關節炎治療的制作方法

專利名稱：關節炎治療的制作方法
關節炎治療相關申請的交叉引用
本申請要求2010年6月18日提交的美國臨時專利申請序列號61/356，176的優先權，通過引用以其全文結合在此。技術領域
本發明總體上涉及免疫學、炎癥、關節炎、及醫學領域。更具體地說，本發明涉及一種特異性結合白細胞介素-Ia (IL-Ια )的抗體(Ab)用來治療關節炎的一種或多種癥狀的用途。
背景技術：
關節炎，在美國是殘疾的最常見原因，為不同病癥的集合，如骨關節炎、類風濕性關節炎、痛風、銀屑病關節炎、膿毒性關節炎、反應性關節炎。所有類型的關節炎以關節炎癥為特征，引起該患病部位的疼痛、腫脹、發紅、僵硬、以及熱。由于罹患受試者因疼痛和僵硬而活動能力較低，關節炎能夠間接導致肥胖癥、高膽固醇、和/或心臟病。關節炎還能夠引起關節外疾病，如虹膜炎、葡萄膜炎、口腔潰瘍、胃腸道炎癥、泌尿生殖道炎癥、以及皮膚損害。
對于大部分類型的關節炎，不存在治愈，并且治療在很大程度是針對癥狀的，例如給予止痛藥和抗炎 藥。非留體抗炎藥(NSAID)能夠用于減輕炎癥和疼痛。雖然通常是有效的，NSAID可能引起副作用，如腹痛、出血、潰瘍、以及肝和腎的損傷。皮質類固醇類在減輕炎癥以及關節損傷上是有效的，但能夠引起許多相關的副作用，包括瘀傷、體重增長、白內障、 骨質變薄、糖尿病、以及高血壓。其他通常用于治療關節炎的藥物是甲氨蝶呤、環孢菌素、環磷酰胺、來氟米特、羥基氯喹、柳氮磺胺吡啶、以及米諾環素。這些藥物也能夠引起副作用， 如肝損傷和免疫抑制。腫瘤壞死因子(TNF)抑制劑，如依那西普(恩利(Enbrel))、英夫利昔單抗(類克(Remicade))、以及阿達木單抗(修美樂(Humira))對關節炎的治療也有用。TNF 抑制劑的副作用包括注射部位反應、心力衰竭、淋巴瘤以及感染風險增加。概述
本發明基于的發現是，對患有關節炎的人類受試者給予一種特異性靶向IL-I α 的抗體(Ab)減少了受試者的⑶14+IL-1 α +外周血單核細胞，并且明顯改善關節以及關節外部位的炎癥，除了給藥部位疼痛以外完全沒有觀察到副作用。
因此，本發明以通過對受試者給予一種藥物組合物來治療與人類受試者中的關節炎相關的炎癥病理的一種方法為特征，該藥物組合物包含一種藥學上可接受的載體和有效減輕受試者中的至少一種炎癥病理癥狀的一定量的抗IL-Ια抗體。該癥狀可以是關節炎癥，如腕關節或肩關節炎癥、或眼睛炎癥如葡萄膜炎。抗IL-I α抗體可以是單克隆抗體,如 IgGl0該抗IL-Ια抗體可以是設計為MABpl的單克隆抗體或包括一個或多個MABpl的互補決定區(CDR)的單克隆抗體。
可以通過皮下、靜脈內、肌內、眼內注射、或直接注射到發炎的關節中而將該藥物CN 102946904 A書明說2/9頁組合物給予該受試者。該抗體還可以局部施用于眼睛。在該方法中，該抗IL-Ια抗體有效減輕受試者中的至少一種炎癥病理癥狀的量可以是足以使受試者的外周血抗IL-I α抗體濃度提高到至少4μ g/mL、和/或足以使受試者的⑶14+IL-1 α +外周血單核細胞的數目降低至少5%。
該方法還可以包括在給予該藥物組合物之后測量受試者外周血中的 ⑶14+IL-1 α +單核細胞數目的步驟，例如，其中該測量受試者外周血中的⑶14+IL-1 α +單核細胞數目的步驟是在給予該藥物組合物之后的至少兩個不同的時間點進行的。
在另一方面，本發明以通過向受試者給予一種藥物組合物來誘導受試者中的單核細胞空泡形成(monocyte vacuolization)的一種方法為特征,該藥物組合物包含一種藥學上可接受的載體和有效誘導單核細胞中的空泡形成的一定量的抗IL-I α抗體。
除非另有定義，在此所使用的所有技術術語均與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的具有相同的含義。通常被理解的生物學術語的定義能夠在Rieger等人的《遺傳學詞匯表經典遺傳學以及分子遺傳學》，第五版，施普林格出版社紐約，1991 (Glossary of Genetics:Classicaland Molecular, 5th edition, Springer-Verlag:New York, 1991); 和Lewin的《基因V》，牛津大學出版社:紐約，1994 (Lewin, Genes V, OxfordUniversity PressiNew York, 1994)中找到。通常被理解的醫學術語的定義能夠在《STEDMAN’ S醫學詞典》，第 27 版，Lippincott、Williams 及 Wilkins 著，2000 (Stedman，s Medical Dictionary, 27th Edition, Lippincott, ffill·iams&ffilkins, 2000)中找到。
