多價pcv2免疫原性組合物和制備此類組合物的方法

專利名稱：多價pcv2免疫原性組合物和制備此類組合物的方法
技術領域：
本發明一方面涉及回收由2型豬圓環病毒(PCV2)之可讀框2(0RF2)表達的蛋白質。更具體地說，該蛋白質為由轉染病毒表達的重組蛋白質，該轉染病毒含有2型豬圓環病毒可讀框2的重組編碼序列。更具體地說，容許該轉染病毒感染將長培養基中的細胞，并在 上清液中，而非從細胞內部回收由可讀框2表達的蛋白質。再更具體地說，該方法涉及下列步驟自2型豬圓環病毒擴增可讀框2基因，將該經擴增的部分克隆到第一載體內，從該第一載體中切下可讀框2，并將其克隆到轉移載體內，將轉移載體和病毒載體共同轉染到生長培養基中的細胞內，使細胞被病毒載體感染并藉此表達可讀框2，然后在上清液中回收表達的由可讀框2編碼的重組蛋白質。另一方面，本發明涉及可有效引起對抗PCV2之免疫反應的免疫組合物，以及產生這些免疫組合物的方法。更具體地說，本發明涉及一種免疫學組合物，它可有效提供免疫反應，該免疫反應保護接受該組合物的動物，并減少與PCV2感染有關的臨床癥狀或降低其嚴重性。更具體地說，本發明涉及一種基于蛋白質的免疫學組合物，其賦予對抗PCV2感染的有效保護。再更具體地說，本發明涉及一種包含PCV2的0RF2的免疫學組合物，其中PCV2-0RF2的施用導致對抗PCV2感染的保護。最具體的是，本發明涉及可有效地對接受該免疫組合物的豬賦予有效免疫力的免疫組合物，且其中該組合物包含由PCV2的0RF2表達的蛋白質。在另一方面，本發明亦提供組合疫苗或多價疫苗。更具體地說，本發明提供可有效引起對抗PCV2及至少一種其它豬致病生物所致感染的免疫反應的免疫組合物。現有技術描述2型豬圓環病毒(PCV2)是小型(直徑17-22納米)、二十面體無包膜的DNA病毒，其含有單鏈的環狀基因組。PCV2與I型豬圓環病毒(PCVl)共享大約80%的序列同一性。然而，與通常無毒力的PCVl相反，被PCV2感染的豬顯示出一種通常稱為小豬斷奶后多系統消耗綜合征(PMWS)的癥狀。PMWS的臨床特征在于消瘦、皮膚蒼白、生長不振(unthriftiness)、呼吸窘迫、腹灣、黃疸(icterus)和黃疸(jaundice)。在一些受累的豬中，出現所有癥狀的組合，而在其它的豬則僅有這些癥狀中一者或二者。在尸體剖檢中，微觀和宏觀損害亦出現在多種組織和器官上，淋巴器官是最常見的損害位置。已觀測到PCV2核酸或抗原的量與微觀淋巴損害嚴重性之間的強相關性。感染有PCV2的豬的死亡率可達80%。PCV2還與包括下列各項的若干其它感染相關偽狂犬病、豬生殖及呼吸綜合征(PRRS)、格拉塞氏病(Glasser' s disease)、鏈球菌性腦膜炎、沙門氏菌病、斷乳后大腸桿菌病、飲食性肝功能障礙(dietetic hepatosis)及化膿性支氣管肺炎。PCV2的可讀框2 (0RF2)蛋白質，當在SDS-PAGE凝膠上電泳時，具有大約30kDa的分子量，從前已經利用它作為PCV2疫苗的抗原性組分。獲得用于這類疫苗中的0RF2的典型方法通常由下列步驟組成擴增編碼0RF2的PCV2DNA，以0RF2DNA轉染病毒載體，用含有0RF2DNA的病毒載體感染細胞，容許病毒在細胞內表達0RF2蛋白質，并通過細胞溶解，從細胞中提取0RF2蛋白質。這些程序通常在以病毒載體感染細胞之后，需花費多達4天。然而，這些程序的缺點在于提取程序昂貴且耗時。此外，從細胞中回收的0RF2量并不是很高；結果，需要以大量的病毒載體感染大量的細胞，以便獲得足量的重組表達的蛋白質供用于疫苗等。近來PCV2免疫的手段包括基于DNA的疫苗，如在美國專利第6，703，023號中描述的那些。然而，這類疫苗不能有效地賦予對抗PCV2感染及其相關臨床癥狀的保護性免疫力。豬生殖與呼吸綜合征(PRRS)是由一種病毒引起的，到1991年才首先分離并將其 分類為動脈炎病毒(arterivirus)。該疾病癥狀首先在1980年代中期在美國被發現，并被稱為〃神秘豬病〃。它也曾被稱為藍耳病(blue ear disease)。最近提議的名稱為豬動脈炎病毒。PRRS的病毒對巨噬細胞，特別是在肺中找到的那些巨噬細胞有特殊的親和力。巨噬細胞是身體防御系統的一部分。出現在肺中的那些巨噬細胞又叫做肺泡巨噬細胞(alveolar macrophages)。它們攝取并消除入侵的細菌和病毒,但對PRRS病毒則不然。這種病毒反而在那些巨噬細胞內繁殖，產生更多的病毒，并殺死巨噬細胞。一旦這種病毒進入豬群，便往往無限期地維持存在并保持活性。高達40%的巨噬細胞被破壞，導致身體防御機制喪失了一個重要部分，使得細菌和其它病毒得以增殖并進行破壞。最常見的例子是當生長/肥育豬被PRRS病毒感染時，地方性肺炎的嚴重性有顯著的增加。首次使整個生育畜群(breeding stock)(特別是在大的畜群中)感染可能花費一年時間，而且雖然該病毒在畜群中似乎散播很快，但可能在4-5個月時才會有至少90%的母豬變成血清-陽性。有一些母豬仍保持無經歷(naive)。此外，母豬群在感染1_2年之后包含少于20%的血清學陽性動物也是屢見不鮮的。然而，這不一定意味著它們不再具有免疫力，也不意味著它們已經不再傳遞免疫力給它們的后代。與正在生長的豬(其排泄病毒持續1-2個月)相比較，成年動物排出病毒的時間短很多(14天)。臨床情況可隨著豬群不同而發生巨大的改變。作為指標，每三個頭一次接觸PRRS的豬群，就有一個不顯示可辨認的疾病，第二個將顯示輕微的疾病，而第三個則有中等到嚴重的疾病。其原因尚未清楚了解。然而，豬群的健康狀況越好，疾病的影響就越輕。可能是病毒隨著增殖而發生突變，產生一些具有高毒力的株系和一些無毒力的株系。PRRS感染所有類型的豬群，包括良好或普通健康狀況的，以及室內和室外的豬群，不論大小。豬肺炎枝原體(Mycoplasma hyopneumoniae) (M hyo)是一被分類在枝原體科(mycopIasmataceae)中的小型細菌(400_1200nm)。M hyo 與地方性肺炎(EnzooticPneumonia)有關，這是一種在生長和肥育豬中常見的豬呼吸道疾病。M hyo攻擊氣管和肺上皮細胞的纖毛，引起纖毛停止振動(纖毛靜止)，且最終引起肺區域的塌陷。依據疾病的程度，被感染豬的每日活增重可能減少多達17%。地方性肺炎在豬群中是廣泛流傳的，且幾乎出現在每個豬群中。M hyo被認為是幫助PRRSV和其它呼吸道病原體進入肺內的主要病原體。已經確定了三種不同株系——232、J和7448的基因組序列(Minion等人，J. Bacteriol. 186:7123-33，2004; Vasconcelos 等人，J. Bacteriol. 187:5568-77，2005)。豬增殖性腸炎(procine proliferative enteritis)是生長-肥育和年輕種豬常見的腹瀉性疾病，其特征在于回腸和結腸的增生和炎癥。其通常是輕微且自限的，但有時卻引起持續腹瀉、嚴重的壞死性腸炎或出血性腸炎，死亡率很高。病因是一種新近被分類的胞
內細菌-細胞內勞索尼亞氏菌(Lawsonia intracellularis)。該生物僅在細胞培養中培
養，而在無細胞培養基中繁殖它的嘗試都沒有成功。通過將細胞內勞索尼亞氏菌的純培養物接種在以傳統方式飼養的豬內；產生該疾病的典型損害，并再度從損害中分離出了細胞內勞索尼亞氏菌，從而滿足了科赫法則。這種疾病的更常見的、非出血形式經常侵襲18-至36-公斤的豬，其特征為突然發作的腹瀉。糞便是水狀至糊狀的，淡褐色或稍帶血絲的。在大約2天后,豬可能排出已經在回腸中形成的黃色纖維壞死性(fibrinonecrotic)成形物(casts)。大多數受累的豬會自然恢復，但相當多發展成慢性壞死性腸炎，伴有進行性消瘦。出血形式的特征為皮膚蒼白、虛弱并排出血便或黑色、焦油狀糞便。懷孕的母豬可能會流 產。損害可能出現在小腸下半段、盲腸或結腸中的任何地方，但最常見和明顯的是在回腸。小腸壁變厚，且腸系膜可能水腫。腸系膜淋巴結變大。小腸黏膜呈現變厚且多皺紋，可能被淡褐色或黃色的纖維壞死性膜覆蓋，而有時有淤斑出血。黃色的壞死性成形物可在回腸中找到，或通過結腸排出。在慢性病例中的彌漫性、完全的黏膜壞死，導致小腸變硬，很像園藝用的軟管(garden hose)。增殖性黏膜損害經常發生在結腸中，但僅在尸體剖檢時小心檢查才能發現。在大量出血的類型中，在結腸中有紅或黑色、焦油狀的糞便，且在回腸中有凝固的血液。牛病毒性腹灣病毒(BVD)和邊境病(Border’s Disease)是兩種病毒，它們與豬痕(豬霍亂)的病毒同屬瘟病病毒(pestivirus)類群，但它們主要分別感染牛和綿羊。它們可進入豬生育畜群中，并引起生殖方面的問題。該疾病并非母豬不孕的常見原因，且從診斷的觀點來看，在諸多可能原因中排名也是靠后的。鉤端螺旋體病是一種動物(包括人類)的接觸傳染疾病，由各種免疫學上不同的鉤端螺旋體血清型引起，這些血清型中的大多數被視為問號鉤端螺旋體(Leptospirainterrogans)的亞群。在豬中有五種重要的血清型和群波摩那鉤端螺旋體(pomona)、澳大利亞鉤端螺旋體(australis)、塔拉索夫鉤端螺旋體(tarassovi)、犬鉤端螺旋體(canicola)、出血黃疸鉤端螺旋體(icterohaemorrhagicae)和流感傷寒鉤端螺旋體(grippotyphosa)。感染可能是無癥狀的，或引起各種征象，包括食欲不振、發熱、倦怠、黃疸、流產、死產和其它不明確的生殖問題，以及死亡。在急性感染之后，鉤端螺旋體經常局限于腎臟或生殖器官，由局灶性間質性腎炎的零星灰色小病灶組成，并從尿中排出，有時大量排出持續數月或數年。因為鉤端螺旋體長時間存活于水表面，該疾病經常是水媒傳播的。在美國，該疾病主要起因于哈德焦鉤端螺旋體O^ptospira hardjo)、波摩那鉤端螺旋體和流感傷寒鉤端螺旋體等血清型。診斷可能比較困難，因為抗體效價可能是暫時存在的，持續時間不足一個月。此外，鉤端螺旋體亦可在健康的動物中發現。澳大利亞鉤端螺旋體布拉提斯拉瓦(Bratislava)血清型最常與生殖問題有關。慢性感染的豬群出現流產，死產和小豬虛弱。布魯氏菌病是由布魯氏菌(Brucella)屬的細菌引起，其特征在于流產、胎盤滯留、不孕、公豬的睪丸炎，和母豬嚴重的子宮炎。在小豬，該疾病之特征為后軀麻痹(posterior paralysis)和跋足(lameness)。該疾病在豬中幾乎完全是由豬布魯氏菌(Brucella suis)生物變型(biovars) 1、2和3引起的。許多其它的哺乳動物可攜帶豬布魯氏菌并將其傳播給豬。在未接種疫苗的豬群中感染迅速地傳播并可引起許多流產。傳染主要是通過接觸其它的豬而發生，雖然性傳播是有可能的。血清學診斷可能較困難，因為有一
