包括具有抗炎癥活性的北野菊的提取物或餾分的混合物的制作方法

專利名稱：包括具有抗炎癥活性的北野菊的提取物或餾分的混合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及ー種具有抗炎癥活性的組合物,該組合物包括北野菊(Chrysanthemumboreale Makino)的提取物或懼分。
背景技術：
人類的皮膚由于多種內在因素和外在因素而隨年齡經受變化。就內在因素而言，各種調節新陳代謝的荷爾蒙的分泌減少，以及免疫細胞的功能和細胞的活性降低，因此減 少了生物體內所需的免疫蛋白和生物蛋白的生物合成。就外在因素而言，環境污染和紫外線導致包括皺紋增多、彈性變小、皮膚干燥和黃褐斑以及雀斑和老年斑增多的多種變化，導致皮膚變差。當今，因為大多數人希望看起來年輕漂亮，他們強烈需要防止或減輕由于例如紫外線和壓力的外在因素和內在因素造成的皮膚老化。特應性皮炎(AD)為皮膚病之一，其為具有例如免疫、遺傳、藥理、生理和環境因素的多因素病因的皮膚病，該疾病特別通過感染、壓力、季節和氣候的變化、刺激和過敏源而產生。特應性皮炎是皮膚的慢性炎癥，在嬰兒到成人的所有年齡段的人中出現。通常，大約80%的特應性皮炎與免疫球蛋白E (IgE)相關，以及可以將特應性皮炎分類成外在(IgE介導)類型和內在(無IgE介導)類型。在具有特應性皮炎的患者中可觀測到IgE應答增多和嗜酸性粒細胞增多，這反映出例如IL (白介素)-4和IL-5的Th2細胞因子的應答增加，同時伴隨有Thl細胞因子、干擾素-Y (IFN-Y)生成減少。關于這一點，已經嘗試了使用各種免疫調節藥物，例如吡美莫司和他克莫司。特別地，近來已經知道存在能夠直接抑制免疫反應的⑶4細胞和⑶25細胞以及調節T細胞(Treg細胞)。Treg細胞來自胸腺并且具有控制各種T淋巴細胞的活性的能力。此外，Treg細胞通過在它們的表面上表達淋巴細胞抗原(CTLA4)、腫瘤壞死因子受體(GITR)、⑶25和淋巴細胞激活基因3 (LAG3)來轉錄免疫抑制信號或抑制例如巨噬細胞或B細胞的免疫細胞之間的相互作用。Treg細胞通過例如轉化生長因子-β (TGF-β )和IL-35以及IL-10的細胞因子的產生來誘發免疫抑制。在特應性皮炎中，例如IL-4和IL-5的Th2細胞因子由于Th2細胞發育的缺陷而大量產生，然而例如IFN-Y的Thl細胞因子的產生得到抑制。近來，已經知道通過TARC/CCL17、MDC/CCL22和CTACK/CCL2表示的Th2趨化因子直接地影響Th2細胞的發育。細胞因子由各種細胞產生且具有不同的功能。具體而言，由于相同的細胞因子可發揮不同的作用，因此細胞因子非常難于分類。當T細胞識別出通過巨噬細胞提供的抗原并且被活化以誘發免疫反應時，大量的細胞因子涉及在該過程中。從抗原識別到效應子步驟，先天免疫和適應性免疫的每ー步驟涉及各種細胞因子，以及ー些細胞因子也涉及在淋巴細胞和其他血細胞的產生中。主要細胞因子的功能如下所示。IL-I (白介素I)為通過活化的單核吞噬細胞、上皮細胞或內皮細胞產生的細胞因子并且介導炎癥。IL-I有IL-I α和IL-I β兩種形式。少量的IL-I激活⑶4-Τ細胞和B細胞，并且刺激炎癥細胞。然而，過量的IL-I起到誘發發燒和急性期反應的荷爾蒙的作用。IL-4 (白介素4)是具有大約20kDa (千道爾頓)大小的蛋白質，其通過⑶4T細胞和活化的肥大細胞產生，并且具有B細胞生長因子的功能。IL-4也具有在B細胞中的免疫球蛋白類類別轉換中涉及的分化因子的功能，并且還可以激活CD4T細胞、肥大細胞、巨噬細胞等。IL-10 (白介素10)通過與IL-2的協同效應誘發激活的T細胞分化成CTL，并且還誘發天然殺傷細胞(NK細胞)、淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK細胞)和激活的T細胞的増殖。IFN-Y (干擾素-Y)，也稱為II型干擾素，由⑶4T細胞或⑶8T細胞產生以調節免疫反應，并且因此也被稱為免疫干擾素。IFN-Y對T細胞、B細胞、NK細胞和內皮細胞起作用以激活它們，并且具有巨噬細胞激活因子的功能以增加I型MHC和II型MHC的表達。IFN-Y還能夠像其他干擾素一祥抑制病毒復制。NO (—氧化氮)在生理條件下具有血管舒張藥的功能。然而，當炎癥因子刺激巨噬細胞吋，iNOS (誘導型一氧化氮合酶)產生的NO在病理情況下誘發炎癥以增加C0X-2 (環 氧合酶-2)的活性，借助花生四烯酸級聯導致炎癥擴增。C0X-2是從花生四烯酸產生前列腺素的關鍵調節劑。C0X-2將花生四烯酸轉變成PGG2。取決于酶，PGG2轉化為在體內發揮不同功能的PGE2、P⑶2、PGF2、PGI2或TXA2。代表性的C0X-2抑制劑是阿司匹林。最近的研究趨勢已經集中于通過免疫調節來上調或下調IgE生成，以及積極研究了臨床可用的東方草藥對具有特應性皮炎的患者的作用。然而，還沒有人報道北野菊在特應性皮炎上的功效。

