測定，將溶解在100mM檸檬酸(pH2.4)中的膠原，以總體積為O.lmL(2.5-30)ag/mL)等分到96孔板的孔中。對于每個孔，加入10|JL的染色試劑。在讀板器測量595納米(nm)的吸光值前，渦旋樣品并在室溫培養10分鐘。對于本發明的膠原組合物，可以一式三份的檢查測試樣品。通過參照標準曲線來確定蛋白質濃度。以膜總干重的百分比計算蛋白質濃度。在約10%的誤差界限內，每個膜的蛋白質含量是膜總干重的實質上95%或更多。水含量可以低于或在實驗誤差內(約io%)。可以利用本領域技術人員已知的和本發明中示例的方法，來表征本發明的膠原組合物的總膠原含量的測量。在特定的實施方案中，本發明的膠原組合物的膠原含量才用由BiocolorLtd,UK生產的定量染料檢測試劑盒(SIRCOL)來測量。檢測利用SiriusRed(或DirectRed80)作為特異的膠原結合染料。結合膠原的染料在UV-Vis分光光度計中表現出540nm吸光值的濃度依賴性增加。所述檢測涉及通過測量一系列已知濃度的牛膠原標準的吸光值，發展標準校正曲線。通過參照標準曲線，確定測試樣品(例如羊膜樣品)中的膠原濃度。在示例性檢測中，膠原(lmg/mL)以5-100^g/10(VL的濃度等分至1.5mL微離心管中。用水調節樣品體積至IO(VL。在室溫下向每個樣品中添加1mLSIRCOL染料試劑。蓋上樣品管，在室溫下機械振蕩培養30分鐘。然后，將樣品在12，000Xg離心15分鐘，并用移液器除凈液體。將每個管底的淡紅色沉淀溶解在1mL的0.5MNaOH(氫氧化鈉)中。使用BeckmanDU-7400UV-VIS分光光度計測量樣品在540nm的UV吸光值。用每個樣品中膠原濃度對540nm的吸光值(OD)繪制標準校準曲線。為了確定實驗誤差，重復檢測單次低濃度的膠原標準(IO|ag/100pL)。使用相同的規程檢測膜樣品，添加樣品的總體積至100pL。在其它實施方案中，使用本領域已知的和本發明示例的標準方法，例如可以使用ELISA檢測來確定本發明的膠原組合物的膠原類型。確定本發明的膠原組合物中的膠原類型，例如I、III和IV型膠原的示例性檢測，包括j吏用由例A口Anthrogen-CIACollagen-IfromChondrex，Inc.,Redmond,WA,USA的試劑盒提供的夾心ELISA檢測。對于III型和IV型研究，可以從RocklandImmunochemicals,Gilbertsville,PA獲得一抗(捕獲抗體)和二抗(檢測抗體)以及膠原標準。檢測抗體是生物素標記的人i、ni或iv型膠原，其與鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶結合。與顯色底物、尿素和H202的酶促反應產生黃色，其可以通過UV-Vis分光光度計在490nm檢測。為了定量膠原類型的量，使用一系列已知濃度的人膠原標準樣品建立標準校準曲線。通過參照標準曲線確定羊膜的測試樣品中膠原的濃度。按照ELISA試劑盒的說明，進行檢測操作。為了建立標準校準曲線，通過添加100試劑盒提供的lOOX-稀釋的捕獲抗體，用捕獲抗體(抗人I型膠原抗體，未偶聯的)來包被96孔板中的10-12個孔。在培養過夜后，用洗滌緩沖液洗滌孔三次，以除去未結合的抗體。然后，將人I型膠原按0-5Hg/mL遞增的濃度，以100的體積添加到孔中。在室溫培養2小時后，用洗滌緩沖液洗滌孔三次，以除去未結合的膠原。然后，向孔內的抗體-膠原復合體添加100體積的生物素化I型膠原抗體，使其在室溫下結合2小時。用洗滌緩沖液洗滌3次，洗去未結合的抗體。然后，通過添加試劑盒提供的200X稀釋的酶樣，使檢測酶鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶與抗體-膠原-抗體復合物結合，允許在室溫下培養1小時。重復洗滌96孔板(6次)，除去任何未結合的酶。向每個孔加入IOO(^L體積的生色底物+尿素/H202。使反應在室溫下進行30分鐘。通過添加50pL的2.5N硫酸終止反應。測量490nm的吸光值。在其它實施方案中，本發明涵蓋了利用本領域已知的和本發明示例的方法，確定本發明的膠原組合物的總彈性蛋白含量的檢測。測量本發明的膠原組合物的彈性蛋白含量的示例性檢測可以包括由Biocolorltd,UK生產的定量染料檢測試劑盒(FASTIN)。該檢測使用5,10,15,20-四苯基-21，23-卟吩(TPPS)作為特異性彈性蛋白結合染料(參見例如Winkleman,J.(1962),CancerResearch,22,589-596;其通過全文引用并入本發明中)。在UV-Vis分光光度計中，與彈性蛋白結合的染料表現出513nm處吸光值的濃度依賴性增加。所述檢測涉及通過測量一系列已知濃度的牛彈性蛋白標準的吸光值，來建立標準校正曲線。通過參照標準曲線，確定測試樣品，例如羊膜樣品中的彈性蛋白濃度。彈性蛋白(lmg/mL)以5-100昭/10(VL的濃度被等分到1.5mL微離心管中。用水調節樣品體積至IO(VL。在4。C下，向每個樣品中添加1mL彈性蛋白沉淀試劑(三氯乙酸+精氨酸)，并在相同溫度下儲存過夜。在過夜沉淀步驟后，將樣品在12,000Xg離心15分鐘，并用移液器除凈液體。向每個樣品中添加1mL的FASTIN染料試劑(TPPS)和100pL的90%飽和疏酸銨。蓋上樣品管，并使其在室溫下培養，且機械振蕩1小時。硫酸銨用作沉淀彈性蛋白-染料復合物。在l小時的混合步驟后，樣品在12，000Xg離心15分鐘，并用移液器除凈液體。將每個管底的棕色沉淀溶解在1mL的FASTIN解離試劑中，所述解離試劑是鹽酸胍在I-丙醇中的溶液。使用BeckmanDU-7400UV-VIS分光光度計測量樣品在513nm的UV吸光值。用每個樣品中彈性蛋白濃度對513nm的吸光值(OD)繪制標準校準曲線。為了確定檢測中的實驗誤差，重復檢測(『10)單次低濃度的彈性蛋白標準(IOpg/100pL)。使用相同的方法來檢測膜樣品，所述樣品被添加至總體積100pL。每個樣品檢測一式三份。在其它實施方案中，本發明涵蓋了利用本領域已知的和本發明示例的方法，確定本發明的膠原組合物的總糖胺聚糖(GAG)含量的檢測。本發明的膠原組合物中存在的GAG含量，可以使用由Biocolorltd,UK生產的定量染料檢測試劑盒(BLYSCAN)來檢測。該檢測使用1,9-二甲基-亞甲基藍作為特異性GAG結合染料。在UV-Vis分光光度計中，與GAG結合的染料表現出656nm處吸光值的濃度依賴性增加。所述檢測涉及通過測量一系列已知濃度的牛GAG標準的吸光值，來建立標準校正曲線。通過參照標準曲線，確定羊膜的測試樣品中的GAG濃度。將牛GAG(O.lmg/mL)以0.5-5—g/10(VL的濃度等分到1.5mL微離心管中。用水調節樣品體積至100iaL。在室溫下，向每個樣品中添加1mL1,9-二甲基-亞甲基藍染料試劑。蓋上樣品管，使其在室溫下培養，并機械振蕩30分鐘。然后，將樣品在12，000Xg離心15分鐘，并用移液器除凈液體。將每個管底的淡紅色沉淀溶解在1mL的染料解離試劑中。使用BeckmanDU-7400UV-VIS分光光度計測量樣品在656nm的UV吸光值。用每個樣品中GAG濃度對540nm的吸光值(OD)繪制標準校準曲線。為了確定檢測中的實驗誤差，重復檢測(11=8)單次低濃度的GAG標準(lpg/100|^L)。使用相同的方法來檢測膜樣品，將樣品添加至總體積至100|^L。每個樣品檢測一式三份。在其它實施方案中，本發明涵蓋了利用本領域已知的和本發明示例的方法，確定本發明的膠原組合物的總層粘連蛋白含量的檢測。確定本發明的膠原組合物的總層粘連蛋白含量的示例性檢測可以包括以下可以使用由TakaraBioInc.,Shiga,Japan提供的試劑盒(Cat#MKI07)進行夾心ELISA檢測。該試劑盒包括用一抗(捕獲抗體)預包被的96孔板，所述一抗是抗人層粘連蛋白的小鼠單克隆抗體。試劑盒提供二抗(檢測抗體)和人層粘連蛋白標準。檢測抗體是過氧化物酶偶聯的人層粘連蛋白抗體。與顯色物四甲基聯苯胺和H202的酶促反應產生藍色，其可以通過UV-Vis分光光度計在450nm檢測。為了定量層轱連蛋白的量，使用一系列已知濃度的人層粘連蛋白標準樣品(試劑盒提供)來建立標準校準曲線。參照標準曲線來確定羊膜的測試樣品中層粘連蛋白的濃度。按照ELISA試劑盒的說明，進行檢測操作。為了建立標準校準曲線，將人層粘連蛋白標準按5ng/mL至160ng/mL遞增的濃度，以100|aL最終體積添加到試劑盒才是供的抗體預包被的96孔板的單個孔中。在室溫培養1小時后，用洗滌緩沖液(含有0.05%TWEEN⑧的PBS)洗滌孔三次，以除去未結合的層粘連蛋白。然后，向孔內的抗體-層粘連蛋白復合體中添加100(aL體積的過氧化物酶-偶聯的層粘連蛋白抗體，使其在室溫下結合1小時。重復洗滌(4X)96孔板，以除去任何未結合的酶/抗體偶聯物。向每個孔中添加100|aL體積的顯色底物+H202。使反應在室溫下進行30分鐘。通過添加100|aL的2.5N硫酸終止反應。測量450nm的吸光值。可溶性膜的樣品以1000ng/mL的濃度進行測試。每個膜樣品一式三份進行測試。如下文所示，層粘連蛋白濃度顯示為總膜重的濃度。在其它實施方案中，本發明涵蓋了利用本領域已知的和本發明示例的方法，確定本發明的膠原組合物的總纖粘連蛋白含量的檢測。確定本發明的膠原組合物的總纖粘連蛋白含量的示例性檢測可以包括以下可以使用由TakaraBioInc.,Shiga,Japan提供的試劑盒(Cat#MK115)進行夾心ELISA檢測。該試劑盒包括用一抗(捕獲抗體)預包被的96孔板，所述一抗是抗人纖粘連蛋白的小鼠單克隆抗體。試劑盒提供二抗(檢測抗體)和人纖粘連蛋白標準。檢測抗體是與辣根過氧化物酶偶聯的人纖粘連蛋白抗體。與顯色底物四甲基聯苯胺和H202的酶促反應產生藍色，其可以通過UV-Vis分光光度計在450nm檢測。為了定量纖粘連蛋白的量，使用一系列已知濃度的人纖粘連蛋白標準樣品(試劑盒提供)建立標準校準曲線。通過參照標準曲線確定測試樣品中纖粘連蛋白的濃度。按照ELISA試劑盒的說明，進行檢測操作。為了建立標準校準曲線，將人纖粘連蛋白標準按12.5ng/mL至400ng/mL遞增的濃度，以100的終體積添加到試劑盒提供的抗體預包被的96孔板的單個孔中。在室溫培養1小時后，用洗滌緩沖液(含有0.05%TWEEN⑧的PBS)洗滌孔三次，以除去未結合的纖粘連蛋白。然后，向孔內的抗體-纖粘連蛋白復合體中添加100i^L體積的過氧化物酶-偶聯的纖粘連蛋白抗體，使其在室溫下結合1小時。重復洗滌(4X)96孔板，以除去任何未結合的酶/抗體偶聯物。向每個孔添加100|aL體積的顯色底物+11202。使反應在室溫下進行30分鐘。通過添加100pL的2.5N疏酸終止反應。測量450nm的吸光值。可溶性膜的樣品在1000pg/mL的濃度下進行測試。每個膜樣品測試一式三份。6.4.2生物相容性研究本發明的膠原組合物是生物來源的，含有大量膠原。然而，與來自動物來源(牛和豬)的膠原不同，人膠原是非免疫原性的。由于非免疫原性的人組織本質上與其它人組織是生物相容的，不需要實施某些標準的生物相容性檢測(例如皮膚刺激和過敏、急性系統性毒性)。本發明涵蓋了確定本發明的膠原組合物的生物相容性的檢測。本發明中使用的生物相容性指生物學相容的性質，其在活組織中不產生毒性、損傷性或免疫性應答或排斥。當在體內使用人工材料時，對未知材料的機體應答是主要關注，因此，材料的生物相容性是此類材料中重要的設計考慮。本發明涵蓋的生物相容性檢測包括但不限于細胞毒性檢測、兔眼刺激實驗、溶血檢測和致熱原檢測。本發明的生物相容性檢測是基于細胞的或基于無細胞的檢測。在另一特定的實施方案中，利用ISOMEMElution檢測(實施例6.4.2.2)來確定本發明的膠原組合物的細胞毒性。該研究的目的是評估膠原組合物在培養的小鼠成纖維細胞中引發細胞毒性應答的能力。在示例性檢測中，使用添加了5。/q胎牛血清(FBS)的Eagle最小必需培養基(E-MEM)來提取測試樣品。所述培養基還添加了一種或多種下列物質L-谷氨酸、HEPES、慶大霉素、青霉素、萬古霉素和兩性霉素B(二性霉素B)。在空氣中含5土1%二氧化碳的濕潤大氣中，在37土rc下，L-929細胞(小鼠成纖維細胞)的培養物在一次性組織培養器皿中，作為單層生長和使用。使用比例等同于120cm2的樣品和添加5%FBS的20ml-E-MEM來完整j是取測試樣品。在37±It和5±1%二氧化碳的條件下，在添加5%FBS的E-MEM中提取樣品24-25小時。在提取期后，從測試培養孔中除去維持培養基，并用1ml的測試培養基/提取物、對照培養^/提取物和氯化釣加標的陽性對照培養基替代。陽性對照、中間對照、陰性對照與測試樣品平行走樣。測試培養基/提取物、對照培養基/提取物、和氯化鈣加標的陽性對照培養基一式三份的放置，并在37土1。C和空氣中含5±1%二氧化碳的濕潤大氣中培養72±4小時。在24、48和72±4小時的培養期，通過顯微鏡觀察評估培養物的細胞毒性效應。評估細胞毒性的標準包括細胞形態學的改變，例如顆粒化、蚨縮或變圓，由于裂解或脫離從單細胞層喪失活細胞。有效的測試需要陰性對照培養物在整個測試過程中維持健康的正常外觀。毒性程度按如下;平分0無毒離散的胞質顆粒；無細胞裂解。1輕微的不超過20%的細胞變圓、松散的附著，沒有胞質顆粒；偶爾存在裂解的細胞。2溫和的不超過50%的細胞變圓，缺少胞質顆粒；沒有大量的細胞裂解以及細胞間的空白區域。3中度不超過70%的細胞層含有變圓的細胞和/或出現裂解。4嚴重的細胞層幾乎完全破壞。根據USP，評分為"0"、"1"或"2"的測試品被認為是無毒的。評分為"3"或"4"的測試品被認為是有毒的。對于有效的測試，陽性對照樣品必須具有"3"或"4"的評分，陰性對照樣品必須具有"0"的評分。已知兔的眼表面比人皮膚更敏感，因此兔眼刺激實驗被用于評估本發明的膠原組合物的生物相容性。在示例性檢測中，篩選樣品的初級眼刺激作用(primaryocularirritation)。用0.05%脫氧膽酸一氳化鈉鹽的水性溶液(D-Cell)來清潔羊膜。根據聯邦有害物質法令(FHSA)管理條例，16CFR1500的指導，進行測試。在示例性檢測中，使用輔助光源通過肉眼檢查，來判斷兔子對照眼為臨床正常。為了檢測任何已經存在的角膜損傷，用熒光染色處理眼，用0.9%USP生理鹽溶液(PSS)沖洗，并在暗室中用紫外光觀察。按照標準技術，將樣品徐徐滴入每只兔子的一只眼睛的較低結膜囊中。每只兔子的另一只眼睛不作處理，作為比較對照。在處理后，將動物放回籠中。在給藥后24、48和72小時，用輔助光源和合適的放大鏡檢查每只兔子的測試眼，與未處理的對照眼相比，并對眼刺激進行評級。