種相對較常見的生物-小腸結腸型耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)0:9與布魯
氏菌有共同的抗原，且經常引起假陽性的結果。死后損害經常包括子宮炎和睪丸炎，并可包括膿腫，有時在肝臟還有壞死病灶。梭菌(Clostridium)是普遍存在的革蘭氏陽性細菌，屬于梭菌科(clostridiaceae)，通常在土壤中找到，但也天然存在于大多數動物的腸道中。豬中的艱難梭菌(C. difficile)感染的特征是嚴重的結腸系膜水腫、腹瀉和其它組織的水腫，如水胸。豬的梭菌性腸炎是由產氣莢膜梭菌(C. perffingens)引起,其特征是慢性腸炎,伴隨有腹瀉、體重減輕和發熱。被產氣莢膜梭菌A、B和C型感染，引起嚴重的腸炎，痢疾、毒血癥，而 在幼牛中有高死亡率。B和C型兩者皆產生高度致壞死性且致命的3毒素，它是造成嚴重腸損害的主因。該毒素對蛋白水解酶敏感，而病情與小腸中蛋白水解被抑制有關。已經有人提出，含有胰蛋白酶抑制劑的母豬初乳是年幼小豬易感的因素。該疾病可能引起小于I周齡小豬的突然死亡，最常見的是在出生3天內。在較大的小豬中，梭菌性腸炎引起小腸變厚，使食物和營養不易吸收。小豬通常因感染和缺乏營養的結合而死亡。死亡可能發生在數小時內，但較不嚴重的病例可存活數天，并可能在數天內恢復。出血性腸炎伴隨黏膜潰瘍是所有種類中的主要損害。在肉眼觀察下，受侵襲的腸道部分為深藍-紫色，乍看之下似乎是與腸系膜扭轉相關的梗塞形成。可檢查腸內容物抹片中是否有大量革蘭氏-陽性桿狀細菌，并制備濾液，檢測毒素，然后通過與特異性抗血清的中和作用進行鑒定。已經懷疑但尚未證實諾氏梭菌(Clostridium novyi)是喂食高水平谷類食物的牛和豬突然死亡的原因，這些牛和豬中檢測不到原先存在的肝臟損害。致命且致壞死性毒素(主要是a毒素)傷害肝實質，藉此容許細菌繁殖并產生致命量的毒素。死亡通常突然發生，沒有確定的征象。受累的動物往往落在獸群后面，采俯臥姿，并在數小時內死亡。大部分的病例發生在夏季和早秋，此時肝吸蟲感染正值高峰期。該疾病在I至4歲大的綿羊中最為盛行，且僅限于感染肝吸蟲的動物。可能不易與急性片形吸蟲病區別，但動物的極急性(peractute)死亡，在尸體剖檢時顯示典型的損害，應疑為傳染性壞死性肝炎。最具特色的損害是在肝臟中灰黃色的壞死病灶，它們經常依循著幼吸蟲的遷移軌跡出現。其它常見的現象是心包囊變大，充滿淡黃色的液體，并在腹膜和胸腔中有過量的液體。皮下組織中微血管通常有廣泛的破裂，導致鄰近皮膚變成黑色(因此俗稱為“黑病”)。敗毒梭菌(Clostridium septicum)在全世界的土壤以及動物(包括人類)的腸內容物中均有發現。感染通常是通過含有失活組織、土壤或一些其它組織致弱因素(tissue-debilitant)的傷口的污染而發生的。由意外、去勢、截尾、不衛生地接種疫苗和分娩引起的傷口都可能被感染。全身性，如食欲不振、中毒和高熱，以及局部損害，在致易感性傷害(predisposing injury)之后數小時至數天內出現。局部損害是柔軟的腫脹，壓下形成凹窩，而且迅速地蔓延，這是因為形成的大量滲出液浸潤受累區的皮下和肌肉內的結締組織。氣體的積累較為少見。與撕裂相關的惡性水腫的特征為明顯的水腫，嚴重的毒血癥，并在24-48小時內死亡。破傷風毒血癥是由壞死組織中的破傷風梭菌(Clostridium tetani)產生的特殊的神經毒素引起的。幾乎所有的哺乳動物，包括豬，均易受該疾病感染。雖然破傷風分布在全世界，但有些地區，如美國的北落磯山脈，在土壤中很少發現該生物，在那里破傷風幾乎不為人知。通常，在各大陸較溫暖的地區，破傷風梭菌在土壤中的出現率以及人類感染破傷風的發病率都較高。破傷風梭菌是一種厭氧菌，有終端球狀的芽孢，在土壤和腸道中都有發現。在大多數情況下，其通過傷口，特別是深的穿刺傷被導入組織內，傷口為其提供了合適的厭氧環境。沙門氏菌屬的某些種(Salmonella spp)感染可能在所有年齡的動物中導致腹瀉，特別是受到應激、密集飼養或接觸嚴重污染之食物或水源供應的那些動物。沙門氏菌病是由沙門氏菌屬(salmonellae)的許多物種引起的，其臨床特征為下列主要癥狀中的一或多種敗血癥、急性腸炎和慢性腸炎。發生率隨著家畜生產的密集程度而增加。雖然各種類型的沙門氏菌均可能引起豬的感染，在豬中發現的典型沙門氏菌是豬霍亂沙門 氏菌(S. choleraesuis)和鼠傷寒沙門氏菌(S. typhimurium)。大多數沙門氏菌所致的臨床特征并非截然不同，而沙門氏菌屬不同物種在它們的流行病學上有分歧的傾向。質粒譜(plasmid profile)和藥物-抗藥性模式在流行病學研究中有時是有用的標記。敗血性沙門氏菌病通常與豬霍亂沙門氏菌有關。被感染的小豬不愿移動、食欲不振、高熱40.5°C-41.6°C，可能還有淺咳。亦可能發現小豬死亡，且四肢發紺。豬霍亂沙門氏菌是能同時引起肺炎和腹瀉的少數疾病之一，且被感染小豬的死亡率通常很高。小腸結腸炎通常與更常見的鼠傷寒沙門氏菌有關。感染的特征是黃色或水狀腹瀉，隨著感染進行，可能含有血或黏液。死亡率低，且常與腹瀉所致的脫水和鉀缺乏有關。被感染動物的糞便可能污染食物和飲水、來自屠宰場的新鮮或加工肉類、用來當作肥料和飼料的植物和動物產品、牧場和牧地，以及許多惰性材料。雖然很少在飼料中發現豬霍亂沙門氏菌。它亦可能直接通過與被感染動物接觸而傳遞。沙門氏菌可在潮濕、溫暖的地方存活數個月，如在肥育豬棚或在水井中。嚙齒動物和野鳥也是傳染來源。感染的盛行程度在不同物種和國家之間有所不同，而且高于臨床疾病的發生率，通常由于應激性狀況，如突然缺乏食物、運輸、干旱、擁擠、分娩，以及某些藥物的施用而造成。大腸桿菌(Escherichiacoli)是腸桿菌科(enterobacteriaceae)的細菌，是天然出現在所有哺乳動物小腸中的細菌的主要類型之一。雖然大腸桿菌通常是無害的，但有些大腸桿菌株系可產生一些外毒素和內毒素，引起感染和疾病。有一些株系主動地產生熱不穩定(LT)和熱穩定(ST)的外毒素，并這些毒素是引起腹瀉的原因。類志賀毒素第II型變種(SLT-IIe)、Stx2e和志賀樣毒素(verotoxin)水腫病作用于小動脈壁，結果導致水腫。內毒素，如脂質A，在乳腺炎和尿道感染中扮演某種角色。大腸桿菌感染的特征在于一些不同的癥狀，視所涉及的具體株系而定，包括腹瀉、眼窩凹陷、生長不振(unthriftiness)、可見的體重喪失、生長受阻、抑郁、腸水腫、乳腺炎、膀胱炎、腎盂腎炎和死亡。可根據細胞壁(0抗原)和細毛(fimbriae) (F抗原)將大腸桿菌分類和編碼。例如，腹瀉通常與大腸桿菌Abbotstown :0147、F4、F5有關，而腸水腫則與F18細毛有關。正確地確認編碼，對于選擇正確的疫苗是非常重要的。大腸桿菌感染危及豬的免疫系統，而死亡通常是繼發感染和疾病的結果。
