專利名稱：：一種抗風濕藥物的質量控制方法和應用的制作方法
技術領域：
：一種抗風濕藥物消絡痛的質量控制方法，屬于中藥制劑的分析方法，特別涉及一種抗風濕藥物的質量控制方法。適用于市售的抗風濕藥物《消絡痛》的片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑等制劑的質量控制。
背景技術：
：一種治療風濕病的中成藥一《消絡痛》是上市多年的產品，因安全性高，療效好，曾出口東南亞一帶，深受廣大風濕患者的好評。抗風濕藥物《消絡痛》主要由艽花條提取物制成，現有技術的質量控制方法，僅有性狀和檢查兩項，控制制劑內容物顯棕褐色；氣微,味苦、麻；和符合藥典片劑項下有關的規定。不能科學準確的判定藥品質量，在國際市場受到質疑，為全面準確的控制藥品質量，保證中藥藥品在國際市場的聲譽，故有必要對其質量控制方法進行研究。
發明內容本發明的目的，是建立一種能科學準確的判定藥品質量的抗風濕藥物《消絡痛》的質量控制方法。本申請的發明目的是通過如下技術方案實施的研制一種抗風濕藥物的質量控制方法，其特征是除性狀和檢查外，該方法還包括鑒別，浸出物測定和含量測定步驟其中，鑒別步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物乙醇溶解，超聲提取，制成供試品溶液，與芫花條對照藥材制成的對照溶液，進行薄層層析對比；浸出物測定步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，乙醇回流浸提，測定醇提物干品量；含量測定步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，甲醇回流浸提，制成供試品溶液，與西瑞香素對照品進行高效液相色譜(Highperformanceliquidchromatography,簡稱HPLC)檢測，測定抗風濕藥物消絡痛制劑內容物的西瑞香素含量。上述的鑒別步驟是①取抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，研細，加乙醇溶解，超聲提取，濾過，濃縮制成供試品溶液；②取芫花(枝)條對照藥材，粉碎研細，加乙醇溶解，超聲提取，濾過，制成對照藥材溶液；③分別吸取供試品溶液與對照品溶液各5nl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯曱酸=1:1:0.01為展開劑展開，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色語中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍色熒光斑點。上迷的浸出物測定步驟是取消絡痛制劑內容物，研細，精密稱定，以95%乙醇為溶劑，回流浸提，供試品中醇提物干品量計。上迷的含量測定歩驟是①精密稱取西瑞香素對照品適量，置棕色量瓶,加甲醇制成每lml含IO嗎對照品的溶液；②取消絡痛制劑內容物，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇，稱定重量，回流提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，制成每lml含消絡痛制劑內容物20~40mg的供試品溶液；③用十八)^硅烷鍵合娃膠(Octadecylsilanechemicallybondedsilica,簡稱ODS)為填充劑，以甲醇或乙腈0.2%磷酸溶液(50~55:50~45)為流動相；高效液相檢測波長346nm,理論板數按西瑞香素C19H120"+,不得低于3000;④分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20p1，注入高效液相色謙儀，測定，供試品中以西瑞香素C19H1207計的含量。一種抗風濕藥物的質量控制方法的應用，其特征是在抗風濕藥物《消絡痛》制劑片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑質量控制中的應用。消絡痛制劑中乙醇浸出物測定中，乙醇浸出物含量片劑不得少于10.0%;膠囊劑不得少于18.0%;顆粒劑不得少于4.0%;丸劑不得少于12.0%含量測定中，制劑每克含芫花條以西瑞香素C19H1207計片劑不得少于0.25mg;膠囊劑不得少于0.5mg;顆粒劑不得少于O.lmg;丸劑不得少于0.30mg。性狀和檢查兩項，沿用現有技術的相關內容，不另詳迷。本申請中，"制劑內容物"系指片劑(糖衣片或薄膜衣片)除去包衣層后的芯片層；或膠囊劑除去膠囊后(原膠囊內)的藥物制劑；或顆粒劑、丸劑制劑本身。本申請中所說的各劑型，每次服用劑量含芫花條量是一致，各制劑單位大小可根據輔料量適當變化。本發明方法的優點是1.芫花枝條的主要有效成分之一的西瑞香素(DaphnoretinC19H12C>7),已經被廣泛研究，確證了分子結構式和理化常數。而抗風濕藥物《消絡痛》是以芫花條(或稱芫花枝條)為主要原料制備的，通過測定抗風濕藥物《消絡痛》中西瑞香素的含量，可以作為有效控制其質量的控制方法。2.本發明的質量控制方法，經對多批抗風濕藥物制劑《消絡痛》產品to,方法簡捷，重現性好，陰性無干擾，專屬性強。圖1消絡痛片樣品HPLC圖譜；圖2西瑞香素對照品HPLC圖傳；圖3陰性對照樣品HPLC圖譜；圖4芫花條藥材HPLC圖譜；圖5西瑞香素對照品標準曲線。具體實施例方式以下結合附圖和實施例闡述本發明；一、附圖中，圖14為消絡痛質控研究對照試驗圖譜，圖中縱座標是樣品通過檢測器的訊號強度，橫座標為樣品的保留時間。