如在此所使用的，一種“抗體”(“antibody”或“Ab”)是一種免疫球蛋白(Ig)、相同的或異源的免疫球蛋白的一種溶液、或免疫球蛋白的一種混合物。一種“抗體”還可以涉及免疫球蛋白的片段和免疫球蛋白的工程化形式，如Fab、Fab’和F (ab’)2片段；以及scFv’ S、 異源耦聯抗體、以及采用免疫球蛋白衍生的CDR賦予抗原特異性的類似的人工分子。一種 “單克隆抗體”(“monoclonal antibody”或“mAb”)是由一個克隆B細胞系表達的一種抗體或僅含有能夠與一種特定抗原的特定表位發生免疫反應的一個抗原結合部位種類的抗體分子群。一種“多克隆抗體”(“polyclonal antibody”或“polyclonal Ab”)為異源抗體的一種混合物。典型地，一種多克隆抗體包含結合特定抗原的大量不同的抗體分子，其中這些不同的抗體的至少一些與該抗原的不同表位發生免疫反應。如在此所使用的，一種多克隆抗體可以是兩種或多種單克隆抗體的混合物。
一種抗體的“抗原結合部分”包含在一種抗原的Fab部分的可變區之內，并且是對抗體賦予抗原特異性的該抗體的部分(即，典型地由該抗體的重鏈和輕鏈的CDR形成的三維口袋(three-dimensional pocket))。“Fab部分”或“Fab區”為木瓜蛋白酶消化的免疫球蛋白的蛋白水解片段，該片段含有該免疫球蛋白的抗原結合部分。“非Fab部分”是不在該Fab部分之內的抗體部分，例如“Fe部分”或“Fe區”。抗體的“恒定區”是在可變區之外的抗體部分。通常包含在恒定區之內的是抗體的“效應子部分"(“effector portion”)，該效應子部分是結合負責促進免疫應答的其他免疫系統組分的抗體部分。因此，例如在一種抗體上結合補體成分或Fe受體(未經由抗原結合部分)的部位為該抗體的效應子部分。
當提及一種蛋白質分子如一種抗體時，“純化的”表示從天然伴隨這些分子的成分中分離。典型地，當一種抗體或蛋白質按重量計至少大約10%(例如，9%、10%、20%、30%、40%、 50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、99. 9%和100%)從其天然結合的非抗體蛋白質或其他4天然存在的有機分子釋放時，它是純化的。能夠通過任何適當的方法，例如柱層析、聚丙烯酰胺凝膠電泳或HPLC分析來測量純度。一種化學合成的蛋白質或在一種細胞類型中產生的其他重組蛋白是“純化的”(在其中該蛋白質天然存在的細胞類型除外)。
對于“結合”(“bind”或“binds”)或“與……反應”表示至少一個分子識別并粘附于樣品中的一種特定的第二分子，但基本上不識別或粘附樣品中的其他分子。通常，與另一種分子“特異性結合”的抗體具有針對該另一種分子的大于約105、106、IO7,108、109、10' IO11 或 IO1Vmol 的 Kdo
一種“治療有效量”是能夠在治療的動物或人體內產生醫學上希望的效果(例如， 一種疾病或一種疾病的癥狀的改善或預防)的量。
雖然與在此描述的那些相似或等效的方法和材料可以用于本發明的實踐或測試， 以下描述了適合的方法和材料。另外，以下所討論的具體實施方案僅僅是說明性的而不旨在限制。附圖
簡要說明
圖I是顯示了在對患有反應性關節炎的人類受試者給予MABpl之后的藥代動力學的曲線圖和表格。
圖2是顯示了對患有反應性關節炎的人類受試者給予MABpl之后的流式細胞血液分析的一系列曲線圖和直方圖。
圖3是顯示了對患有反應性關節炎的人類受試者給予MABpl之后的流式細胞血液分析的一系列曲線圖。 詳細說明
本發明包括用于治療與受試者中的關節炎相關的癥狀或病理過程的組合物和方法。以下描述的優選實施方案說明了這些組合物和方法的適應性變化。雖然如此，根據這些實施方案的說明，基于以下提供的說明可以完成和/或實踐本發明的其他方面。一般方法
