專利名稱：一種凍干免疫佐劑的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種凍干免疫佐劑的制備方法，特別是涉及一種聚肌胞凍干制劑的制備方法。
背景技術：
聚肌胞(PolyIC或PIC)是由人工合成的聚肌苷酸(PolyI)和聚胞苷酸(PolyC) 配對合成的雙鏈核苷酸(RNA)，是一種高效干擾素誘生劑。目前酶法合成的核苷酸原料均為酵母提取物，含有大量的內毒素、殘留DNA及菌體蛋白，這些物質都能夠導致PIC產品在臨床中產生發熱等副作用。我公司進行了精制聚肌胞的純化與合成工藝探索。精制聚肌胞是在原聚肌胞制備工藝的基礎上通過三步層析技術進行精制，最大限度地去除內毒素、殘留 DNA及殘余宿主菌體蛋白等雜質，從而大大地提高了純度和有效成分的含量，遠遠高于原聚肌胞注射液的純度；該精制聚肌胞制備是在-40°C冷凍干燥的，低溫可以最大限度地保持了有效成分及其活性。
發明內容
本發明的目的之一是提供一種凍干免疫佐劑的制備方法，目的之二是提供一種保質期較長的新城疫凍干免疫佐劑。一種凍干免疫佐劑的制備方法，包括聚肌胞原液及冷凍干燥添加劑，所述冷凍干燥添加劑基本上由葡萄糖酸鈣和甘露醇組成。為了更好地維持和保護原液生物的活性， 所述冷凍干燥添加劑中還含有抗壞血酸鈉、精氨酸。所述冷凍干燥添加劑各組分的百分比為單硫酸卡那霉素500 5000單位/ml精氨酸0.5% 2.0%抗壞血酸鈉 0.1% 0.3%甘露醇2.0% 8.0%一種凍干免疫佐劑的制備方法，包括以下步驟(1)聚肌胞原液制備取聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液，于40°C 60°C水浴中混合， 攪拌30min 120min，聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液加入比例為1 0. 5 1 1. 5 ；(2)將聚肌胞原液用0. 45 μ m濾芯過濾，用Millipore超濾系統300KD的膜包濃縮成濃度為0. 8mg/ml 4. Omg/ml，加入冷凍干燥添加劑混勻，無菌過濾，分裝于西林瓶中，半加塞，其中所述冷凍干燥添加劑基本上由葡萄糖酸鈣、甘露醇組成；(3)待西林瓶放入冷凍干燥器內，分別在4.8 5.2 °C、 0. 2 -0. 2°C、_5. 8 -6. 2°C各平衡 1 小時；(4)快速凍結，將制品溫度降至-48 -52°C維持3. 5 2. 5小時；(5)真空干燥；(6)加熱干燥，在制品溫度達到25. 5 37. 5°C條件下持續3. 5 2. 5小時；
(7)全部加塞，壓封鋁蓋。本發明由于采用了上述技術方案，因此具有以下優點1.在凍干制劑的減壓一升溫一干燥過程中，適宜的升溫程序對維持生物制品的生物活性、制劑的外觀形態是重要的。將升溫干燥的終點控制在30°C并持續3小時，使制品中的殘余水分以定量非共價鍵形式存在，以維持原液的形態、活性的穩定，減少成品凍干制劑在保存過程中的效價急速回落，并延長保存時間。2、本發明的冷凍干燥添加劑與聚肌胞原液具有極佳的生物相容性。甘露醇，既是一種很好的脫水劑，又是一種很好的凍干賦形劑；精氨酸是一種很好的生物保護物質；抗壞血酸鈉是抗細胞膜氧化的維生素；單硫酸卡那霉素是一種穩定劑。3、液體凍結過程中，即液體降溫一結冰一形成玻璃化晶態的過程中會發生從宏觀到微觀的適應性變形，以保持其生物活性。在凍干制劑生產的凍結過程中采用5°C、 0°c, -6°c各平衡1小時，有利于原液對溫度的適應性變形，對維持凍干制劑的生物效價是必要的。4、本發明的凍干制劑中聚肌胞原液經過了過濾、濃縮處理，使雜質減少。5、本發明的凍干制劑，半成品最終通過過濾除菌，代替了傳統的高壓滅菌，使生產
工藝簡單化。下面結合具體實施例對本發明做進一步說明。