圖5是西瑞香素對照品標準曲線，其中縱坐標為對照品的峰面積，橫坐標為對照品的進樣量。其中，圖1是消絡痛片在此提取方法和色譜條件下的色傳峰，是本品含西瑞香素的證據；圖2是西瑞香素對照品在此色譜條件下的色譜峰，為西瑞香素的陽性標準對照圖謙；圖3是陰性對照樣品(*是不含芫花條的樣品圖譜)在此色譜條件下無色i辨出現，證明樣品中的其他物質不會對西瑞香素的含量測定造成干擾；圖4是芫花條藥材在此色諳條件下的色譜峰，是證明藥材中含有西瑞香素的依據。*附注市售抗風濕藥物制劑《消絡痛》，是由藥物成分芫花條和其他輔料組成。此樣品是剔除主藥芫花條的樣品，常規意義上的"空白"對照樣品。二、消絡痛制劑中西瑞香素的含量測定試驗(以片劑為例)(1)提取條件的選擇①提取溶劑的選擇取071002批樣品30片，除去包衣，研細，稱取三份，每份2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯各25ml，稱定重量，超聲處理(功率100W,頻率25kHz)30min,放冷，再稱定重量，用相應溶刑補足減失重量，以孔徑0.45薩有機系微孔濾膜濾過，作為供試液，注入液相色i棘(美國戴安高效液相色謙儀包括P680泵、UVD170紫外檢測器、CHROMELE數據處理軟件)測其含量，結果見表-l。表-l提取溶劑選擇結果表提取溶劑甲醇無水乙醇乙酸乙酯西瑞香素含量(mg/g)0.250.180.15結果表明以甲醇為提取溶劑時樣品含量最高，故選擇提取溶劑為甲醇。②提取方法的選擇取071002批樣品30片，除去包衣，研細，稱取細粉2.0g,—式三份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加曱醇各25tnl，稱定重量，分別用超聲法(功率IOOW，頻率25kHz)、回流法、索氏提取法制備樣品，分別提取l小時，放冷，再稱定重量，用曱醇補足減失重量，以孔徑0.45^m有機系微孔濾膜濾過，作為供試液，注入液相色譜儀(美國戴安高效液相色謙儀包括P680泵、UVD170紫外檢測器、CHROMELE數據處理軟件)測其含量，結果見表-2。表-2提取方法選擇結果表提取方法超聲法回流法索氏提取器西瑞香素含量(mg/g)0.250.260.14結果表明回流提取法提取時樣品含量最高，故選擇ll取方法為回流提取法。③提取時間的選擇取071002批樣品適量，除去包衣，研細，稱取細粉約2.0g,—式三份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入曱醇25ml，稱定重量，分別回流提取45min,60min,75min,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，以以孔徑0.45拜有機系微孔濾膜濾過，作為供試液，注入液相色謙儀(美國戴安高效液相色謙儀包括P680泵、UVD170紫外檢測器、CHROMELE數據處理軟件)測其含量，結果見表-3。表-3提取時間選擇結果表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結果表明樣品回流提取60min時，西瑞香素已提取完全，故確定提取時間為60min。④提取樣品量的選擇取071002批樣品適量，除去包衣，研細，分別稱取細粉2.Og、1.0g、0.5g精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇25ml稱定重量，分別回流提取lh,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，以孔徑0.45nm有機系微孔濾膜濾過，作為供試液，注入液相色譜儀(美國戴安高效液相色語儀包括P680泵、UVD170紫外檢測器、CHROMELE.數據處理軟件)測其含量，結果見表-4。表-4提取時間選擇結果表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結果表明1.0g樣品用25ml甲醇提取時其含量已達最高，0.5g甲醇提取時其含量無明顯變化，表明1.0g樣品西瑞香素用25ml甲醇時已提取完全。為節約試劑，同時保證能最大P艮度提取成分，決定將樣品量確定為1.0g,提取溶劑用量為25ml。通過以上試驗研究，供試品溶液的制備最終描述為取本品30片，除去糖衣，研細，取約l.Og,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加曱醇25ml，稱定重量，回流提取60min,放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，即得。(2)、線性范圍考察取西瑞香素對照品適量，精密稱定，加曱醇制成每lml含40jig的溶液，分別精密吸取20"1、15jil、10pl、5m1、2jul進樣，測定其峰面積。結果見表4。以峰面積(y)對進樣量(x)進行回歸，得標準曲線方程。y-52.069x+0.3883(r=0.9998)。以上結果表明在0.08mg~0.80jug范圍內，西瑞香素峰面積值與進樣量有良好的線性關系。表-5西瑞香素對照品測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>試驗結果見說明書附圖5所示。(3)陰性對照試驗分別取不含艽花條的陰性試制樣品(此樣品是剔除主藥芫花條的樣品，常規意義上的"空白"對照樣品。)