為了檢測或驗證角膜損傷，在24小時時，用熒光染色處理測試眼，用PSS漂洗，并在黑暗條件下用紫外燈檢查。按照FHSA-修正的Draize評分規則對反應評分。三只動物中的一只表現出明顯的陽性反應為臨界發現。三只動物中的兩只表現出明顯的陽性反應為顯著的陽性應答，并且認為測試品是刺激性的。本發明涵蓋了利用本領域已知的和本發明示例的方法，確定本發明的膠原組合物的溶血性質(參見實施例6.4.2.4)。溶血描述了將接觸血液的測試樣品的溶血性質。由于它測量了與材料和裝置接觸的紅血細胞膜的易碎性，因此其被認為是要進行的特別重要的篩選檢測。在示例性檢測中，該過程涉及將測試材料暴露在血細胞懸浮液中，然后確定血紅蛋白釋放的量。測試在靜態條件下進行，并且測試樣品與人血液直接接觸。血紅細胞釋放的血紅蛋白的量采用熒光分光光度計在540nm下(在轉變為氰化正鐵血紅蛋白后)與陰性對照和陽性對照同時測量。樣品和對照的溶血指數按如下計算溶血指數二釋放的血紅蛋白(mg/mL)X100存在的血紅蛋白(mg/mL)其中釋放的血紅蛋白(mg/mL)二(常數+X系數)X光學密度X16。存在的血紅蛋白(mg/mL)二稀釋的血液10±1mg/mL。本發明涵蓋了利用本領域已知的和本發明示例的方法，確定本發明的膠原組合物的致熱原性(參見實施例6.4.2.5)。在一實施方案中，利用例如，鱟變形細胞溶解物(LAL)測試，通過測量本發明的膠原組合物中細菌內毒素的存在，來確定本發明的膠原組合物的致熱原性。該測試為用于細菌內毒素檢測和定量的體外檢測。在示例性的測試中，98個膠原組合物樣品(11=1/批)，每個的大小是lx2cm，單獨地檢測提取物。所述提取通過在37-40t下，在30mL提取液中洗滌每個樣品40至60分鐘，并伴隨定軌搖床的間歇性攪拌來進行。如pH試紙所驗證的，每個樣品提取物的pH為介于6和8之間。通過動態比濁比色測試，用每mL0.05內毒素單位(EU)的測試靈敏度，來測量致熱原水平。將檢測的內毒素值(EU/mL)乘以30mL(每裝置的提取體積)和24(刺激6x8cm大小的裝置)，來計算每個樣品的總內毒素。6.4.3微生物學研究本發明涵蓋了本領域已知的和本發明示例的，確定本發明的膠原組合物中微生物生物體的存在的方法，微生物生物體包括但不限于大腸桿菌(Escherichiacoli)、月申炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae),金黃色釀月農葡萄J求菌(Staphylococcusaureus)、糞腸3求菌(Enterococcusfaecalis)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、普通變形菌(Proteusvulgaris)、草綠色《連3求菌(Staphylococcusviridans)和綠膿^f艮單月包菌(Pseudomonasaeruginosa)。此類方法可用于膠原組合物制備的任何步驟。在加工過程中，用于微生物學研究的示例性方法包括以下步驟檢測微生物"加標"的未加工的羊膜樣品以及在加工過程中使用的設備。將樣品浸泡在有以下8種微生物加標的生理鹽溶液中5分鐘，從而人為的污染樣品1.大腸桿菌5.白色念珠菌2.肺炎克雷伯氏菌6.普通變形桿菌3.金黃色釀膿葡萄球菌7.草綠色鏈球菌4.糞腸球菌8.綠膿假單胞菌有利的，本發明的去細胞化和漂洗方法可以降低本發明的膠原組合物中的微生物數量。本發明涵蓋了本領域已知的和本發明示例的，用于確定本發明的膠原組合物的生物負載的方法。如本發明中使用的，"生物負載"是在經歷工業滅菌過程之前，在給定量的材料上發現的污染生物體的測量值。在示例性的方法中，確定了可以實現具有無菌保證水平10—6的最小電子束照射量。利用PEPTONE-TWEEN⑧溶液，通過浸泡和人工振蕩來抽提膜。平板培養法是利用大豆粉酪蛋白消化物瓊脂的膜過濾。對于好氧條件，平板在30-35。C培養4天，然后計數。對于真菌，平板在20-25。C培養4天，然后計數。對于孢子形成菌，將提取部分熱休克、過濾，并如同好氧菌一樣涂板。平板在30-35。C培養4天，然后計數厭氧菌。平板在厭氧條件下在30-35t培養4天，然后計數。使用的微生物是產芽胞梭狀芽胞桿菌(Clostridiumsporogenes)、綠膿假單月包菌(Pseudomonasaemginosa)和萎縮芽孑包片i1菌(Bacillusatrophaeus)。在特定的實施方案中，本發明的膠原組合物具有少于2克隆形成單位(cfu)的好氧性生物和真菌，少于1或0cfu的好氧性生物和真菌。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物具有少于5.1克隆形成單位(cfu)，少于2，或少于1cfu的厭氧性生物和孢子。在特定的實施方案中，根據本發明示例的和本領域技術人員已知的方法確定，本發明的膠原組合物不是抑制細菌的或抑制真菌的(參見實施例6.4.3.2)。如本發明中使用的，抑制細菌的指抑制細菌生長或繁殖，但是不殺死細菌的試劑。如本發明中使用的，抑制真菌的指由于非-殺真菌性的化學或物理物質的存在，抑制真菌的生長的試劑。6.4.4膠原組合物的儲存和處理本發明涵蓋了在室溫下(例如25。C)儲存本發明的膠原組合物。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物可以儲存在至少0°C、至少4°C、至少10°C、至少15°C、至少20°C、至少25°C、至少30°C、至少35t:或至少40。C溫度下。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物是不冷藏的。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物可以冷藏在約2至8t:的溫度下。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物可以在上述明確的任何溫度下儲存一段延長的時間。在特定的實施方案中，本發明的膠原組合物儲存在無菌和非氧化的條件下。在某些實施方案中，根據本發明的方法生產的膠原組合物可以在任何特定的溫度下儲存12個月或更久，而不產生生物化學或結構完整性的改變(例如不降解)，不具有膠原組合物的任何生物化學或生物物理學性質的改變。在某些實施方案中，根據本發明的方法生產的膠原組合物可以儲存若干年，而不具有生物化學或結構完整性的改變(例如不降解)，不具有膠原組合物的任何生物化學或生物物理學性質的改變。在某些實施方案中，預期根據本發明的方法制備的膠原組合物可以無限存的膠原組合物可以儲存在無菌的雙層易撕包裝中。6.4.5滅菌本發明的膠原組合物可以根據本領域技術人員已知的用于此類組合物滅菌的4支術來滅菌。在某些實施方案中，膠原組合物通過濾器過濾，允許內毒素通過而留下膠原組合物。可以使用本領域技術人員已知用于內毒素過濾的任何尺寸，例如30kDa的濾器。在某些實施方案中，在允許內毒素通過濾器，同時保留膠原組合物的條件下，將膠原組合物與濾器接觸。所述條件可以是本領域技術人員已知的任何用于過濾的條件，例如，離心或泵壓。濾器的尺寸應該是在允許一種或多種病毒顆粒通過濾器的同時保留膠原。在某些實施方案中，濾器可以在5kDa和100kDa之間。在特定的實施方案中，濾器是約5kDa、約10kDa、約15kDa、約20kDa、約30kDa、約40kDa、約50kDa、約60kDa、約70kDa、約80kDa、約90kDa、或約100kDa。濾器可以是本領域技術人員已知的、適合膠原組合物的任何材料，例如纖維素、聚苯醚砜和其它本領域技術人員顯而易見的材料。根據本領域技術人員的需要，過濾可以重復盡可能多次。可以根據標準技術檢測內毒素來監控清除率。在某些實施方案中，可以過濾膠原組合物，產生不含病毒顆粒或病毒顆粒減少的膠原組合物。有利的，在這些本發明的實施方案中，濾器在允許病毒顆粒通過的同時，保留了膠原組合物。可以使用本領域技術人員已知的任何用于清除病毒的濾器。例如，可以使用1000kDa濾器來清除或降低細小病毒、甲肝病毒和HIV。可以使用750kDa濾器來清除或降低細小病毒和甲肝病毒。可以-f吏用500kDa濾器來清除或降低細小病毒。因此，本發明提供了生產不含病毒顆粒或病毒顆粒減少的膠原組合物的方法，包括將膠原組合物與濾器接觸的步驟，所述濾器的尺寸允許在一種或多種病毒顆粒通過濾器的同時，保留膠原組合物。在某些實施方案中，膠原組合物與濾器的接觸條件是，允許一種或多種病毒顆粒通過濾器的同時，保留膠原組合物。所述條件可以是本領域技術人員已知的用于過濾的任何條件，例如離心或泵壓。濾器的尺寸應該是在允許一種或多種病毒顆粒通過濾器的同時保留膠原。在某些實施方案中，濾器是介于500kDa和1000kDa之間。在特定的實施方案中，所述濾器是約500kDa，約750kDa和約lOOOkDa。濾器可以是本領域技術人員已知的、與膠原組合物相容的任何材料，例如纖維素、聚苯醚砜或其它本領域技術人員顯而易見的材料。根據本領域技術人員的需要，可以多次重復過濾。可以根據標準技術來檢測病毒顆粒從而監控過濾。本發明的膠原組合物的滅菌還可以利用本領域技術人員已知的方法，例如Gorham,D.Byrom(編著),1991,Biomaterials，StocktonPress,NewYork,55-122進行電子束照射來進行。任何足以殺死至少99.9%的細菌或其它潛在污染生物體的照射劑量都涵蓋在本發明的范圍內。在特定的實施方案中，使用至少18-25kGy的劑量來實現本發明的膠原組合物的最終滅菌。6.5膠原組合物的制劑在某些實施方案中，本發明提供了膠原組合物。膠原可以是本發明的任何膠原，例如由本發明中的方法之一制備的膠原。有利的，膠原可以在水或磷酸緩沖鹽溶液中配制。在特定的實施方案中，在磷酸緩沖鹽溶液中配制膠原。膠原可以是本領域技術人員有效的任何濃度。在某些實施方案中，本發明的制劑包含0.1-100mg/ml、1-100mg/ml、1-75mg/ml、1-50mg/ml、10-40mg/ml、或20-40mg/ml膠原。在某些實施方案中，本發明的制劑包含約5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml、或50mg/ml的月交原。在4寺定的實施方案中，本發明提供了包含約35mg/ml膠原的制劑。在本發明的某些實施方案中，膠原組合物可以干燥并成型為本領域技術人員有用的形狀。所述形狀可以是任何有用的形狀，包括片狀、管狀、塞狀、球狀等。在某些實施方案中，膠原組合物成型為適合傷口或損傷的位點。成型的膠原組合物可用于對本領域技術人員顯而易見的任何目的。下文纟是供了利用成型的膠原組合物的示例性方法。由于從胎盤中^^是取，本發明的組合物通常是白色糊狀物(paste)。該糊狀物可以根據本領域已知的、用于此類材料成型的任何方法來成型。例如，所述組合物可以被壓入模具中，或包圍在模具外成型，來生產特定的形狀，并加熱干燥、真空干燥或冷凍干燥。還可以利用例如真空，使組合物伸展變薄并在例如干膠器上干燥。在某些實施方案中，本發明的組合物可以與藥學或化妝品上可接受的載體結合，并作為組合物在體外或在體內施用。施用的形式包括但不限于注射、溶液、膏劑、凝膠、植入物、泵、油膏、乳液、懸浮液、微球、顆粒、微顆粒、納米顆粒、脂質體、糊劑、貼片、片劑、透皮給藥裝置、噴霧、氣霧劑，或本領域常規技術人員熟悉的其它方式。此類藥學或化妝品上可接受的載體是本領域普通技術人員普遍已知的。本發明的藥物制劑可以使用本領域已知的方法，利用普遍已知并可方便獲得的成分來制備。例如，可以用常規賦形劑、稀釋劑或載體配制組合物，制成片劑、膠嚢、懸浮液、粉末等。適合此類制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的實例包括以下填充劑和膨脹劑(例如淀粉、糖、甘露糖醇和含硅衍生物)、結合劑(例如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮)、增濕劑(例如甘油)、崩解劑(例如-炭酸鈣和-炭酸氫鈉)、用于延遲溶解的試劑(例如石蟲普)、重吸收加速劑(例如季銨化合物)、表面活性劑(例如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯)、吸收載體(例如高嶺土和斑脫土)、乳化劑、防腐劑、增甜劑、穩定劑、著色劑、芳香劑、增香劑、潤滑劑(例如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂)、固體聚乙基乙二醇、及其混合物。本發明中使用的術語"藥學或化妝品上可接受的載體"意指不受任何限制的，任何液體、固體或半固體，包括但不限于水或鹽溶液、凝膠、膏劑、軟膏、溶劑、稀釋劑、液態軟膏基質、油膏、糊劑、植入物、脂質體、膠粒、巨膠粒等，適合在與活動物或人組織的接觸中使用，而不導致不良的生理學或化妝品應答，也不與組合物的其它組分以有害方式相互作用。可以使用本領域技術人員已知的其它藥學或化妝品上可接受的載體，制備用于遞送本發明的分子的組合物。可以構建制劑，使其僅僅或優選的在特定位置釋放活性成分，可能的話持續一段時間。此類組合還提供了控制釋放動力學的機制。包衣、外殼或保護性基質可以從例如多聚物或蠟來制造。本發明的組合物或者包含此類組合物和其它材料(例如特別適合用于多種形式的本發明的載體)的制劑的體內給藥方法包括但不限于口服(例如口腔或舌下給藥)、肛門施用、直腸施用、作為栓劑施用、局部^t用、氣霧劑使用、吸入、腹膜內施用、靜脈內施用、透皮施用、皮內施用、皮下施用、肌肉內施用、子宮內施用、陰道施用、向體腔施用、在腫瘤或內部損傷的位置手術施用、向器官的內腔或實質組織施用，以及胃腸外的施用。在上述不同給藥類型中有效的技術包括但不限于局部給藥、攝入、手術給藥、注射、噴霧、透皮遞送裝置、滲透泵、直接作用于理想位點的電沉積，或其它本領域常規技術人員熟悉的方式。使用位置可以是外部的，例如在表皮上，或者是內部的，例如胃潰瘍、手術區域等。本發明的膠原組合物可以膏劑、凝膠、溶液、懸浮液、脂質體、顆粒的方式^t用，或以治療和化妝品化合物的制劑和遞送領域的技術人員已知的其它方式使用。可以使用超細顆粒尺寸的膠原材料，用于治療劑的吸入給藥。用于皮下給藥的合適制劑的某些實例包括但不限于植入物、儲庫型(depot)、針劑、膠嚢和滲透泵。用于陰道給藥的合適制劑的某些實例包括但不限于膏劑和環。用于口服給藥的合適制劑的某些實例包括但不限于丸劑、液體、糖漿和懸浮液。用于透皮給藥的合適制劑的某些實例包括但不限于凝膠、膏劑、糊劑、貼片、噴霧和凝膠。用于皮下給藥的合適制劑的某些實例包括但不限于植入物、儲庫型、針劑、膠囊和滲透泵。