發明內容
技術問題因此，本發明已經證實，北野菊的提取物或餾分具有降低血清IgE濃度的作用并且對在炎癥疾病中發現的炎癥相關的因子具有抑制作用。基于該研究，發現北野菊的提取物或餾分顯示出對特別是特應性皮炎的各種炎癥性疾病有預防和治療作用，由此完成本發明。技術方案本發明的一目的是提供具有抗炎癥活性的組合物，所述組合物包括北野菊的提取物或餾分。本發明的另一目的是提供用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物、用于預防或減輕炎癥性疾病的化妝品組合物、食品組合物和準藥物(quasi-drug)組合物,所述的組合物包括含有作為活性成分的北野菊的提取物或餾分的組合物。本發明的另一目的是提供用于預防或減輕炎癥性疾病的水軟化劑，其包括含有作為活性成分的北野菊的提取物或餾分的組合物的過濾填料(fi I ter fi 11 er )。本發明的另一目的是提供用于通過對患有炎癥性疾病或處于炎癥性疾病風險的患者施用含有北野菊的提取物或餾分的所述組合物來預防或治療炎癥性疾病的方法。有益效果由于根據本發明的組合物具有抗炎癥活性，故該組合物可以用于預防或治療例如特應性皮炎的炎癥性疾病，并且還可以被應用到包括準藥物、化妝品、食品和水軟化劑的多個領域。


圖I為示出制備北野菊的提取物和餾分的方法的流程圖；圖2示出DNCB (ニ硝基氯苯)處理的NC/Nga小鼠的敏化時間表；圖3根據藥物治療前后的分數示出NC/Nga小鼠模型的變化；圖4示出在北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花的提取物的治療之后，誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的抓撓行為的變化；圖5示出在北野菊、蒲公·英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花的提取物的治療之后，誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的臨床評分的結果；圖6示出在北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花的提取物的治療之后，誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的血清IgE濃度的變化；圖7根據使用北野菊的提取物治療前后的分數，示出NC/Nga小鼠模型的過敏癥狀的變化；圖8示出在使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的臨床評分的結果；圖9示出在使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的抓撓行為的結果；圖10示出使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的耳朵厚度(長度mm)的測量結果；圖11示出使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的耳朵厚度(體積··%)的測量結果；圖12 (a)示出在ロ服給藥北野菊的提取物之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的血清IgE濃度的測量結果；(b)示出在局部給藥北野菊的提取物之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的血清IgE濃度的測量結果；圖13示出在使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的血清IFN-Y濃度的測量結果；圖14示出在使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的血清IL-4濃度的測量結果；圖15示出在使用北野菊的提取物治療之后的誘導型特應性皮炎NC/Nga小鼠模型的耳朵組織切片的照片；圖16示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS (脂多糖)誘導的細胞內一氧化氮的生成量；圖17示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內iNOS (誘導型一氧化氮合酶)的生成量；圖18示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內PGE2的生成量；圖19示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內C0X-2的生成量；圖20示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內I KB的生成量；圖21示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內P50的生成量；圖22示出在使用北野菊的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內P65的生成量；圖23示出在使用野菊花的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內
一氧化氮的生成量；圖24示出在使用野菊花的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內iNOS (誘導型一氧化氮合酶)的生成量； 圖25示出在使用野菊花的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內PGE2的生成量；圖26示出在使用野菊花的餾分治療之后在RAW264. 7細胞中LPS誘導的細胞內C0X-2的生成量；圖27示出在使用野菊花的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內I KB的生成量；圖28示出在使用野菊花的餾分治療之后，RAW 264. 7細胞中的LPS誘導的細胞內P65的生成量；圖29示出針對北野菊的提取物和餾分的細胞毒性的MTS分析的結果。
具體實施例方式為了實現上述目的，在ー個方面中，本發明提供了ー種具有抗炎癥活性的組合物，所述組合物包括北野菊的提取物或餾分。本發明人已經選取了北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根(Ilex cornutaLindl)和樓花(Prunus yedoensis Matsumura)的提取物,并檢查了這些提取物在炎癥疾病上的作用。結果發現北野菊的提取物具有最佳的效果。根據具體試驗示例(示例1)，當用北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花的提取物治療特應性皮炎誘發模型且隨后進行臨床評分時，發現與其他植物相比，記錄的北野菊的提取物示出對于紅斑、水腫、表皮脫落、瘙癢、皮膚干燥、糜爛和苔蘚樣硬化的低分值(見表I和表2，以及圖4和圖5)，并且示出顯著低的血清免疫球蛋白E濃度(見表3和圖6)。北野菊為多年生植物，該植物屬菊科和桔梗目并且分布在韓國、日本、中國北部和西伯利亞，主要出現在山谷或田野中。該植物生長到Im到I. 5m。葉子為可互生(alternate)的，當開花時，底部的葉子落下。中間的葉子為橢圓形、卵形，且長5cm到7cm以及寬4cm到6cm。底部的葉子有點像心形或末端平坦，分開的葉片具有類似的尺寸，并且為橢圓形、完整，以及在邊緣為鋒利葉狀的鋸齒形。葉柄為Icm到2cm長。邊緣葉片為2對，并且在葉片、表面上的毛和反面的中部的毛之間具有大的間隙。該植物從9月到10月開花，并且花的直徑為I. 5cm，花掛在枝和莖干的端部。總苞為4mm長且直徑為8mm。苞片為3排到4排，以及外苞片為直線型或橢圓形并且在其表面具有毛，以及內苞片為橢圓形且具有薄的邊緣。花冠為5mm到7mm長、顔色為黃色，并且管狀花冠的邊緣被分成5部分。瘦果為倒橢圓形的且長度為1mm，并且具有5排到6排以及沒有冠毛，且在十月到十一月成熟。該植物的莖為Im到I. 5m高并且具有多個具有短的白毛的分支。該植物的根長出并且小枝伸展開來。該植物在任何土壌中且尤其肥沃的土壌中生長的很好，并且比起潮濕的地方，更喜歡干燥的地方。本發明的北野菊為學名，并且可以從市場上可購買到的任何來源購買、從自然界收集或種植。此外，根據本發明的北野菊的提取物可以從天然植物、雜交植物或變異植物的各個器官抽提，例如根、莖、葉、花、新鮮果實和皮以及植物組織培養，并且最優選從北野菊的花中抽提。可通過用水、有機溶劑或它們的混合物抽提來獲得根據本發明的 北野菊的提取物。