豬痘是引起皮膚損害、丘疹、膿皰和痂的疾病。血蟲體病(eperythrozoonosis)是立克次氏體(血營養型(haemotrophic))疾病，由豬血蟲體(Eperythrozoon suis)引起,豬血蟲體是一種細胞外的細菌生物,其附貼在豬紅細胞膜上，導致紅細胞變形和損傷。該疾病之特征為貧血和黃疸(黏膜、鞏膜和內耳變黃色)。它可能導致不優選的懷孕率、其它不明確的生殖問題，甚至死亡。豬瘟也稱為經典型豬瘟(Classical Swine Fever, CSF)或非洲豬瘟(ASF)，是由一種黃病毒科(Flaviviridae)病毒引起的疾病,該病毒是一種有包膜的RNA病毒；或者,在非洲豬瘟的情況下，是由與痘病毒有親緣關系的有被膜的DNA病毒引起的。在臨床上，CSF和ASF是無法區分的。最先的癥狀是降低活力和困乏，有一些食欲不振，且豬可能呈現寒顫。在數天內，豬出現明顯的發熱(41-42°C )，有時伴隨有皮膚發紅。接下來，豬出現結膜炎和便秘，導致淡黃色腹瀉。在豬群中，豬表現出寒冷而經常擠在一起。少數的豬在死亡之前可能抽搐。豬只開始死亡時皮膚有蔓延的紫斑，且死亡經常出現在感染后10-20天內。存活的豬常發生嚴重的生長延遲和弓背。在已確立的豬群中，小豬在懷孕期被母親傳染，結果導致流產、干尸化、畸形、死產和出產小豬虛弱。由感染CSF母豬生下的小豬可能仍然是健康 的，但在其一生中持續散布疾病。肺炎性巴斯德氏菌癥(Pneumonic pasteurellosis)和鏈球菌病(Streptococci),是由多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocidia)和各種鏈球菌引起的，最具代表性的是豬鏈球菌(S.suis)。被病原感染通常代表斷奶后呼吸道綜合征的最終階段。臨床癥狀呈現三種類型，急性類型最常與多殺巴斯德氏菌血清型B有關，動物出現呼吸困難、用力呼吸、心跳加劇(thumping)、高熱(42. 2°C )、虛脫而最后死亡。在一些病例中，腹部變成紫色。第二種類型為亞急性類型，其特征在于胸膜炎、咳嗽和呼吸困難。豬只可能大量喪失體重，并可能生長極差或沒有生長，給豬流量(flow)造成嚴重影響。慢性類型出現偶發的咳嗽、心跳加劇和少量或沒有發熱。該類型通常影響10-16周齡的豬。鏈球菌性腦膜炎引起腦膜一即覆蓋腦的膜一的炎癥反應。在吮乳小豬中，通常是由豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis),或有時為諸如大腸桿菌之類的桿菌(bacteria)，以及其它的鏈球菌引起。豬鏈球菌有許多血清型。在大多數的國家中，豬鏈球菌第I型在吮乳小豬中是主要的一種，但這在其它國家中則可能不是事實。例如，在丹麥是豬鏈球菌第7型。豬鏈球菌亦引起關節問題，特別是第I和14型。豬鏈球菌可在扁桃腺保留長時間，并可從母豬或從其它小豬傳播給吮乳小豬。母豬在初乳中亦提供不同水平的免疫力。在吮乳小豬中，鏈球菌性腦膜炎散發于小豬個體中。當該生物頭一次進入豬群中時，或在其繼發于PRRS感染時，在吮乳小豬中鏈球菌性腦膜炎可能更加惡劣。偽狂犬病(Pseudorabies)，亦稱為豬狂犬病病毒、豬皰疹病毒，其中該病原為有被膜的皰疹DNA病毒。在無經歷(naive)豬群中，新生的豬出現嚴重的中樞神經癥狀，從陣發痙攣(fitting)到嚴重的協調問題。后軀麻痹可能導致小豬的坐姿像狗。此外，死亡率高。在斷奶的豬中，中樞神經癥狀可能有所減少，但可能伴隨有呼吸道征象的增加。呼吸道疾病時常與繼發感染關聯。斷奶的豬可能發生消耗、生長狀況不佳，且經常發育受阻。在生長中的豬中，中樞神經癥狀進一步減少，而呼吸道癥狀則增加。呼吸道疾病的程度視繼發感染的出現和嚴重性而定。在成年豬中，主要是生殖系統癥狀。母豬可能流產，而被感染動物在懷孕末期可能產下死胎或虛弱的小豬。在已確立的豬群中，可能幾乎沒有臨床癥狀。
豬流感病毒引起豬流感，并屬于甲型流感病毒群。在無經歷(naive)獸群中，臨床癥狀可能爆炸性地出現，全部或許多動物同時生病。動物可能出現不活潑、抑郁、擠成一團/蜂擁和食欲不振。動物常以口呼吸，且呼吸費力。在運動時可能接著發生咳嗽。其它的臨床癥狀包括流鼻涕和眼睛腫脹，直腸溫度在40. 5-41. 5°C之間。在生育畜群中的高體溫可導致流產、不孕、產下小而弱的幼獸，并增加死產。在已確立的獸群中，出現每年重復感染。結腸炎螺旋體是由結腸菌毛樣短螺旋體(Brachyspira piIosicoli)細菌引起。該感染通常影響10-20周齡的生長/肥育豬。其特征在于對生長豬為非致命的消耗性腹瀉，結果增加了肥育所需的天數。腹瀉亦導致飼料效率的降低，并產生水狀腹瀉或松散的糞便。大約一半的豬可能顯示出暫時或持續的水狀或黏液樣綠至淺棕色的腹瀉，不含血。臨床癥狀較常出現在混合和改變飼料之后10-14天。豬痢疾(swine dysentery)是由細菌豬痢疾短螺旋體(Brachyspirahyodysentheriae)引起。目前已知有12種血清型。在已確立的豬群中，臨床癥狀包括腹瀉、在一些豬中出現迅速掉膘(loss of condition)、外觀多毛、脫水、腹痛，并在其它豬顯 現任何癥狀之前有一兩只豬死亡。在無經歷(naive)豬群中關鍵性的爆發可能影響從吮乳小豬到成年母豬的所有年齡群。傳染性胃腸炎是由一種冠狀病毒引起的腸道疾病。這種冠狀病毒與豬呼吸道冠狀病毒、流行性腹瀉病毒和凝血性腦脊髓炎病毒屬于相同的科。一開始的臨床癥狀是水狀腹瀉、嘔吐和食欲不振。小于21天的小豬通常會死亡，斷奶豬變得生長不振，而生長豬、肥育豬和成豬受到的影響通常輕微，若提供適當的水將會存活。細小病毒病(parvovirus)是特征為豬生殖系統問題的疾病。病原是小型DAN無-包膜病毒。胎兒是唯一受影響的群體，而對胎兒的影響將視遭感染時的年齡而定。在10-30天大時，感染導致胎兒的死亡和重吸收。在30-70天之間，感染導致死亡和木乃伊化。而從70天到足月，感染導致生下虛弱的小豬和木乃伊化。該疾病能夠越過胎盤，然后沿著子宮移往每個胎兒。在母豬中的臨床癥狀為死產、木乃伊化的小豬、死胎、不孕，并產生明顯 減少的活產后代數目。流產并非細小病毒感染的特征。放線桿菌性大葉性肺炎，亦稱為APP和嗜血性大葉性肺炎，是由細菌大葉性肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuopneumonia)所引起的。目前已描述了 15種血清型病毒(serovirus)，且臨床癥狀之嚴重性在不同的血清型病毒之間及其它因素的存在下有所不同。認為血清型病毒1、5、9、10和11是較具毒力的。此外，血清型病毒1、9和11 ;2、6和8 ;以及4和7可能有交叉反應。所有年齡的豬均易感。臨床癥狀為突然發病，結果許多動物躺倒，并出現41. 5°C的直腸高溫。動物通常食欲不振且不喝水，它們肢端發紺且摸起來冰冷。發紺可能擴散至全身，并在死前發生嚴重的呼吸困難，常用口呼吸。可能在口部和鼻孔看到帶血的泡沫，通常死亡發生在24-48小時內。急性臨床癥狀包括群體中高比例的動物不活潑，躺倒、發生40. 5-51°C的直腸高溫、食欲不振、嚴重的呼吸窘迫、咳嗽、用口呼吸、發紺、嘔吐和流產。亞急性臨床癥狀包括在豬群中有間歇的咳嗽、普通的食欲不振，且生長減退。變體(Cyrovar)第3型出現關節炎、心內膜炎和膿腫。在受到慢性影響的獸群中，每日增重可能不受影響，但可能聽到間歇的咳嗽。格拉塞氏病(Glassersdisease)是由副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis)(Hps)引起的，其具有至少15種不同的類型。在世界各地均發現它，甚至在極為健康的獸群中亦出現該生物。若獸群是使用SPF或MEW技術建立的且不含Hps，則當它們首次被污染時可能造成極大的破壞，產生類似炭疽的病情，在母豬有高死亡率。在該細菌地方性流行大多數獸群中，母豬產生強的母體免疫，其正常留存它的后代中，直到8至12周齡為止。結果，感染在斷奶仔畜中的影響通常是零或極小的。然而，在吮乳小豬中可能出現病情。若豬只仍受到母體抗體的保護，然后刺激它們自己的免疫反應，則通常成為亞臨床感染。然而，若母體免疫在它們被感染之前消失，則可能發展出嚴重的疾病。這通常是在斷奶之后。其亦可成為其它主要疾病，特別是地方性肺炎(EP)(肺炎枝原體)的繼發病原體。在吮乳小豬中，特別是在小母豬(gilt)群中，有時有疾病爆發。Hps攻擊關節的平滑表面、小腸的覆蓋部分、肺、心臟和腦，引起肺炎、心包囊感染、腹膜炎和胸膜炎。它是經呼吸傳播的。Hps很少在母豬中引起疾病，除非干乳期母豬是無經歷的。在小母豬中偶而可見跛足或僵硬、關節和肌腱處稍微腫脹，以及罕有的腦膜炎。在小豬中，急性病情表現為豬只迅速消沉，體溫升高，無食欲，不愿起身。一次2-3下的短咳是典型特征之一。吮乳良好的小豬中的突然死亡并不少見。亦已知Hps在個別病例中引起關節炎和跛足，伴隨有發熱和無食欲。慢性疾病的特征是豬膚色蒼白和生長狀態不佳。亦可能發生突然死亡。至于斷奶小豬和生長豬，患有格拉塞氏病的豬變得迅速消沉，或可能才發現就死亡了。其它的癥狀包括體溫升高、食欲不振、不愿起身、神經癥狀，如痙攣和抽搐，包括腦膜炎，常導致豬狀況不良、日漸消耗和多毛。在幼齡的生長豬中，下列的癥狀是最常見的發熱、輕微的腦膜炎、關節炎、跛足、肺炎、心包 囊感染、腹膜炎和胸膜炎。同樣，一次僅2-3下的短咳是典型的特征。滲出性皮膚炎是由一種細菌-豬葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)引起的，