用于胃腸外給藥的合適制劑的某些實例包括但不限于水性或非水性的無菌注射液，其可以含有抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑和使制劑與目的受體的血液等滲的溶質，以及水性或非水性無菌懸浮液，其可以包括懸浮的試劑和增稠劑。可以用本領域普通技術人員常規使用的無菌粉末、顆粒和片劑來制備臨時配制的注射液和懸浮液。其中本發明的組合物與例如一種或多種"藥學或化妝品上可接受的載體"或賦形劑組合的實施方案可以方便的用單位劑量提供，并可以通過常規制藥技術制備。此類技術包括使含有活性成分的組合物與藥物載體或賦形劑結合的步驟。一般而言，通過使活性成分和液體載體均勻和緊密的結合，來制備制劑。特定的單位劑量制劑是含有一服或一單位所施用成分，或其合適部分的制劑。應該理解，除了上述特別提及的成分外，包含本發明組合物的制劑還可以包括本領域普通技術人員常規使用的其它試劑。給藥體積隨給藥途徑變化。例如，肌肉內注射的體積范圍可以是約0.1ml至1.0ml。本發明的組合物可以向人和動物施用，以提供能夠產生理想的生理學或藥理學結果的任何劑量范圍的物質。劑量依賴于所施用的物質，理想的治療終點，在作用位點或體液中的理想有效濃度，以及給藥類型。關于物質的合適劑量信息是本領域普通技術人員已知的，可見于參考文獻例如L.S.Goodman和A.Gilman，編著，ThePharmacologicalBasisofTherapeutics,MacmillanPublishing,NewYork,和Katzung,Basic&ClinicalPharmacology.Appleton&Lang,Norwalk,Connecticut,(第6版，1995)。理想治療領域的熟練醫師可以根據情況需要和所施用的物質，選擇特定的劑量和劑量范圍，以及i^合藥頻率。膠原組合物可以包括一種或多種非膠原的化合物或物質。例如可以將生物分子，在生產過程中或手術準備過程中注入膠原組合物。此類生物分子包括但不限于抗生素(例如克林霉素、米諾環素、脫氧土霉素、慶大霉素)、激素、生長因子、抗胂瘤劑、抗真菌劑、抗病毒劑、鎮痛藥、抗組胺劑、抗炎劑、抗感染劑包括但不限于銀(例如銀鹽，包括但不限于硝酸銀和磺胺嘧啶銀)、元素銀、抗生素、殺菌酶(例如溶菌酶)、愈傷劑(例如細胞因子，包括但不限于PDGF、TGF;胸腺素)、作為愈傷劑的透明質酸、傷口封閉劑(例如含有或不含有凝血酶的纖維蛋白)、細胞引誘劑和支架試劑(例如纖粘連蛋白)等。在特定的實例中，可以將至少一種生長因子浸潤至膠原組合物，例如成纖維細胞生長因子，表皮生長因子等。還可以用有機小分子浸潤至膠原組合物，例如特定生化過程的特定抑制劑，例如膜受體抑制劑、激酶抑制劑、生長抑制劑、抗癌藥物、抗生素等。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物可以與水凝膠結合。本發明涵蓋了本領域技術人員已知的任何水凝膠組合物，例如下列綜述中公開的任何水凝膠組合物Graham,1998,Med.DeviceTechnol.9(1):18-22;Peppas等人，2000,Eur.J.Pharm.Biopharm.50(1):27-46;Nguyen等人，2002,Biomaterials,23(22):4307-14;Henincl等人，2002,Adv.DrugDeliv.Rev54(1):13-36;Skelhome等人，2002，Med.Device.Technol.13(9):19-23;Schmedlen等人，2002,Biomaterials23:4325-32;其均通過全文引用并入本發明中。在特定的實施方案中，水凝膠組合物是應用于膠原組合物上的，即，被置于膠原組合物的表面。例如，水凝膠組合物可以噴在膠原組合物上、浸透在膠原組合物的表面、與膠原組合物一起浸泡、與膠原組合物一起浸潤、或包被在膠原組合物的表面。本發明的方法和組合物中有用的水凝膠，可以采用本領域已知的任何水-相互作用，或水溶性多聚物來制造，其包括但不限于聚乙蹄醇(PVA)、聚羥乙基甲基丙烯酸、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、透明質酸、葡聚糖或其書f生物和類似物。在一些實施方案中，本發明的膠原組合物在與水凝膠結合前，還浸漬一種或多種生物分子。在其它實施方案中，水凝膠組合物在與本發明的膠原組合物結合前，還浸漬了一種或多種生物分子。此類生物分子包括但不限于抗生素(例如克林霉素、米諾環素、脫氧土霉素、慶大霉素)、激素、生長因子、抗腫瘤劑、抗真菌劑、抗病毒劑、鎮痛藥、抗組胺劑、抗炎劑、抗感染劑包括但不限于銀(例如銀鹽，包括但不限于硝酸銀和磺胺嘧啶銀)、元素銀、抗生素、殺菌酶(例如溶菌酶)、愈傷劑(例如細胞因子，包括但不限于PDGF、TGF;胸腺素)、作為愈傷劑的透明質酸、傷口封閉劑(例如含有或不含有凝血酶的纖維蛋白)、細胞引誘劑和支架試劑(例如纖粘連蛋白)等。在特定的實例中，可以將至少一種生長因子浸漬至膠原組合物或水凝膠組合物中，例如成纖維細胞生長因子，表皮生長因子等。有利的，生物分子可以是治療劑。在某些實施方案中，水凝膠組合物與包含本發明的膠原組合物的薄片結合。水凝膠/膠原組合物具有醫學領域的用途，包括但不限于創傷、燒傷和皮月夫適應癥的治療(例如治療疤痕)，美容用途(例如美容手術)、和任何作為植入物的應用。在某些實施方案中，水凝膠/膠原組合物局部的施用至個體，例如在皮膚的表面，例如用于創傷的治療。在其它實施方案中，水凝膠/膠原組合物可施用至個體的內部，例如作為植入物，成為體內永久或半永久的結構。在一些實施方案中，水凝膠組合物配制成不可生物降解的。在其它實施方案中，水凝膠組合物配制成可生物降解的。在特定的實施方案中，水凝膠組合物配制成在數天內降解的。在另一特定的實施方案中，水凝膠組合物配制成在數月內降解的。在一些實施方案中，在本發明的膠原組合物中種植了細胞，使細胞是均一的和匯合的。可用于種植本發明的膠原組合物的細胞包括但不限于干細胞、人干細胞、人分化的成體細胞、全能干細胞、多能干細胞、多潛能該細胞、組織特異性干細胞、胚樣干細胞、定向祖細胞、成纖維細胞。在其它實施方案中，本發明涵蓋了用特定類型的祖細胞種植的本發明的膠原組合物，包括但不限于軟骨細胞、肝細胞、造血干細胞、胰腺實質細胞、神經母細胞和肌肉前體細胞。6.6干細胞在某些實施方案中，本發明的膠原組合物包含大量的干細胞。干細胞可以是適合給定目的的任何干細胞，可以是全能或多能干細胞，或者可以是前體細胞。優選的，組合物包含胎盤干細胞，例如美國申請公開號2003/0032179和2003/0180269中，以及美國專利號7,045,148中描述的干細胞。然而，組合物可以包含來自任何組織來源的干細胞或前^^細胞，優選哺乳動物干細胞或前4本細胞，例如胚胎干細胞、胚胎生殖細胞、間充質干細胞、骨髓來源的干細胞、造血前體細胞(例如來自外周血、胎兒血、胎盤血、臍帶血、胎盤灌流液等的造血干細胞)、成體干細胞、神經干細胞、肝干細胞、胰月泉干細胞、內皮干細胞、心肌干細胞、肌肉干細胞、脂肪干細胞等。組合物可以包含任何干細胞類型的組合。在優選的實施方案中，干細胞是人干細胞，例如人胎盤干細胞。一般而言，本發明的組合物與大量的干細胞或前體細胞接觸一段時間，所述時間足以使所述大量的干細胞或前體細胞附著在組合物上。在優選的實施方案中，在與干細胞或前體細胞4妻觸前，本發明的組合物成型成有用的構型，例如片狀、塞狀、管狀或其它構型。可以通過本領域已知的任何方法來影響干細胞或前體細胞與本發明的組合物的接觸，包括例如將包含干細胞或前體細胞的基質分散在組合物的表面；將組合物的一部分或整體浸入干細胞或前體細胞的懸浮液中；在組合物的表面培養大量的干細胞或前體細胞一段時間，所述時間足以使大量的細胞增殖至少一次細胞分裂；等等。干細胞，優選的胎盤干細胞，可以存在于本發明的組合物上，例如，成型的組合物上，在整個的或部分的組合物的表面，例如可以隨機的或匯合的存在于表面上，等。在任何實施方案中，與本發明的組合物接觸的干細胞或前體細胞的數量可以變化，但可以是至少1X106、3X106、lxl07、3X107、1X108、3Xl08、1X109、3Xl09、1X1010、3Xl010、1X1011、3X1011、或1X1012個；或可以是不超過lXl(f、3XlOb、1X10'、3X10'、1X108、3Xl08、1X109、3X109、1X1010、3X1010、1X1011、3X1011、或1X10"個干細胞或前體細胞。在某些其它實施方案中，本發明的組合物包含由干細胞沉積的一種或多種類型的胞外基質蛋白。例如，在一實施方案中，通過下列方法使本發明的膠原組合物包含胞外基質蛋白將本發明的膠原組合物與大量的干細胞接觸；在組合物上培養干細胞一段時間，所述時間足以使干細胞沉積可檢測量的至少一種類型的胞外基質蛋白；和使組合物去細胞化，生產包含至少一種類型的胞外基質蛋白的膠原組合物。因此，在一實施方案中，本發明的組合物包含去細胞化的胞外基質，其中，由千細胞沉積或產生去細胞化的胞外基質。在多個實施方案中，胞外基質蛋白是膠原(I、II、III和/或IV型)、彈性蛋白或纖祐連蛋白。在另一實施方案中，胞外基質蛋白是由大量的增殖且不分化的干細胞生產的。在另一實施方案中，胞外基質是由大量的分化的干細胞生產的，或者由從大量的干細胞分化成的大量的細胞產生的。在上述實施方案的特定的實施方案中，干細胞是胎盤干細胞，例如CD34—胎盤干細胞或CD200'胎盤干細胞。6.6.1胎盤干細胞在優選的實施方案中，組合物包含大量的CD34—胎盤干細胞。CD34—胎盤干細胞是可從胎盤組織中獲得的干細胞，其附著在組織培養底物上，并具有分化成非胎盤細胞類型的能力。胎盤干細胞可以是胎兒或母體來源的(即，可以具有母親或胎兒的基因型)。胎盤干細胞群，或包含胎盤干細胞的細胞群，可以只包含胎兒來源或母體來源的胎盤干細胞，或者也可以包含胎兒和母體來源的胎盤干細胞的混合群。胎盤干細胞，和包含胎盤干細胞的細胞群，可以通過下文討論的形態學、標志物和培養特征來鑒定和選擇。當作為原代培養或細胞培養時，胎盤干細胞附著在組織培養底物上，例如組織培養容器表面(例如組織培養塑料)。培養中的胎盤干細胞通常表現出成纖維細胞樣、星狀外形，具有從中央細胞體延伸出許多胞質突起。然而，胎盤干細胞與相同條件下培養的成纖維細胞是形態可區分的，胎盤干細胞表現出比成纖維細胞更多數量的此類突起。形態學上，胎盤干細胞與造血祖細胞也是可區分的，后者在培養中通常表現為更圓的、或鵝卯石狀的形態。胎盤干細胞通常表達標志物CDIO、CD73、CD105、CD200、HLA-G和/或OCT-4，且不表達CD34、CD38或CD45。胎盤干細胞還可以表達HLA-ABD(MHC-1)和HLA-DR。因此，在一實施方案中，可以結合本發明的組合物的干細胞是CD200+或HLA-G+。在另一實施方案中，胎盤干細胞是CD73+、CD105+和CD200+。在另一實施方案中，胎盤干細胞是€0200+和OCT-4+。在另一實施方案中，胎盤干細胞是CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一實施方案中，胎盤干細胞是CD73+和CD105+,并且，當處于允許胚樣小體形成的條件下時，有利于在胎盤細胞群中形成一個或多個胚樣小體。在另一實施方案中，胎盤干細胞是OCT-4+,并且，當在允許胚樣小體形成的條件下培養時，和處于胎盤細胞群中時，有助于在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一個或多個胚樣小體。可以通過灌流獲得胎盤干細胞。例如，本發明提供了根據以下方法生產的分離的胎盤干細胞群，所述方法包括灌流已經排盡臍帶血的哺乳動物胎盤，并灌流除去殘留的血液；用灌流液灌流所述胎盤；和收集所述灌流液，其中在灌流后，所述灌流液包含胎盤細胞群，含有胎盤干細胞；從所述細胞群中分離大量的所述胎盤干細胞。在特定的實施方案中，灌流液通過^^靜^^和臍動^^，收集從胎盤排出的溶液。通過此類方法生產的胎盤干細胞群通常包含胎兒細胞和母體細胞的混合物。在另一特定的實施方案中，灌流液通過臍靜脈，從臍動脈收集，或通過臍動脈，從臍靜脈收集。通過此類方法生產的胎盤干細胞群通常基本上是專一的胎兒來源的；即例如群中多于90%、95%、99%或99.5%的胎盤千細胞是胎兒來源的。在不同的實施方案中，從胎盤灌流獲得的細胞群中，含有占所述胎盤細胞群的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%的胎盤干細胞。在另一特定的實施方案中，通過灌流收集的胎盤干細胞包括胎兒細胞和母體細胞。在另一特定的實施方案中，通過灌流收集的胎盤干細胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%是胎兒細胞。還可以通過器官或其一部分的物理解離，例如酶促消化，從哺乳動物胎盤中收集胎盤干細胞。例如，可以在接觸本發明的干細胞收集組合物的同時，例如將胎盤或其部分壓碎(cmsh)、剪碎(shear)、絞石卒(mince)、切塊(dice)、切細(chop)、浸軟(macerate)等，然后將組織用一種或多種酶消化。還可以物理解離胎盤或其部分，并用一種或多種酶消化，然后將獲得的材料浸入或與本發明的干細胞收集組合物混合。任何物理解離方法均可以使用，只要所述解離方法使所述器官中多數的，更優選的大多數的，更優選的至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的細胞存活，其通過例如，臺盼藍不相容來確定。在物理解離和/或酶促消化和干細胞回收前，可以將胎盤分割成各個組件。例如，可以從羊膜、絨毛膜、臍帶、胎盤絨毛葉或其任意組合來獲得胎盤干細胞。優選的，從包含羊膜和絨毛膜的胎盤組織獲得胎盤干細胞。通常可以通過將胎盤組織解離為小塊來獲得胎盤干細胞，例如胎盤組織塊的體積是約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或約1000立方毫米。優選的干細胞收集組合物包含一種或多種組織解離酶。酶促消化優選使用酶的組合，例如基質金屬蛋白酶和中性蛋白酶的組合，如膠原酶和分散酶的組合。在一實施方案中，胎盤組織的酶促消化使用了基質金屬蛋白酶、中性蛋白酶和用于消化透明質酸的粘多糖酶的組合，例如膠原酶、分散酶和透明質酸酶的組合，或LIBERASE(BoehringerMannheimCorp"Indianapolis,Ind.)和透明質g交酶的組合。可用于裂解胎盤組織的其它酶包括木瓜蛋白酶、脫氧核糖核酸酶、絲氨酸蛋白酶，如胰蛋白酶、糜蛋白酶或彈性蛋白酶。