優選地，使北野菊干燥預定的時間并 且將其粉碎，隨后根據現有技術已知的例如熱水抽提、冷水抽提、熱抽提、超聲抽提和冷抽提的常見方法抽提。抽提方法不特別受限并且可以在室溫下或更高的溫度下(前提條件是活性成分沒有被破壞或 該破壞程度被最小化)進行。優選地，通過使洗滌且干燥的北野菊粉碎而獲得的北野菊的粉末可以用水、較低的C1-C4酒精或這些溶劑的混合物來抽提，更優選地，可以使用水或甲醇來抽堤。可以通過以下步驟進行北野菊的熱水抽堤用水加熱北野菊，過濾北野菊，濃縮濾液，并且隨后與賦形劑一起被粉化，并且用粘合劑將北野菊的粉末提取物制成片。所述賦形劑例如可以為淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖或明膠。此外，所述粘合劑可以例如為糊精、羥丙基纖維素、預膠凝淀粉、聚維酮(聚こ烯吡咯烷酮)、羧甲基纖維素、甲基纖維素或こ基纖維素。抽提時間不特別地受限，但可以為大約2小時到5小吋，并且熱水抽提可以在70°C到100°C、優選地80°C到100°C下進行。基于北野菊的重量，10倍到30倍，優選15倍到25倍，并且更優選地大約20倍體積的水可以用來制備北野菊的熱水提取物。同時，可以通過北野菊的提取物進行分餾獲得本發明的北野菊的餾分。為了獲得餾分，可以使用本領域已知的各種溶劑，優選使用有機溶剤。例如，可以包括戊烷、己烷、2，2，4-三甲基戊烷、地卡因、環己烷、ニ硫化碳、四氯化碳、氯丁烷、ニ異丙醚、氯仿、丙酮、硝基丙烷、丁酮、ニ氯こ烷、吡啶、丙醇、甲醇和こ酸こ酷。優選的有機溶劑包括非極性有機溶齊U，具體而言，這些非極性有機溶劑為氯仿、こ醇、こ酸こ酯或它們的溶劑混合物，但不限于此。在本發明的具體示例中，氯仿、こ醇或它們的溶劑混合物用來獲得各種餾分，并且所有的餾分顯示出活性。在這些餾分中，氯仿餾分顯示出最高的抗炎癥活性(表8、表9和表10)。本文中所使用的術語“抗炎癥活性”意指抑制炎癥，炎癥是ー種抵御一定刺激的人體內部防御機理，并且指產生三種變化(組織的改變、循環失調和分泌物以及組織的増殖)的復雜的機能障礙。更具體地，炎癥為先天免疫的一部分，人類的先天免疫類似于其他動物，包括通過識別具體的細胞表面類型(pattern)獲知病原體。吞噬細胞識別出異己的細胞來攻擊病原體。如果病原體滲入人體的生理屏障，那么發生炎癥。炎癥為對損傷的部位的細菌產生不利的環境的非特定的防御。在炎癥反應中，當損傷發生時或病原體侵入身體時，通過起始免疫反應涉及的白血球的募集來釋放細胞因子。因此，胞內細胞因子濃度為炎癥活性的指標。本發明人已經進行了北野菊的試驗，并且證實北野菊的提取物和餾分具有抗炎癥活性。在本發明的具體試驗示例(示例3)中，本發明人確認在使用北野菊的提取物或餾分治療之后，在炎癥疾病動物模型中，血清IgE (血清免疫球蛋白E)、IFN-Y (干擾素-Y )和IL-4 (白介素4)濃度降低(圖12、圖13和圖14);胞內NO (—氧化氮)濃度降低(圖16)；iNOS (誘導一氧化氮合酶)濃度降低(圖17);胞內PGE2 (前列腺素E2)的濃度降低(圖18);胞內C0X-2蛋白濃度降低(圖19);以及抑制I K B磷酸化和NF-K B核易位降低(圖20、圖21和圖22)。由于所有這些物質在炎癥或過敏反應期間被高度表達，故它們的表達濃度的降低表明北野菊的提取物具有抗炎癥活性。具體而言,與野菊花(野菊花(Chrysanthemi Indici Flos)為屬菊科的多年生植物、60cm到90cm長、具有暗紅色的莖并且具有裂開的羽狀葉和在十月到十一月盛開在枝頭的芳香的黃色花)對比，發現北野菊(5μ g/ml)的甲醇(MeOH)提取物、氯仿(CHCl3)餾分和こ酸こ酯(EtOAc)餾分分別可將炎癥疾病動物模型中的胞內ー氧化氮(NO)濃度降了大約38%,78%和30% (示例3和示例2)，而發現野菊花分別在2. 5 μ g/ml,25 μ g/ml,50 μ g/ml和100 μ g/ml的濃度下,野菊花的甲醇提取物將胞內一氧化氮濃度降低至97. 9%、89. 0%、37. 3%和17. 8%，以及野菊花的氯仿餾分將胞內一氧化氮濃度降低至50. 6%、19. 2%、16. 6%和
