專利名稱：：一對原人參二醇衍生物和它們混合體的醫藥用途的制作方法
技術領域：
：本發明屬于醫藥
技術領域：
，涉及一對原人參二醇衍生物和它們的混合體的醫藥用途及新型抗腫瘤制劑，具體涉及化合物20(R)-25-羥基-達瑪烷-3p,12P，20-三醇和20(S)-25-羥基-達瑪烷-3p，12|3,20-三醇[20(R)-25-methoxy卜dam匿ane-3(3,12p，20-trio1(簡稱25Rhdt)20(S)-25-me-thoxy卜dammarane-3P，12p,20_triol(簡稱25Shdt)]。及它們的混合體(外消旋體)在抑制人腫瘤細胞(人乳腺癌、人小細胞肺癌、人胃癌、人結腸癌、人神經膠質癌、人黑色素瘤、人宮頸癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宮頸癌-14及艾氏腹水癌等)生長與增殖，誘導腫瘤細胞分化、凋亡，抑制腫瘤新生血管生成、抑制腫瘤的侵潤和轉移、增強機體免疫力和降低化療藥物毒副作用中的應用。25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)可以被制成用于不同癌癥治療的任何藥用及保健品劑型，主要應用于惡性腫瘤的防治，具有重要的開發價值和應用前景。
背景技術：
：癌癥是殘害人類生命的世界第二大疾病，死亡率僅次于心腦血管疾病，是人類死亡的最主要因素之一。在全世界60億人口中，目前約有各類癌癥患者3500萬。癌癥造成的死亡人數每年全世界約有630萬人，據國際權威調査機構統計，到2020年癌癥死亡人數將翻一番，達到1000萬人以上。近年來，工業大生產導致人類生存環境不斷惡化。化學、病毒、物理輻射等各種致癌因素逐漸增多，我國的癌癥發病率也逐年上升。目前，治療癌癥的常用方法有手術、放療和藥物治療等。而藥物治療能成功地治愈或明顯延長病人的生命，在癌癥的治療中占有越來越主要的地位。許多學者的研究表明人參皂苷具有明顯的抗腫瘤和免疫調節作用、改善微循環作用、提高生命質量等多種生物'活性。但是由于天然人參皂苷較難吸收，而由天然皂苷轉化而來的低極性皂苷、苷元或二者的衍生物是天然人參皂苷發揮其藥效的原型。因此，有關低極性皂苷、苷元或二者的衍生物的制備與抗腫瘤活性的研究非常活躍，已發現它們在具有多種抗腫瘤活性的同時，基本無毒副作用。自今發現具有抗腫瘤活性的低極性皂苷、苷元或二者的衍生物有人參皂苷-Rg3、Rh2、C-K、Mc、PPD以及30,12P-二羥-20(22)，24(25)-二烯達瑪烷和3P,6a,12p-三羥-20(22)，24(25)-二烯達瑪烷等。已經上巿的抗腫瘤藥物參一膠囊(人參皂苷-Rg3)、正在用于臨床實驗研究的抗腫瘤藥物有人參阜苷-Rh2和人參皂苷-C-K。在對體外多種人腫瘤細胞的抗癌實驗研究中，我們發現和發明了具有抗腫瘤活性的一對原人參二醇衍生物和它們的混合體(外消旋體)的抗腫瘤用途及它們的新型抗腫瘤制劑。25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)是PPD的衍生物。研究證明，25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)對體內外腫瘤細胞的抑制作用均優于PPD和人參皂苷-Rg3。中國專利公開號CN101121741A已經詳細的公開了上述衍生物的多種制備方法。
發明內容本發明提供了一對原人參二醇衍生物和它們的混合體(外消旋體)的抗腫瘤用途及含有該化合物作為活性成分的新型抗腫瘤制劑。這對化合物的名稱為20(R)-25-羥基-達瑪烷-3|3，12|3,20-三醇和20(S)-25-羥基-達4烷—3P，12(3,20-三醇[20(R)—25—methoxyl—dammarane-3p，120，20-triol(簡稱25Rhdt)和20(S)-25-me-thoxy卜da隱rane-3p，12|3，20-triol(簡稱25Shdt)]。其結構如下所示25Rhdt25Shdt本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，以25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)為有效成分，其總有效劑量為1-100mg/kg/d。本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)可與任何法定藥用配合劑和賦形劑制成各種藥用劑型的制劑。本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)可與目前市場上的任何化療藥、生物制劑，包括激素類、烷化劑類、鉑類、抗代謝類、拓撲異構酶抑制劑類、抗微絲微管類、誘導分化類、抗腫瘤生長類、提高機體免疫類及其他藥物，制備成復方制劑。