血清中的a2微球蛋白可以抑制絲氨酸蛋白酶，因此用于消化的培養基通常是無血清的。在酶促消化過程中通常使用EDTA和DNA酶來增加細胞回收的效率。優選稀釋消化物從而避免干細胞陷入粘稠的消化物中。可以使用任何組織消化酶的組合。組織消化酶的典型濃度包括例如50-200U/ml的I型膠原酶和IV型膠原酶，1-10U/ml的分散酶，和10-100U/ml的彈性蛋白酶。可以組合使用蛋白酶，即，在同一消化反應中使用兩種或多種蛋白酶，或者可以相繼使用從而游離胎盤干細胞。例如，在一實施方案中，胎盤或其一部分首先用合適量的I型膠原酶按2mg/ml消化30分鐘，然后用0.25%的胰蛋白酶在37。C消化10分鐘。優選的在其它酶的使用后再繼續使用絲氨酸蛋白酶。在另一實施方案中，可以通過向含有干細胞的干細胞收集組合物中，或者向在用干細胞收集組合物分離干細胞前用于解離和/或消化組織的溶液中，添加螯合劑(例如，乙二醇雙(2-氨基乙醚)-N,N,N，N，-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA))，進一步解離組織。可以理解，當完整的胎盤或胎盤的一部分同時含有胎兒和母本細胞(例如，胎盤的一部分包含絨毛膜或絨毛小葉)時，收集的胎盤干細胞將包含同時來源于胎兒和母本源的胎盤干細胞的混合物。當胎盤的部分不含有或只含有可忽略量的母本細胞時(例如，羊膜)，收集的胎盤干細胞將幾乎只含有胎兒的胚胎干細胞。6.6.1.1分離和表征胎盤干細胞不論是否由灌流或酶促消化獲得的，來自哺乳動物胎盤的干細胞，可以通過例如，聚蔗糖梯度離心從其它細胞中初步純化(即，分離)。此類離心可以遵循任何標準方法的離心速度等。例如，在一實施方案中，從胎盤收集的細胞是通過在5000Xg室溫離心15分鐘從灌流液中回收的，其將細胞與，例如污染的殘渣和血小板分離開。在另一實施方案中，將胎盤灌流液濃縮至約200ml,輕輕的鋪在聚蔗糖上，在22t以約1100Xg離心20分鐘，收集低密度的細胞中間層用于進一步處理。細胞沉淀可以重懸在新鮮的干細胞收集組合物中，或適合干細胞維持的培養基中，例如含有2U/ml肝素和2mMEDTA的IMDM無血清培養基(GibcoBRL，NY)。根據生產商的推薦方法，可以利用例如LYMPHOPREP(NycomedPharma,Oslo,挪威)分離總單核細胞部分。如本發明中使用的，"分離"胎盤干細胞意指除去至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%的通常在完整哺乳動物胎盤中與干細胞相關的細胞。當其存在于包含少于50%的通常在完整器官內與干細胞相關的細胞的細胞群中時，來自器官的干細胞就是"分離的"。例如，通過灌流或消化獲得的胎盤細胞可以進一步或一開始就利用例如具有0.2%EDTA的0.05。/。胃蛋白酶(Sigma,St.LouisMO)溶液通過差別胰酶消化來分離。由于胎盤干細胞通常在約5分鐘內從塑料表面脫離，而其它附著的群通常要求超過20-30分鐘培養，因此差別胰酶消化是可能的。在胰酶消化和利用例如胰蛋白酶中和溶液(TNS，Cambrex)中和胰蛋白酶后，可以收獲脫離的胎盤干細胞。在分離附著細胞的一實施方案中，在每個T-75瓶中，優選的纖連蛋白包被的T75瓶中，放置等份的，約5-10Xl()6個細胞。在此類實施方案中，可以用商購的間充質干細胞生長培養基(MSCGM)(Cambrex)培養細胞，并置于組織培養箱(37°C，5%C02)中。在10-15天后，通過用PBS洗滌從瓶中除去非附著細胞。然后用MSCGM替換PBS。優選的每天檢查瓶中不同附著細胞類型的存在，特別的鑒別和擴增成纖維樣細胞簇。利用標準的細胞檢測技術，例如流式細胞儀、細胞分選、免疫組織化學(例如用組織特異性或細胞標志特異性抗體染色)、熒光活化細胞分選(FACS)、磁性活化細胞分選(MACS),通過利用光學或共聚焦顯微鏡檢查細胞的形態學，和/或利用本領域普遍已知的技術(例如PCR和基因表達譜)來檢測基因表達的改變，通過測量形態學和細胞表面標志物的改變，可以監測從哺乳動物胎盤中收集的細胞數量和類型。這些技術也可用于鑒別對一種或多種特定標志物呈陽性的細胞。例如，利用CD34的抗體，利用上述技術，可以確定細胞是否含有可檢測量的CD34;如果是，則細胞是CD34+。同時，如果細胞產生足夠RT-PCR可檢測的OCT-4RNA，或者顯著多于成體細胞的OCT-4RNA，則細胞是OCT-4+。細胞表面標志物(例如CD標志物如CD34)的抗體，和干細胞特異性基因例如OCT-4的序列，也是本領域普遍已知的。胎盤細胞，特別是已經過聚蔗糖分離、差別附著，或兩者的結合所分離的細胞可以利用熒光活化細胞分選儀(FACS)來分選。熒光活化細胞分選(FACS)是基于顆粒的熒光性質，用于分離顆粒(包括細胞)的普遍已知的方法(Kamarch，1987,MethodsEnzymol，151:150-165)。單個顆粒中焚光部分的激光激發產生微小的電荷，從而允許混合物中正電和負電顆粒的電磁分離。在一實施方案中，用不同的熒光標簽來標記細胞表面標志物特異性抗體或配體。細胞經過細胞分選儀，從而基于其與所用抗體的結合能力來分離細胞。FACS分選的顆粒可以直接注入96-孔或384-孔板的單個孔中，以便于分離和克隆。在一個分選技術方案中，基于標志物CD34、CD38、CD44、CD45、CD73、CD105、OCT-4和/或HLA-G的表達來分選來自胎盤的干細胞。上述方法可以結合基于其在培養中的附著性質來選擇干細胞的方法來實施。例如，可以在基于標志物表達的分選之前或之后，實現干細胞的附著選擇。例如，在一實施方案中，首先基于其CD34的表達來分選細胞；保留CD34—的細胞，并將CD200+HLA-G+的細胞與所有其它CD3《細胞分離。在另一實施方案中，基于其對標志物CD200和/或HLA-G的表達來分選來自胎盤的細胞；例如，分離表現出任一這些標志物的細胞供進一步使用。在特定的實施方案中，表達例如CD200和/或HLA-G的細胞可以基于其對CD73和/或CD105的表達，或通過抗體SH2、SH3或SH4識別表位，或缺少CD34、CD38或CD45的表達來進一步分選。例如，在一實施方案中，通過CD200、HLA-G、CD73、CD105、CD34、CD38和CD45的表達或其缺失來分選胎盤細胞，將CD200+、HLA-G+、CD73+、CD105+、CD34—、CD38—和CD45—的胎盤細胞與其它胎盤細胞分離，供進一步使用。在另一實施方案中，可以使用磁珠分離細胞。可以利用磁性活化細胞分選(MACS)技術來分選細胞，一種基于顆粒結合磁珠(0.5-100直徑)的能力來分選顆粒的方法。對磁微珠可以實施多種有用的修飾，包括共價添加特異性識別特定細胞表面分子或半抗原的抗體。然后將磁珠與細胞混合，使其結合。然后將細胞通過磁場，分離出具有特定細胞表面標志物的細胞。在一實施方案中，可以隨后分離這些細胞，并與偶聯了4元其它細胞表面標志物的抗體的磁珠再混合。使細胞再次通過磁場，分離結合兩種抗體的細胞。然后可以將此類細胞稀釋入不同的盤中，例如微滴盤中用于克隆分離。還可以基于細胞形態學和生長特征來表征和/或分選胎盤干細胞。例如，胎盤干細胞可以表征為在培養中具有成纖維細胞樣表型，和/或基于成纖維細胞樣表型來選擇。胎盤干細胞還可以表征為具有形成胚樣小體的能力，和/或基于上述能力來選擇。在一實施方案中，例如，將形狀為成纖維細胞樣，表達CD73和CD105,并在培養中產生一個或多個胚樣小體的胎盤細胞與其它胎盤細胞分離。在另一實施方案中，將培養中產生一個或多個胚樣'j、體的OCT-4+胎盤細胞與其它胎盤細胞分離。在另一實施方案中，可以通過集落生成單位試驗來鑒別和表征胎盤干細胞。集落生成單位試驗是本領域普遍已知的，例如MESENCULTTM培養基(StemCellTechnologies,Inc.,VancouverBritishColumbia)。利用本領域已知的標準技術，可以分析胎盤干細胞的活力、增殖潛力和壽命，例如臺盼藍不相容試驗、醋酸焚光素4聶取試驗、碘化丙錠攝取試驗(評估活力)；以及胸腺嘧啶核苷攝取試驗、MTT細胞增殖試驗(評估增殖)。通過本領域普遍已知的方法可以確定壽命，例如通過確定延長培養中群倍增的最大數。利用本領域已知的其它技術也可以將胎盤干細胞與其它胎盤細胞相分離，例如期望的細胞的選擇性生長(正向選擇)、不期望的細胞的選擇性破壞(負選擇)、基于混合群與例如大豆凝聚素的差別細胞可凝集性的分離、凍融步驟、過濾、低速離心和區帶離心、離心沖洗(逆流離心)、單位重力分離、逆流分布、電泳、等等。6.6.1.2胎盤干細胞的培養可以如上述分離胎盤干細胞，并立即與本發明的組合物接觸。在與本發明的組合物接觸前，還可以，例如在細胞培養中培養胎盤干細胞若干代。例如，分離的胎盤干細胞，或胎盤干細胞群，或胎盤干細胞從中生長出的細胞或胎盤組織，可用于起始或接種細胞培養。細胞通常轉移到無菌的組織培養容器內，所述容器采用或未用胞外基質或配體包被，例如層祐連蛋白、膠原(如天然的或變性的)、明膠、纖連蛋白、鳥氨酸、玻璃體粘附蛋白和胞外膜蛋白(例如MATRIGEL(BDDiscoveryLabware，Bedford,Mass.))。在優選的實施方案中，胎盤干細胞培養在本發明的膠原組合物上。在某些實施方案中，膠原組合物包含可檢測量的纖粘連蛋白和層粘連蛋白。在其它實施方案中，膠原組合物包含不可檢測量的纖粘連蛋白和層粘連蛋白。在其它實施方案中，膠原組合物包含占干重至少約5%，或至少約10%的彈性蛋白。在另一實施方案中，膠原組合物包含不超過干重約5%的彈性蛋白。在某些實施方案中，培養胎盤干細胞用于特定細胞因子的生產，所述細胞因子可以從培養基中收集。在特定的實施方案中，細胞因子是IL-6、IL-8和/或單核細胞趨化性蛋白-l(MCP-l)。在某些其它的實施方案中，培養胎盤干細胞用于纖粘連蛋白的生產。在特定的實施方案中，在含有少于約5%纖粘連蛋白的本發明的組合物上培養胎盤干細胞。如上述，本發明的胎盤膠原組合物可以成型成任何有用的形狀，例如醫療有用的。這些組合物一旦成型并干燥，在水性溶液中，例如組織培養基或緩沖液中就是穩定的。因此，可以在成型的組合物上直接培養干細胞，如胎盤干細胞。可以在細胞培養皿或其它適合細胞培養的液體容器，例如瓶中，進行此類培養。可以在本領域認為適合干細胞培養的任意培養基和任何條件下培養胎盤干細胞。優選的，培養基包含血清。胎盤干細胞可以培養在例如DMEM-LG(Dulbecco改良的基礎培養基，低糖)艇CDB201(雞成纖維細胞基礎培養基)，其含有ITS(胰島素-轉鐵蛋白-硒)、LA+BSA(亞油酸-牛血清白蛋白)、右旋糖(dextrose)、L-抗壞血酸、PDGF、EGF、IGF-1，和青霉素/鏈霉素；含有10。/。胎牛血清(FBS)的DMEM-HG(高糖)；含有15%FBS的DMEM-HG;含有10%FBS，10%馬血清和氯化可的松的IMDM(Iscove改良的Dulbecco培養基)；含有10%FBS、EGF和肝素的M199;含有10%FBS、GLUTAMAX和慶大霉素的y-MEM(最低基礎培養基)；含有10%FBS、GLUTAMAX和慶大霉素的DMEM，等。優選的培養基是含有2%FBS、ITS、LA+BSA、右旋糖、L-抗壞血酸、PDGF、EGF，和青霉素/鏈霉素的DMEM-LG艇CDB-201。可用于培養胎盤干細胞的其它培養基包括DMEM(高糖或低糖)、Eagle基礎培養基、Ham的F10培養基(FIO)、Ham的F12培養基(F12)、Iscove改良的Dulbecco培養基、間充質干細胞生長培養基(MSCGM)、Liebovitz的L-15培養基、MCDB、DMIEM/F12、RPMI1640、改良的DMEM(Gibco)、DMIEM/MCDB201(Sigma),和CELL-GROFREE。培養基可以添加一種或多種組分，包括例如血清(如胎牛血清(FBS),優選的約2-15%(v/v);馬血清(ES);人血清(HS));p-巰基乙醇(BME)，優選的約0.001%(v/v);—種或多種生長因子，例如，血小板書f生的生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、基礎成纖維細胞生長因子(bFGF)、胰島素-樣生長因子-l(IGF-l)、白血病抑制因子(LIF)、血管內皮生長因子(VEGF)，和促紅細胞生成素(EPO);氨基酸包括L-纈氨酸；和一種或多種用于控制微生物污染的抗生素和/或抗真菌劑，例如青霉素G、疏酸鏈霉素、兩性霉素B，慶大霉素、和制霉菌素，單獨或組合使用。可以在標準的組織培養條件下培養胎盤干細胞，例如在組織培養皿或多孔板中。還可以使用懸滴法培養胎盤干細胞。在該方法中，胎盤干細胞以約lXl(^個細胞/mL懸浮在約5mL培養基中，將一滴或多滴培養基置于組織培養容器(例如100mLPetri培養皿)的蓋的內側。液滴可以是例如單滴或來自例如多通道移液器的多滴。將蓋小心地倒轉，并置于i底部的頂上，所述皿底部含有一定體積的液體，例如無菌的PBS，其足以維持皿內空氣的水分含量，并且培養干細胞。一旦胎盤干細胞或者干細胞群被分離(例如，與至少50%的胎盤細胞分離的干細胞或干細胞群，所述胎盤細胞是干細胞或干細胞群通常在體外相關的)，就可以在體外增殖或擴增干細胞或干細胞群。例如，可以在組織培養容器(例如皿、瓶、多孔板等)中培養胎盤干細胞群一段時間，所述時間足夠使千細胞增殖至70-90%匯合度，即，直到干細胞及其后代占據組織培養容器的70-90%的培養表面區域。以可以允許細胞生長的密度將胎盤干細胞種植在培養容器內。例如，細胞可以低密度(例如約1,000至約5,000細胞/cm、至高密度(例如約50,000或更多細胞/cm^來接種。在優選的實施方案中，在約0至約5%體積C02的空氣中培養細胞。在某些優選的實施方案中，在約2至約25%體積02的空氣中培養細胞，優選的在約5至約20%體積02的空氣中培養細胞。細胞優選的培養在約25。C至約40°C，優選37°C。細胞優選的在培養箱中培養。培養基可以是靜態的或攪動的，例如，利用生物反應器。胎盤干細胞優選在低氧化壓力下(例如，添加谷胱甘肽、抗壞血酸、過氧化氫酶、生育酚、N-乙酰半胱氨酸等)生長。一旦獲得70%-90%匯合度，細胞就可以傳代。例如，細胞可以利用本領域普遍已知的技術進行酶促處理，例如胰蛋白酶消化，將其與組織培養表面分離。在移液除去細胞和計數細胞后，約20,000-100,000個干細胞，優選的約50,000個干細胞傳代到含有新鮮培養基的新培養容器內。典型的，新培養基與除去干細胞培養基是相同的類型。已經傳代至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20次或更多次的胎盤干細胞可與本發明的胎盤組合物聯合使用。