其正常生活在皮膚上，不會引起疾病。不知為何它有時加劇，并引起皮膚炎，滲出油膩的液體。其產生毒素，毒素被吸收到體內，并傷害肝臟及腎臟。在吮乳小豬中，疾病通常限于個別的動物，但在新小母豬群和斷奶豬中可能造成嚴重的問題。在即將產仔前的幾天內，細菌在母豬的陰道內大量繁殖，使得小豬在出生過程中或出生后不久被感染。母豬的癥狀包括少見但局限的損害，尤其可見于在眼睛和面部后方。嚴重受累的小豬將會死亡。小豬中的癥狀包括脅部上和耳后的局限損害。損害開始時通常是面部四周或在腿上的小型、暗色、局限的感染區。沿著腹側面和在腿之間的皮膚變成棕色，逐漸累及全身。皮膚起皺紋，伴隨著大面積的剝落，并有油膩的觸感。在嚴重的病例中，皮膚因壞死而變黑，且小豬死亡。若母豬將一些免疫力傳遞給小豬，則可見較局限的狀況，直徑大約5-10毫米的小型、界限性、不擴展的損害。至于斷奶和生長豬，癥狀通常在斷奶后大約3天開始，在臉部四周或在腿上皮膚已經受損之處有局限性的棕色感染區或皮膚炎。其可能潰瘍。沿著肚子側面和在腿之間的皮膚變成棕色，逐漸牽涉到全身。皮膚起皺紋，伴隨著大面積的剝落，并發展成暗色油膩的質地，在嚴重的病例中變成黑色。這類病例通常因葡萄球菌體產生的毒素而死亡。在養殖場中，群體中高達15%可能被累及，且經常發生脫水。豬丹毒是由細菌豬紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)引起的,在大多數但非全部的豬場中發現。高達50%的動物可能在其扁桃腺中帶有這種細菌。該細菌總是出現在豬中或環境中，因為它通過唾液、糞便或尿排泄。該細菌亦在許多其它的物種中有發現，包括鳥類和綿羊，并可在豬體外存活數周，而在輕質土中更久。因此，從畜群中除去這種細菌是不可能的。被感染的糞便或許是感染的主要來源，特別是在生長和肥育畜欄中。這種細菌可單獨引起該疾病，但若同時有病毒感染，如PRRS或流感，可能引起爆發。疾病在小于8-12周齡的豬中較不常見，因為從母豬通過初乳獲得的母體抗體提供了保護。最易感染疾病的動物是生長中的豬，未接種疫苗的母豬，和經產數不超過4次(upto 4th parity)的母豬。該生物在體內繁殖，并侵入血流，產生敗血癥。然后，在豬中的繁殖速度和免疫力之水平可決定臨床癥狀。血蟲體病(Epe)是由一種叫做豬血蟲體的細菌引起的疾病，這種細菌附貼在紅細胞的表面，有時破壞它們。豬可能貧血，而在細胞破壞之后留下的產物可能引起黃疸。在年幼的生長豬中最常發生臨床病情。然而，它亦可能在生育畜群中引起呼吸道問題。母豬可能帶有Epe但仍相當健康,然而,Epe可能越過胎盤,導致出生的小豬虛弱蒼白。Epe出現在大多數但并非所有的獸群中，但還不知道是什么機制使它具有致病性，而且在一些群體中導致疾病而在其它群體中則不致病。疾病的發生率低。腦心肌炎，或EMC，感染各種脊椎動物中并引起疾病，但豬似乎是最易感染的農場動物。該病毒遍布全世界，但在不同的國家和地區，在致病性和毒力上有差異。在大部分歐洲國家中，特別是在歐盟國家中，它有相對較輕微或非致病性的傾向，且很少在豬中診斷出 該疾病。澳大利亞的株系似乎比新西蘭的株系對豬的毒力強得多。佛羅里達、加勒比海和(可能的)中美洲的毒力株系，可損害心臟并引起死亡，而在美國中西部的株系有引起生殖問題的傾向。當大鼠數目增加至猖獗的程度時，豬便有發生臨床疾病的傾向。豬可從大鼠被感染，或從大鼠污染的飼料或水被感染。感染似乎不會在豬之間非常迅速地散播。在受累的獸群中，斷奶和生長中的豬通常沒有臨床癥狀。奧耶斯基氏病(Aujeszky' s disease)或稱AD,是由皰疫病毒引起的一種重要的豬類疾病。該病毒可在攜帶狀態下，持續隱藏在神經內一段長時間，然后再度被活化。一旦進入獸群中，病毒通常保留在其中，且它能夠不同的水平持續影響生殖功能。病毒在豬體外可存活最多3周。當有毒力的病毒株系首次影響未接種疫苗的易感染獸群時，便發生疾病的急性爆發。病毒能越過子宮和胎盤并感染胎兒。豬是主要的寄主。但狗和牛亦可被感染，顯示神經癥狀,并死亡。豬巨細胞病毒感染(PCMV)是由一種皰疹病毒引起的；這種病毒在全身組織中都可找到，包括新生小豬的鼻子，在那里引起炎癥(鼻炎)。PCMV在全世界都有存在，并存在于差不多所有的豬群中，但大部分的感染為亞臨床的，很少有臨床疾病。例如，在英國進行的血清學分析指出，有超過90%的獸群已經暴露在感染之下。由該病毒產生的鼻炎是罕見的，主要發生在新生小豬，與產毒素細菌——多殺巴斯德氏菌引起的萎縮性鼻炎無關。因此，在大多數的獸群中，感染是不顯著的，除了有時引起輕微的打噴嚏之外，對豬的健康沒有重大影響。藍眼病(blue eye disease)是病毒性疾病，引起神經癥狀、生殖障礙和角膜不透明或變藍。主要見于墨西哥，但在其它國家也曾有報告。未見于歐洲。癥狀包括無食欲、角膜不透明-結膜炎、神經癥狀，如陣發痙攣和抽搐、好采取犬坐姿、發熱、返情(returns)增力口、斷奶到交配的間隔增加、死產、小豬木乃伊化的、小豬高死亡率、睪丸腫大和喪失性欲。日本乙型腦炎病毒(JE)是由蚊子傳播的病毒，且僅在昆蟲盛行的國家中是重要的。它侵襲大多數的家畜。它可在人類引起腦炎。豬是重要的感染源。癥狀包括小豬木乃伊化或死產，小豬的神經癥狀，如陣發痙攣和抽搐，且在小豬中有水腫液。它還可引起公豬不孕和睪丸腫大。
豬流行性腹瀉(PED)是由一種冠狀病毒引起的，這種病毒與引起TGE者的冠狀病毒略為類似。該病毒在歐洲廣泛流傳。病毒損害腸絨毛，從而使吸收表面減少，伴隨體液喪失和脫水。在病毒進入易感染的種畜群之后，在二至三周內出現強的免疫力。然后初乳的免疫力保護小豬。病毒通常自發地從生育畜群，特別是小型的獸群(〈300只母豬)中消失。當病毒頭一次進入易感染的群體中時，便發生腹瀉的急性爆發。在這類情況下，可能高達100%的母豬被侵襲，出現輕微至極度水狀的腹瀉。確認了兩種臨床現象PED第I型僅侵襲生長中的豬，而PED第II型侵襲所有年齡，包括吮乳豬和成熟母豬。潛伏期約2天，而腹瀉則持續7至14天。在吮乳小豬中，疾病可能是輕微或嚴重的，死亡率高達40%。在大型生育畜群，特別是大規模飼養的生育畜群中，頭一次并不是所有的雌獸都被感染(first timearound)，而可能會有再發。這僅在無母體抗體的母豬的吮乳小豬中發生，因此是散發的。豬呼吸道冠狀病毒感染(PRCV)，在十多年或更久以前，首次出現在歐洲的豬只中。它與另一種冠狀病毒一TGE病毒相近但不相同。人們認為這種病毒憑借風力在農場之間傳播，保持獸群中沒有該病毒是極為困難的。感染經常發生在2至3周齡的吮乳小豬，但不是很重要。當在慢性呼吸疾病綜合征中出現其它呼吸道病原體時，它可能對肺組織有影響。 母豬通常無癥狀，但在其它與咳嗽有關的呼吸道病原體的存在下，可能出現咳嗽。在斷奶和生長豬中，頭一次接觸的獸群幾乎沒有癥狀。最常見的癥狀是短暫的咳嗽，僅持續數小時。輪狀病毒(rotavirus)感染是一種在豬群中廣泛流傳的病毒感染。它出現在絕大多數豬群中，在成年牲畜中差不多有100%的血清轉變。其另一流行病學特征是它在豬體外的持久性；在豬體外它對環境改變和許多殺菌劑有抗性。母體抗體持續3-6周，在此之后豬成為易受感染的，但接觸不一定會導致疾病。估計豬中僅有10-15%的腹瀉是由原發的輪狀病毒感染引起的。在成熟獸群中，在小豬7至10天大之后出現病情。隨著年齡增長而越來越不重要。然而，若存在致病的大腸桿菌株系，可能發生嚴重的病情且死亡率很高。狂犬病是由病毒引起，而在豬則被視為一種罕見的疾病。它在所有物種包括人類中都是致命的，因此極為重要。狂犬病在英國沒有，但在世界上的其它國家中都有出現。很少感染小豬和母豬。在母豬、斷乳小豬和生長豬中，疾病發生是突然的，癥狀包括臉部肌肉的神經性痙攣、陣發痙攣和抽搐、快速地咬、流唾、肌肉發生痙攣，并可能出現后軀麻痹。通常在3天內死亡。豬水皰病(SVD)是與引起口蹄疫(FMD)的病毒不同的病毒。然而，它在豬身上產生的疾病，在臨床上與FMD無法區別。若突然普遍出現跛足，且在口鼻部、舌和爪尖有水泡或膿泡，便應認為是該疾病。結核病侵襲哺乳動物，包括人、鳥類和豬。病原體結核分枝桿菌，分成人型、牛型和鳥型。鳥型又叫做鳥分枝桿菌(M. avium)或更常稱為鳥/胞內(avian/intracellulare)復合體，因為它不是均一存在的物種。鳥分枝桿菌本身主要感染鳥類，但也在環境中與胞內分枝桿菌(M. intracelIulare) —起被發現,其主要是腐生的,不需活體。豬很少被人或牛型感染，但經常被鳥/胞內復合體感染。鳥/胞內復合體亦在健康的人中引起亞臨床非進行性的感染。主要的擔憂是它可能在免疫抑制的人和患有AIDS的人中引起更嚴重的疾病。在大多數國家中，若在屠體頸部發現損害，整個頭部就要禁止使用，若在引流腸的腸系膜淋巴結中發現損害，則內臟禁止使用。若在體內更廣泛散布——這種情況很少見——則可能禁止使用整個屠體或將其進行蒸煮。若肉品檢查員漏檢了小的損害，正常的廚房烹煮將會破壞該生物。在所有的豬中，感染在頸部和引流小腸的淋巴結中引起小結節。在絕大多數的病例中，損害是非進行性的，不會散播到全身，也不會使豬生病且不會被排出。沒有臨床癥狀，且感染和未感染豬之間在表現上并無差異。豬水皰疹(VES)病毒與引起口蹄疫(FMD)和豬水皰病(SVD)的那些病毒不同，但它在豬身上產生的疾病在臨床上與FMD和SVD無法區別。和FMD不同，它僅影響豬。癥狀包括低死亡率，但在吮乳小豬可能有一些死亡。其它的癥狀包括流唾、無食欲，并在嘴、鼻、舌和足部周圍有水泡。水泡性口炎(VS)引起的疾病，主要發生在南美洲和中美洲，偶爾發生在美國，極少數情況下在北至加拿大南達阿根廷的范圍內流行。VS病毒在豬身上產生的疾病，在臨床上與FMD、SVD和VES無法區別。然而，感染的豬最常是亞臨床的。在所有的豬中，感染的特征為流唾、足部損害和跛足、生長速率降低、體溫升高至40-41°C (106-107 °F )，在鼻、唇和乳頭上，以及在蹄冠周圍出現直徑最高達30毫米的水泡(膿泡)，這可能使豬跛足。死亡率通常很低，大部分的豬在一到兩周內恢復。