本發明所提供的原人參二醇衍生物25Rhdt和25Shdt及它們的混合體(外消旋體)具有抑制乳腺癌、人小細胞肺癌、人胃癌、人結腸癌、人神經膠質癌、人黑色素瘤、人宮頸癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宮頸癌-14及艾氏腹水癌等腫瘤細胞的分化、凋亡和生長等活性和醫藥用途。具體實施例方式實施例1:25Rhdt和25Shdt及它們的混合體在體外抑制人癌細胞生長使用6種人惡性腫瘤(人白血病細胞HL-60,人前列腺癌細胞Dul45，人乳腺癌細胞MCF-7，人結腸癌細胞Colon2Q5，人肺癌細胞A549和人肝癌細胞Hep3B/HepG2)細胞系，釆用MTT法測定了25Rhdt和25Shdt及它們的混合體體外抗癌活性，測定濃度為0-300(iM,處理時間為72小時。不同的細胞系之間觀察到對這些化合物敏感性的明顯不同。對于25Rhdt和25Shdt及它們的混合體，大多數細胞系的IC5。值在較低的jiM水平。表125Rhdt和25Shdt及它們的混合體對6種人腫瘤細胞IC50(nmol/L)(%)(M士SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例2:25Rhdt和25Shdt及它們的混合體抑制S-180腫瘤細胞生長實驗實驗動物，健康昆明種小白鼠50只，體重19-24克，雄性，由中國醫科大學動物中心提供。所有動物均在同樣環境下飲水、攝食、保持自然光照。溫度25。C，濕度60-70%。動物全價顆粒飼料由沈陽巿實驗動物伺料廠提供。實驗共分7組荷瘤對照組(ig蒸餾水10mL/kg);B:25Rhdt組(ig10mg/kg/d);25Shdt組;25Rhdt:25Shdt(1:1)組(ig10mg/kg/d);人參皂苷-Rg"且(ig10mg/kg/d);原人參二醇組(ig10mg/kg/d);E:紫杉醇組(ip10mg/kg/d)。選取移植腫瘤7天，腫瘤生長良好，腹部膨隆明顯的小鼠，接種癌細胞混懸液0.2mL/只。接種后小鼠按體重隨機共分成5組，每組10只，分別為于接種后次曰開始給藥，每曰l次，連續給藥12天。給藥結束次曰，將動物稱體重后脫臼處死，剝離出皮下腫塊稱重，進行統計處理，計算抑瘤率。25Rmdt和25Smdt及它們的混合體對S-180荷瘤小鼠抑瘤作用的結果見表2。統計學處理方法釆用組間"t"檢驗。抑瘤率(%)=[(荷瘤對照組瘤重-實驗組瘤重)/荷瘤對照組瘤重]x100%表225Rhdt和25Shdt及它們的混合體對S-180荷瘤小鼠抑瘤作用的結果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>備注l,給藥量為0.1mg/10g;2,與荷瘤對照組比較*P<0.01。實施例3:25Rhdt和25Shdt及它們的混合體對艾氏腹水癌小鼠生存影響實驗將實驗小鼠飼養3天，選取生長狀態良好，腹部膨隆明顯的接種2周艾氏腹水癌的小鼠，腹部皮膚消毒，在無菌條件下給每只實驗小鼠腹腔注射癌細胞混懸液0.2mL/只。接種后小鼠按體重隨機分租，共分成7組，每組10只，分別為于接種后次日開始灌胃給藥，每曰l次，連續給藥12天。觀察小鼠死亡情況并記錄，25Rmdt和25Smdt及它們的混合體對艾氏腹水癌小鼠的生存影響見表3。實驗結果表明與艾氏腹水癌對照組相比，25Rhdt和25Shdt及25Rhdt:25Shdt(l:l)對艾氏腹水癌小鼠生存期有明顯延長作用。表325Rhdt和25Shdt及它們的混合體對艾氏腹水癌小鼠生存期的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例4:25Rhdt和25Shdt及它們的混合體抑制小鼠Lewis肺癌生長實i實驗共分7組荷瘤對照組(ig蒸餾水10mL/kg);B:25Rhdt組(ig10mg/kg/d);25Shdt組;25Rhdt:25Shdt(1:1)組(ig10mg/kg/d);人參皂苷-Rg"且(ig10mg/kg/d);原人參二醇組(ig10mg/kg/d);E:紫杉醇組(ip10mg/kg/d)。取接種后第15天生長良好的Lewis荷瘤小鼠腹水，以無菌鹽水1:3稀釋后，昆明種小鼠前肢右腋下sc接種0.2mL/只，接種后小鼠按體重隨機共分成5組，每組10只，分別為于接種后次曰開始給藥，每日l次，連續給藥12天。給藥結東次曰，將動物稱體重后脫臼處死，剝離出皮下腫塊稱重，進行統計處理，計算抑瘤率。25Rhdt組(ig10mg/Kg/d);25Shdt組;25Rhdt:25Shdt(1:1)組對小鼠Lewis肺癌的影響見表4。統計學處理方法采用組間"t"檢驗。