6.6.2非干細胞在某些實施方案中，包含干細胞的本發明的組合物，也包含一種或多種類型的非干細胞。如本發明中使用的，"非干細胞"表示終末分化的細胞。例如，在一實施方案中，本發明的組合物包含大量的干細胞和大量的成纖維細胞。本發明的組合物可以包括的非干細胞包括但不限于成纖維細胞或成纖維樣細胞；內皮細胞、上皮細胞、肌細胞、心肌細胞、胰腺細胞等。在某些其它實施方案中，組合物包含至少兩類干細胞和至少兩類非干細胞。6.7使用膠原組合物的方法另一方面，本發明提供了治療性、預防性或美容性使用本發明的膠原纟且合物的方法。本發明的膠原組合物具有廣泛的潛在用途。用途包括但不限于制造經工程改造的組織和器官(包括例如基質材料或組織的補丁或填料的結構)、假肢和其它植入物、組織支架、創傷的修復或敷料、止血裝置、用于組織修復和支持的裝置(例如縫合線)、手術和矯形螺釘、以及手術和矯形板、合成植入物的天然包衣或組分、美容植入物和支持物、器官或組織的修復或結構支持物、藥物遞送、生物工程平臺、用于測試藥物對細胞影響的平臺、細胞培養，和多種其它用途。上述潛在用途的討論并非意在窮舉，還存在許多其它實施方案。此外，針對膠原與其它材料和/或特定物質的組合，雖然下文提供了許多特定實例，但是仍可以使用其它的許多材料和物質的組合。在膠原組合物用于創傷的治療或填充的應用中，有利地，組合物刺激周圍組織中的干細胞產生纖粘連蛋白。在此類實施方案中，創口可以接觸包含不可檢測量的纖粘連蛋白的本發明的組合物。膠原材料中的細胞結合能力提供了使用本發明的組合物構建組織、器官或器官樣組織的能力。此類組織或器官中包含的細胞可以包括這樣的細胞，所述細胞具有遞送物質的功能，提供替代組織來源的接種的細胞，或兩者。多種類型的細胞可用于創建組織或器官。在不同實施方案中使用干細胞、定向的干細胞，和/或分化的細胞。在這些實施方案中使用的干細胞的實例包括但不限于胚胎干細胞、骨髓干細胞和臍帶干細胞，其用于制造器官或器官樣組織，例如肝或腎臟。在一些實施方案中，組合物的形狀有助于向細胞發送信號，從而使其以特定型的理想方式生長或增殖。基質中可以添加其它物質，例如分化誘導劑，來促進特定類型的細胞生長。此外，在某些實施方案中，組合物中整合了不同類型細胞的混合物。膠原材料和基質對組織或器官進行生物工程改造的能力創造了多種經生物工程改造的組織的替代應用。生物工程改造組分的實例包括但不限于骨骼、牙齒結構、關節、軟骨、骨骼肌、平滑肌、心肌、腱、半月板、韌帶、血管、支架、心瓣膜、角膜、耳鼓、神經導管(nerveguide)、組織或器官補丁或封閉劑、缺失組織的填充物、美容修復的薄膜(sheet)、皮膚(添加了細胞的薄膜使其成為皮膚的等價物)、喉的軟組織結構例如氣管、會厭軟骨和聲襞，其它軟骨結構例如鼻軟骨、瞼板、氣管環、甲狀腺軟骨和杓狀軟骨、結締組織、脈管移植物及其組分，和用于局部應用的薄膜，或者器官的修復或替代例如肝、腎和胰腺。在某些實施方案中，此類基質與本發明的藥物和物質遞送基質結合，所述結合方式將改善植入物的功能。例如，可以向經生物工程改造的器官的培養基添加抗生素、抗炎劑、局部麻醉劑或其組合，從而加速愈合過程并降低不適。6.7.1美容應用人皮膚是表皮和真皮的復合材料。皮膚表皮層的最外層是角質層。角質層下是表皮。表皮下是真皮的最外層，稱為乳頭狀真皮，其下是網狀真皮和皮下層。皮膚具有多種功能，包括保護、吸收、色素生成、感知覺、分泌、排泄、溫度調節和免疫過程調節。這些皮膚功能被衰老、過度陽光暴露、吸煙、外傷和/或環境因素負面的影響，其導致皮膚結構改變，并可以導致皮膚屏障功能的損傷和減少的表皮細胞轉化。受損的膠原和彈性蛋白喪失了適當收縮的能力，其導致皮膚皺紋和表面粗糙。皺紋是皮膚的改變，通常與皮膚衰老有關，通常出現在日光照射的皮膚上。隨著衰老進行，面部以及身體的其它區域開始表現出重力、日光照射和多年面部肌肉運動(例如笑、咀嚼和斜視)的影響。隨著皮膚衰老或逐漸病變，皮膚產生皺紋、下垂和妊娠紋，皮膚變粗糙，同時皮膚合成維生素D的能力降低。由于膠原、彈性蛋白和糖胺聚糖的改變，衰老的皮膚還變薄，并且真皮表皮界面變平。通常，衰老的皮膚的特征為厚度、彈性和與下層組織的附著能力降低。由于衰老、環境因素、日光暴露和其它因素(例如減肥、懷孕、疾病(如痤瘡和癌癥)以及手術)造成的皮膚損傷，通常導致皮膚輪廓缺陷和其它皮膚異常。為了矯形皮膚的輪廓缺陷和其它異常，人們通常求助于美容手術，例如面部去皺和皮膚整形。然而，美容手術通常是昂貴的、侵入性的，具有在手術區域遺留疤痕的可能，并可能影響正常的生物學和生理學功能。因此，還需要替代療法。本發明提供了用于填充患者的皮膚的方法。在一實施方案中，用于填充患者皮膚的方法包括將本發明的膠原組合物注射或施用到患者面部或身體需要填充的區域，其中，與使用膠原前的所述區域相比，患者面部或身體的區域被填充了。在本發明的上下文中，"填充皮膚"指由于外部作用或影響，患者(例如人)皮膚及相關區域的天然狀態的任何改變。可以通過填充皮膚來改變的皮膚的非限制性區域包括表皮、真皮、皮下層、脂肪、立毛肌、毛干、汗腺孔、皮脂腺或其組合。在某些實施方案中，本發明的方法包括將本發明的膠原組合物注射或施用到患者，用于治療眼角皺紋、鼻唇褶("笑紋")、木偶紋、眉間皺紋("皺眉紋")或其組合。本發明的膠原組合物可以幫助填充紋路、褶痕和其它皺紋，重建更平滑、視覺上更年輕的外表。本發明的膠原組合物可以單獨使用，或與一種或多種其它可注射的組合物、表面重建方法(例如激光治療)或整形方法(例如面部祛皺)結合使用。在一實施方案中，本發明的膠原組合物還可以用于填充面部起缺或凹陷的區域，和/或添加或增加患者面部和身體區域的豐滿度。需要填充的面部和/或身體的區域可以是例如衰老、創傷、疾病、病癥、環境因素、減肥、分娩或其組合導致的。可以注射或施用本發明的膠原組合物的、患者的面部或身體區域的非限制性實例包括眼底、太陽穴、上顴骨、下顴骨、下巴、嘴唇、下頜外形、前額、眉間、眉外側、臉頰、嘴唇和鼻子之間的區域(例如鼻梁)、頸、臀部、腰間、胸骨或面部或身體的任何其它部分，或其組合。可以用于治療皮膚缺陷的本發明的膠原組合物包括但不限于皺紋、凹陷或其它褶皺(例如皺眉紋、憂思紋、眼角皺紋、木偶紋)、妊娠紋、內部和外部皰痕(例如由損傷、創傷、事故、咬傷或手術造成的疤痕)，或其組合。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物可用于矯形例如"空洞化"的眼睛、黑眼圈導致的可視的血管、以及可視的淚溝。本發明的膠原組合物還可用于例如在下眼瞼成形術過度除去眼底脂肪墊后用于矯形眼底，或者在過度頰脂抽脂或天然損失后矯形下頜。在一實施方案中，本發明的膠原組合物可用于矯整鼻整形術的結果、植皮或其它手術導致的瑕疵，例如脂肪吸除手術導致的凹陷。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物可用于么喬形面部或身體的疤痕(例如創傷、水痘或痤瘡疤痕)。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物注射或施用到患者上用于面部重塑。可以使用本發明方法在以下患者中完成面部重塑，所述患者患有頸部松弛，或具有枯瘦臉、長臉、底重(bottom-heavy)臉、不對稱臉、圓臉，或者具有局部脂肪萎縮、面中部下頜后移、凹陷的眼睛的面部，以及上述的組合。在一實施方案中，本發明的方法包括將本發明的膠原組合物注射或施用于患者，用于治療皮膚缺陷，例如由疾病或病癥(例如癌癥或痤瘡)導致的皮膚缺陷。該缺陷可以是疾病或病癥的直接或間接的結果。例如，由疾病或病癥導致的皮膚缺陷，或由疾病或病癥的治療導致的皮膚缺陷。6.7.2非美容性應用6.7.2.1空隙填補本發明提供了用于封閉、填補和/或其它治療患者體內空隙的方法。在某些實施方案中，本發明的方法包括將本發明的膠原組合物注射或施用到患者上，從而填補患者體內的空隙。例如，膠原組合物可以施用在空隙分布的區域。術語"空隙"意在涵蓋由于衰老、疾病、手術、先天性異常或其組合導致的任何不期望的空洞空間。例如，在從患者身體中手術除去腫瘤或其它團塊后，可以產生空隙。可以用本發明的膠原組合物填補的空隙的非限制性實例包括患者身體的任何組織或器官中的裂紋、瘺管、憩室、動脈瘤、嚢腫、病變或任何其它不期望的空洞空間。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物可用于整體或部分的填補、封閉和/或治療裂縫、裂紋或瘺管，所述裂縫、裂紋或瘺管在組織、器官或身體的其它結構(例如血管)內，或相鄰組織器官或結構之間的連結內，從而防止生物^f本液，例如血液、尿液或其它生物液體的滲漏。例如，本發明的膠原組合物可以注射、植入、貫穿或以其它方式施用于臟器之間的瘺管中，或臟器向患者身體外部的開口或孔中。本發明的膠原組合物可用于填補空隙或其它由這類病理狀態形成的缺陷，并且刺激成纖維細胞滲透，愈合和組織向內生長。在一實施方案中，使用本發明的方法填補、封閉和/或治療需要治療的患者內的瘺管，所述方法包括向患者注射或施用本發明的膠原組合物。可以通過針頭在一個瘺管開口注射，向患者施用本發明的膠原組合物，并且填補大部分或全部的開口分支。可選的，膠原繩或膠原桿都可以通過開口穿入瘺管病變，或者可以用導管將膠原導入患者體內。通過本發明的膠原組合物或方法可以填補、封閉和/或治療不同類型的痿管，例如肛門痿、動靜脈瘺、膀胱瘺、頸動脈海綿竇瘺、外瘺、胃痿、腸瘺、體壁瘺、涎瘺、陰道瘺和肛門直腸瘺，及其組合。在一實施方案中，使用本發明的方法填補、封閉和/或治療需要治療的患者中的憩室，所述方法包括向患者注射或施用本發明的膠原組合物。憩室是這樣的異常生理學結構，所述結構是管狀或嚢狀器官例如腸、膀胱等，上的袋狀或囊狀開口，可以使用本發明的膠原組合物填充或增強。在另一實施方案中，本發明的方法用于填補、封閉和/或治療需要治療的患者中的嚢肝，所述方法包括向患者注射或施用本發明的膠原組合物。嚢肝是具有膜內層的異常囊，其含有氣體、液體或半固體物質。在一些實施方案中，嚢腫是假性囊腫，其具有例如液體聚集，但不包含上皮或其它膜性內層。可以用本發明來填補、封閉和/或治療的囊肺的其它非限制性實例包括皮脂嚢種、皮樣囊腫、骨嚢腫，或漿液囊腫，或其組合。在另一實施方案中，本發明的方法包括注射或施用本發明的膠原組合物，來填補全部或部分的任何空隙，所述空隙是從患者中手術的、化學的或生物學的除去不需要的或不期望的贅生物、液體、細胞或組織所導致的。可以在空隙位置局部注射或施用膠原組合物，從而填充剩余的和周圍的組織，幫助愈合過程，使感染風險最小化。該填充對于腫瘤切除造成的空隙位置是特別有用的，例如乳腺癌手術、除去瘤性結締組織、骨組織或軟骨組織等的手術。本發明還提供了產生填充的方法，所述方法通過不直接向身體注射或施用本發明的膠原組合物，而是在將所述組織、器官或器官組分包埋到身體內前，將本發明的膠原組合物體外注射到器官、器官組分或組織。6.7.2.2組織擴大(tissuebulking)在一實施方案中，本發明的方法包括向患者施用本發明的膠原組合物，用于組織擴大。在本發明的上下文中，"組織擴大"指由于外部作用或影響，患者(例如人)的非真皮軟組織的天然狀態的任何改變。本發明涵蓋的組織包括但不限于肌肉組織、結締組織、脂肪和神經組織。本發明涵蓋的組織可以是多種器官或身體部分的一部分，包括但不限于括約肌、膀胱括約肌和尿道。6.7.2.3尿失禁尿失禁(包括壓迫性尿失禁)是伴隨導致腹內壓升高的活動，例如咳嗽、噴嚏、笑或運動所發生的突發尿液漏出。在這些活動中，腹內壓瞬時升高高于尿道阻力，導致突發的、通常少量的尿液漏出。壓迫性尿失禁通常是膀胱儲藏問題，其中尿道括約肌的力量減小，當腹部存在升高的壓力時，括約肌不能防止尿液流出。尿失禁的出現可能是支持膀胱和尿道的骨盆肌減弱的結果，或者是由于尿道括約肌機能失常。例如，在尿道區域創傷之前，神經受損和某些藥物治療可以削弱尿道。尿失禁最常見于絕經期、盆腔外科手術或分娩后的婦女，例如在多次妊娠和陰道分娩后，或具有盆腔脫垂的婦女(膀胱、尿道或直腸壁突出到陰道空間)、膀胱突出癥、膀胱尿道突出或直腸突出，通常與陰道前支持缺失有關。在男性中，在前列腺手術后可以觀察到尿失禁，最常見于根治性前列腺切除術，其中可能損傷了尿道外括約肌。本發明涵蓋了控制或治療尿失禁或由其導致的癥狀或適應癥的方法，包括向需要的患者注射或施用本發明的膠原組合物，其中，填充了患者的括約肌組織，患者的自制力得到改善或重建。膠原組合物可以尿道旁注射或施用，從而增加尿道周圍的組織體積，以控制和/或治療尿失禁。通過增加組織體積，從而增加對尿液外流的抵抗力，能夠實現壓迫性尿失禁的改善。在某些實施方案中，將本發明的膠原組合物注射或施用到患者的尿道周圍區域中，例如，接近尿道上漏出尿液的孔，或增加尿道壁的厚度，從而當抑制尿液時能緊密的封閉。在另一實施方案中，將本發明的膠原組合物注射或施用到患者的膀胱出口的尿道肌肉外側的尿道周圍。可以通過皮膚、通過尿道，或者在女性中通過陰道，來注射使體積增大的材料。當使用針頭注射本發明的膠原組合物時，可以通過使用插入尿道內的膀胱鏡引導針頭放置。可以在局部麻醉下實施尿道重建過程，但是某些患者可能需要全身麻酔、區域麻醉或脊髓麻醉。可以使用局部麻醉，使患者在注射后能夠站立，并可以確定是否已經實現了自制。如果尚未重建自制力，可以向患者施用一次或多次后續注射。在數月后可能需要重復步驟，以實現膀胱控制。膠原注射通過增大尿道周圍區域，從而收縮括約肌，來幫助控制尿液漏出。6.7.2.4膀胱輸尿管反流膀胱輸尿管反流(VUR)(或尿意反射)的特征是尿液從膀胱至腎臟的尿液逆流。未治療的VUR對患者的腎功能和整體健康可以產生毀滅性的長期影響。患有VUR的患者具有發展出尿道感染、腎瘢痕、腎盂腎炎、高血壓和漸進性腎衰竭的增加的風險。本發明^是^f共了控制或治療VUR或由其導致的癥狀或適應癥的方法，包括向需要的患者注射或施用本發明的膠原組合物，其中，填充了患者的輸尿管壁，降低或消除了VUR的癥狀。可以利用本領域已知的任何方法，將膠原組合物在例如內窺鏡的引導下，注射(例如亞三角區注射)或施用在輸尿管口下方的逼尿肌背側。6.7.2.5胃食管返流疾病胃食管返流疾病(GERD)通常是由于食道下端括約肌(LES)—食道連接胃處的肌肉閥一不能正確閉合、松弛或削弱，以及胃內容物回漏或返流進入食道，所導致的功能紊亂。當胃酸，或偶爾的膽鹽與食道接觸時，就導致人們偶爾感覺到的燒心的灼燒感覺。當返流的胃酸接觸食道內層時，導致胸部或咽喉處的灼燒感覺(燒心)，并在口腔后部可以嘗到液體(胃酸過多)。隨時間推移，胃酸返流破壞了食道的組織內層，導致炎癥和疼痛。在成人中，長期持續的、未治療的GERD可以導致食道的永久損傷，甚至導致癌癥。