萎縮性鼻炎，進行性和非進行性疾病，其引起鼻子的炎癥，可能由各種細菌和刺激性物質引起。在感染過程中，傷害鼻內細致的結構和鼻甲骨，使其萎縮并消失。進行性萎縮性鼻炎，是指鼻組織永久萎縮的特定疾病。它是由特定的產毒素型多殺巴斯德氏菌菌株(PMt)引起的。分A和D兩型。在吮乳豬中，最先的癥狀是打噴嚏、鼻塞和流鼻涕，但在急性爆發且幾乎沒有母體抗體時，鼻炎可能嚴重到鼻子流血的程度。到三至四周齡為止，并從斷奶開始，有淚液污染和鼻子扭曲與縮短(twisting and shortening)之畸形的證據。受到嚴重影響的豬，可能有進食的問題。有降低很多的每日增重。在嚴重爆發的豬只中，可能無法生長至上市的體重。東方馬腦炎病毒(EEEV)是披蓋病毒科(Togaviridae), a病毒(alphavirus)屬的成員。當被感染的蚊子叮咬時，EEEV可傳播給馬和人類。除了馬和人類之外，EEEV可在普通的家畜中產生嚴重疾病，如豬和牛。已經從鳥類,如火雞、雉、鵪鶉、駝鳥和鴯鹋中回收了 EEEV或病毒特異性的抗體。枝原體關節炎是由豬關節液枝原體(Mycoplasma hyosynoviae)感染引起的。該關節炎之特征為一個或多個關節的炎癥，且常見于所有吮乳和生長豬，以及母豬中。然而，在小豬中很少發生。腺病毒和凝血性腦脊髓炎病毒亦可引起豬的感染。因此，在本領域中，需要一種獲得0RF2蛋白質，但不需從被感染的細胞內提取0RF2蛋白質的方法。更需要以足以高效地制備疫苗組合物的量獲得重組0RF2蛋白質的方法。更需要無需像現有0RF2蛋白質提取規程所需的復雜且勞動力密集的方法，而能夠獲得0RF2蛋白質的方法。最后，關于組合物，在本領域中，需要免疫組合物，其賦予對抗PCV2感染的保護性免疫力，并減輕與其相關的臨床體征的嚴重性或預防與其相關的臨床體征。
發明概要本發明克服了在現有技術中固有的問題，并為現有技術發展水平提供了明顯的進步。具體而言，本發明的一方面提供了用于產生和/或回收重組PCV2 0RF2蛋白質的改進方法，所述方法i)通過容許含有PCV2 0RF2 DNA編碼序列的重組病毒載體感染培養中的易感細胞，其中該重組病毒載體表達0RF2蛋白質，并ii)隨后回收上清液中的0RF2。已經意外地發現，若容許感染和后續的感染細胞培養越過(progress past)現有技術中典型的PCV20RF2回收過程(該過程從細胞內提取PCV2 0RF2)，便會釋放大量的0RF2至上清液中。而且，亦已經意外地發現，PCV 0RF2蛋白質對于生產細胞外部的原型降解作用(prototypical degradation)是魯棒(robust)的。這兩個發現共同容許從利用含有PCV20RF2 DNA并表達PCV2 0RF2蛋白質的重組病毒載體感染的細胞培養上清液中回收高量的PCV2 0RF2蛋白質。高量的PCV20RF2蛋白質意指超過大約20iig/ml上清液，優選超過大約25 V- g/ml,更優選超過大約30 V- g/ml,甚至更優選超過大約40 u g/ml,甚至更優選超過大約50 u g/ml,甚至更優選超過大約60 u g/ml,甚至更優選超過大約80 u g/ml,甚至更優選超過大約IOOli g/ml,甚至更優選超過大約150ii g/ml,最優選超過大約190 y g/ml。亦可通過在實施例I至3中描述的方法達到那些表達率。優選的細胞培養物具有在大約0. 3-2. OxlO6個細胞/mL之間的細胞計數，優選從大約0. 35-1. 9xl06個細胞/mL，甚至更優選從大約0. 4-1. 8xl06個細胞/mL，甚至更優選從大約0. 45-1. 7xl06個細胞/mL，而最優選的是從大約0. 5-1. 5xl06個細胞/mL。優選的細胞可以由本領域技術人員加以決定。優選的細胞是易于利用含有PCV2 0RF2 DNA 是昆蟲細胞，更優選其包括以商標名Sf+昆蟲細胞市售的昆蟲細胞(Protein SciencesCorporation, Meriden, CT)。適當的生長培養基亦可由本領域技術人員決定，優選的生長培養基是不含血清的昆蟲細胞培養基，如Excell 420 (JRH Biosciences, Inc.，Lenexa, KS)等等。優選的病毒載體包括桿狀病毒，如 BaculoGold (BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA),特別是在生產細胞為昆蟲細胞時。雖然桿狀病毒表達系統是優選的，但本領域技術人員了解其它的表達系統對本發明的目的，即表達PCV2 0RF2至細胞培養物的上清液中也是有用的。這類其它的表達系統可能需要使用信號序列，以便將0RF2表達至培養基內。已經意外地發現，當由桿狀病毒表達系統產生0RF2時，不需要任何信號序列或進一步的修飾來使0RF2表達在培養基內。人們認為該蛋白質可獨立地形成類病毒顆粒(Journal of GeneralVirology第81冊，第2281-2287頁(2000))，并被分泌至培養物上清液中。重組的病毒載體含有PCV2 0RF2 DNA序列，當用來感染易感細胞時，具有在大約0.03-1. 5之間的優選感染復數(MOI)，更優選從大約0. 05-1. 3，甚至更優選從大約0. 09-1. 1，而最優選的是從大約0. 1-1. O。上文提及的優選MOI是相對于ImL細胞培養液。優選的是，在本文中描述的方法包括使用含有PCV2 0RF2 DNA并表達PCV2 ORF蛋白質的重組病毒載體，以大約0. 03-1. 5，更優選大約0. 05-1. 3，甚至更優選大約0. 09-1. 1，最優選大約0. 1-1. 0的MOI (感染復數)感染0. 35-1. 9xl06個細胞/mL，更優選大約0. 4-1. 8xl06個細胞/mL，甚至更優選大約0. 45-1. 7xl06個細胞/mL,最優選大約0. 5-1. 5xl06個細胞/mL。然后培養被感染的細胞最多10天，更優選大約2天到大約10天，甚至更優選大約4天到大約9天，最優選從大約5天到大約8天。優選的培養條件包括在大約22-32°C之間的溫度，優選的是從大約24-30°C，更優選從大約25-29°C，甚至更優選從大約26_28°C，最優選的是大約27°C。優選的是，在接種之后觀察Sf+細胞中桿狀病毒誘導的獨特變化。這類觀察可包括監視感染后的期間內細胞密度的動向和存活率的降低。結果發現，在感染后3-5天觀察到病毒效價的高峰，并且在第5到8天之間，和/或當細胞存活力降低至10%以下時，ORF2從細胞中到上清液中的釋放達到高峰。因此，本發明的一個方面提供一種用于產生和/或回收(優選以上文所述的量)重組PCV2 0RF2蛋白質的改良方法，所述方法是通過i)容許用重組病毒以如上文定義的MOI載體感染若干培養中的易感染細胞(參見上文)，ii)由該重組病毒載體表達0RF2蛋白質，且iii)然后，從感染后5-8天之間和/ 或細胞活力降低至10%以下(時)獲得的細胞的上清液中回收PCV2 0RF2。優選的是，重組病毒載體是含有PCV2 0RF2 DNA編碼序列的重組桿狀病毒，且該細胞為Sf+細胞。此外，最好在感染之后的期間內周期性地檢查培養物中污染的宏觀和微觀證據，或是細胞形態學上的非典型變化。任何培養物出現任何污染時均應予以拋棄。優選的是，所表達的0RF2重組蛋白質被細胞分泌至維持細胞生存的周圍生長培養基內。然后從細胞周圍的上清液中，而不是從細胞本身中回收0RF2。回收過程優選以分離培養基中的細胞碎屑與被表達的0RF2的分離步驟開始。優選的分離步驟包括過濾、以最高達大約20，OOOxg的速度離心、連續流離心、使用離子交換或凝膠過濾的層析分離，以及傳統的免疫親和法。那些方法均為本領域技術人員已知的，例如(Harris和Angel (編輯)，Protein purification methods-a practical approach, IRLpress Oxford 1995)。最優選的分離法包括以高達大約20，OOOxg的速度離心，以及過濾。優選的過濾法包括封端(dead end)式微量離心，以及切向流(或交叉流)過濾，包括中空纖維過濾封端式微濾(dead end microfiltration)。其中,封端式微濾是優選的。封端式微濾的優選孔大小是在大約0. 30-1. 35微米之間，更優選在大約0. 35-1. 25微米之間，甚至更優選在大約0. 40-1. 10微米之間，最優選在大約0. 45-1. 0微米之間。相信任何常規的過濾膜均適合可實現本發明目的，但優選的是聚醚砜膜。在過濾步驟期間，移除任何低分子量(low weight)的核酸種類。因此，本發明的另一個方面提供一種用于產生和/或回收(優選以上文所述的量)重組PCV2 0RF2蛋白質的改良方法，所述方法通過i)容許用重組病毒以如上文定義的MOI載體感染若干培養中的易感染細胞(參見上文)，ii)由該重組病毒載體表達PCV 0RF2蛋白質，iii)從感染后5-8天之間和/或細胞活力降低至10%以下(時)獲得的細胞的上清液中回收PCV2 0RF2，并iv)通過分離步驟分離細胞碎屑與已表達的PCV2 0RF2。優選的是，該重組病毒載體是含有PCV2 0RF2 DNA編碼序列的重組桿狀病毒，且該細胞為Sf+細胞。優選的分離步驟是上述的那些。最好是使用孔大小為大約0. 30-1. 35微米之間，更優選大約0. 35-1. 25微米之間，甚至更優選大約0. 40-1. 10微米之間，最優選大約0. 45-1. 0微米之間的膜進行封端式微濾。為了回收將用于免疫原性或免疫學組合物(如疫苗)的PCV2 0RF2,優選包含失活化步驟，以便使病毒載體失活。