1.0g、消絡痛片樣品1.0g、蕪花條藥材(粉末)1.5g,分別加甲醇25ml稱定重量，回流提取lh，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，濾過,分別得陰性對照液，消絡痛片樣品溶液、芫花條藥材溶液。分別將西瑞香素對照品與以上樣品溶液各20m1注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明在陰性對照圖譜中無西瑞香素峰。試驗結果見說明書附圖1~4所示(4)、精密度試驗吸取對照品溶液(19jig/ml)和071002批同一份樣品溶液(1.0230g25ml)分別重復進樣6次，每次各20n1，分別計算兩者峰面積的RSD，結杲見表-6。表-6精密度試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果表明對照品平均峰面積為20.077,RSD為O.63%,供試品平均峰面積12.036,RSD為0.92%,精密度良好。(5)、重現性試驗取071002批的樣品5份，分別按供試品制備項下制備、測定結果，西瑞香素含量見表-7。表-7重現性試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果表明5份供試品的平均含量為0.282mg/g，RSD為1.71%試驗方法的重現性良好。**相對標準偏差(Relativestandarddeviation,簡稱RSD.)常用來表示精密度。(6)、穩定試驗取071002批同一份供試品溶液(1.023g25ml)，分別于0小時、2小時、4小時、6小時、8小時，進樣。結果見表-8。表-8穩定性試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果表明供試品在8小時內RSD為O.74%,供試品溶液在8小時內穩定性良好。(7)、回收率試驗(采用加樣回收法)精密稱取071002批(已知含量為0.28mg/g)細粉O.5g，共稱取5份，分別加入相同的西瑞香素對照品，測定總含量，計算回收率。回收率==(總量一樣品中量)/加入純品量。結果見表-9。表-9回收率試驗結果<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結果表明平均回收率為99.31%,RSD%(RelativeStandardDeviation相對標準偏差，即標準偏差/平均值。一般來說，RSD越小，測定值之間的接近程度越好。高效液相所測數據的RSD。/。要求〈2.0)為1.09%,加樣回收率良好。該口服制劑中，消絡痛片劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于0.25mg;膠囊劑每克含芫花條以西瑞香素(C19Hu07)計，不得少于0.50mg;顆粒劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于O.lOmg;丸劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于0.30mg。以下是本發明的方法應用于檢測消絡痛片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑的實施例。實施例1應用本發明提供方法對消絡痛片劑的檢測示例1.鑒別測定步驟如下供試品溶液制備取消絡痛片劑6片，研細，取樣品約0.1~0.6g,加乙醇5-15ml溶解，超聲(功率100W,頻率25kHz)提取30min,濾過，濾液濃縮至lml,作為供試品溶液。對照藥材溶液制備取克花條對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。薄層色譜法測定按照中國藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜法進行，吸取上述兩種溶液各5pl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的珪膠G薄層板上，以正己烷一醋酸乙酯一甲酸(l:1:0.01)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色諉中，在與對照藥材色譜相應的位置上，應該顯示相同的藍色熒光斑點。2.檢查測定步驟如下應符合中國藥典片劑項下有關的各項規定。3.浸出物測定步驟如下取消絡痛片劑20片，研細，取約2.0g,精密稱定，按照《中國藥典》2005年版一部附錄XA中的醇溶性浸出物測定法中的熱浸法進行，以95%乙醇為溶劑，片劑醇溶性浸出物含量，不得少于10.0%。4.含量測定步驟如下采用高效液相色謙法，色語柱為十八5^法烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈0.2%褲酸溶液(50-55:50-45)為流動相；檢測波長為346nm。理論板數按西瑞香素計算，應不得低于3000。對照品溶液制備精密稱取西瑞香素對照品適量，置棕色量瓶，加甲醇制成每lml含lOUg的溶液。供試品溶液制備:取消絡痛片約1~2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中精密加甲醇25~50ml,15~25ml或30~50ml回流提取lh,放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20p1，注入液相色鐠儀，測定含量。