7.5%(表14)。該結果表明，較少量的北野菊的提取物顯示出與野菊花的效果相同或更好的效果。此外，當比較iNOS (誘導一氧化氮合酶)濃度降低(圖24)、胞內PGE2 (前列腺素E2) 濃度降低(圖25)、胞內C0X-2蛋白濃度降低(圖26)、以及抑制I K B磷酸化和NF-κ B核易位移位降低(圖27和圖28)時，盡管北野菊的含量較低，但是北野菊的提取物和餾分顯示出比野菊花更佳的效果。一氧化氮(NO)在生理條件下具有血管舒張藥物的作用。然而，當巨噬細胞受到炎癥細胞因子刺激時，iNOS產生的NO在病理狀態下誘發炎癥以提高C0X-2 (環氧酶_2)的活性，借助花生四烯酸級聯導致炎癥擴增。IFN- Y也被稱為II型干擾素，通過⑶4T細胞或⑶8T細胞產生以調節免疫反應，并且由此被稱為免疫干擾素。IFN-Y對T細胞、B細胞、NK細胞和內皮細胞起作用以激活它們，并且具有巨噬細胞激活因子的功能以增加I型MHC和II型MHC的表達。IFN-Y還像其他干擾素ー樣能夠抑制病毒復制。IL-4為大約20kDa大小的蛋白質，其通過⑶4T細胞和活化的肥大細胞產生并且具有B細胞生長因子的功能。IL-4還具有B細胞中的免疫球蛋白類別轉換中涉及的分化因子的功能，并且還可以激活⑶4T細胞、肥大細胞和巨噬細胞。與上述結果一致，根據本發明的北野菊的提取物或餾分在尤其是特應性皮炎的炎癥疾病上具有優異的預防和治療活性。北野菊的提取物和餾分不是人工合成的化合物，而基于天然提取物獲取的成分。因此，北野菊的提取物和餾分是安全、無毒和沒有副作用的，并且可以長期使用。此外，該組合物可以用于具有炎癥疾病的動物，包括猴、狗、貓、兔、豚鼠、大鼠、小鼠、牛、綿羊、豬和山羊以及人。因此，本發明可以用來制備用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物，該藥物組合物包含作為活性成分的北野菊的提取物或餾分，并且通過施用該組合物可以預防或治療炎癥疾病。在本發明的另一方面中，本發明涉及用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物，該組合物包含作為活性成分的北野菊的提取物或餾分，本發明還涉及ー種用于預防或治療炎癥性疾病的方法，所述方法通過對具有炎癥性疾病或具有炎癥性疾病風險的患者施用包含北野菊的提取物或餾分的所述組合物而進行的。
炎癥性疾病可以為過敏性炎癥疾病，過敏性炎癥疾病可以包括慢性阻塞性肺病(C0PD)、哮喘、風濕性關節炎、特應性皮炎和炎癥性腸病。然而，可以包括通過炎癥或過敏反應誘發的任一疾病而不受限制，并且優選包括特應性皮炎。本文中所使用的術語“預防”表示通過施用包含根據本發明的北野菊的提取物或餾分的組合物，疾病得到抑制或延緩的所有行為。本文中所使用的術語“治療”表示通過施用包含根據本發明的北野菊的提取物或餾分的組合物，疾病大大好轉或改善的所有行為。根據本發明的具體試驗示例(示例2)，本發明人確認在使用北野菊的提取物治療之后，在炎癥疾病動物模型中，I)紅斑、水腫、表皮脫落、瘙癢、皮膚干燥、糜爛和苔蘚樣硬化減輕(圖7和圖8) ；2)耳腫脹減輕(圖10和圖11) ；3)抓撓行為減少(圖9) ；4)抑制成纖維細胞増殖、膠原蛋白層增生和潰瘍，降低肥大細胞浸潤，以及減輕由中性粒細胞浸潤和淋巴細胞浸潤引發的炎癥(圖15 )，這表明對尤其特應性皮炎的炎癥疾病有治療作用。 用于預防或治療炎癥性疾病的包含根據本發明的北野菊的提取物或餾分的藥物組合物可以經各種途徑向哺乳類動物給藥，所述哺乳類動物包括大鼠、小鼠、家畜和人。考慮所有給藥方式，例如，給藥可以以ロ服、直腸給藥、或通過靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、硬膜外注射或側腦室注射而進行。優選地，該組合物可以應用到皮膚，并且最優選地口服給藥。本發明的用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物以藥學上有效的量被給藥。本文所使用的術語“藥學上有效的量”指足以治療疾病的量，該量與應用于醫療的適當的獲益/風險比相稱。可以根據對象和疾病的嚴重程度、年齡、性別、感染病毒的類型、藥物活性、病人的藥物敏感性、給藥時間、給藥途徑、排出率、治療持續時間、同時使用的藥物和醫學領域中知道的其他因素來確定該組合物的有效劑量。本領域技術人員可以理解，有效量根據給藥途徑、賦形劑用量和與其他活性劑共同使用而不同。本發明的用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物可以以該藥物組合物的藥學上可接受的鹽的形式使用，并且還可以單獨使用或結合其他的藥學上的活性化合物使用。可以使用本領域已知的方法將本發明的用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物制備成藥物制劑以便在對哺乳動物給藥后提供活性成分的快速、延長或延遲釋放。在制劑的制備中，優選地，活性成分可以與載體混合或用載體稀釋，或裝在容器類型的載體中。