〃免疫原性或免疫學組合物〃意指這樣的物質的組合，其包括至少一個在宿主中誘發免疫反應的抗原，該免疫反應是針對感興趣的組合物或疫苗的細胞和/或抗體介導的免疫反應。通常，"免疫反應"包括但不限于一或多個下列效應特異地針對感興趣之組合物或疫苗中所含的抗原的抗體、B細胞、T輔助細胞、抑制性T細胞，和/或細胞毒性T細胞和/或yd T細胞的產生或激活。優選的是,宿主將展現治療性或預防性免疫反應，從而提高對新感染的抵抗力，和/或降低疾病的臨床嚴重性。這樣的保護作用表現為減少或消除被感染宿主通常展現的癥狀、加快恢復時間，和/或降低在被感染宿主中的病毒效價。因此，本發明還涉及用于產生和/或回收(優選以上文所述的量)重組PCV2 0RF2蛋白質的方法，所述方法是通過i)容許用重組病毒以如上文定義的MOI載體感染若干培養中的易感染細胞(參見上文)，ii)由該重組病毒載體表達PCV 0RF2蛋白質，iii)從感染后5-8天之間和/或細胞活力降低至10%以下(時)獲得的細胞的上清液中回收PCV2 0RF2,iv)通過分離步驟分離細胞碎屑與已表達的PCV2 0RF2，并v)使該重組病毒載體失活。優選的是，在即將進行過濾步驟之前或之后馬上實施失活化，而優選的失活化時間是在過濾步驟之后。任何傳統的失活化方法均可用于本發明的目的。因此，可通過化學和/或物理處理進行失活化。在優選的形式中，測定收獲液的體積，并使溫度達到大約32-42°C之間，更優選在大約34-42°C之間，最優選大約35_39°C之間。優選的失活化方法包括加入環化二元氮丙啶(BEI)，優選是以大約I至大約20mM的濃度，更優選的是大約2至大約IOmM,更優選大約2至大約8mM,甚至更優選大約3至大約7mM,最優選的是大約5mM。例如，失活化包括在液體中加入優選為大約0. 4M的2-溴乙撐胺氫溴化物的溶液(其已經在0. 3N NaOH中被環化成0. 2M的二元氮丙啶(BEI))，得到終濃度大約5mM的BEI。優選的是， 然后持續攪拌該液體72-96小時，并可將失活的收獲液冷凍儲存在_40°C或更低，或在大約1-7°C下。在完成失活化之后，加入硫代硫酸鈉溶液，優選是I. 0M，中和任何殘余的BEI。優選的是，加入的硫代硫酸鈉與先前為了失活化而加入的BEI相比是等量的。例如在加入EBI至終濃度為5mM的情況下，加入I. OM硫代硫酸鈉溶液，得到5mM的最低終濃度，以中和任何殘余的BEI。因此，本發明更進一步的一個方面涉及一種產生重組PCV2 0RF2蛋白質(優選以上文所述的量)的方法，該方法是通過i)容許用重組病毒以如上文定義的MOI載體感染若干培養中的易感染細胞(參見上文)，ii)由該重組病毒載體表達PCV 0RF2蛋白質，iii)從感染后5-8天之間和/或細胞活力降低至10%以下(時)獲得的細胞的上清液中回收PCV20RF2，iv)通過分離步驟分離細胞碎屑與已表達的PCV2 0RF2，并V)使該重組病毒載體失活。優選的是，該重組病毒載體是含有0RF2 DNA編碼序列的桿狀病毒，且該細胞為Sf+細胞。優選的分離步驟是上述的那些，最優選是過濾步驟。優選的失活化步驟是上述的那些。優選的是，在大約35-39°C之間，在2至8mM BEI的存在下，更優選在大約5mM BEI的存在下進行失活化。已經意外地發現，較高濃度的BEI，對PCV2 0RF2蛋白質有負面的影響。根據本發明更進一步的方面，上述的方法還包括在步驟V)之后的中和步驟。該步驟vi)包括加入等量的中和溶液內的失活劑的試劑。優選的是，若失活劑是BEI，則優選加入等量的硫代硫酸鈉。因此，根據另一個方面，當失活劑為BEI時，步驟vi)包括加入硫代硫酸鈉溶液至大約I至大約20mM的終濃度,優選的是大約2至大約10mM，更優選大約2至大約8mM,甚至更優選大約3至大約7mM,最優選是大約5mM。在優選的形式中，且特別是重組PCV2 0RF2蛋白質將用于免疫組合物，如疫苗的形式中，對每一批收獲的0RF2，通過在貼壁依賴性、桿狀病毒易感性的Sf+細胞中傳代來測試其失活情況。在這種測試方法的優選形式中，以I. OmL失活的PCV2液接種150cm2的適當細胞培養物單層，并維持在25-29°C下14天，傳代至少兩次。在維持期結束時，對細胞單層檢查PCV20RF2桿狀病毒典型的致細胞病變作用(CPE)。優選的是，亦使用陽性細胞對照組。這類對照組可由一個以未失活參考PCV2 0RF2桿狀病毒接種的Sf+細胞培養物，以及一瓶保持未接種的Sf+細胞組成。在培養和傳代之后，若在BEI處理病毒液中沒有病毒感染的細胞，則是令人滿意的失活測試。以參考病毒接種的對照組細胞應顯示PCV2 0RF2桿狀病毒典型的CPE，而未接種燒瓶應該不顯示任何PCV2 0RF2桿狀病毒CPE的跡象。或者，在維持期間結束時，可收集上清液試樣，接種在載有Sf+細胞的Sf+96孔培養板上，維持在25-29°C下5-6天。然后固定該板，并用與FITC偶聯的抗-PCV2 0RF2抗體染色。若通過IFA顯微鏡檢查在BEI處理的病毒液中沒有CPE和0RF2表達，則是令人滿意的失活測試。以參考病毒接種的對照組細胞，應顯示CPE和IFA活性，而未接種的瓶則不應顯示任何PCV2 0RF2桿狀病毒CPE的跡象，且不含IFA活性。因此，本發明更進一步的方面涉及一種用于測定重組病毒載體失活化的有效性的失活測試，包括步驟i)使至少一部分含重組病毒載體的培養液與失活劑接觸，優選如上述的失活劑，ii)加入中和劑來中和失活劑，優選如同上述，并iii)通過如上述測定法測定殘余的感染性。本發明更進一步的方面涉及一種用于構建重組病毒載體的方法，所述重組病毒載 體含有PCV2 0RF2 DNA，并在感染至易感細胞內時以高量表達PCV2 0RF2蛋白質。意外地發現，本文提供的重組病毒載體在感染易感細胞之后，以如上所述的高量表達PCV2 0RF2。因此，本發明還涉及一種用于產生和/或回收PCV2 0RF2蛋白質的改良方法，優選包括下列步驟構建含有PCV2 0RF2DNA的重組病毒載體并表達PCV2 0RF2蛋白質。優選的是，該病毒載體為重組的桿狀病毒。構建本文提供的含有PCV2 0RF2 DNA并表達PCV2 0RF2蛋白質的重組病毒載體的方法的細節，描述如下在優選的形式中，通過將其中克隆了 0RF2基因的轉移載體轉染至病毒載體內，來產生用于感染細胞的、含有PCV2 0RF2 DNA并表達PCV20FR2蛋白質的重組病毒載體。優選的是，僅將轉移載體中含有0RF2 DNA的部分轉染到病毒載體內。〃轉染至病毒載體內〃 一詞用作〃導入〃或〃克隆〃異源DNA至病毒載體內的同義詞，如導入桿狀病毒載體內。該病毒載體優選是但不必是桿狀病毒。因此，根據本發明更進一步的方面，重組病毒載體是通過在含有異源PCV2 0RF2DNA的轉移載體和病毒載體之間的重組作用而產生的，所述病毒載體優選是桿狀病毒，更優選是線性化的復制缺陷的桿狀病毒(如Baculo Gold DNA)。〃轉移載體〃意指這樣的DNA分子，其包括至少一個復制起點、異源基因(在本案中為PCV2 0RF2)、以及容許克隆該異源基因至病毒載體內的DNA序列。優選地，容許克隆異源基因至病毒載體內的序列位于該異源基因的側翼。甚至更優選地，那些位于側翼的序列與病毒載體的序列至少部分上是同源的。該序列同源性容許兩個分子一病毒載體和轉移載體一發生重組，產生含有異源基因的重組病毒載體。一種優選的轉移載體為PVL1392載體(BD Biosciences Pharmingen),它被設計用于與BaculoGoldDNA共轉染至優選的Sf+細胞株內。該轉移載體優選包括PCV20RF2 DNA。共染的構建體約為10，387個堿基對長。在更優選的形式中，本發明的方法將以PCV2 0RF2 DNA的分離開始。通常，這可來自已知或未知的株系，因為0RF2 DNA似乎是高度保留的，在不同的分離株之間有至少大約95%的序列同一性。為了本發明的目的，可使用本領域中已知的任何PCV2 0RF2基因，因為每一個都將表達到上清液中。優選使用PCR法擴增PCV 0RF2DNA，更優選同時導入5'側翼Kozak' s 共有序列(CCGCCAUG) (SEQ ID NO: I)和 / 或 3'側翼 EcoRl 位點(GAATTC) (SEQIDN0:2)。所述5' Kozak' s共有序列的導入優選導致PCV20RF2的天然存在之起始編碼子AUG的去除。3' EcoRl位點優選被導入在PCV2 0RF2之終止編碼子的下游。更優選的是，它被導入在多聚A轉錄終止序列的下游，多聚A轉錄終止序列自己則位于PCV2 0RF2終止密碼子的下游。已經發現Kozak' s共有序列的使用，特別是如上述的使用，會增加隨后PCV2 0RF2蛋白質的表達水平。將擴增后PCV2 0RF2 DNA及這些額外的序列一起導入載體內。一種適合這個初步克隆步驟的載體是pGEM-T-Easy載體(Promega, Madison, WI)。優選是在Notl限制位點從載體中切下包含一些pGEM載體序列(SEQ ID NO: 7)的PCV2 0RF2DNA。然后將所得的DNA克隆到轉移載體內。因此，在本發明的一個方面中，提供一種用于構建含有PCV2 0RF2 DNA的重組病毒載體的方法。該方法包括下列步驟i)將重組的PCV2 0RF2克隆到轉移載體內，并ii)將轉移載體的含有重組PCV2 0RF2的部分轉染到病毒載體內，產生重組的病毒載體。