在此描述了涉及常規免疫學和分子生物學技術的方法。免疫學方法(例如用于抗原抗體復合物的檢測和定位的測定法、免疫沉淀法、免疫印跡，等等)通常在本領域是已知的并且在方法學論文如《當代免疫學實驗手冊》，Coligan等人編輯，約翰威利父子出版公司，紐約(CurrentProtocols in Immunology, Coligan et al. , ed. , John ffiley&Sons, New York)中描述。分子生物學技術詳細描述于專題論文中，如《分子克隆實驗室手冊》，第二版，1-3卷,Sambrook等人編輯,冷泉港實驗室出版社，紐約,2001 (Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 2nd ed.，vol. 1—3，Sambrook et al.，ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold SpringHarborj N. Y. , 2001)和《當代分子生物學實驗手冊》， Ausubel等人編輯，格林出版和威利-交叉科學，紐約(Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al. , ed. , Greene Publishing and Wiley-Intersciencej New York)。 抗體方法描述于《治療性抗體手冊》，Dubel, S.編輯，威利-VCH出版社，2007 (Handbook of Therapeutic Abs，Dubel，S.，ed.，Wiley-VCH，2007)中。醫學治療的一般方法描述于McPhee和Papadakis的《當代醫學診斷與治療2010》，第49版，麥格勞-希爾醫學， 2010 (McPhee and Papadakis，CurrentMedical Diagnosis and Treatment 2010，49th Edition, McGraw-Hill Medical, 2010)以及Fauci等人的《哈里森內科學原理》，第17版，麥格勞 _ 希爾專業出版，2008 (Fauci et al.，Harrison，s Principles of Internal Med icine, 17thEdition, McGraw-Hill Professional, 2008)中。關節炎癥狀的治療
在此所述的這些組合物和方法對于通過對受試者給予一種藥物組合物來治療哺乳動物受試者中的與關節炎相關的炎癥病理是有用的，該藥物組合物包含有效減輕受試者中的至少一種炎癥病理癥狀的一定量的抗IL-Ια抗體。該哺乳動物受試者可以是罹患關節炎的任何受試者，包括人類、狗、貓、馬、牛、綿羊類、山羊和豬。人類受試者可以是男性、女性、成人、兒童、老年人(65歲或更老)、以及患有其他疾病的人。與關節炎相關的特定癥狀或病理過程可以是炎癥、疼痛、僵硬、或關節(例如在腕、指/趾掌關節或跖關節、肘、肩、 髖、膝、踝、腳、頸、或背中)或關節外組織(例如虹膜炎、葡萄膜炎、口腔潰瘍、胃腸道炎癥、泌尿生殖道炎癥、或皮膚損傷害)的退化。抗體以及其他靶向IL-Ια的藥劑
特異性結合IL-I α并減輕受試者的關節炎引起的癥狀或病理過程的任何適合類型的抗體可能用于本發明中。例如，所使用的抗IL-I α抗體可能是單克隆抗體、多克隆抗體、單克隆抗體的混合物、或一種抗體片段或工程化抗體樣分子(如一種scFv)。該抗體的 Ka 優選為至少 IxIO9IT1 或更大(例如大于 9xl010M_\8xl010M_\7xl010M_\6xl010M_\5xl0lclM_\ AxIOiqM-1 JxIOiqM-1 JxIOiqM'或lxKTif1)。在一個優選的實施方案中，本發明利用了一種全人源單克隆抗體，該全人源單克隆抗體包括(i )展示出與人IL-I α的很高結合親和力的一個抗原結合可變區以及·(ii)在通過Clq結合而激活補體系統和結合若干不同的Fe受體兩方面均有效的一個恒定區。該人抗體優選是一種IgGl，雖然該人抗體也可以是不同的同種型，如IgM、IgA、或IgE，或亞類如IgG2、IgG3、或IgG4。特別有用的單克隆抗體的一個實例是MABpI，一種在2009年6月I日提交的美國專利申請序列號12/455，458中描述的 IL-I α特異性IgGl單克隆抗體。其他有用的單克隆抗體為包括MABpl的至少一種但優選為所有的CDR的單克隆抗體。