任何人，包括嬰兒、兒童和孕婦，都可以患有GERD。本發明l是供了控制或治療GERD或由其導致的癥狀或適應癥的方法，包括向需要的患者注射或施用本發明的膠原組合物，其中，填充了患者的LES,降低或消除了GERD的癥狀。在某些實施方案中，在內窺鏡的引導下，將膠原組合物施用在食道胃連接水平的食道壁上。為了阻止返流，體積增大的效應是滯留的材料和后續的組織應答組合的結果。可以通過標準的或大口徑(例如大號)注射針頭來注射本發明的膠原組合物。6.7.2.6聲襞和喉頭本發明提供了方法，用于控制或治療影響一側或兩側聲襞(聲帶)和/或喉頭(喉)的疾病、功能紊亂(例如神經障礙)或其它異常。此類喉頭或聲襞的疾病、功能紊亂或其它異常的非限制性實例是聲門型喉癌、單側喉返神經麻痹、雙側喉返神經麻痹、麻痹性發音困難、非麻痹性發音困難、痙攣性發音困難或其組合。在其它實施方案中，本發明的方法還可用于控制或治療導致聲襞閉合失常的疾病、功能紊亂或其它異常，例如聲襞的不全麻痹("輕癱")、普通虛弱的聲襞例如伴隨老年的("老年喉小嚢(presbylaryngis)")，和/或聲襞的瘢痕(例如由于以前的手術或放療)。本發明涵蓋了為患者的聲襞提供支持或增大體積的方法，所述患者缺失了聲襞原有的體積(例如聲襞弓形突出或萎縮)或移動性(例如癱瘓)。在某些實施方案中，可以用本發明的膠原組合物來填充聲襞和/或喉頭的其它軟組織，其可以單獨使用或與其它治療或藥物結合使用。在一實施方案中，本發明的膠原組合物填充或增加了一側(或兩側)聲襞的體積，使其能夠與另一側聲襞接觸。可以使用本領域普遍已知的任一種方法，用于向患者的聲襞或喉頭施用本發明的膠原組合物。在一些實施方案中，使用彎針通過患者的口來注射本發明的膠原組合物。在其它實施方案中，可以使用針頭(例如大號、短針)直接通過患者的皮膚和喉結注射本發明的膠原組合物。向患者施用本發明的膠原組合物時，可以用喉鏡在視頻監視器上監控患者的聲襞。6.7.2.7聲門閉合不全在一實施方案中，本發明提供了控制或治療聲門閉合不全的方法。利用本領域已知的方法，使用針頭將本發明的膠原注射到患者聲襞中，實現經皮喉頭膠原填充。在一些情況下，患者患有發音過弱和/或聲門閉合不全，其影響喉頭的發聲功能，增加肌強直和降低甲杓肌的運動能力。在另一實施方案中，發音過弱是帕金森氏癥的結果。在一實施方案中，用于控制或治療患者中聲門閉合不全的本發明的方法包括將本發明的膠原組合物注射或施用到患者的聲襞，其中注射填充了聲襞，改善了聲門閉合，從而減弱或消除了患者中的聲門閉合不全。在施用本發明的膠原組合物之前，患者可以具有或不具有可移動的聲襞。6.7.2.8發音困難發音困難是聲音的任何損傷或說話困難。發音困難可以與喉或聲襞癱瘓有關或無關。本發明提供了用于控制或治療發音困難，例如癱瘓性發音困難、非癱瘓性發音困難或痙攣性發音困難的方法。在一實施方案中，控制或治療患者的發音困難的方法包括向需要的患者注射或施用本發明的膠原組合物，其中，與膠原組合物施用前相比，患者的發音困難改善了。在某些情況下，喉膠原注射允許以小的增量對一側或兩側聲襞進一步醫學處理，從而在結合甲狀軟骨成形術或在甲狀軟骨成形術之后，改善發聲。6.7.2.9聲襞癱瘓聲襞本質上是被粘膜覆蓋的肌肉。當肌肉不再與神經連接時，肌肉就萎縮了。因此，典型的癱瘓的聲襞是小尺寸和彎如弓狀的。此外，根據癱瘓的類型，聲襞可以或不可以移動至足夠接近中部，使另一側聲襞能夠接觸。當聲襞不能夠接觸時，患者難以發出聲音(或至少發出大的聲音)。因此，本發明提供了方法，用于填充或擴大聲襞癱瘓患者的萎縮的聲襞，其中，聲襞相互接觸的能力被改善。單側聲襞癱瘓是一側聲襞不能運動，通常是由于神經功能障礙，通常喉頭不能完全閉合。喉返神經是負責兩側聲襞大部分運動的主要神經，其可以被例如多種疾病、某些手術或病毒感染破壞。在某些實施方案中，患者的聲襞癱瘓是甲狀腺癌、肺癌、結核或肉瘤病(或任何導致淋巴結擴大至胸部的原因)、中風或神經疾病(例如夏-馬-圖三氏(Charcot-Marie-Tooth)、希-德二氏(Shy-Drager)和多系統萎縮)的癥狀或結果。雙側聲襞癱瘓是兩側聲襞不能運動(通常接近中線)。在某些實施方案中，患者的雙側聲襞癱瘓是例如中風或其它神經適應癥(例如阿-希二氏畸形(Amold-Chiarimalformation))、甲狀腺癌、手術(例如大腦手術)曱狀腺切除術的癥狀或結果。本發明提供了用于控制或治療聲襞癱瘓的方法。在一實施方案中，提供了控制或治療患者單側或雙側聲襞癱瘓，或與其相關的綜合癥的方法，包括向患者注射或施用本發明的膠原組合物，其中，患者的聲襞閉合改善了。在一實施方案中，本發明的膠原組合物填充或增加了一側(或兩側)癱瘓聲襞的體積，使其可以與另一側聲襞接觸。可以通過患者的口，或直接通過皮膚和喉結，向需要的患者注射本發明的膠原組合物。6.7.2.10藥物遞送可以使用本發明的膠原組合物作為藥物遞送載體，用于藥物(例如治療劑)的受控遞送。在某些實施方案中，膠原組合物向個體(例如人)遞送一種或多種治療劑。本發明范圍涵蓋的治療劑是蛋白質、肽、多糖、多糖偶聯物、遺傳疫苗、減毒活疫苗、完整的細胞。本發明的方法中使用的藥物的非限制性實例是抗生素、抗癌劑、抗菌劑、抗病毒劑；疫苗；麻醉劑；鎮痛劑；抗哮喘劑；抗炎劑；抗抑郁劑；抗關節炎劑；抗糖尿病劑；精神抑制劑；中樞神經系統刺激劑；激素；免疫抑制劑；肌肉松弛劑；前列腺素。膠原組合物可用作遞送載體，用于一種或多種小分子向個體(例如人)的控制遞送。在一些實施方案中，膠原組合物向個體(例如人)遞送一種或多種小分子。如本發明中使用的，術語"小分子"以及類似的術語包括但不限于肽、類肽、氨基酸、氨基酸類似物、多核苷酸、多核苷酸類似物、核苷酸、核苷酸類似物、具有少于每摩爾約10,000克的分子量的有機或無機化合物(即，包括異源有機化合物或有機金屬化合物)、具有少于每摩爾約5000克的分子量的有機或無機化合物、具有少于每摩爾約1000克的分子量的有機或無機化合物、具有少于每摩爾約500克的分子量的有機或無機化合物、具有少于每摩爾約100克的分子量的有機或無機化合物，或此類化合物的鹽、酯和其它藥學上可接受的形式。還涵蓋了此類化合物的鹽、酯和其它藥學上可接受的形式。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物作為藥物遞送的載體，導致藥物的增強的吸收；改善的藥物動力學譜，和與本領域已知的其它藥物遞送系統有關的藥物的系統分布。對于改善藥物動力學，意指通過例如測量標準藥物動力學參數，實現了增強的藥物動力學譜，所述參數為例如實現最大血漿濃度的時間(Tmax)、最大血漿濃度的強度(Cmax)、出現可檢測的血液或血漿濃度的時間(Tlag)。對于增強吸收，意指根據此類參數的測量，藥物的吸收是改善了的。藥物動力學參數的測量是本領域常規實施的。在某些實施方案中，本發明的膠原組合物還包括一種或多種生物分子，例如治療劑，包括但不限于抗生素、激素、生長因子、抗腫瘤劑、抗真菌劑、抗病毒劑、鎮痛藥、抗組胺劑、抗炎劑、抗感染劑、愈傷劑、傷口封閉劑、細胞引誘劑和支架試劑、酶、受體拮抗劑或激動劑、激素、生長因子、自體骨髓或其它細胞類型、抗生素、抗微生物劑和抗體等，或其組合。在特定的實例中，可以采用一種或多種生長因子，例如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子等浸潤膠原組合物。還可以用一種或多種小分子浸潤膠原組合物，所述小分子包括但不限于有機小分子，例如特定生化過程的特定抑制劑，例如膜受體抑制劑、激素、激酶抑制劑、生長抑制劑、抗癌藥物、抗生素等。在某些實施方案中，在生產前或注射前，根據預期的用途，用生物分子浸潤本發明的膠原組合物。在一些實施方案中，本發明的膠原組合物包含一種或多種干擾素(oc-IFN、[3-IFN、Y-IFN)、集落刺激因子(CSF)、粒細胞集落刺激因子(GCSF)、粒-單核細胞集落刺激因子(GM-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)、神經生長因子(NGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、淋巴毒素、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、血管內皮生長因子、紅細胞生成素、轉化生長因子(TGF)、制瘤素M、白介素(IL-I、IL-2、IL-3、IL陽4、IL畫5、IL-6、IL-7、IL匿8、IL畫9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL扁19、IL-20，等)，其家族成員，或其組合。在一些實施方案中，本發明的膠原組合物包含此類生長因子或其它生物分子的生物活性類似物、片段，或衍生物。本發明的方法中使用的特定活性劑包括生長因子例如轉化生長因子(TGFs)、成纖維細胞生長因子(FGFs)、血小板衍生生長因子(PDGFs)、表皮生長因子(EGFs)、結締組織活性肽(CTAPs)、成骨因子，以及此類生長因子的生物學活性類似物、片段和衍生物。轉化生長因子(TGF)超基因家族的成員是有用的，其是多功能的調節蛋白。TGF超基因家族的成員包括[3轉化生長因子(例如TGF-pl、TGF-p2、TGF-[33);骨形態發生蛋白(例如BMP-1、BMP匿2、BMP-3、BM-4、BMP-5、BMP陽6、BMP陽7、BM-8、BM-9);肝素結合生長因子(例如成纖維細胞生長因子(FGF)、表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、胰島素樣生長因子(IGF));抑制素(例如抑制素A、抑制素B);生長分化因子(例如GDF-1);和激活素(例如激活素A、激活素B、激活素AB)。6.7.2.11傷口和燒傷部分的由于其物理性質，本發明的膠原組合物被預期，與本領域已知的其它生物材料相比，例如在美國專利號3,157,524、4,320,201、3,800,792、4，837，285、5,116,620中描述的那些，具有作為傷口敷料的增強的臨床用途，其用于填充或取代硬和/或軟組織修復。由于本發明的膠原組合物保留了膠原的天然四級結構，本發明的膠原組合物通過細胞遷移進入膠原基質的間隙中，從而提供了改善的組織向內生長。本發明的膠原組合物允許細胞附著并生長到膠原基質內，合成自身的大分子。從而使細胞產生了新的基質，所述基質允許新組織的生長。在其它已知的膠原形式(例如纖維、羊毛織物和可溶性膠原)上，尚未觀察到此類細胞生長。在一些實施方案中，本發明涵蓋了通過將本發明的膠原組合物直接置于個體的傷口位置的皮膚上(即，角質層上)，從而傷口被覆蓋，利用例如膠布，來治療傷口。在其它實施方案中，本發明涵蓋了使用本發明的膠原組合物作為植入物，例如皮下植入物，來治療傷口。本發明涵蓋了通過向本發明的膠原組合物中添加能夠促進組織向內生長的大分子，以增加傷口愈合的速率。此類大分子包括但不限于透明質酸、纖粘連蛋白、層粘連蛋白和蛋白聚糖(參見例如Doillon等人，(1987)Biomaterials8:195200;和DoillonandSilver(1986)Biomaterials7:38)。在一些實施方案中，本發明的膠原組合物用于控制傷口，所述傷口包括但不限于部分傷口和全層傷口、壓迫潰瘍、壓迫潰瘍、靜脈曲張性潰瘍、糖尿病潰癡、慢性血管潰瘍、隧道/潛行傷、術后傷口(例如供體部位/移植物、Mohs手術后、激光手術后、足病、傷口裂開)、外傷(例如擦傷、割傷、二度燒傷和皮膚劃傷)以及引流傷。在一些實施方案中，本發明的膠原組合物意在一次性使用。本發明還涵蓋了將藥物活性劑，其包括但不限于血小板衍生生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子、轉化生長因子(3、血管生成因子、抗生素、抗真菌劑、殺精子劑、激素、酶、酶抑制劑，摻入本發明的膠原組合物中，如本發明4.4.2.7節所述用于向皮膚遞送，以及任何上述生物分子。在某些實施方案中，藥物活性劑以生理有效量來提供。在一些實施方案中，膠原組合物在用于傷口位點前，還種植了活細胞，所述細胞包括但不限于自體干細胞、干細胞和自體成體細胞。本發明的膠原組合物用于治療傷口感染是特別有用的，例如手術故障或外傷導致的傷口感染。在特定的實施方案中，膠原組合物采用用于傷口感染治療的治療有效量的試劑來浸潤，所述試劑包括但不限于抗生素、抗微生物劑和抗細菌劑。本發明的膠原組合物具有治療本領域已知的任何微生物的傷口感染的臨床和治療用途，例如來源于人體內的感染傷口的微生物(人體已知是病原微生物的儲庫)，或來源于環境來源的。在傷口中的生長可以被本發明的方法和組合物降低或阻止的微生物的非限制性實例是金黃色葡萄球菌(S.m#"ews)、表皮葡萄je求菌OS.ep/dem2&)、(3-溶血性鏈3求菌(/zaemo/^/c5Vre/tococcttf)、E.coli、克雷伯菌(^/eZ^/e〃a)矛口作i單月包菌(T^ewfifcw7W7os)屬，以及厭氧纟田菌魏氏梭狀芽月包桿菌(C7os^"/Wm/wwe/c/n'/)或第三梭狀芽胞桿菌(C/c^nW&mteW/wm)，其是氣性壞疽的病因，主要位于深部外傷中。在其它實施方案中，本發明的膠原組合物用于傷口治療，包括但不限于表皮傷口、皮膚傷口、慢性傷口、急性傷口、外部傷口、內部傷口(例如在手術過程中，膠原組合物可以圍繞在吻合位點，以防止血液從縫合線漏出，并且防止身體對縫合材料形成粘附)、先天性傷口(例如營養不良性大皰性表皮松解癥)。特別的，膠原組合物在壓迫潰瘍(例如褥瘡)的治療中具有增強的用途。壓迫潰瘍通常發生在經歷長期臥床的患者上，例如四肢麻痹患者和下身麻痹患者，由于局部壓力的原因，承受著皮膚喪失的痛苦。產生的褥瘡表現出真皮腐蝕并缺少表皮和皮膚附屬器。在其它更特定的實施方案中，本發明的膠原組合物用于控制傷口，包括但不限于部分和全層傷口、壓迫潰瘍、靜脈曲張性潰瘍、糖尿病潰瘍、慢性血管潰瘍、隧道/潛行傷口、術后傷口(例如供體部位/移植物、Mohs手術后、激光手術后、足病、傷口裂開)、外傷(例如擦傷、割傷、二度燒傷和皮膚劃傷)和引流傷。本發明的膠原組合物還可用于燒傷的治療，包括但不限于一度燒傷、二度燒傷(部分厚度燒傷)、三度燒傷(全層燒傷)，燒傷的感染、切痂和不切痂的燒傷、移植傷口的感染、供體位點的感染、原移植或愈合燒傷或皮膚移植供體位點的表皮缺失，以及燒傷膿皰病。6.7.2.12牙科本發明的膠原組合物在牙科(例如牙周手術)中具有特殊的用途，其能指導牙周組織再生的組織再生，指導骨質再生和牙根覆蓋。本發明涵蓋了使用本發明的膠原組合物促進牙周骨內組織缺損的再生，其包括但不限于匹配雙側牙周組織缺損、牙間隙骨內缺損、深3壁骨內缺損、2壁骨內缺損、和骨內缺損2和3。