專利名稱：肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑及其制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種肝素鈣/鈉納米口服制劑及其制備工藝及方法，以及制備所 述肝素鈣/鈉納米口服制劑所用的肝素鈣/鈉納米脂質體。(二) 背景技術肝素是常用的天然抗凝劑，在臨床應用已經70多年，主要用于治療高血壓 病、心血管病、中風、血栓形成、腎病綜合癥等多種疾病，應用極廣，有20多 種作用機制。最近研究發現肝素可以抑制惡性腫瘤增生和轉移，使惡性腫瘤患 者的5年生存率提高90%以上，肝素還有降血脂、退黃疸、預防肝硬化等多種 作用。但是，肝素只有針劑，應用不便。在長期的臨床工作中發現，患者對針劑肝素的順從性差，半衰期短，要反 復皮下或靜脈給藥，不方便而痛苦，往往中途停藥，導致嚴重腦血栓等意外事 件發生而死亡。由此，口服劑的開發非常必要而且有意義。在動物體內研究表明，納米微粒能夠通過消化道吸收，為制備肝素鈣/鈉口 服劑提供基礎。由山東大學(聯合中國藥科大學)作者于2002年報道用超聲波分散法制備 低分子肝素納米脂質體，所得脂質體平均粒徑為89.6nm，包封率為36.1% (翟 光喜等，低分子肝素納米脂質體的制備以及大鼠口服吸收，中國藥科大學學報 2002.06.25; 33(3):200 202);中國藥科大學作者于2005年報道用逆相蒸發法制 備低分子肝素納米脂質體，所得脂質體平均粒徑83.1納米，包封率為23.6%， 并按三元相圖摸索微乳區，以螺旋振蕩制備低分子肝素微乳制劑，微乳平均粒 徑52.8納米(汪龍江等，低分子肝素微乳及其納米脂質體作大鼠口服抗凝效果的比較，江蘇藥學與臨床研究，2005.04.20;13(2): 4 6)。由于上述方法制得的 低分子肝素納米脂質體包封率均較低，無法達到《中國藥典》規定的80%的標 準，因此目前還未見有關低分子肝素鈣/鈉納米口服劑型的文獻報道，更物口服 制劑投放市場。
發明內容本發明目的是提供一種肝素鈣/鈉納米口服劑型及其制備方法，以及用于制 備所述肝素鈣/鈉納米口服劑型的包封率高的肝素鈣/鈉納米脂質體。 本發明采用的技術方案是肝素轉/鈉鹽納米口服制劑，以肝素鈣/鈉鹽納米脂質體為主要原料制備，所 述低分子肝素鈣/鈉鹽納米脂質體由如下方法制備得到將殼聚糖溶解在0.1~20 %濃度(w/w，優選為2%)的稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為0.5 5g/100mL醋酸 溶液(殼聚糖與溶液中的醋酸質量比優選為1: 1)，得到酸化的殼聚糖溶液，過 濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加濃度1~99% (w/w，優選為20%)的 肝素鈣/鈉水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀物冷 凍干燥，得到所述的肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。本發明所述肝素鈣/鈉鹽包括各種不同分子量的肝素鈣/鈉鹽，以低分子肝素 鈣/鈉鹽納米脂質體為例，其制備過程具體如下將殼聚糖溶解在0.1~20%濃度 (優選為2%，過稀產量太低，過濃要結硬塊)的稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為 0.5 5g/100mL醋酸溶液(殼聚糖與溶液中的醋酸質量比優選為1: 1)，得到酸化 的殼聚糖溶液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加0.1%-99.9%濃度(優 選為20%，濃度太低，產量不高；濃度太高，原材料浪費)的低分子肝素轉/鈉 水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀物冷凍干燥，得 到所述的低分子肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。制備得到所述低分子肝素鈣納米脂質 體后，可按照本領域常規方法，直接將其包入腸溶衣或腸溶膠囊中，或者添加常規輔料后包入腸溶衣或腸溶膠囊中，得到相應制劑；或者添加相應輔料后或直接 制成顆粒劑、丸劑、粉劑、膏劑、片劑等各種口服制劑。所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑為下列劑型膠囊劑、顆粒劑、片劑、 丸劑、乳劑、糖漿等各種口服制劑。優選的，所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑為膠囊劑，由所述低分子肝 素鈣納米脂質體直接作為膠囊內容物灌入腸溶膠囊得到，膠囊內容物含肝素藥量 為12.5mg 200mg/粒。根據不同病情給藥。本發明還涉及所述的低分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑的制備方法，所述低 分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑為低分子肝素鈣/鈉鹽納米膠囊劑，由如下方法制 備得到將殼聚糖溶解在2%濃度的稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為2g/100mL醋 酸溶液，得到酸化的殼聚糖溶液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加濃 度為20%的低分子肝素鈣/鈉水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液 離心，取沉淀物冷凍干燥，得到低分子肝素鈣納米脂質體，將所述低分子肝素轉 /鈉鹽納米脂質體灌入腸溶膠囊，得到所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米膠囊劑。