優選的是，該轉移載體是如上所述的，或是按照如上所述構建的，或在圖I中例舉的那樣構建的。因此，根據更進一步的一個方面，用來構建如上述之重組病毒載體的轉移載體含有SEQ IDNO:7的序列。根據更進一步的一個方面，該方法在步驟i)之前，還包括下列步驟在體外擴增 PCV2 0RF2 DNA，其中按照上述修飾PCV2 0RF2 DNA的側翼序列。在體外擴增PCV2 0RF2 DNA并修飾該側翼序列，在體外將經擴增之PCV2 0RF2 DNA克隆到轉移載體內的方法，以及適當的轉移載體，已在上文中描述、在圖I中舉例說明，或是本領域技術人員已知的。因此，根據更進一步的方面，本發明涉及構建含有PCV2 ORF 2DNA并表達PCV2 0RF2蛋白質之重組病毒載體的方法，包括下列步驟i)在體外擴增PCV2 0RF2DNA，其中修飾該PCV2 0RF2 DNA的側翼序列，ii)將經擴增之PCV2 0RF2DNA克隆到轉移載體內，并iii)將轉移載體或其含有重組PCV2 0RF2 DNA的部分轉染至病毒載體內，產生重組的病毒載體。優選如上文所述進行PCV20RF2 DNA之側翼序列的修飾，例如通過導入5' Kozak' s序列和/或EcoRl位點，優選如上文所述的方式進行。根據更進一步的方面，提供一種用于產生和/或回收由PCV2的可讀框2表達的重組蛋白質的方法。該方法通常包括下列步驟i)將重組PCV2 0RF2克隆到轉移載體內，ii)將轉移載體中含有重組PCV2 0RF2的部分轉染到病毒內，iii)用被轉染的病毒感染在培養基中的細胞，iv)使經轉染的病毒從PCV2 0RF2表達重組蛋白質，V)分離細胞與上清液；并vi)從上清液中回收已表達的PCV2 0RF2蛋白質。在上文中描述了如何將重組的PCV2 ORF 2DNA克隆到轉移載體內的方法。優選的是，轉移載體含有SEQ ID NO: 3,SEQ ID NO:4或SEQ ID NO: 7的序列。然而，轉移載體可含有任何未經修飾或經修飾的PCV2 0RF2 DNA，只要該PCV2 0RF2 DNA被轉染至重組病毒載體內時，在細胞培養物中表達即可。優選的是，該重組病毒載體包括SEQ ID NO: 8之序列。此夕卜，在上文中詳述了如何感染細胞的方法，優選是如何以一定數目的含有PCV2 0RF2DNA并表達PCV20 RF2蛋白質的重組桿狀病毒來感染昆蟲細胞的方法。再者，還在上文中詳述了分離細胞與上清液的步驟，以及回收已表達之PCV20RF2蛋白質的步驟。在本文中描述的任何這些具體的處理步驟，均為如上文所述的用于產生和/或回收由PCV2的可讀框2表達的重組蛋白質之方法的一部分。優選的是，該細胞為Sf+細胞。更優選地，細胞培養物具有在大約0. 3-2. OxlO6個細胞/mL之間的細胞計數，更優選從大約0. 35-1. 9x IO6個細胞/mL，甚至更優選從大約0. 4-1. 8xl06個細胞/mL，甚至更優選從大約0. 45-1. 7xl06個細胞/mL，最優選的是從大約0. 5-1. 5xl06個細胞/mL。優選的是，當用來感染易感細胞時，含有PCV2ORF2 DNA之重組病毒載體具有在大約0. 03-1. 5之間的優選感染復數(MOI)，更優選從大約0. 05-1. 3，甚至更優選從大約0. 09-1. 1，甚至更優選從大約0. 1-1. 0，最優選的是大約0. 5。優選是在感染后5-8天之間，和/或細胞存活力降低至10%以下時所獲得之細胞的上清液中回收PCV2 0RF2蛋白質。為了產生PCV2 0RF2蛋白質，優選將細胞培養在25至29°C下。優選的分離步驟是離心或過濾步驟。任選地，該方法可包括在將PCV2 0RF2 DNA克隆到轉移載體內之前，擴增來自PCV2株系之PCV2 0RF2 DNA的步驟。在優選的形式中，還可在被擴增的序列中加入5' Kozak' s序列、3' EcoRl位點及其組合，優選是在擴增作用之前或期間加入。優選的5' Kozak' s序列包括SEQ ID NO: I。優選的V EcoRl位點包括SEQ ID NO:2。優選的PCV2 0RF2 DNA包括核苷酸序列Genbank登錄編號AF086834(SEQ ID NO:3)和SEQ ID N0:4。優選的重組PCV2 0RF2蛋白質包括SEQ ID NO: 5的氨基酸序列，它是由SEQ ID NO: 3 (Genbank登錄編號AF086834)編碼的蛋白質，以及SEQ ID NO:6的氨基酸序列，它是由SEQ ID N0:4編碼的蛋白質。優選的培養基包括不含血清的昆蟲細胞培養基，更優選Excell 420培養基。當進 行任選的擴增步驟時，優選是先將擴增后的可讀框2克隆到第一個載體內，從該第一個載體中切下可讀框2，并使用切下來的可讀框克隆至轉移載體內。優選用于共轉染的細胞株是Sf+細胞株。優選用于共轉染的病毒是桿狀病毒。在該方法的優選形式中，轉移載體中被轉染的部分包括SEQ ID N0:8。最后，對該方法而言，優選在以病毒感染細胞之后至少5天，回收在細胞培養上清液中的PCV2可讀框2(0RF2)蛋白質。因此，本發明更進一步的方面涉及一種產生和/或回收PCV2可讀框2的方法，包括下列步驟i)在體外擴增PCV2 0RF2 DNA，優選是通過加入5' Kozak' s序列和/或加入3' EcoRl限制位點，ii)將經擴增之PCV2 0RF2克隆到轉移載體內；iii)將轉移載體之含有重組PCV2 0RF2的部分轉染到病毒內；iv)以經轉染的病毒感染在培養基中的細胞；v)使該經轉染的病毒從PCV20RF2表達重組蛋白質；vi)分離細胞與上清液；并￥^)從上清液中回收已表達的PCV2 0RF2蛋白質。本發明的一個更進一步的方面涉及制備包含PCV2 0RF2蛋白質和失活病毒載體的組合物的方法。該方法包括下列步驟i)將經擴增之PCV2 0RF2克隆到轉移載體內；ii)將轉移載體之含有重組PCV2 0RF2的部分轉染到病毒內；iii)以經轉染的病毒載體感染在培養基中的細胞；iv)使該經轉染的病毒載體從PCV2 0RF2表達重組蛋白質；v)分離細胞與上清液；vi)從上清液中回收已表達的PCV2 0RF2蛋白質；并vii)使重組病毒載體失活。優選的是，該重組病毒載體是含有PCV2 0RF2編碼序列的桿狀病毒，而該細胞是Sf+細胞。優選的分離步驟是上述的那些，優選是過濾步驟。優選的失活步驟是上述的那些。優選的是，在大約35-39°C下，在2至8mM BEI的存在下，更優選在大約5mM BEI的存在下進行失活化。已經意外地發現，較高濃度的BEI對PCV2 0RF2蛋白質有負面的影響，而較低濃度則不能在24至72小時的失活期間內有效地使病毒載體失活。優選的是，失活化進行至少24小時，更優選24至72小時。根據更進一步的方面，如上文所述的制備包括PCV2 0RF2蛋白質和失活病毒載體的組合物的方法，在步驟vii)之后還包括中和步驟。該步驟viii)包括加入等量的能中和溶液中失活劑的試劑。優選的是，若失活劑為BEI，優選加入等量的硫代硫酸鈉。因此，根據更進一步的方面，當失活劑為BEI時，步驟viii)包括加入硫代硫酸鈉溶液至大約I至大約20mM的終濃度,更優選大約2至大約IOmM,甚至更優選大約2至大約8mM,甚至更優選大約3到大約7mM，最優選的是大約5mM。根據更進一步的方面，如上文所述的制備包括PCV2 0RF2蛋白質和失活病毒載體之組合物的方法，在步驟i)之前，包括下列步驟在體外擴增PCV2 0RF2 DNA，其中如上文所述修飾PCV2 0RF2 DNA的側翼序列。用于在體外擴增PCV2 0RF2 DNA并修飾側翼序列、在體外將經擴增之PCV20RF2 DNA克隆到轉移載體內的方法，以及適當的轉移載體，已在上文中描述、在圖I中舉例說明，或者是本領域技術人員已知的。因此，根據更進一步的方面，該方法包括下列步驟i)在體外擴增PCV2 0RF2 DNA，其中修飾該PCV2 0RF2 DNA的側翼序列，ii)將經擴增之PCV2 0RF2 DNA克隆到轉移載體內；并iii)將轉移載體或其含有重組PCV2 0RF2 DNA的部分轉染到病毒載體內，產生重組的病毒載體；iv)以經轉染病毒感染在培養基中的細胞；v)使該經轉染的病毒從PCV2 0RF2表達重組蛋白質；vi)分離細胞與上清液；vii)從上清液中回收已表達的PCV2 0RF2蛋白質；viii)使該重組病毒載體失活，優選的是在大約I到大約20mM BEI的存在下，優選是在大約5mM BEI的存在下；和ix)加入等 量的中和劑來中和溶液中的失活劑，當失活劑為BEI時，優選的是加入硫代硫酸鈉溶液至大約I至大約20mM的終濃度,優選是大約5mM。在本發明另一項方面中，提供了一種用于制備誘發對抗PCV2的免疫反應的組合物，優選抗原性組合物，例如疫苗的方法。通常，該方法包括將構建體轉染到病毒內的步驟，其中該構建體包括i)得自PCV2之0RF2的重組DNA，ii)以經轉染病毒感染在生長培養基中的細胞，iii)使該病毒從PCV20RF2表達重組蛋白質，iv)從上清液中回收已表達的0RF2蛋白質，和V)通過將回收的蛋白質與適當的佐劑和/或可藥用載體組合來制備組合物。當在本文中使用〃佐劑〃 一詞時，可包括氫氧化鋁和磷酸鋁、皂角苷，例如Quil A、QS-21(Cambridge Biotech Inc. , Cambridge MA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals,Inc.