對于牙周組織骨內缺損治療，本發明的膠原組合物與本領域已知的其它技術相比，預期具有增強的治療用途和增強的臨床參數，所述已知技術例如如Quteish等人，1992,J.Clin.Periodontol.19(7):476-84;Chung等人，1990,J.Periodontol.61(12):732-6;Mattson等人，1995，J.Periodontol.66(7):635-45;Benque等人，1997,J.Clin.Periodontol.24(8):544-9;Mattson等人，1999,J.Periodontol.70(5):510-7中公開的交聯的膠原膜的使用。利用本發明的膠原組合物改善的臨床參數的實例包括但不限于菌斑和牙齦指數評分、牙周袋探針深度(probingpocketdepth)、探針附著深度(probingattachmentdepth)，以及根分叉病變和骨質缺損的分類，都是本領域技術人員已知的。本發明還涵蓋了本發明的膠原組合物在治療II型根分叉缺損中的用途，所述缺損包括但不限于雙側缺損、成對的口腔II級下頜磨牙根分叉缺損，和雙側下頜根分叉缺損。本發明的膠原組合物在治療II級根分叉缺損中的應用，可以部分的解釋為它在根分叉缺損中使缺失的齒根膜再生的能力。與本領域使用的膠原膜相比，預期本發明的膠原組合物對于II級根分叉缺損的治療，具有增強的治療和臨床用途，所述膠原膜如在Paul等人，1992,Int.J.PeriodonticsRestorativeDent.12:123-31;Wang等人，1994，J.Periodontol.65:1029-36;Blumenthal,1993,J.Periodontol.64:925-33;Black等人，1994,J.Periodontol.54:598-604;Yukna等人，1995,丄Periodontol.67:650-7中公開的。本發明還涵蓋了本發明的膠原組合物在牙根覆蓋方法中的用途。本發明的膠原組合物在牙根覆蓋中的應用，可以部分的解釋為基于指導組織再生的原則，其取代缺失的、受損的或疾病的牙齦組織的能力。與本領域傳統用于牙根覆蓋的膠原膜相比，預期本發明的膠原組合物對于牙根覆蓋，具有增強的治療和臨床用途，所述的膠原膜公開在例如Shieh等人，1997J.Periodontol.,68:770-8;Zahedi等人，1998J.Periodontol.69:975-81;Ozcan等人，1997J.MarmaraUniv.Dent.Fa.2:588-98;Wang等人，1997J.Dent.Res.78(SpecIssue):119(摘要.106)中，如上文的原因引用。本發明還涵蓋了膠原組合物在具有牙周病的個體中的用途，所述牙周病包括但不限于牙周炎和齒齦炎。本發明的膠原組合物還具有作為添加劑在潔治加沖艮面平整(scalingandrootplaning)方法中的臨床用途。本發明涵蓋了使用本發明的膠原組合物治療具有牙周病的個體。使用本發明的膠原組合物治療個體的牙周病的示例性方法包括將膠原組合物(其可以采用抗生素例如葡萄糖酸洗必太進行浸潤)插入個體的一個或多個牙周袋中，例如大于或等于5mm。有利的，膠原組合物可以是生物可降解的。根據治療的牙病的類型，在牙科中使用的本發明的膠原組合物可以采用一種或多種生物分子來浸潤。本發明的方法和組合物涵蓋了本領域已知的、用于牙病治療的任何生物分子。在特定的實施方案中，在與感染相關的牙病治療中使用的膠原組合物可以采用一種或多種抗生素進行浸潤，所述抗生素包括但不限于鹽酸強力霉素(doxocycline)、四環素(tetracycline)、葡萄糖酸洗必太(chlorhexidinegluconate)和米i若環素(minocycline)。6.7.2.13其它用途本發明的膠原組合物還可以用作卵巢或子宮角的術后粘連障礙。膠原組合物還可以用作腦的粘連障礙(例如腦膜-腦粘連)。因此，膠原組合物可用于重建分隔硬腦脊膜和軟腦膜的硬膜下腔。通常的，膠原組合物可用作受傷內臟的包裹物，例如脾臟，或作為附著在肺上的薄膜，以控制術后漏氣。膠原組合物還可用于(在鼓膜穿孔中)支持鼓膜移植的手術治療，或作為乳突腔的內層。膠原組合物還可用作新陰道成形術中的內層組織。在心血管手術中，膠原組合物可以用作心包封閉材料。膠原組合物還可以在輸精管吻合術中完成吻合中使用。6.7.3包含干細胞的組合物的應用在任何上述用途的范圍內，不論是美容的或非美容的，組合物可以包含一種或多種類型的干細胞，優選的胎盤干細胞，如上文5.6節描述的。當胎盤干細胞與本發明的組合物接觸時，胎盤干細胞分泌促進傷口愈合的細胞因子，例如IL-6、IL-8和MCP-1(單核細胞化學引誘蛋白-1)。在本發明的組合物不包含或僅包含可忽略量的纖粘連蛋白的實施方案中，當允許胎盤干細胞附著在組合物上時，胎盤干細胞分泌胞外基質蛋白，包括纖粘連蛋白。因此，組合物，結合附著在組合物上的胎盤干細胞，可以作為創建表面或導管，來刺激和允許細胞遷移到接受所述組合的個體一部分之內，或沿所述部分遷移。組合物和干細胞可以共同向個體施用。例如，在一實施方案中，組合物可以包含干細胞(在向個體施用組合物之前不久(例如在10-20分鐘內)，已經與組合物接觸)。在另一實施方案中，在施用前，通常在施用前至少1小時，干細胞可以與組合物接觸一段時間以允許干細胞附著至組合物。在更特定的實施方案中，施用前的時間是足以使干細胞附著和增殖的時間，通常在施用前至少24小時至48小時，或更久。在另一更特定的實沉積可檢測量的胞外基質蛋白，例如纖粘連蛋白的時間。組合物和干細胞也可以分別向個^f本施用。例如，在一實施方案中，組合物可以向個體的傷口位點或組織需要修復的位點施用，然后再施用干細胞。在另一實施方案中，干細胞與傷口或需要修復的組織位點接觸，然后傷口或需要修復的組織再接觸本發明的組合物。因此，在一實施方案中，本發明提供了促進傷口愈合的方法，包括用包含干細胞(例如胎盤干細胞)的本發明的組合物接觸傷口，其中，干細胞分泌IL-6、IL-8或MCP-1，或其任意組合，或者向至少一部分傷口分泌纖粘連蛋白。當千細胞分泌纖粘連蛋白時，優選的本發明的膠原組合物包含不可檢測量的纖粘連蛋白。在特定的實施方案中，組合物幾乎按照傷口的形狀成型或形成。在某些實施方案中，傷口是不愈合的傷口。在特定的實施方案中，傷口是小腿潰瘍，例如靜脈曲張性小腿潰瘍、動脈小腿潰瘍、糖尿病小腿潰瘍或褥癡(壓迫)潰瘍。當傷口是小腿潰瘍時，組合物優選的形成大小足以覆蓋至少一部分潰瘍的薄膜，且薄膜至少在接觸潰瘍的薄膜表面包含胎盤千細胞。在不同的實施方案中，所述傷口是意外傷，或由手術操作引起的或附屬的傷口。所述手術操作可以是如上述本發明的膠原組合物可應用的任何手術操作，并且所述手術操作可以是美容手術或非美容手術。在另一實施方案中，本發明促進了個體的一部分身體的組織缺損的改善或愈合。此類缺損可以是天然存在的，例如遺傳缺損，如瘺管、缺陷型心瓣膜、腹壁穿孔，等。6.8包含膠原組合物的試劑盒本發明的另一方面，提供了包含本發明的膠原組合物的試劑盒。例如，本發明提供了用于填充或取代哺乳動物組織的試劑盒。所述試劑盒包括封裝的本發明的一種或多種膠原組合物，用于向本領域熟練的技術人員分發。試劑盒可以包括標簽，或采用根據本發明的方法使用膠原組合物用于填充或取代哺乳動物的組織的說明來標注。在某些實施方案中，試劑盒包括用于執行方法的組分，例如用于施用膠原組合物的裝置，如一種或多種注射器、插管、導管等。在某些實施方案中，試劑盒可以包括用于安全處理施用膠原組合物的裝置的組分(例如用于使用過的注射器的"利器"容器)。在某些實施方案中，試劑盒可以包括在預填充的注射器、單位劑量和單位用量包裝中的組合物。在某些其它實施方案中，本發明的試劑盒可以包括本發明的膠原組合物，以及一種或多種用于干細胞群培養的其它組分。例如，試劑盒可以包括一種或多種構型的本發明的膠原組合物，所述構型適于干細胞(例如胎盤干細胞)的培養，例如呈薄膜、管狀、網狀等形狀的膠原組合物。試劑盒可以包括一種或多種用于干細胞培養的器具，例如在細胞培養過程中能夠容納本發明的膠原組合物的培養皿；塑料制品、注射器、移液器槍頭、細胞培養基、一種或多種細胞因子或生長因子、一次性用品等。在其它實施方案中，試劑盒可以包含一種或多種有利于從胎盤組織中收集干細胞的組分。在不同的特定實施方案中，試劑盒包含有利于灌流胎盤以收集干細胞的組分，例如灌流液；一種或多種大小足以容納胎盤的盤子，用于收集灌流液的玻璃器亞或塑料器皿；一個或多個用于收集灌流液的袋子，用于臍帶血管插管的必需物和/或套管；等。在其它特定的實施方案中，試劑盒包含一種或多種有利于酶促消化胎盤組織，以分離胎盤干細胞的組分，例如一種或多種組織消化酶(例如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等)；適合細胞培養的塑料器皿(例如培養皿、多孔培養板等)。在某些實施方案中，試劑盒包括用于在至少一種醫學領域，例如傷口愈合方面使用本發明的膠原組合物的說明書。在其它實施方案中，試劑盒包括用于在本發明的膠原組合物上培養一種或多種干細胞群的說明書。7.實施例在下列章節中，本領域技術人員應認識到短語"在約23°C"可以指室,、曰/皿。7.1實施例l:從胎盤分離膠原該實施例示例了從胎盤分離膠原。根據本發明中描述的方法獲得冷凍的胎盤。通過包裹在有水的Nalgene盤中1-4小時，來解凍胎盤。然后，除去塑料包裹，并置于水中進一步解凍。將解凍的胎盤置于絞肉機的不銹鋼盤中。從每個胎盤上切除臍帶部分，并在約23t將每個胎盤切成約4片。在約23。C用絞肉機磨碎所述片。滲透壓沖擊將獲得的磨碎的胎盤添加到裝有0.5MNaC1(5升/胎盤)的Nalgene槽中，并用馬達驅動的攪拌器在75-100rpm混合(4-6。C，24小時)。24小時后，停止攪拌器，使組織在約23。C沉淀在攪拌器的底部。在約23。C,使用蠕動泵，用#36TYGON⑧管泵出組織和液體，并通過糾0篩過濾，將分離的組織放回攪拌槽中。將新鮮的0.5MNaC1(5升/月臺盤)添加到混合物中，在4-6。C混合24小時(有發動機的攪拌器，75-100rpm)。在24小時后使用上述方法分離組織。用水(5升/胎盤)洗滌組織，并在4-6。C混合24小時(有發動機的攪拌器，75-100rpm)。在24小時后使用上述方法分離組織。用0.5MNaCl再次洗滌組織，然后再根據上述四個段落所述，用0.5MNaCl，接著再用水來洗滌組織。冷凍干燥將獲得的樣品按200-400g的量分裝到冷凍干燥容器中，并在-7(TC冷凍1-2小時。將冷凍樣品在冷凍干燥器中冷凍干燥24-48小時，然后移除。在攪拌機中將凍干樣品混合成均勻的粉末，然后轉移至清潔的攪拌槽。去垢劑處理將1%脫氧膽酸溶液(117胎盤)與拌勻的、凍干樣品添加到攪拌槽中。將樣品和1%脫氧膽酸溶液在4-6。C混合24小時(有發動機的攪拌器，75-100rpm)。在24小時后，停止攪拌器，如上述用#40篩分離組織。在4-6。C重復去培劑處理24小時(有發動機的攪拌器，75-100rpm)。在24小時后，停止攪拌器，如上述用#40篩分離組織。水洗潦用水(5升/胎盤)洗滌組織，并在4-6。C混合24小時(有發動機的攪拌器，75-100rpm)。在24小時后，使用上述方法分離組織。然后用水(5升/胎盤)再次洗滌組織，在4-6t混合24小時(有發動機的攪拌器，100-150rpm)。在24小時后，使用上述方法分離組織。然后用水(5升/胎盤)再次洗滌組織，在4-6。C混合24小時(有發動機的攪拌器，150rpm)。在24小時后，使用上述方法分離組織。任選的，用水(5升/胎盤)第四次洗滌組織，并在4-6t:混合24小時(有發動機的攪拌器，150rpm)。在24小時后，使用上述方法分離組織。冷凍干燥將獲得的樣品按200g的量添加到攪拌器中。向樣品中添加200mL去離子水，并在攪拌機中將樣品混合成均勻的糊狀。倒出混勻的樣品，并用水(l升/胎盤)漂洗。將200-400g量的樣品添加到凍干容器中。將樣品分裝并在-70。C冷凍。分裝的樣品凍干24-48小時。無菌堿處理倒出凍干的樣品。將氫氧化鈉溶液(0.5M，1L)添加到高壓滅菌的、無菌瓶中。將低內毒素水(1L)添加到倒出的、凍干樣品中。在約23°C，將樣品和氫氧化鈉溶液在振蕩器上250rpm混合4小時。無菌水洗滌通過無菌的#70濾器過濾，回收樣品，并用1L無內毒素的水漂洗。添加無內毒素水(lL),并在約23。C，在振蕩器上250rpm混合樣品18-24小時。通過無菌的#70濾器過濾，回收樣品。添加無內毒素水(lL)，在約23°C，在^展蕩器上250rpm混合樣品18-24小時。通過無菌的#70濾器過濾，回收樣品，并用1L無內毒素的水漂洗。添加無內毒素水(lL)，并在約23。C，在振蕩器上250rpm混合樣品18-24小時。如果pH大于9，用無內毒素的水再次洗滌樣品，并在振蕩器上約250rpm混合樣品約18-24小時。如果pH小于或等于9，則樣品可供制劑。產量可以是10g/胎盤或更多。可以凍干獲得的樣品，供儲存。對于使用，樣品可以在攪拌器中以300-1000mg/mL懸浮在磷酸緩沖鹽溶液中，作為糊劑在例如注射器中使用。樣品還可以500-1000mg/ml在磷酸緩沖鹽溶液中鑄模，并成型成例如薄膜、管狀、塞狀等供使用。7.2實施例2:端肽膠原樣品的制備根據實施例1的滲透壓沖擊、冷凍干燥、去垢劑處理、水洗滌、冷凍干燥、堿處理、水洗滌和冷凍干燥步驟，制備出7.5g端肽膠原。根據實施例1的滲透壓沖擊、冷凍干燥、去垢劑處理、水洗滌、堿處理、水洗滌和冷凍干燥步驟，制備出11.8g端肽膠原。根據實施例1的滲透壓沖擊、冷凍干燥、去垢劑處理、水洗滌、堿處理、水洗滌和冷凍干燥步驟，制備出12.0g端肽膠原。根據實施例1的滲透壓沖擊、去垢劑處理、水洗滌、堿處理、水洗滌和冷凍干燥步驟，制備出11.8g端肽膠原。7.3實施例3:生物化學分析根據實施例1和2制備膠原樣品。標準技術進行的生物化學分析顯示，膠原占干重80.40%,水11.00%和少于0.01%纖粘連蛋白、層粘連蛋白和糖胺聚糖。未測定彈性蛋白含量。根據實施例1和2制備的樣品的氨基酸分析顯示，34-35%甘氨酸、約11%羥脯氨酸和10-11%脯氨酸。根據實施例1和2制備的樣品的免疫學分析顯示，74-92%I型膠原，4-6%III型膠原和2-15%IV型膠原。7.4實施例4:制造ECM的替代方法，和在ECM上的干細胞培養該實施例示例了制造本發明的膠原組合物的替代方法，并提供了分析通過這類方法制造的材料組合物的方法。應矛差^Y五CM)^^庠如下分離ECM。簡而言之，在0.5M氯化鈉中解凍冷凍的人胎盤，在絞肉機中磨碎，并在23t下，在培養箱的振蕩器中，在0.5M氯化鈉和水中重復洗滌，再用去垢劑，例如l。