本發明還涉及用于制備所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑的低分子肝素 鈣/鈉鹽納米脂質體，由如下方法制備得到將殼聚糖溶解在2%濃度的稀醋酸 溶液中，殼聚糖用量為2g/100mL醋酸溶液，得到酸化的殼聚糖溶液，過濾，取 濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加亞飽和的低分子肝素鈣/鈉水溶液，直至出現 乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀物冷凍干燥，得到所述的低分子 肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。本發明所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑的基礎藥學研究結果納米包 封率高達98% (98.06±1.10%)，體外釋放率4小時高達25%左右，室溫下觀察 72小時穩定。這些特性表明產量高，性能穩定，有利于生產、運輸和存儲。家兔口服200mg納米膠囊后實驗表明腸道吸收效果良好，吸收率達39%以上，達峰時間1小時，呈現零級動力學，即半衰期隨給藥劑量增大而延長， 組織濃度高于血藥濃度，緩慢釋放，組織起存儲作用，有利于持續發揮藥物的作用。而普通肝素針劑在人體的生物利用度是20%~30%。家兔口服200mg膠 囊后，藥物在動物體內代謝時間長，半衰期延長至28小時以上，作用時間長達 50小時，而且出現代謝峰，這些意外發現表明，納米肝素口服劑有緩釋作用， 與針劑比較有明顯的優點針劑在人體的半衰期約3小時，作用時間短，故病 人需要反復用藥，忍受皮肉之痛。口服劑型與針劑比較還有許多優點，即方便、 經濟、環保和人性化，屬綠色藥物范疇，值得大力開發。本發明的有益效果主要體現在所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑穩定性 好、納米包封率高達98%，體外釋放率4小時高達25%;腸道吸收率好，在體 內代謝時間長，作用時間長達50小時，具有緩釋作用，經濟、方便、環保，更 人性化為人類健康服務。(四)
圖l為低分子肝素鈣標準液(100mg/L)圖譜； 圖2為兔口服膠囊吸收圖譜；圖3為兔靜脈注射肝素針劑后2小時血漿圖譜； 圖4為兔口服200mg膠囊代謝圖譜； 圖5為兔口服28小時血漿圖譜；圖6為志愿者口服膠囊50mg3小時后血槳圖譜(相當于3.05mg/L);圖7為志愿者口服膠囊50mg4小時后血漿圖譜(相當于7.46mg/L);圖8為志愿者口服膠囊50mg5小時后血漿圖譜；圖9為不同時間段血藥濃度的紫外光譜掃描圖譜對比；圖IO為志愿者口服膠囊圖譜。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護范圍并不 僅限于此實施例l:低分子肝素鈣納米脂質體制備將殼聚糖lg溶解在0.1X濃度(w/w)的醋酸溶液50mL中，得到殼聚糖溶 液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加濃度為1% (w/w)的低分子肝 素鈣(常州天普制藥有限公司，批號H1999007)水溶液，直至出現乳白色沉淀， 將所得到的混懸液離心，取沉淀物冷凍干燥，得到低分子肝素鈣納米脂質體， 其納米包封率高達98%(97.94± 1. 33%)。實施例2:低分子肝素鈣納米脂質體制備將殼聚糖lg溶解在2%濃度的醋酸溶液50mL中，得到酸化的殼聚糖溶液， 過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加濃度為20%的低分子肝素鈣(常州 天普制藥有限公司，批號H199卯07)水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到 的混懸液離心，取沉淀物冷凍干燥，得到低分子肝素鈣納米脂質體，其納米包 封率高達98%(98.06±1.100/0)。實施例3:低分子肝素鈣納米膠囊劑制備取按實施例1方法所得低分子肝素鈣納米脂質體平均分裝入20顆膠腸溶膠 囊，得到所述低分子肝素鈣納米膠囊劑，含藥量為50mg/粒。實施例4:低分子肝素鈣納米膠囊劑制備取按實施例2方法所得低分子肝素鈣納米脂質體，平均分裝10顆腸溶膠囊， 得到所述低分子肝素鈣納米膠囊劑，含藥量為100mg/粒。低分子肝素鈣納米膠囊劑口服試驗一、 儀器與試劑高效液相儀(Thermo公司)、C-18柱(3.98X 150mm)、數據處理系統(Xcalibur)。 流動相為甲醇(0.01M)醋酸銨體積比(9: 91)，甲醇為色譜純，醋酸銨和丙 酮為分析純。低分子肝素鈣為常州天普制藥有限公司，批號H19990077。二、 方法1. HPLC法測定低分子肝素鈣精確稱量一定量的低分子肝素鈣配置成不同濃度的溶液作為標準液，紫外 檢測波長220nm，流速0.5ml/min，于40min內完成檢測。計算采用外標法求低 分子肝素鈣含量。低分子肝素鈣標準液(100mg/L)圖譜見圖l。不同時間段血 藥濃度的紫外光譜掃描圖譜對比見圖9。2. 兔血漿中藥物含量測定取按實施例3方法制得的膠囊喂兔子(4粒200mg)，并于0， 4， 7, 28， 50， 60小時從兔耳靜脈抽取2ml血，置含枸櫞酸的試管離心(3000rx 15min)， 分離出血漿約lml，加入等量的甲醇和丙酮混合液，充分混勻后放置15min再次 離心，取上清液過濾進樣。兔口服膠囊吸收圖譜見圖1，兔口服200mg膠囊代 謝圖譜見圖4，兔口服28小時血漿圖譜見圖5。