由于表達人IL-Ια特異性免疫球蛋白的B淋巴細胞天然存在于人類中，用于增加單克隆抗體的一種目前優選的方法是，首先從受試者中分離這種B淋巴細胞，然后使其永生化，使得它能夠在培養中連續復制。可以用一種或多種人IL-I α抗原來免疫缺乏大量天然存在的表達人IL-I α特異性的免疫球蛋白的B淋巴細胞的受試者，以便增加這種B淋巴細胞的數目。人單克隆抗體是通過永生化一種分泌人抗體的細胞(例如一種人漿細胞)制備的。參見，例如美國專利號4，634，664。
在一個示例性的方法中，從一位或多位(例如5位、10位、25位、50位、100位、1000位或更多位)人類受試者中篩選了在其血液中存在這種IL-I α特異性抗體的受試者。于是那些表達所希望的抗體的受試者能夠被用作B淋巴細胞供體。在一個可能的方法中，從具有表達人IL-I α特異性抗體的B淋巴細胞的人類供體獲得外周血。然后從該血液樣品中分離了這種B淋巴細胞，例如通過細胞分選(例如熒光激活細胞分選“FACS”、或磁珠細胞分選)篩選表達人IL-I α特異性免疫球蛋白的B淋巴細胞。然后，根據已知的技術通過病毒轉化(例如使用EBV)或通過與另一種永生化細胞(如人骨髓瘤細胞)融合使這些細胞永生化。 然后，能夠通過有限稀釋法(例如選擇并繼代培養在微量滴定板的孔中的人IL-I α特異性免疫球蛋白陽性的細胞，并重復該過程直到能夠分離得到所希望的克隆細胞系)分離在這個表達人IL-Ια特異性免疫球蛋白的群體中的B淋巴細胞。參見，例如Goding的《單克隆抗體:原理和實踐》，59-103 頁,學術出版社，1986 (Goding, Monoclonal Abs:Principles and Practice, pp. 59-103, Academic Press, 1986)。那些表達與人 IL-1 α 具有至少納摩爾或納摩爾的結合親和力的免疫球蛋白的克隆細胞系是優選的。可以通過常規的免疫球蛋白純化程序如鹽截留(salt cuts)、尺寸排阻、離子交換分離、以及親和色譜從培養基或體液 (例如腹水)中純化由這些克隆細胞系分泌的單克隆抗體。
雖然永生化的B淋巴細胞可以用于體外培養以直接產生單克隆抗體，在某些情況下可能令人希望的是使用異源表達系統來產生單克隆抗體。參見，例如美國專利申請號 11/754,899中描述的方法。例如，可以將編碼人IL-I α特異性單克隆抗體的基因克隆并引入一種表達載體(例如一種基于質粒的表達載體)，用于進行在異源宿主細胞(例如CHO細胞、COS細胞、骨髓瘤細胞、以及大腸桿菌細胞)中的表達。由于免疫球蛋白包含重(H)鏈和輕(L)鏈(在一種H2L2構型中)，可以將編碼每個鏈的基因分別分離并在不同載體中表達。
雖然由于受試者會產生一種抗抗體應答的可能性較大而通常是次優選的，但嵌合單克隆抗體(例如“人源化”單克隆抗體)可以用于本發明種，該嵌合單克隆抗體是具有源于不同動物種類的不同部分(例如與一種人免疫球蛋白的恒定區融合的一種鼠免疫球蛋白的可變區)的抗原結合分子。可以通過本領域中知的方法制備這種嵌合抗體。參見， 例如 Morrison 等人，《美國科學院院報》(Proc. Nat’ I. Acad. Sci. USA), 81:6851, 1984 ； Neuberger 等人，《自然》(Nature), 3I2:⑶4，1984 ；Takeda 等人，《自然》(Nature), 314:452,1984。同樣，可以通過本領域已知的方法將抗體人源化。例如,可以通過各種供應商或如美國專利號5，693，762,5, 530，101、或5，585，089中所述，將具有所希望的結合特異性的單克隆抗體人源化。
