專利名稱：多舌飛蓬提取物的制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，具體涉及ー種多舌飛蓬提取物的制備方法。
背景技術：
多舌飛蓬[Erigeron multiradatus (Lindl) Benth.]為菊科飛蓬屬多年生草本植物，主要分布于我國西藏、四川西部和云南西北部高原地區，資源豐富，在藏醫藥中以全草入藥，其藏藥名為“美多羅米”，在藏醫藥中過去多用于跌打損傷、風濕疼痛、牙痛、胃痛、感冒等癥，具有發表散寒、消炎止痛、活血化淤等功效。關于多舌飛蓬的藥用成分、提取方法資源、化學成分、定性定量分析、藥效、毒性的相關研究很多，如，多舌飛蓬的生藥學研究[中草藥，第35卷第3期2004年3月]公開了藥材采用甲醇-水(1比1)超聲提取，并對該提取液進行定性定量分析。飛蓬屬多種植物的化學成分含量研究[藥物分析雜志，2005，25(1)]公開了藥材采用80%乙醇水浴提取，并對該提取液進行定性定量分析。多舌飛蓬黃酮成分的研究[中草藥，1998年第四卷第12 期]公開了多舌飛蓬全草用95%乙醇回流提取6次，得浸膏，用熱水溶解，水溶液冷卻后依次用氯仿、乙醚、乙酸乙酷、正丁醇萃取，減壓濃縮分別得到了氯仿、乙醚、乙酸乙酷、正丁醇提取物，經柱層析從上述提取物中分離得到化合物芹菜素、燈盞甲素、槲皮素等，并進行了定性分析。多舌飛蓬化學成分的研究[中草藥，1999年第30卷第8期]公開了全草粉碎后用丙酮-水(6比4)浸提，濾液合并后，回收丙酮，濃縮物用石油醚萃取除去脂溶性雜質后繼續用KOAc萃取，蒸干溶劑后得KOAc部分，殘余物用n-BuOH萃取得到n-BuOH部分， n-BuOH部分和KOAc部分上MCl gelCHP20P柱脫色，用甲醇洗脫得到甲醇部分，上硅膠柱層折，用MEOH-CHCI3洗脫燈盞乙素。天然植物因其提取エ藝不同，會導致提取物在成分、成分含量、藥效上有極大區別，故需要發明人做出創造性勞動以確定其提取エ藝及提取物的藥效等內容。
發明內容
本發明所解決的技術問題是提供一種全新的方法提取多舌飛蓬提取物，所得提取物藥用效果明確，標示性成分含量高。本發明提取方法為A、取多舌飛蓬藥材，粉碎成粗粉，用8 16倍量的水、甲醇水溶液或乙醇水溶液提取，合并提取液；B、提取液調pH值至3 5后通過大孔樹脂吸附柱洗脫，先用1 5BV(BV表示柱體積)的水，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌吸附柱，棄水洗液，之后采用20 70%的乙醇，以 0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌所述吸附柱，收集該乙醇洗脫液，濃縮，干燥，干膏得率為2. 8
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本發明的有益效果為1、本發明多舌飛蓬提取物中總黃酮的含量可達20 90%，其中含有芹菜素、槲皮素、木犀草素、燈盞甲素、異槲皮苷、燈盞乙素、漢黃芩素的一種或者多種。該制備方法能有效地富集燈盞甲素和燈盞乙素，去除了無藥理作用的雜質成分。2、本發明多舌飛蓬提取物為所含各個活性成分協同起效的組合物，它不同于活性単體，它的藥效也不同于各個活性成分藥效的簡單相加，藥用效果明確，可用于預防或治療心腦血管疾病、糖尿病并發癥或炎癥。藥理實驗表明，本發明多舌飛蓬提取物具有抑制小鼠血栓形成，大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用，其對應的疾病為腦血栓、腦出血及其后遺癥、缺血性中風、冠心病、心絞痛，對糖尿病并發癥有較好的治療作用，對炎癥(如類風濕性關節炎)有抑制作用。3、急性毒性實驗結果表明本發明多舌飛蓬提取物的毒性低，具有很好的用藥安全性，這充分提示了多舌飛蓬提取物臨床藥用的安全性。4、本發明多舌飛蓬提取物的制備方法簡單，成本低廉。其中所采用的大孔樹脂純化方法簡便、快捷、重現性好；所選用的大孔樹脂吸附容量大，解吸率大，可反復使用；選用乙醇作為溶剤，價廉、無毒，且可以回收再利用。由于具有以上優點，充分說明本發明制備方法適用于多舌飛蓬提取物的エ業化生產，具有很大的適用性。
圖1燈盞甲素和燈盞乙素的吸附動力學曲線。圖2不同pH值對燈盞甲素和燈盞乙素的吸附影響。圖3不同的洗脫體積對燈盞甲素和燈盞乙素的解吸效果的影響。圖4泄漏點的測定結果。圖5不同濃度的乙醇對燈盞甲素和燈盞乙素的解吸效果。
具體實施例方式本發明提供了一種采用全新方法制備而得的多舌飛蓬提取物，其中燈盞甲素的含量為6. 7 24. 8%，燈盞乙素的含量為7. 6 26. 4% ；它是以水、甲醇水溶液或乙醇水溶液為提取溶劑進行提取，提取液調pH值至3 5后通過大孔樹脂吸附柱洗脫，水清洗后采用 20 70%的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗脫，洗脫液濃縮，干燥而得的干膏。它可以采用如下方法制備而得A、取多舌飛蓬藥材，粉碎成粗粉，用8 16倍量的水、甲醇水溶液或乙醇水溶液作為提取溶剤，如常用煎煮法、加熱回流提取，滲漉法提取，索式提取法，連續逆流提取，超臨界提取等，如采用回流提取吋，回流提取2 4次，提取時間為每次0. 5 3小吋，合并提取液；B、提取液調pH值至3 5后通過大孔樹脂吸附柱洗脫，先用1 5BV的水，以 0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌所述吸附柱，棄水洗液，之后采用20 70%的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌所述吸附柱，收集該乙醇洗脫液，濃縮，干燥，干膏得率為2. 8 7. 2%，所得提取物中燈盞乙素的含量為7. 6 沈.4% ；燈盞甲素的含量為6. 7 8%。