同時，在另一只家兔的左兔靜脈注射13.75mg即4000U的低分子肝素鈣針 劑為對照組，5分鐘后從右側兔耳朵靜脈采集血2ml，動態測定血藥濃度(兔靜 脈注射肝素針劑后2小時血漿圖譜見圖3)。3. 人血漿中藥物含量測定(高效液相質譜儀法)按實施例3方法制得的膠囊，志愿者口服(l粒50mg膠囊)，并于0， 2， 4，5, 6， 7小時從志愿者肘靜脈抽取2ml血，置含枸櫞酸的試管離心(3O00rx 15min)，分離出血漿約lml，加入等量的甲醇和丙酮混合液，充分混勻后放置 15min再次離心，取上清液過濾進樣。志愿者口服膠囊50mg3小時后血漿圖譜(相當于3.05mg/L)見圖6,志愿 者口服膠囊50mg4小時后血漿圖譜(相當于7.46mg/L)見圖7，志愿者口服膠 囊50mg5小時后血漿圖譜見圖8;志愿者口服膠囊圖譜見圖10。 三、實驗結果兔口服試驗結果顯示動物口服200mg膠囊后1小時即測到吸收峰，7~8 小時出現吸收高峰。28小時還可以測到吸收峰，50小時測到代謝峰。APTT/PT 持續到28小時后。志愿者口服試驗結果顯示口服后3小時開始吸收，6小時出現吸收高峰， 7小時出現高峰后還測到代謝峰。APTT及PT均在正常范圍內，試驗過程無不 適反應。 '
權利要求
1、肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑，以肝素鈣/鈉鹽納米脂質體為主要原料制備，所述低分子肝素鈣/鈉鹽納米脂質體由如下方法制備得到將殼聚糖溶解在0.1～20％濃度的稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為0.5～5g/100mL醋酸溶液，得到酸化的殼聚糖溶液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加濃度1～99％的肝素鈣/鈉水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀物冷凍干燥，得到所述的肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。
2、 如權利要求1所述的肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑，其特征在于所述肝素f5 /鈉鹽為低分子肝素鈣/鈉鹽，或中分子肝素鈣/鈉鹽，或未分級的肝素鈣/鈉鹽。
3、 如權利要求1所述的肝素鈣/鈉納米口服制劑，其特征在于肝素鈣/鈉鹽 納米口服制劑為下列劑型膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、粉劑、乳劑、膏劑。
4、 如權利要求1所述的肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑，其特征在于肝素轉/鈉 鹽納米口服制劑為膠囊劑，由所述肝素鈣/鈉鹽納米脂質體灌入腸溶膠囊得到。
5、 制備如權利要求1所述的肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑的方法，其特征在于所述肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑為肝素鈣/鈉鹽納米膠囊劑，由如下方法制備得到將殼聚糖溶解2%濃度的稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為2g/100mL醋酸溶液， 得到酸化的殼聚糖溶液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加20%的肝 素鈣/鈉水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀物液冷 凍干燥，得到肝素鈣/鈉鹽納米脂質體，將所述肝素鈣/鈉鹽納米脂質體灌入腸溶 膠囊，得到所述肝素鈣/鈉鹽納米膠囊劑。
6、 一種低分子肝素鈣/鈉鹽納米脂質體，由如下方法制備得到將殼聚糖溶 解在2%濃度的稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為2g/100mL醋酸溶液，得到酸化的 殼聚糖溶液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加濃度為20%濃度的低 分子肝素鈣/鈉水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀 物冷凍干燥，得到所述的肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。
全文摘要
本發明涉及一種肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑及其制備方法，以及用于制備所述肝素鈣納米口服劑型的包封率高的肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。所述肝素鈣/鈉鹽納米脂質體由如下方法制備得到將殼聚糖溶解在1％-10％稀醋酸溶液中，殼聚糖用量為0.5～5g/100ml醋酸溶液，得到酸化的殼聚糖溶液，過濾，取濾液，在磁力攪拌下往濾液中滴加1％-99％的肝素鈣/鈉水溶液，直至出現乳白色沉淀，將所得到的混懸液離心，取沉淀物冷凍干燥，得到所述的肝素鈣/鈉鹽納米脂質體。本發明所述肝素鈣/鈉鹽納米口服制劑穩定性好、納米包封率高達98％，體外釋放率4小時高達25％；腸道吸收率好，在體內代謝時間長，半衰期隨口服劑量的增加而延長，呈現零級動力學，而且組織濃度大于血藥濃度，有緩慢釋放的功能，家兔口服200mg后，體內血藥濃度維持長達50小時以上，具有緩釋作用。
文檔編號A61K9/00GK101249063SQ200810060188
公開日2008年8月27日 申請日期2008年3月14日 優先權日2008年3月14日
發明者褚紅女 申請人:褚紅女