在此所述的這些單克隆抗體是親和成熟的，以增強或另外地通過已知的方法如 VH 和 VL 結構域改組(Marks 等人，Bio/TechnologylO: 779-783, 1992)、高變區(HVRs) 和/或框架殘基的隨機誘變(Barbas等人，《美國科學院院報》(Proc. Nat’ I. Acad. Sci. USA) 91:3809-3813，1994 ；Schier 等人，《基因》(Gene) 169:147-155，1995 ;Yelton 等人，《免疫學期刊》(J. Immunol. ) 155:1994-2004，1995 Jackson等人，《免疫學期刊》 (J. Immunol. )154 (7) : 3310-9，1995 ；and Hawkins 等人，《分子生物學期刊》(J. Mol. Biol.) 226:889-896, 1992)改變他們的結合特異性。一種抗體的氨基酸序列變體可以通過將適當的變化引入編碼該抗體的核苷酸序列中而制備。另外，可以改變編碼單克隆抗體的核酸序列的修飾(例如不改變該單克隆抗體的氨基酸序列)用于增強該單克隆抗體在某些表達系統中的產生(例如針對一種給定的表達系統的內含子去除(intronelimination)和/或密碼子優化)。可以通過與另一種蛋白質(例如另一種單克隆抗體)或非蛋白質分子偶聯來修飾在此所述的單克隆抗體。例如，可以將一種單克隆抗體與一種水溶性聚合物(如聚乙二醇)或碳納米管偶聯(參見，例如Kam等人，《美國科學院院報》(Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 102:11600-11605,2005)。參見，美國專利申請號 11/754,899。
優選地，為了確保以最小的副作用對受試者給予高效價的人IL-I α特異性單克隆抗體，本發明的單克隆抗體組合物是按重量計至少0. 5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、 10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、98%、99%、99. 9% (或更高)純的(不包括任何賦形劑)。本發明的單克隆抗體組合物可以7僅僅包含單一類型的單克隆抗體(即，由單個克隆B淋巴細胞系產生的一種單克隆抗體)或可以包含兩種或更多種(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多種)不同類型的單克隆抗體的混合物。
為了修飾或增強它們的功能，人IL-I α單克隆抗體可以與另一種分子(如細胞毒素)結合。一種人IL-Ια特異性單克隆抗體可以與一種或多種細胞毒素結合以便更有效地殺死表達IL-I α的細胞。用于本發明的細胞毒素可以是任何能夠與人IL-I α特異性單克隆抗體結合的細胞毒性藥劑(例如在接觸一種細胞之后可以殺死該細胞的分子)。細胞毒素的實例包括但不限于放射性核素(例如35S、14C、32P、125I、131I、9°Y、89Zr、2Q1Tl、186Re、 188Re、57Cu、213Bi、和211At)、結合放射性核素類、以及化療劑。另外的細胞毒素的實例包括但不限于抗代謝藥(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤(MTX)、氟達拉濱，等等)、抗微管藥 (例如長春新堿、長春堿、秋水仙堿、紫杉烷(如紫杉醇和多西他賽)，等等)、烷化劑(例如環磷酰胺、美法侖、雙氯乙基亞硝基脲(BCNU)等)、鉬類藥(例如順鉬(也稱為cDDP)、卡鉬、奧沙利鉬、JM-216、CI-973，等等)、蒽環類(例如，多柔比星、柔紅霉素，等等)、抗生素類藥物(例如，絲裂霉素C)、拓撲異構酶抑制劑(例如依托泊苷、替尼泊苷、和喜樹堿)、或其他細胞毒性藥物如蓖麻毒素、白喉毒素(DT)、假單胞菌外毒素(PE) A、PE40、相思豆毒素、肥皂草素、 美洲商陸病毒蛋白、溴化乙錠、糖皮質激素、炭疽毒素、以及其他。參見，例如美國專利號 5，932，188。
雖然上述IL-I α特異性抗體優選用于本發明，在一些情況下，也可以使用其他特異性靶向IL-I α的藥劑，只要它們的給藥導致關節炎的一種或多種癥狀的改善即可。這些其他試劑可以包括特異性結合IL-I α的有機小分子類、適體類、肽類、和蛋白質類。藥物組合物和方法