因此，本發明的用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物可以根據常見的方法被制成用于ロ服的劑型，例如粉末、顆粒、藥片、膠囊、懸浮劑、乳剤、糖漿、氣霧劑等，或者用于外敷的劑型、栓劑和滅菌注射溶液。還可以包括組合物的制備中通常使用的合適的載體、賦形劑和稀釋劑。本發明的藥物組合物中可包括的載體、賦形劑和稀釋劑的示例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、北露糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、海藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚こ烯吡咯烷酮、水、甲基羥苯酸酯、丙基羥苯酸酷、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。在制備期間，通常所用的填料、增量劑(extender)、粘合劑、潤濕劑、崩解劑(disintegrant)、表面活性劑等被用作稀釋劑或賦形齊 。用于ロ服給藥的固體劑型包括藥片、藥丸、粉末、顆粒等。通過將所述提取物與例如淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠等的至少ー種賦形劑混合來制備固體劑型。此外，除了賦形劑之外，還可以使用例如硬脂酸鎂和滑石的潤滑剤。用于ロ服給藥的液體劑型包括懸浮劑、用于內用的液體、乳劑、糖漿等。除了例如水和液態石蠟的常用的簡單稀釋劑以外，還可以包括例如潤濕劑、甜味劑、芳香剤、防腐劑等多種賦形劑。腸胃外給藥的劑型包括無菌水溶液、非水性溶液、懸浮液、乳液、冷干制劑和栓劑。非水性溶液或懸浮液可包括丙ニ醇、聚こニ醇、例如橄欖油的蔬菜油、例如油酸こ酯的可注射酯等。栓劑的基料可以為witepsol、聚こニ醇、吐溫61 (Tween61)、可可油、月桂油和北油凝膠等。在另一方面中，本發明提供用于減輕炎癥性疾病的食品組合物，該組合物包含作為活性成分的北野菊的提取物或餾分。 可以以藥丸、粉末、顆粒、浸劑、藥片、膠囊或飲料的形式制備本發明的食品組合物，并且本發明的食品組合物可以加入到例如飲料、ロ香糖、茶、復方維生素、保健食品等的各種食品中。除了作為必要成分的北野菊的提取物或餾分之外，本發明的食品組合物可包括其他成分而不受特別限制，并且可以以常規食品的相同方式包括各種草藥提取物、食品添加劑或天然糖類。該食品組合物還可包括選自北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花的ー種或多種草藥提取物。此外，還可以包括食品補充添加剤，食品添加劑包括本領域熟知的香味劑、調味齊U、著色劑、填料、穩定劑等。天然糖類的示例包括常規的糖，例如單糖(例如，葡萄糖和果糖等)；ニ糖(例如麥芽糖和蔗糖等)；多糖(例如糊精和環糊精等)；和糖醇，例如木糖醇、山梨糖醇和赤蘚糖醇。此外，可以恰當地使用例如奇異果甜蛋白、甜葉菊提取物(例如萊苞迪甙A和北草酸等)的天然香味劑和例如糖精和天冬甜素的合成香味劑等作為香味劑。此外，本發明的食品組合物可包含各種營養素、維生素、礦物質(電解質)、調味劑(例如合成調味劑和天然調味劑等)、著色劑、増量劑(奶酪和巧克カ等)、果膠酸和果膠酸鹽、海藻酸和海藻酸鹽、有機酸、保護膠體的增稠劑、酸堿性調節劑、穩定劑、防腐劑、北油、こ醇、用于碳酸飲料的碳酸化劑等。此外，本發明的食品組合物可包含可以用于制備天然果汁、果汁飲料和蔬菜飲料的果肉。上述各成分可以單獨使用或組合使用。此外，可應用的食品沒有限制，這些食品例如有肉、香腸、面包、巧克力、糖果、點心、餅干、比薩、日本拉面、ロ香糖、冰淇淋、湯、飲品、茶、功能水、飲料、酒精類飲料和復方維生素。在另一方面中，本發明涉及一種化妝品組合物，該化妝品組合物包括作為活性成分的北野菊的提取物或餾分。根據本發明的化妝品組合物可被制成化妝水、凝膠、可溶于水的粉末、可溶于油的粉末、可溶于水的液體、面霜、香精等，如果必要的話，使用常規方法加入控制酸堿度的物質、香料、乳化劑和防腐剤。在另一方面中，本發明涉及一種準藥物組合物，該準藥物組合物包括作為活性成分的北野菊的提取物或餾分。換言之，本發明的所述組合物可以加入到準藥物組合物中以預防或減輕炎癥疾病。當本發明的北野菊的提取物或餾分被用作準藥物添加劑時，該提取物或餾分可以未加改變地添加或根據通常的方法可以結合其他的準藥物或準藥物成分使用。活性成分的混入量可以根據使用目的(預防、保健或醫療)而適當地確定。