表425Rhdt和25Shdt及它們的混合體對小鼠Lewis肺癌抑瘤作用的結果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>荷瘤對照組A—1020.6±1.2022.90±2.06U6±0.42—25Shdt101020.3±1.8021.20±2.050.53±0.19*54.125Rhdt101020.5±1.96,21.45±1.880.54±0.27*53.825Rhdt:25Shdt(l:l)101020.5±2.22:21.59±1,980.56±0.36*52,2人參皂苷-Rg3101020.7±2.5922.02±1.880.69±0.28*40.4原人參二醇101019.8±2.6221.58±2.020.62±0.20*46.4紫杉醇101020.6±2.6821.90±2.%0.54±0.36*53.5實施例5:25Rhdt片劑的制備25Rhdt20g,淀粉300g混勻，加入10%淀粉漿適量，混合制成軟材，18目篩制粒，6(TC干燥，18目篩整粒后，加入硬脂酸鎂2.5g和羧甲基淀粉鈉5g，混勻，壓片，制得每片含25Rhdt20mg的片劑。以上所述輔料可用任何同種性質載體替代。實施例6:25Shdt膠囊的制備25Shdt20g,乳糖100g,加入5%PVP制成軟材，經14目篩制粒，60。C干燥后整粒，分裝，制得每粒含25Shdt20mg的膠囊。以上所述輔料可用任何同種性質載體替代。實施例7:25Rhdt和25Shdt外消旋體微乳注射液的制備注射用卵磷脂8g、Tween-800.2g加入油相中，加熱攪拌至卵磷脂完全溶解，加入1.0g25Rhdt和25Shdt外消旋體，進行高壓均質；將注射用甘油(25g)、油酸鈉(0.5g)、EDTA(0.2g)、F68(2g)分散于適量注射用水中，加熱攪拌至全部溶解。將油相加入水相中，置于高速組織搗碎機中攪拌；調節pH值至7.0,注射用水稀釋定容至1000ml,轉移至高壓均質機中均質，裝瓶，封罐氮氣，12rC滅菌15min,制得每10ml含25Rhdt和25Shdt外消旋體10mg的微乳注射液。以上所述輔料可用任何同種性質載體替代。釆用常規的制藥方法可制備成其他藥物上常用的劑型。權利要求1、一對原人參二醇衍生物和它們混合體的醫藥用途，其特征在于所述的原人參二醇衍生物為20(R)-25-羥基-達瑪烷-3β，12β，20-三醇和20(S)-25-羥基-達瑪烷-3β，12β，20-三醇，簡稱25Rhdt和25Shdt，其結構如下所示以25Rhdt和25Shdt及它們的混合體在制備抑制人乳腺癌、人小細胞肺癌、人胃癌、人結腸癌、人神經膠質癌、人黑色素瘤、人宮頸癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝癌腹水型、小鼠宮頸癌-14及艾氏腹水癌生長與增殖，誘導腫瘤細胞分化、凋亡，抑制腫瘤新生血管生成、抑制腫瘤的侵潤和轉移、增強機體免疫力和降低化療藥物毒副作用藥物中的應用。2、根據權利要求1所述的一對原人參二醇衍生物和它們混合體的醫藥用途，其特征在于所述的混合體為25Rhdt和25Shdt的外消旋體的混合體。3、根據權利要求1所述的一對原人參二醇衍生物和它們混合體的醫藥用途，其特征在于以25Rhdt和25Shdt及它們的混合體為有效成分和有效組合，其總有效劑量為1-100mg/kg/d。4、一對原人參二醇衍生物和它們混合體的制劑，其特征在于該制劑是25Rhdt和25Shdt及它們任何比例的混合體與任何法定藥用載體和賦形劑制備而成。5、根據權利要求4所述的原人參二醇衍生物和它們混合體的制劑，其特征在于25Rhdt和25Shdt及它們的混合體與目前巿場上激素類、烷化劑類、鉑類、抗代謝類、拓撲異構酶抑制劑類、抗微絲微管類、誘導分化類、抗腫瘤生長類、提高機體免疫類化療藥、生物制劑制備成復方制劑。全文摘要本發明屬于醫藥
技術領域：
，涉及一對原人參二醇衍生物和它們的混合體的醫藥用途。這對化合物的名稱為20(R)-25-羥基-達瑪烷-3β，12β，20-三醇和20(S)-25-羥基-達瑪烷-3β，12β，20-三醇[20(R)-25-hydroxyl-dammarane-3β，12β，20-triol(簡稱25Rhdt)和20(S)-25-hydroxyl-dammarane-3β，12β，20-triol(簡稱25Shdt)]。25Rhdt和25Shdt及它們的混合體具有抑制人腫瘤細胞生長與增殖，誘導腫瘤細胞分化、凋亡，抑制腫瘤新生血管生成、抑制腫瘤的侵潤和轉移、增強機體免疫力和降低化療藥物毒副作用等抗腫瘤活性。25Rhdt和25Shdt及它們的混合體可以被制成用于不同癌癥治療的任何藥用劑型，主要應用于上述各種惡性腫瘤的防治，具有重要的開發價值和應用前景。文檔編號A61P37/02GK101229175SQ20081001039公開日2008年7月30日申請日期2008年2月15日優先權日2008年2月15日發明者吳春福,弘張,張瑞穩,楊靜玉,偉王,慧王,趙余慶申請人:沈陽藥科大學