可以通過藥學上可接受的載體(例如無菌生理鹽水)對動物或人給予該抗IL-I a 抗體組合物，藥學上可接受的載體是基于給藥模式和途徑以及標準的制藥實踐而選擇的。 藥學上可接受的載體以及藥物制劑的清單可以在作為本領域內的標準文本的雷明頓藥物科學(Remington，sPharmaceutical Sciences)以及在USP/NF中找到。可以向這些組合物中添加其他物質，并且可以采取其他步驟來穩定和/或保存這些組合物、和/或促進它們的向受試者的給藥。
例如，這些抗體組合物可以是凍干的(參見Draber等人，《免疫學方法期刊》 (J. Immunol. Methods. >181:37, 1995 和 PCT/US90/01383);可以溶于包含鈉離子和氯離子的溶液中；溶于包含一種或多種穩定劑(如白蛋白、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、聚乙二醇、 和甘氨酸)的溶液中；過濾(例如，使用O. 45μπι和/或O. 2μπι的過濾器);與β-丙內酯接觸；和/或溶于包含一種殺微生物劑(例如一種去污劑、一種有機溶液、以及一種去污劑與有機溶劑的混合物)的溶液中。
可以通過適合的技術對動物或人給予這些抗體組合物。典型地，這種給藥將是腸胃外的(例如靜脈內、皮下、肌內、或者腹膜內注射)。還可以通過例如注射或局部施用直接對目標部位(例如發炎的關節、或葡萄膜或結膜)給予這些組合物。其他遞送方法是本領域已知的，例如脂質體遞送或從一個浸潰有該組合物的裝置擴散。可以通過單次快速注射、多次注射或連續輸注(例如靜脈輸液或通過腹膜透析)給予該組合物。
一個治療有效量是能夠在治療的動物或人體內產生醫學上所希望的結果的量。抗IL-I α抗體組合物的一個有效量是一個在關節炎患者中顯示臨床療效的量，臨床療效的量度是在疼痛和功能以及預防結構損傷方面的改善。正如在醫療領域熟知的，用于任何動物或人類的劑量取決于許多因素，包括受試者的尺寸、體表面積、年齡、有待給予的特定組合物、性別、給予的時間和途徑、全身健康狀況、以及同時給予的其他藥物。一個優選的劑量為一個足以使受試者的外周血抗IL-I α抗體的濃度升高到至少4 (例如，至少4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100、200、300、400、500、1000、2500、或 5000)微克 /mL 的劑量。預期的是， 抗體的一個適當劑量可以是在大約O. 2到20(例如O. 5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、 50、或100) mg/kg體重的范圍內的皮下給藥、以及大約O. 001到50 (例如，O. 001、0. 01、I、5、10、15、25、或50)!1^每只眼睛的局部給藥。可以反復給予該劑量，例如每小時一次、每天一次、每周一次、或每月一次。實例實例 l-Xilonix
Xilonix 是一種穩定的等滲緩沖液(pH6. 4)中的15mg/mL的MABpl的一種無菌的注射用液體制劑。每IOmL的I型硼硅玻璃血清瓶含有5mL該制劑，并用一種20mm的Daikyo Flurotec的丁基橡膠塞和翻蓋招密封件(flip-off aluminum seal)將其密封。該產品儲存在5±3° C，允許室溫下偏移。該藥品的確切組成如下所示藥品(Xilonix )的組成成分等級制造商濃度MABpl抗體GMPXBiotech15 mg/mL磷酸氫二鈉藥典的JT Baker12 me/mL c>一水抒樣酸藥典的JT Baker2 mg/mL二水海藻糖(高純度低內毒素)藥典的Ferro- Pfanstiehl60 nuz/mL C5聚山梨酯80藥典的JT Baker0.2 mg/mL磷酸，用于調節pH藥典的JT Baker0.04 ing/mL注射用水藥典的Microbix適量實例2-用一種IL-I α特異性單克隆抗體治療反應性關節炎
對一位48歲的患有反應性關節炎的男性患者給予總共220mg的MABpl，MABpl為 2009年6月I日提交的美國專利申請序列號12/455，458中描述的一種IL-Ια特異性單克隆抗體。該患者具有長的反應性關節炎病史，始于16歲，當時在因為他左膝的嚴重炎癥住院治療期間，被診斷為萊特爾綜合征。這種炎癥消退了，可是該患者經歷了在若干關節中的周期性復發，一直到他二十幾歲。直到35歲未發生進一步的發作，該患者患有持續8周的嚴重單側葡萄膜炎發作。用眼科皮質類固醇和口服NSAIDS不能良好地控制葡萄膜炎，導致了某種疤痕。該患者隨后經歷了至少三次另外的不同強度的葡萄膜炎發作，其中一次發作需要角膜下注射皮質類固醇。