優選地，在除菌清潔劑、沐浴露、口腔清新劑、濕巾、清潔皂、洗手液、加濕器填料、面膜、藥膏、涂抹劑或過濾填料的制備中可以使用該準藥物組合物。包括根據本發明的過濾填料的過濾器可以被應用到各個領域，且用在本領域已知的任ー過濾設備中。因此，在另一方面中，本發明提供了ー種用于預防或治療炎癥性疾病的水軟化劑組合物，該水軟化劑組合物包括過濾填料。本文所使用的術語“水軟化劑”為設計成用來從硬水去除例如鈣和鎂的陽離子的裝置，并且還被稱為硬水軟化劑。除了水軟化功能以外，該水軟化劑可包括空氣清潔的功能和水純化功能。本發明的該水軟化劑包括含有所述組合物的過濾填料，所述組合物包含作為活性成分的北野菊的提取物或餾分，由此對于預防和減輕特別是特應性皮炎的炎癥疾病是有效的。除了北野菊的提取物或餾分之外，本發明的水軟化劑還可包含例如根據目的而·定的東方草藥的多種成分。本發明的方式在下文中，將結合示例更詳細地描述本發明。然而，以下示例僅用于例證目的，并且本發明不限于這些示例。示例I樣本提取和篩選(I)候選藥物的抽提使用100%甲醇(MeOH)作為溶劑，在110°C的提取器中對IOOg的北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花各抽提三次，在減壓條件下使用旋轉式蒸發器濃縮，并且隨后冷干以獲得各100%的甲醇提取物。(2) NC/Nga小鼠模型的介紹NC/Nga小鼠被稱為自發特應性皮炎小鼠模型，由于因JAK3激酶的過磷酸化而IgE生成增多而產生。近來，據報道，特應性皮炎也在剔除STAT6的NC/Nga小鼠中自發地誘發，其中，STAT6對于IgE和Th2細胞因子的產生是重要的，這表明皮炎通過其他未預想到的機理誘發(J. I. 1999，162 :1056-63)。盡管具有這些優點，但自發性皮炎誘發的比率低并且誘發型皮炎的嚴重程度不同。實際上，小鼠模型對于評估是不可靠的模型。因此，在日本，使用半抗原和三硝基氯苯通過人工誘發皮炎解決該問題。然而，三硝基氯苯在韓國為禁用的，因此在本文中使用結構上類似于三硝基氯苯的DNCB (I-氯2，4- ニ硝基苯，西格瑪23732-9)來進行試驗，以便獲得類似的結果。在該模型中，特應性皮炎的主要癥狀(瘙癢、IgE生成増加和皮膚發炎)全部被觀測至IJ，并且此外，這些癥狀完全通過局部用類固醇或ロ服環孢菌素來治療，所述類固醇和環孢菌素對于特應性皮炎是公知治療藥劑。因此，NC/Nga小鼠模型被作為體內模型引入，以對用于特應性皮炎的治療藥劑作療效評價。(3)通過使用NC/Nga小鼠的篩選方法自發特應性皮炎小鼠模型即NC/Nga小鼠用于誘發特應性皮炎，并且隨后以下述方式進行評估以篩選最有效的藥物。使用以下試驗組進行藥物篩選正常組，不用DNCB處理以免患特應性皮炎；對照組，用DNCB處理以患特應性皮炎；ロ服給藥組，用北野菊的提取物(100mg/kg，400mg/kg)治療；和局部給藥組，用北野菊的提取物(200 μ I :1%的稀釋液，2%的稀釋液)治療。Α.臨床評分進行兩次臨床評分，在DNCB (西格瑪23732-9)處理之后進行一次，和用候選治療齊IJ (各100mg/kg和400mg/kg的北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花)治療之后進行一次。通過兩個或兩個之上的有經驗的研究者執行和評估特應性皮炎的臨床評分。具體而言，在完成藥物治療之后拍照并且存儲照片。視覺評估結果用下面的五項的單獨評分的總 和表示。評估項包括紅斑、瘙癢和皮膚干燥、水腫和表皮脫落、糜爛、以及苔蘚樣硬化，這些項按如下單獨評分無(O)、輕微(I)、中度(2)和嚴重(3)。因此，評分范圍為從O到15。將藥物治療前后的評分進行比較以確定減少率，將該減少率與載體治療組的減少率進行比較以用于顯著性試驗。B.抓撓行為評估緊接著藥物給藥之后，檢查達30分鐘的發癢和抓撓行為的指標。用后肢抓撓被計作一次抓撓行為，以及在I秒內的快速且頻率高的的抓撓行為也被計作一次抓撓行為。C.血清IgE濃度在用候選治療藥物(各100mg/kg和400mg/kg的北野菊、蒲公英、黃柏、石菖蒲、枸骨根和櫻花)治療DNCB (西格瑪23732-9)誘發的皮炎之后，通過ELISA來測定血清IgE濃度。將藥物治療前后的血清IgE濃度對比以測定減少率，將該減少率與賦形劑治療組的減少率對比以用于顯著性試驗。A.藥物治療組[治療之前的IgE (藥物)-治療之后的IgE (藥物)]/治療之前的IgE (藥物)B.賦形劑治療組[治療之前的IgE (載體)-治療之后的IgE (載體)]/治療之前的IgE (載體)(4)結果A.臨床評分結果就臨床評分結果而言，與其他候選藥物對比，針對北野菊記錄的分值較低，并且該分值接近于正常組的分值。此外，表I示出誘發型特應性皮炎的NC/Nga小鼠模型的臨床評分(圖5)。表I[表I]