具體實施例方式實施例1取聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液(1 0.5)，于40°C水浴中混合，攪拌45min，用 0. 45 μ m濾芯過濾，用Millipore超濾系統300KD的膜包濃縮成濃度為0. 8mg/ml的液體，加入單硫酸卡那霉素500單位/ml，精氨酸0.5%，抗壞血酸鈉0.15%，甘露醇2.0%，混勻，無菌過濾，分裝冷凍干燥。實施例2取聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液(1 1)，于50°C水浴中混合，攪拌60min，用 0. 45 μ m濾芯過濾，用Millipore超濾系統300KD的膜包濃縮成濃度為2. Omg/ml的液體，力口入單硫酸卡那霉素3000單位/ml，精氨酸1. O抗壞血酸鈉0.2%，甘露醇3.8%，混勻，無菌過濾，分裝冷凍干燥實施例3取聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液(1 1. 5)，于50°C水浴中混合，攪拌90mi η,用 0. 45 μ m濾芯過濾，用Millipore超濾系統300KD的膜包濃縮成濃度為4. Omg/ml的液體，加入單硫酸卡那霉素5000單位/ml，精氨酸1.0%，抗壞血酸鈉0.3%，甘露醇6.0%，混勻，無菌過濾，分裝冷凍干燥成品凍干制劑按《標準》所列方法檢定，合格。
權利要求
1.一種凍干免疫佐劑的制備方法，其特征是包括聚肌胞原液制備及冷凍干燥添加齊U，其特征在于所述冷凍干燥添加劑基本上由葡萄糖酸鈣和甘露醇組成。
2.一種凍干免疫佐劑的制備方法，根據權利要求1所述，其特征在于所述冷凍干燥添加劑中還含抗壞血酸鈉、精氨酸。
3.一種凍干免疫佐劑的制備方法，根據權利要求2所述，其特征在于所述冷凍干燥添加劑各組分的百分比為單硫酸卡那霉素500 5000單位/ml精氨酸0.5% 2.0%抗壞血酸鈉0.1% 0.3%甘露醇2.0% 8.0%
4.一種凍干免疫佐劑的制備方法，根據權利要求1所述，其特征在于所述聚肌胞原液的濃度為0. 8mg/ml 4mg/ml。
5.一種凍干免疫佐劑的制備方法，根據權利要求1所述，其特征在于包括以下步驟(1)聚肌胞原液制備取聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液，于40°C 60°C水浴中混合，攪拌 30min 120min，聚肌苷酸和聚胞苷酸純化液加入比例為1 0. 5 1 1. 5 ；(2)將聚肌胞原液用0.45 μ m濾芯過濾，用Millipore超濾系統300KD的膜包濃縮成濃度為0. 8mg/ml ％ig/ml，加入冷凍干燥添加劑混勻，無菌過濾，分裝于西林瓶中，半加塞， 其中所述冷凍干燥添加劑基本上由葡萄糖酸鈣、甘露醇組成；(3)待西林瓶放入冷凍干燥器內，分別在4.8 5. 2°C、0. 2 -0. 2°C、-5. 8 -6. 2 V 各平衡1小時；(4)快速凍結，將制品溫度降至-48 -52°C維持3.5 2. 5小時；(5)真空干燥；(6)加熱干燥，在制品溫度達到25.5 37. 5°C條件下持續3. 5 2. 5小時；(7)全部加塞，壓封鋁蓋。
全文摘要
本發明公開了一種凍干免疫佐劑的制備方法。涉及領域為凍干制劑及其制備方法。本發明的目的是提供一種凍干免疫佐劑的制備方法。本發明的技術方案是一種凍干免疫佐劑的制備方法，包括聚肌胞原液及冷凍干燥添加劑，所述冷凍干燥添加劑基本上由甘露醇、抗壞血酸鈉、精氨酸、單硫酸卡那霉素組成。制備上述凍干免疫佐劑的方法，包括以下步驟(1)聚肌胞原液制備；(2)聚肌胞原液過濾、濃縮；(3)加入冷凍干燥添加劑混勻，無菌過濾，分裝于西林瓶中；(4)將西林瓶放入冷凍干燥器內，分別在5℃、0℃、-6℃備平衡1小時；快速凍結，將制品溫度降至-50℃維持3小時；(5)真空干燥；(6)加熱干燥，在制品溫度達到30℃條件下持續3小時；(7)加塞，封口。
文檔編號A61P31/14GK102488897SQ20111042012
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者侯本晶, 沈麗麗, 焦月, 王國新 申請人:天津濟命生生物科技有限公司