消絡痛片劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于0.25mg。實施例2應用本發明提供方法對消絡痛膠嚢劑的檢測示例鑒別測定時，膠囊劑取樣3粒；其余同實施例l;檢查測定時，應符合中國藥典膠嚢劑項下有關的各項規定；浸出物測定時，膠囊劑取樣10粒；膠囊劑的醇溶性浸出物含量，不得少于18.0%;其余同實施例1;含量測定時，膠囊劑取樣約0.5~lg,膠囊劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于0.50mg;其余同實施例1。實施例3應用本發明提供方法對消絡痛顆粒劑的檢測示例鑒別測定時，顆粒劑取樣1~2袋；其余同實施例1;檢查測定時，應符合中國藥典顆粒劑項下有關的各項規定；浸出物測定時，顆粒劑取樣10袋；顆粒劑的醇溶性浸出物含量，不得少于4.0%;其余同實施例1;含量測定時，顆粒劑取樣約26g,顆粒劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于0.lOmg;其余同實施例1。實施例4應用本發明提供方法對消絡痛丸劑的檢測示例鑒別測定時，丸劑取樣6粒；其余同實施例l;檢查測定時，應符合中國藥典丸劑項下有關的各項規定；浸出物測定時，丸劑取樣20粒；丸劑的醇溶性浸出物含量，丸劑不得少于12.0%;其余同實施例l;含量測定時，丸劑取樣約l-2g，丸劑每克含芫花條以西瑞香素(C19H1207)計，不得少于0.30mg;其余同實施例1。權利要求1.一種抗風濕藥物的質量控制方法，其特征是除性狀和檢查外，該方法還包括鑒別，浸出物測定和含量測定步驟其中，鑒別步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物乙醇溶解，超聲提取，制成供試品溶液，與芫花條對照藥材制成的對照溶液，進行薄層層析對比；浸出物測定步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，乙醇回流浸提，測定醇提物干品量；含量測定步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，甲醇回流浸提，制成供試品溶液，與西瑞香素對照品進行高效液相色譜檢測，測定抗風濕藥物消絡痛制劑內容物的西瑞香素含量。2.按照權利要求1所述的方法，其特征是鑒別步驟是①取抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，研細，加乙醇溶解，超聲提取，濾過，濃縮制成供試品溶液；②取芫花條對照藥材，粉碎研細，加乙醇溶解，超聲提取，濾過，制成對照藥材溶液；③分別吸取供試品溶液與對照品溶液各5^1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正己垸醋酸乙酯甲酸=1:1:0.01為展開劑展開，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍色熒光斑點。3.按照權利要求1所述的方法，其特征是浸出物測定步驟是取消絡痛制劑內容物，研細，精密稱定，以95%乙醇為溶劑，回流浸提，供試品中醇提物以干品量計；4.按照權利要求1所述的方法，其特征是含量測定步驟是①精密稱取西瑞香素對照品適量，置棕色量瓶，加甲醇制成每lml含10ug對照品的溶液；②取消絡痛制劑內容物，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇，稱定重量，回流提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，制成每lml含消絡痛制劑內容物2040mg的供試品溶液；③用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈0.2%磷酸溶液=5055:5045為流動相，高效液相檢測波長346nra，理論板數按西瑞香素C19H120^+，不得低于3000;④分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，測定，供試品中以西瑞香素C19H1207計的含量。5.—種抗風濕藥物質量控制方法的應用，其特征是在抗風濕藥物制劑片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑質量控制中的應用。全文摘要本發明提供一種抗風濕藥物的質量控制方法。除性狀和檢查外，該方法還包括鑒別，浸出物測定和含量測定步驟其中，鑒別步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物乙醇溶解，超聲提取，制成供試品溶液，與芫花條對照藥材制成的對照溶液，進行薄層層析對比；浸出物測定步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，乙醇回流浸提，測定醇提物干品量；含量測定步驟是，抗風濕藥物消絡痛制劑內容物，甲醇回流浸提，制成供試品溶液，與西瑞香素對照品進行高效液相色譜檢測，測定抗風濕藥物消絡痛制劑內容物的西瑞香素含量。適用于市售的抗風濕藥物《消絡痛》的片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑等制劑的質量控制。文檔編號A61K9/20GK101366875SQ200810016438公開日2009年2月18日申請日期2008年5月31日優先權日2008年5月31日發明者李雪梅,王立慶,勇翟,郭桂秋申請人:山東魯泰環中制藥有限公司