(mg/kg)I天 5天8天15天22天25天27天
正常組-0±0 0±00·3±0·5 0·8±1·3 1·0±1·5_ 1·0±1·5_ 1·0±1·5
對照組-0±0 6·2±0·8 11·3±1·5 11·3±0·8 8·3±0·沴 7·3±0·8_ 7·3±0·8
北野菊 100-治療組 ’0±0 5·5±2·1 10·0±3·3 9·8±2·4 6·8±1·2_ 5·5±2·3_ 4·2±1·8
權利要求
1.一種具有抗炎癥活性的組合物，所述組合物包括北野菊的提取物或餾分。
2.根據權利要求I所述的組合物，其中，所述北野菊的提取物為北野菊的水提取物或北野菊的甲醇提取物。
3.根據權利要求I所述的組合物，其中，所述北野菊的提取物是通過熱水抽提來抽提的。
4.根據權利要求I所述的組合物，其中，所述餾分為使用氯仿、乙醇、乙酸乙酯或其混合物中的任一個獲得的餾分。
5.根據權利要求I所述的組合物，其中，所述組合物是具有以下性質中的一個或多個性質的組合物 1)減少紅斑、水腫、表皮脫落、瘙癢、皮膚干燥、糜爛和苔蘚樣硬化； 2)減少耳腫脹； 3)減少抓撓行為； 4)降低血清免疫球蛋白E(IgE)、干擾素-Y (IFN-Y )或白介素-4 (IL-4)的濃度； 5)減少胞內一氧化氮(NO)表達； 6)減少胞內一氧化氮合酶(iNOS)表達； 7)減少胞內前列腺素E2(PGE2)的生成； 8)減少胞內C0X-2的表達； 9)抑制IK B磷酸化且降低NF- K B核易位；以及 10)抑制成纖維細胞增殖、膠原蛋白層增生和潰瘍，降低肥大細胞浸潤，以及減輕由中性粒細胞浸潤和淋巴細胞浸潤引起的炎癥。
6.一種用于預防或治療炎癥性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括作為活性成分的權利要求I到5中任一項所述的組合物。
7.根據權利要求6所述的藥物組合物，其中，所述炎癥性疾病為過敏性炎癥疾病。
8.根據權利要求7所述的藥物組合物，其中，所述過敏性炎癥疾病為特應性皮炎。
9.根據權利要求6所述的藥物組合物，其中，用于預防或治療炎癥性疾病的所述藥物組合物具有藥片、藥丸、粉末、顆粒、膠囊、懸浮液、內用液體、乳液、糖漿、消毒的水性溶液、非水性溶液、凍干劑型和栓劑中的任一劑型。
10.一種用于預防或減輕炎癥性疾病的化妝品組合物，所述化妝品組合物包括作為活性成分的權利要求I到5中任一項所述的組合物。
11.一種用于預防或減輕炎癥性疾病的食品組合物，所述食品組合物包括作為活性成分的權利要求I到5中任一項所述的組合物。
12.根據權利要求11所述的食品組合物，其中，所述食品組合物為肉、香腸、面包、巧克力、糖果、點心、餅干、比薩、日本拉面、口香糖、冰淇淋、湯、飲品、茶、功能水、飲料、酒精類飲料和復方維生素中的任一種。
13.一種用于預防或減輕炎癥性疾病的準藥物組合物，所述準藥物組合物包括作為活性成分的權利要求I到5中任一項權利要求的所述組合物。
14.根據權利要求13所述的準藥物組合物，其中，所述準藥物組合物為除菌清潔劑、沐浴露、口腔清新劑、濕巾、清潔皂、洗手液、加濕器填料、面膜、藥膏、涂抹劑或過濾填料中的任一種。
15.一種用于預防或減輕炎癥性疾病的水軟化劑，所述水軟化劑包括含作為活性成分的權利要求I到5中任一項所述的組合物的過濾填料。
16.一種用于預防或治療炎癥性疾病的方法，所述方法是通過向患有炎癥性疾病或處于炎癥性疾病風險的患者給藥權利要求I到5中任一項所述的組合物而進行的。
17.根據權利要求16的所述方法，其中，所述組合物為口服給藥或局部給藥的。
18.根據權利要求16的所述方法，其中，所述炎癥性疾病為過敏性炎癥疾病。
19.根據權利要求18的所述方法，其中，所述過敏性炎癥疾病為特應性皮炎。
全文摘要
本發明涉及一種具有抗炎癥活性的組合物，該組合物包括北野菊的提取物或餾分。由于該組合物顯示出在對特別是特應性皮炎的炎癥性疾病上的預防和治療作用，因此該組合物可以被用作藥物組合物，并且還可以被應用到包括準藥物、化妝品組合物、食品和水軟化劑的多個領域。
文檔編號A61P29/00GK102686230SQ201080058900
公開日2012年9月19日 申請日期2010年9月30日 優先權日2009年11月27日
發明者咸仁惠, 崔湖榮, 方燦成, 梁甲栻, 金元泰, 韓昌洙 申請人:慶熙大學校產學協力團, 熊津豪威株式會社