恰好在他48歲生日之前，該患者發生了在他的左肩和腕部的嚴重疼痛。明顯的腫脹和發紅伴隨活動能力的幾乎完全喪失累及腕部。由于強烈的肩痛，該患者不能將他的左臂外展大于約20°。在當天，對該患者給予皮質類固醇，肩峰下注射到左肩中。該患者報9告，這種病癥繼續惡化，據說肩和腕的疼痛變得持續，打擾了工作，并且妨礙了睡眠。另外， 接著發生了左眼的疼痛和刺激，表明葡萄膜炎的發作的開始。據說這是第一次關節炎癥與葡萄膜炎一起出現。該患者當時正在服用眼科皮質類固醇、口服和局部眼科NSAIDS，但幾乎無明顯益處。
在第O天(在皮質類固醇肩峰下注射42天之后)，對該患者給予MABpl皮下注射四次，遞送總共IlOmg的MABpl (以相同劑量)。除了注射時的疼痛以外，未報告任何副作用。 在注射之前即刻通過靜脈穿刺進行抽血，置于兩個5mL肝素鈉管中。用酶聯免疫吸附測定 (ELISA)進行血漿分析以檢測存在的內源性抗IL-I α抗體，結果表明沒有已存在的抗體。
在第一天，該患者報告，他在那天早上無搏動痛而醒來，搏動痛曾經變成“醒來時的第一感覺”。在后續的幾天中，有明顯的活動能力的改善。注射部位沒有硬結或發紅。進行了抽血和流式細胞分析(FACS)以評估白細胞亞群和單核細胞中IL-Ια的表達。進行血漿分析以確定MABpl的水平，并且開始收集MABpl的藥代動力學(ρΚ)數據。PBMC的FACS分析表明，大多數(72. 6%)⑶14+單核細胞表達了 IL-Ια。觀察到MABpl血漿濃度為3. 2 μ g/ mL。
在第6日，進行另一次血液樣品采集并且使用FACS分析MABpl.經由MABpl染色的⑶14+單核細胞的頻率已經下降至47. 3%。MABpl的血漿水平已經增加到7 μ g/mL。雖然未被證實，MABpl濃度的增加被認為反映了 MABpl的皮下給藥的貯存效果。雖然已經存在改善，但該患者仍然呈現有相當的壓痛和伴隨運動的疼痛，并且自從前一個周末，該患者參加了一次派對并飲酒后葡萄膜炎出現閃輝。對該患者給予了另一個IlOmg的MABpl的皮下給藥。
在第14天，采集血液樣品并使用FACS進行分析，并且進行血漿的ρΚ分析。經由 MABpl染色的⑶14+單核細胞的頻率進一步下降到21. 7%。然而，MABpl的血漿水平也下降至5. 8 μ g/mL。這是不曾預料的，因為MABpl的血漿水平曾經在第一次注射之后的一周中增加。
在第一次注射MABpl之后大約一個月，再次評估該患者。注意到在活動能力上有顯著的改善，并且腕部無疼痛。肩痛僅僅在外展至90°時出現。FACS分析表明沒有可檢測的經由MABpl染色的CD14+單核細胞。MABpl的血漿水平已經下降到I. 6 μ g/mL，提示MABpl 的半衰期為大約兩周。
在接下來的幾周的療程中，該患者顯示在活動能力上的逐漸的但是持續的改善。 葡萄膜炎完全消退。即使該患者在第一次注射MABpl之后停用了所有藥物治療，仍然注意到這種改善。在第一次注射MABpl之后大約三個月，經由MABpl染色的⑶14+單核細胞的頻率恢復到治療前水平。MABpl的血漿水平下降到O. 07 μ g/mL。然而，該患者在肩活動能力的改善上繼續表現良好。實例3-對血漿樣品進行內源性抗人IL-I α自身抗體的篩選以及MABpl的藥代動力學。
開發了一種使用直接ELISA的用于篩選血漿樣品的抗人IL_1 α的內源性自身抗體的方法。該方法也被用來確定在給予MABpl之后的藥代動力學(pK)，除了制備了更高稀釋度的血漿樣品以外。
直接ELISA包括在一種聚苯乙烯微孔板上包被重組人IL_1 α。結合的人IL-IA捕獲來自測試樣品的內源性抗人IL-Ια抗體。然后用一種HRP結合的Fe特異性的鼠抗人 IgG來檢測該被捕獲的內源性抗人IL-Ια抗體，然后用TMB底物處理。在與HRP酶反應時， 該TMB底物產生深藍色的可溶性產物。通過加入使該藍色產物轉變成黃色的終止液來終止該酶促反應。用酶標儀在450nm下進行比色測量。