所述的大孔吸附樹脂通常為苯乙烯型共聚體的樹脂，其結構為大孔網狀結構，例如D101大孔樹脂，HPD系列大孔樹脂及其它系列樹脂等。通過篩選試驗優選，步驟A中用10倍量的濃度為40%乙醇水溶液回流提取，毎次 5小時。步驟B中的大孔吸附樹脂為HPD100, HPD600、HPD450、D100、DlOU D141、D160或 AB-8大孔樹脂中任意ー種；上柱前調整提取液的PH值至4，先用水洗脫，棄水洗液，然后改用45 50%的乙醇約3倍體積洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥即得。該提取物通過藥效試驗證明，其藥用效果明確，可用于預防或治療心腦血管疾病 (如腦血栓、腦出血及其后遺癥、缺血性中風、冠心病或心絞痛等、糖尿病并發癥(如糖尿病腎病、糖尿病視網膜病變、糖尿病心臟病或糖尿病神經病變等或炎癥(如類風濕關節炎)， 且該制備方法簡單，提取物收率高，質量標準可控，應用試劑低毒，成本低廉。本發明提取物還可按照常規的制劑方法配制成可供給藥的藥劑形式，包括經ロ或胃腸外給藥形式。在可供給藥的形式中，應包含治療有效量的多舌飛蓬提取物。所謂“治療有效量”是指在該劑量下，本發明的提取物能夠改善或者減輕疾病癥狀，或者能夠抑制或阻斷疾病的發展。可供給藥的藥劑形式可以為片劑、膠囊、顆粒劑、丸剤、ロ服液體制劑、注射劑。這些可供給藥的組合物還可以根據需要制備成緩控釋制劑或靶向制劑。ロ服給藥的藥劑形式可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸剤、ロ服液體制劑、固體分散體、脂質體制劑等。它們可以含有常規賦形劑如粘合劑糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蜻膠、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑如乳糖、蔗糖、淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤滑劑如硬脂酸鎂；崩解劑如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚維酮、羥乙酸淀粉鈉、 微晶纖維素。液體組合物(如ロ服液體組合物)可以制備為ロ服液、糖漿劑形式，或者將他們制備為干燥產物形式，在使用前用水或者其他適當的溶媒溶解。此類液體制劑可以含有常規的添加剤，懸浮劑如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠、氰化可食用脂肪；乳化劑如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分餾椰子油或油性酯如甘油、丙ニ醇或乙醇的酯；防腐剤如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常規的矯味劑或著色劑。胃腸外組合物(如胃腸外給藥組合物)可以含有所述活性化合物和無菌溶媒，根據使用的濃度，所述活性化合物可以懸浮于或溶解于該溶媒中。制備胃腸外給藥的溶液吋， 可以將本發明的組合物溶于注射用水中，過濾除菌，然后灌裝于適當的管制瓶或安瓿中并密封。最好將輔助劑如局部麻酔劑、防腐劑和緩控溶劑溶于所述溶媒中。為增加穩定性，可以將該組合物灌裝于管制瓶中后冷凍并真空去除水分。以基本相同的方法可以制備胃腸外懸浮液，但是所述活性化合物是懸浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通過過濾進行。可以將所述化合物暴露于環氧乙烷中滅菌，然后將其懸浮于無菌溶媒中，最好該化合物中含有表面活性劑或潤濕劑以有助于活性組分的均勻分布。以下為提取液的制備方法1)將新鮮采集的多舌飛蓬藥材全植株晾干，粉碎成粗粉，用8 16倍量的水，回流提取2 4次，提取時間為每次0. 5 3小吋，合并提取液，濃縮至相對密度為1. 35 1. 40的稠膏，干燥粉碎即得，干膏得率為15 25%，所得提取物中燈盞甲素的含量1. 5 4. 7%，燈盞乙素的含量為2. 8 5. 3%。2)將新鮮采集的多舌飛蓬藥材全植株晾干，粉碎成粗粉，用含8 16倍量的甲醇或者乙醇的水溶液，回流提取2 4次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，該濃縮液做澄清處理，取上清液濃縮至相對密度為1.35 1.40的稠膏，干燥粉碎即得，干膏得率為15 25%，所得提取物中燈盞甲素的含量4. 2 8. 7%，燈盞乙素的含量為5. 3 9. 5%。