/oSDS或0.5。/。脫氧膽酸來洗滌。用0.1-0.5N氫氧化鈉處理無血液的胎盤組織，處理的時間在3小時和24小時之間不等，以使小葉組織可溶化，再用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)漂洗，以中和pH。如此生產的材料是穩定的糊狀物，并儲存在4。C下。i務化夢^浙為了確定分離的ECM的生物化學組成，冷凍干燥1克樣品，并確定干重。通過在70°C溶于100mMHC1中，或在23°C下，在10mMHC1中胃蛋白酶處理(lmg/gm)ECM18小時，使ECM溶解。使用溶解在100mMHCl中的組織來確定纖粘連蛋白、層粘連蛋白、GAG和彈性蛋白的含量。使用胃蛋白酶-溶解的組織來確定膠原含量。使用夾心ELISA來確定纖粘連蛋白和層粘連蛋白的濃度。使用染料檢測來確定彈性蛋白和糖胺聚糖(GAG)含量。使用夾心ELISA(Chondrex)進行I型膠原含量的確定。使用II型和IV型膠原的一抗，和HRP-偶聯的二抗，采用自制ELISA,來確定III型和IV型膠原含量。五CM溝建沐W斜務.'為了制備ECM材料的薄膜，將一層水合的ECM糊狀物夾在兩層醫學級的TYVEK⑧膜之間。將該構建體裝載到干膠器上，在23。C使用真空過夜，直到ECM膜干燥。將薄膜剪切成用于細胞培養研究的合適大小。為了制備ECM的3D結構，將ECM糊狀物填充到不同的模具中，并凍干。研究ECM膜和3D模具在培養基或水中的穩定性。將構建體置于水、生理鹽水或細胞培養基中，在37。C下培養長達1周時間。勿>€培#參將胎盤干細胞繼代培養于60%低糖DMEM(Invitrogen,Carlsbad,CA)、40%MCDB-201(Sigma，St.LouisMO)、2%胎牛血清(Hyclone,Logan,UT)、1X胰島素-轉鐵蛋白-硒添加物(Invitrogen)、0.02%亞麻酸/牛血清白蛋白(Sigma)、10ng/ml表皮生長因子(Sigma)、10ng/ml血小板衍生生長因子(R&DSystems,Minneapolis,MN)、0.05M地塞米松(Sigma)、0.1mM抗壞血酸2-磷酸(Sigma)和100U青霉素/1000U鏈霉素(Invitrogen)中。將胎盤干細胞(30，000個/孔)接種在已經置于24多孔微孔板中的ECM膜上。胎盤干細胞還以相等的密度，接種在用膠原(Inamed,Fremont,CA)預包4皮的Labtek腔室je皮片(NalgeneNuncInternational,Rochester,NY)上。細胞在37°C培養3和48小時，并被處理用于免疫熒光顯微鏡檢。名瘦資^^凝錄趁在用ECM膜培養3或48小時后，用3.7%甲醛固定胎盤干細胞-ECM構建體10分鐘，并用0.5%Triton-X100透化20分鐘。用AlexaFluor488-偶聯的鬼筆環肽培養胎盤干細胞，使F-肌動蛋白可視化。對于纖粘連蛋白染色而言，用兔抗人纖粘連蛋白抗體(Sigma)在封閉的緩沖液(3%牛血清白蛋白/lX磷酸緩沖鹽溶液)中培養樣品1小時，用磷酸緩沖鹽溶液洗滌，并再用AlexaFluor594-偶聯的抗兔-抗體在封閉緩沖液中培養樣品30分鐘。將樣品再用磷酸緩沖鹽溶液洗滌，并置于載玻片上，用熒光顯微鏡觀察。勿應^f為、泌》V(從含有胎盤干細胞的細胞培養ECM薄膜上，以及從含有胎盤干細胞的組織培養處理板上，在培養的0、3、24和48小時，移除培養基樣品(100pl)。將樣品用1mLPBS稀釋，并分析細胞因子的存在。根據已知濃度的細胞因子的標繪圖，計算每種細胞因子的濃度。為、庠五CM:對應濕重約300g每個的胎盤，典型的胎盤干重是約30g。如圖1所示，可以使用滲透壓沖擊步驟和去垢劑洗滌步驟來除去大量的非胞外基質組織，其最終殘留重量為約10g。使用NaOH和去垢劑的增溶作用的結合，導致殘重進一步降低至約6g。已經發現暴露在NaOH中的時間，和NaOH的濃度，將影響從胎盤分離的ECM總量。使用不同的去港劑和NaOH洗滌步驟，將產生5種不同的ECM終材料。通常，單個胎盤產生約6g至約10g的ECM材料。五CMW^參化夢逸成5種不同的ECM的生物化學分析顯示，它們基本上由膠原組成；I型是主要的膠原(總膠原的約74%至約90%),III型(總膠原的約4%至約6%)和IV型(總膠原的約2%至約15%)是次要組分。在胎盤ECM中發現的其它主要的胞外基質蛋白是彈性蛋白。如表1所示，彈性蛋白代表了ECM-1至ECM-4的總干重的約3-5%。然而，未使用NaOH產生的ECM-5,含有約12%彈性蛋白。當鑒別在通過五種方法制造的ECM材料中的糖胺聚糖時，％干重似乎不受分離方法中使用NaOH的影響。相反，重要的粘附蛋白纖粘連蛋白和層粘連蛋白的存在，則對NaOH的使用非常敏感。經過NaOH處理，纖粘連蛋白和層粘連蛋白不能保留，其在ECM1至4中都未發現。然而，不使用NaOH分離的ECM-5則具有更豐富的黏附蛋白的組成(表1)。表1:由不同方法制造的胎盤膠原組合物中存在的胞外基質蛋白組<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>%=百分比干重勿應錄合碌宏在接種3個小時后，在所有的ECM(弁l-5)中都觀察到了相似水平的胎盤干細胞附著。與ECM結合的干細胞的水平少于在純化膠原上觀察到的水平。此時，纖粘連蛋白的免疫染色揭示了豐富的胞外染色，并且沒有檢測到胞外纖粘連蛋白。通過48小時培養，在純化的膠原、ECM2和ECM4上觀察到胎盤干細胞數量增加，并且具有相似的伸展良好的形態學。相反，在ECM1上培養的胎盤干細胞則沒有旺盛生長。不僅只觀察到少量的細胞，而且細胞的形態學是圓形的，而不是伸展良好的。在ECM5上的胎盤干細胞比其它ECM或膠原上的胎盤干細胞表現出更多的拉長或極化。因為干燥后材料表面不均一，對附著在ECM3上的細胞的測定有些損害。由于難以沿著一個焦平面成像，它開始表現出非常少的細胞附著；然而，對不同焦平面的觀察揭示了某些細胞附著在ECM3上。在48小時時間點對纖粘連蛋白的免疫染色揭示在ECM1-ECM4上存在大量的胞外纖粘連蛋白培養基纖絲的網絡。這些纖粘連蛋白培養基纖絲是由胎盤干細胞組裝的，因為對照中，在沒有培養胎盤干細胞的ECM上沒有顯示出纖粘連蛋白纖絲。與ECM1-ECM4相反，ECM5和膠原不支持胎盤干細胞組裝纖粘連蛋白培養基；在它們的表面沒有檢測到胞外纖絲狀的纖粘連蛋白。勿應^f厚/y研^::我們研究了作為在ECM上結合和增殖的結果，胎盤干細胞的關鍵性細胞因子/趨化因子的分泌。將ECM上的細胞因子分泌與在組織培養處理的細胞培養板上培養的胎盤干細胞進行比較。使用了標準的25-多重細胞因子陣列，其包括某些白介素和細胞因子(Biosource)。細胞因子包括IL-lp、IL-lRa、IL-2R、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL隱8、IL-10、IL隱12p40/p70、IL-13、IL-15、IL隱17、TNF-oc、IFN-oc、IFN-Y、GM-CSF、MIP-loc、MIP-1卩、IP-IO、MIG、嗜酸細胞活化趨化因子、Rantes和MCP-1。對于研究的25種細胞因子，當胎盤干細胞在ECM膜上培養時，觀察到3種細胞因子的分泌增加IL-6、IL-8和MCP-1，超過和多于在組織培養處理板上培養的胎盤干細胞的分泌。附圖2A-2C顯示，在5種ECM構建體上的胎盤干細胞的細胞因子分泌(IL-6、IL-8和MCP-1)呈時間依賴性增加。所有數據都歸一化為1000個結合細胞/cm2。由于沒有MCP-1分泌的明顯增加，ECM-5是個例外，這提示當培養在該胞外基質上時，胎盤干細胞發生細胞生理學改變。如前所示，非常不同于ECM-1至-4，ECM-5不支持纖粘連蛋白的表達。需要注意的是，ECM-5是唯一不用NaOH制備的培養基，并具有保留了2種關鍵性細胞粘附蛋白纖粘連蛋白和層粘連蛋白的生物化學組成。本說明書中引用的所有出版物和專利申請都通過全文引用納入本發明中，正如同特定和單獨指出每種單獨的出版物或專利申請都通過全文引用并納入本發明。雖然為了清楚的理解，前述本發明已經通過示例和實施例的方式，進行了詳細描述，但是，對于本領域普通技術人員來說，根據本發明的教導，可以在不脫離所附權利要求的主旨和范圍內，對本發明進行某些改變和修飾，這是顯而易見的。權利要求1、堿處理的、去垢劑處理的端肽膠原。2、權利要求l的膠原，其是哺乳動物膠原。3、權利要求l的膠原，其是牛、綿羊或大鼠膠原。4、權利要求l的膠原，其是人膠原。5、權利要求l的膠原，其是胎盤膠原。6、權利要求l的膠原，其是人胎盤膠原。7、權利要求l的膠原，其是交聯的。8、權利要求l的膠原，其是與戊二醛交聯的。9、去垢劑處理的端肽膠原，其包含可檢測量的纖粘連蛋白。10、權利要求1或權利要求9的組合物，包含大量的干細胞。11、權利要求10的組合物，其中所述干細胞是胎盤干細胞、胚胎生殖細胞、間充質干細胞、骨髓來源的干細胞、來自外周血的造血干細胞、來自胎兒血的造血干細胞、來自胎盤血的造血干細胞、來自臍帶血的造血干細胞、來自胎盤灌流液的造血干細胞、成體干細胞、神經干細胞、肝臟干細胞、胰月象干細胞、內皮干細胞、心臟干細胞、肌肉干細胞、脂肪干細胞，或CD34—月臺盤干細胞。12、權利要求ll的組合物，其中所述CD3《胎盤干細胞是CD200+。13、權利要求ll的組合物，其中所述CD3傘胎盤干細胞是a、CD200+或HLA-G+;b、CD73十、CD105+和CD200+;c、CD200+和OCT-4+;d、CD73+、CD105+和HLA-G+、CD73+和CD105+，以及，當處于胎盤細胞群中時，在允許胚樣小體形成的條件下，有利于一個或多個胚樣小體的形成；或e、OCT-4+,并且當處于胎盤細胞群中時，在允許胚樣小體形成的條件下培養時，有利于在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一個或多個胚樣小體。14、；f又利要求10的組合物，包含多于一種類型的干細胞。15、權利要求10的組合物，包含大量的非干細胞。16、權利要求10的組合物，成型為膜狀。17、權利要求10的組合物，成型為管狀。18、；f又利要求10的組合物，成型為網狀。19、權利要求10的組合物，其中所述組合物成型為適合傷口或損傷位點的形狀。20、一種填充、擴大或取代哺乳動物組織的方法，包括向哺乳動物的組織施用權利要求l的膠原。21、一種填充、擴大或取代哺乳動物組織的試劑盒，包括權利要求1的膠原和標簽，該標簽具有施用交聯的端肽膠原的指示。22、一種從包含膠原的哺乳動物組織制備端肽膠原的方法，所述方法包括以下步驟a.將所述組織與滲透壓沖擊溶液接觸，以產生膠原組合物；b.將所述膠原組合物與去垢劑接觸；和c.將所述去垢劑-處理的膠原溶液與堿溶液接觸。23、權利要求22的方法，其中滲透壓沖擊溶液包含具有滲透勢低于50mMNaCl的水。24、權利要求22的方法，其中在步驟(a)之前或之后，使所述組織與滲透勢至少為0.5MNaCl的溶液^l姿觸。25、權利要求22的方法，其中所述堿溶液包含至少0.5MNaOH。26、權利要求22的方法，其還包括過濾所述堿處理的、去垢劑處理的膠原溶液的步驟。27、權利要求22的方法，其還包括交聯所述膠原以產生交聯的膠原的步驟。28、權利要求27的方法，其中所述膠原是與戊二醛交聯的。29、權利要求22的方法，其還包括剪切交聯的膠原的步驟。30、權利要求22的方法，其還包括將所述膠原組合物與濾器接觸的步驟，所述濾器的尺寸允許一種或多種病毒顆粒穿過濾器，同時保留所述膠原組合物。31、權利要求30的方法，其中所述濾器是約500kDa，約750kDa或約1000kDa。32、一種促進傷口愈合的方法，包括將所述傷口與本發明的膠原組合物接觸，其中，與未接觸所述組合物的傷口相比，所述接觸導致所述傷口的一方面有可檢測的較大的改善。33、權利要求32的方法，還包括將所述傷口與大量的干細胞接觸。34、權利要求32的方法，其中所述干細胞與所述傷口的接觸和所述組合物與所述傷口的接觸是分開的。35、權利要求32的方法，其中所述組合物包含所述干細胞。36、權利要求32的方法，其中所述組合物成型成具有兩面的膜，所述干細胞存在于至少一側所述面上。37、權利要求32的方法，其中所述干細胞附著在所述組合物上。38、權利要求32的方法，其中所述干細胞分泌IL-6、IL-8和/或MCP-1。39、權利要求32的方法，其中所述干細胞是胎盤干細胞。40、權利要求34的方法，其中所述胎盤干細胞是CD34—和CD200+。41、權利要求32的方法，其中所述傷口是小腿潰瘍。42、權利要求43的方法，其中所述小腿潰瘍是靜脈曲張性小腿潰瘍、動樂:K小腿潰瘍、糖尿病小腿潰瘍或褥瘙小腿潰瘍。43、權利要求32的方法，其中所述組合物用作傷口填充劑。44、一種制造組合物的方法，包括將權利要求1的組合物與大量的干細胞接觸。45、權利要求44的方法，包括允許至少一部分所述大量的干細胞附著在所述組合物上。46、權利要求45的方法，包括允許所述干細胞在所述組合物上增殖。47、權利要求46的方法，其中所述千細胞在所述組合物上增殖至匯合。48、權利要求46的方法，其中當與所述組合物接觸時，所述干細胞產生可檢測量的IL-6、IL-8和/或MCP-1。49、石威處理的、去垢劑處理的端肽膠原在治療中的用途。50、堿處理的、去垢劑處理的端肽膠原用于填充、擴大或取代哺乳動物組織的用途，其中所述填充、擴大或取代包括將所述膠原施用到所述哺乳動物的組織。51、堿處理的、去垢劑處理的端肽膠原在生產用于填充、擴大或取代哺乳動物組織的組合物中的用途，其中所述填充、擴大或取代包括將所述膠原施用到所<述哺乳動物的組織。52、堿處理的、去祐劑處理的端肽膠原在促進個體的傷口愈合中的用途，其中所述促進包括將所述傷口與組合物接觸，并且與未接觸所述組合物的傷口相比，其中所述接觸導致所述傷口的一方面有可檢測的較大的改善。53、石咸處理的、去垢劑處理的端肽膠原在生產用于促進個體的傷口愈合的組合物中的用途，其中所述促進包括將所述傷口與所述組合物接觸，并且與未接觸所述組合物的傷口相比，其中所述接觸導致所述傷口的一方面有可檢測的較大的改善。全文摘要本發明提供了包含人胎盤端肽膠原的組合物、制備該組合物的方法、及其使用方法和包含該組合物的試劑盒。所述組合物、試劑盒和方法可用于例如填充或替代哺乳動物的組織。文檔編號A61K38/39GK101622007SQ200780044801公開日2010年1月6日申請日期2007年10月9日優先權日2006年10月6日發明者克里斯·盧戈,倩葉,莫希特·巴迪亞,詹姆士·W·愛丁格申請人:人類起源公司