提供了每個樣品的大約5mL的血漿樣品。在等分之前將血漿置于2_8 ° C，并在-80° C儲存。以1:500、1:1000、和1:2000倍稀釋血漿樣品，以便用作樣品。使用緩沖液中的陽性對照，該陽性對照含有20 μ g/mL的MABpl抗體原液，按照1:5000和1:10000倍稀釋于微孔板上。緩沖液被用作陰性對照以及一種預設陰性對照血漿，按照1:1000、1:1200、 以及1:1500稀釋。采用了一種附加的陽性血漿對照，該附加的陽性血漿對照為加入了 20g/ mLMABpl抗體的血漿，并對于微孔板上的樣品稀釋為I :5000和1:10000。
如果陽性對照值在±2的標準偏差之內，則認為該ELISA數據是可接受的。然而，如果該QC陽性對照值在±2的標準偏差之外，則認為該ELISA數據是不可接受的，且將重復該實驗。使用Kaleidagraph,將標準溶液的對數平均吸光度(logarithmic mean absorbance)作為對數濃度的函數連同吸光度誤差條一起標繪。該標準曲線應當表現出線性行為。從如實例2中所述的患者身上采集的樣品的藥代動力學分析的結果顯示在圖I中。實例4-血統亞群的流式細胞(FACS)檢查
描述了全血染色和從全血中富集的外周血單核細胞(PBMC)的染色這兩者的FACS 程序。對所有樣品進行全血和PBMC兩者的染色。這種FACS分析允許血統亞群(blood lineage subset)B和T淋巴細胞、NK細胞、單核細胞、中性粒細胞、以及IL-I α +細胞的相對百分比確定。從如在實例2中所述的患者采集的樣品的FACS分析的結果顯示在圖2和3 中。血涂片的顯微照片顯示，當在給藥后32天分析時，給予MABpl引起了外周血單核細胞中的廣泛空泡形成。實例5-用一種IL-I α特異性單克隆抗體治療葡萄膜炎
在實例2中所述的葡萄膜炎的消退后大約兩個月，該患者經歷了另一次葡萄膜炎發作(主要為虹膜炎)。該患者開始用皮質類固醇和非留體抗炎藥(NSAIDS)滴劑。也使用了口服NSAIDS。葡萄膜炎對治療無反應并發展。然而，沒有關節累及的任何跡象，繼續顯示肩在活動能力上的改善。對該患者的受累眼睛局部給予MABpl。以每分鐘一滴的速率對受累眼睛給予持續10分鐘總共10滴(O. 25mL中大約O. 375mg)的MABpl (15mg/mL溶液)。 在給藥期間該患者沒有任何疼痛主訴。然而，幾小時之后，該患者報告了不適和燒灼感。該患者口服了 NSAID并入睡。第二天早晨，該患者報告了明顯的改善、疼痛減輕、以及比給藥前更輕微的炎癥。在MABpl滴劑的第一次給藥之后24小時，以同樣的方式對該患者給予10 滴MABpl。再一次，注意到不適和燒灼感。該患者服用口服NSAID，并再一次臥床休息。葡萄膜炎本身完全消退了。未進行進一步的藥物治療。在接下來的四個月中未觀察到葡萄膜炎的復發。其它實施方案
應當理解的是，雖然結合其詳細說明描述了本發明，前述的說明旨在說明而不是限制本發明的范圍，本發明的范圍是由所附權利要求書的范圍來限定的。其他方面、優點、 以及修改落在以下的權利要求書的范圍之內。
權利要求
1.一種抗IL-1 a抗體用來治療與人類受試者中的關節炎相關的至少一種炎癥病理癥 狀的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其中該至少一種癥狀是關節炎癥。
3.根據權利要求1所述的用途，其中該至少一種癥狀是眼睛的炎癥。
4.根據權利要求3所述的用途，其中該炎癥是葡萄膜炎。
5.根據權利要求1所述的用途，其中該抗IL-1a抗體是一種單克隆抗體。
6.根據權利要求5所述的用途，其中該單克隆抗體是IgG1。
7.根據權利要求5所述的用途，其中該單克隆抗體包含MABpl的互補決定區。
8.根據權利要求5所述的用途，其中該單克隆抗體是MABpl。
9.根據權利要求1所述的用途，其中該抗IL-Ia抗體被配制成一種適合于注射給藥的 藥物組合物。
10.根據權利要求1所述的用途，其中該抗IL-Ia抗體被配制成一種適合于對眼睛局 部給藥的藥物組合物。
全文摘要
給予一種特異性靶向IL-1α的單克隆抗體(mAb)對于治療關節炎的關節癥狀和關節外癥狀是有用的。
文檔編號A61P19/00GK102946904SQ201180028483
公開日2013年2月27日 申請日期2011年6月17日 優先權日2010年6月18日
發明者J·西馬德 申請人:埃克斯生物科技公司