將按照上述兩種制備方法得到的提取液調pH值至3 5后通過大孔樹脂吸附柱洗脫，先用1 5BV的水，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌吸附柱，棄水洗液，之后采用20 70%的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌所述吸附柱，收集該乙醇洗脫液，濃縮，干燥，干膏得率為2. 8 7. 2 %，所得提取物中燈盞甲素的含量6. 7 8%，燈盞乙素的含量為 7. 6 26. 4%。本發明多舌飛蓬提取物通過如下方法檢測燈盞甲素和燈盞乙素的含量，測定條件如下對照品溶液的制備分別取燈盞乙素、燈盞甲素對照品(自制，含量> 98% )，用 60%甲醇溶解并定容于IOml容量瓶中。供試品溶液的制備取樣品藥材粉末(過40目篩)，精密稱取約1. 0克，裝入錐形瓶，加甲醇-水(1 1) 20ml，超聲提取30min，傾出上清液于50ml容量瓶中，再加甲醇-水 (1 1) 20ml，超聲提取30min，合并兩次提取液，甲醇定容到刻度。在以上條件下，分別取供試品溶液與對照品溶液10 μ 1進樣。色譜條件為乙腈acetonitile(A)，0· 4%冰醋酸 aqueous acetic acid (ν/ν, B) 流速為1. Oml · mirT1，柱溫為35°C，檢測波長為335nm。本發明提供了所述多舌飛蓬提取物的制備エ藝，首次采用多舌飛蓬進行了提取、 大孔吸附樹脂制備エ藝的研究，提供了一種多舌飛蓬的大孔樹脂純化方法，該純化方法是將多舌飛蓬提取液經上大孔樹脂柱、洗脫收集洗脫液、濃縮干燥，獲得純化的多舌飛蓬提取物，從而有效的富集了燈盞甲素和燈盞乙素，并去除了大量的雜質。本發明多舌飛蓬提取物的制備方法篩選試驗如下，通過如下篩選試驗確定了滿足提取物質量的提取エ藝及相關參數，并確定了最佳エ藝方案。一、均勻設計法優選多舌飛蓬的提取エ藝1. 1藥材的處理按中國藥典藥材取樣方法，分別取多舌飛蓬藥材粗粉5g，根據均勻設計法的條件進行回流提取。每個水平重復3次，取其平均值。1. 2實驗方法——均勻設計法選取溶劑濃度(乙醇30% 95%)、溶劑倍數(8 16)、提取時間(0.5 3小吋) 作為因素分析的三因素，分別設定為相應的9個水平，確定為提取エ藝優化條件的范圍，見表1。根據均勻設計表(U95)確定實驗序列，見表2。表1因素水平表
權利要求
1.多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于它包括如下步驟A、取多舌飛蓬藥材，粉碎成粗粉，用水、甲醇水溶液或乙醇水溶液提取，得提取液；B、提取液調pH值至3 5后過大孔樹脂吸附柱，水洗滌后，棄水洗液，采用20 70% 的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗脫，收集該乙醇洗脫液，濃縮，干燥即得。
2.根據權利要求1所述的多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于步驟A中提取時采用回流提取，用8 16倍量的水、甲醇水溶液或乙醇水溶液回流提取2 4次，毎次 0.5 3小吋，合并提取液。
3.根據權利要求1所述的多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于步驟A中提取時采用回流提取，用10倍量的濃度為40 50%乙醇水溶液回流提取2 4次，毎次1. 5小時。
4.根據權利要求1所述的多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于步驟B提取液過大孔樹脂吸附后，先用1 5BV的水，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗滌，棄水洗液后再用乙醇水溶液洗脫。
5.根據權利要求1所述的多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于步驟B所述的大孔樹脂為 D100、D101、D141、HPD100、HPD600、HPD450 或 AB-8 大孔樹脂中任意ー種。
6.根據權利要求1所述的多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于步驟B上柱前調整提取液的PH值至4。
7.根據權利要求1所述的多舌飛蓬提取物的制備方法，其特征在于步驟B中水洗滌后，采用45 50%的乙醇洗脫。
全文摘要
本發明屬于醫藥領域，具體涉及多舌飛蓬的制備方法。本發明提供了一種由全新的方法提取多舌飛蓬，該提取方法為將多舌飛蓬藥材以水、甲醇水溶液或乙醇水溶液為提取溶劑進行提取，提取液調pH值后過大孔樹脂洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥，即得多舌飛蓬提取物。該方法簡單，成本低廉，所得提取物藥用效果明確，標示性成分含量高，可用于預防或治療心腦血管疾病、糖尿病并發癥或炎癥。
文檔編號A61P9/10GK102552359SQ20121000894
公開日2012年7月11日 申請日期2008年6月27日 優先權日2008年6月27日
發明者張志鋒, 張 浩 申請人:四川大學