，Birmingham, AL)、油包水乳劑、水包油乳劑、水包油包水乳劑。乳劑特別是以輕質液狀石蠟油(歐洲藥典型式)；來自鏈烷，特別是異丁烯或癸烯的低聚作用的類異戊二烯油，如角鯊烷或角鯊烯油；含有直鏈烷基基團之酸或醇的酯類，特別是植物油、油酸乙酯、丙二醇二 _(辛酸酯/癸酸酯)、甘油三_(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；分支脂肪酸或醇的酯類，特別是異硬脂酸酯為基礎。使用油與乳化劑混合，形成乳劑。乳化劑優選是非離子型表面活性劑，特別是脫水山梨糖醇(sorbitan)、二縮甘露糖醇(例如無水甘露糖醇油酸酯)、甘油、聚甘油、丙二醇和油酸、異硬脂酸、蓖麻油酸或羥基硬脂酸等的酯類，它們任選是乙氧基化的，以及聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物，特別是普羅尼克(Pluixmic)產品，尤其是 L121。參見 Hunter 等人，The Theory and Practical Application of Adjuvants (編輯 Stewart-Tul 1，D. E. S. )。John Wiley and Sons, NY,第 51-94 頁(1995)和 Todd 等人，Vaccinel5:564-570(1997)。例如，有可能使用由M. Powell 及M. Newman編寫的〃Vaccine Design, The Subunitand Adjuvant Approach", Plenum Press, 1995 的第 147 頁中描述的 SPT 乳液，及在同一本書的第183頁中描述的乳液MF59。佐劑的另一例子是這樣的化合物，其是選自丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物和順丁烯二酸酐與鏈烯基衍生物之共聚物的化合物。有利的佐劑化合物是丙烯酸或甲基丙烯酸的交聯的聚合物，尤其與糖類或多元醇的聚鏈烯基醚交聯的聚合物。這些化合物被叫做卡波姆(carbomer) (Phameuropa第8冊,第2期，1996年6月)。本領域技術人員還可參考美國專利第2，909，462號，其描述這類丙烯酸聚合物，與具有至少3個羥基基團的聚羥基化的化合物交聯，更優選不超過8個，至少三個羥基的氫原子被具有至少2個碳原子的不飽和脂肪族基團取代。優選的基團是含有從2至4個碳原子的那些，例如乙烯基、烯丙基和其它烯族不飽和基團。不飽和基團本身可含有其它的取代基，如甲基。以卡巴普(Carbopol)之名市售的產品(BF Goodrich, Ohio, USA)是特別適合的。它們與烯丙基鹿糖或烯丙基季戍四醇交聯。其中，可例舉卡巴普974P、934P和971P。最優選的是使用卡巴普971P。在順丁烯二酸酐和鏈烯衍生物的共聚物中，共聚物EMA(Monsanto)是順丁烯二酸酐與乙烯的共聚物。這些聚合物溶解于水中，會產生酸性溶液，其將被中和，優選中和至生理pH，以便得到一種佐劑溶液，免疫原性組合物、免疫學組合物或疫苗組合物本身將加入該佐劑溶液中。更多適當的佐劑包括，但不限于RIBI佐劑系統(Ribi Inc.)、嵌段共聚物(CytRx, Atlanta GA)、SAF-M(Chiron, Emeryville CA)、單憐酸基脂質 A、阿夫立定 (Avridine)脂質-胺佐劑、得自大腸桿菌的熱-不穩定之腸毒素(重組或其它的)、霍亂毒素、IMS 1314或胞壁酰基二肽等等。優選的是，以每個劑量大約100微克到大約10毫克的量加入佐劑。更優選地，以每個劑量大約100微克到大約10毫克的量加入佐劑。甚至更優選地，以每個劑量大約500微克到大約5毫克的量加入佐劑。甚至更優選地，以每個劑量大約750微克到大約2. 5毫克的量加入佐劑。最優選的是，以每個劑量大約I毫克的量加入佐劑。因此，根據更進一步的方面，制備誘發對抗PCV2之免疫反應的抗原性組合物，例如疫苗的方法，包括i)制備并回收PCV2 0RF2蛋白質，并ii)將其與適當之佐劑混合。優選的是，該佐劑為卡巴普971P。更優選地，以每個劑量大約500微克到大約5毫克的量，更優選以每個劑量大約750微克到大約2. 5毫克的量，最優選的是每個劑量大約I毫克的量加入卡巴普971P。優選的是，過程步驟i)包括如對制備和回收PCV2 0RF2描述的過程步驟。例如，在該方法的優選形式中，在轉移載體中獲得包括PCV2 0RF2DNA的構建體。上文描述了適當的轉移載體和制備它們的方法。任選地，該方法可包括在將0RF2克隆到轉移載體內之前，通過PCR從PCV2株系擴增0RF2的步驟。優選的可讀框序列、Kozak' s序列、3' EcoRl位點序列、重組蛋白質序列、轉染的構建體序列、培養基、細胞和病毒均如同在先前方法中描述的。該方法的另一任選步驟包括將經擴增的PCV2 0RF2 DNA克隆到第一個載體內，從該第一個載體中切下0RF2 DNA，并使用該切下的PCV2 0RF2 DNA進行克隆到轉移載體內。和其它方法一樣，優選是在用經轉染的桿狀病毒感染細胞之后，等待至少5天，然后才從上清液中回收重組0RF2蛋白質。優選的是，該方法的回收步驟還包括分離培養基與細胞和細胞碎屑的步驟。這可利用各種方式進行，但為了容易及便利，優選是通過孔大小從大約0. 45 ii M至大約I. 0 ii M的濾器過濾細胞、細胞碎屑和生長培養基。最后，對該方法而言，優選在組合物中混合回收之重組PCV2 0RF2蛋白質之前，包括病毒失活化步驟。這可利用各種方式進行，但在本發明的實施中優選是使用BEI。因此，根據更進一步的方面，該方法包括下列步驟i)在體外擴增PCV20RF2 DNA,其中修飾該PCV2 0RF2 DNA的側翼序列，ii)將經擴增之PCV20RF2 DNA克隆到轉移載體內；并iii)將該轉移載體或其含有重組PCV20RF2 DNA的部分轉染到病毒載體內，產生重組的病毒載體，iv)以該轉染病毒感染在培養基中的細胞；v)使該轉染的病毒從PCV2 0RF2表達重組蛋白質；vi)分離細胞與上清液；vii)從上清液中回收已表達的PCV2 0RF2蛋白質；viii)使該重組病毒載體失活，優選的是在大約I至大約20mM BEI的存在下，優選是在大約5mM BEI的存在下；ix)加入等量的能中和溶液中失活劑的中和劑，當失活劑為BEI時，優選的是加入硫代硫酸鈉溶液至大約I到大約20mM，更優選大約5mM的終濃度；和x)加入適量的佐劑，優選的是加入卡巴普，更優選卡巴普971P，甚至更優選以上述的量(例如，每個劑量大約500微克至大約5毫克，更優選以每個劑量大約750微克到大約2. 5毫克的量，最優選的是以每個劑量大約I毫克的量)。此外，組合物還可包括一種或多種可藥用載體。當在本文中使用時，“可藥用載體”包括任何和所有的溶劑、分散介質、包衣(coatings)、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌劑和抗真菌劑、等張劑、延遲吸收劑等。最優選的是，本文提供的組合物含有下列各項從在體外培養之細胞的上清液中回收的PCV2 0RF2蛋白質，其中以含有PCV2 0RF2 DNA并表達PCV20 RF2蛋白質的重組病毒載體感染該細胞，且其中以大約2至大約8mM BEI處理該細胞培養物，優選是以大約5mM BEI使病毒載體失活；和相等濃度的中和劑，優選是硫代硫酸鈉溶液，至大約2大約8mM的終濃度，優選的是大約5mM ;卡巴普，更優選卡巴普971P，優選是 以每個劑量大約500微克到大約5毫克的量，甚至更優選以每個劑量大約750微克到大約2. 5毫克的量，最優選的是以每個劑量大約I毫克的量；以及生理鹽水，優選以大約50至大約90% (體積/體積)的量，更優選大約60至80% (體積/體積)，甚至更優選大約70% (體積/體積)。因此，更進一步的方面涉及制備誘發對抗PCV2之免疫反應的抗原組合物，例如疫苗的方法，包括下列步驟i)在體外擴增PCV2 0RF2 DNA，其中修飾該PCV2 0RF2 DNA的側翼序列，ii)將經擴增之PCV2 0RF2 DNA克隆到轉移載體內；并iii)將該轉移載體或其含有重組PCV2 0RF2 DNA的部分轉染到病毒載體內，產生重組的病毒載體，iv)以該轉染病毒感染在培養基中的細胞；v)使該經轉染的病毒從PCV2 0RF2表達重組蛋白質；vi)分離細胞與上清液；vii)從上清液中回收已表達的PCV2 0RF2蛋白質；viii)使該重組病毒載體失活，優選的是在大約2至大約20mM BEI的存在下，優選是在大約5mM BEI的存在下；ix)加入等量的中和劑，中和溶液中的失活劑，當失活劑為BEI時，優選的是加入硫代硫酸鈉溶液至大約0. 5到大約20mM之終濃度，更優選大約5mM ；x)加入適量的佐劑，優選的是加入卡巴普，更優選卡巴普971P，甚至更優選以上述的量(例如，每個劑量大約500微克至大約5毫克，更優選以每個劑量大約750微克到大約2. 5毫克的量，最優選的是以每個劑量大約I毫克的量)；并1丨)加入生理鹽水，優選的是以大約50至大約90%(體積/體積)的量，更優選大約60至80% (體積/體積)，甚至更優選大約70% (體積/體積)。該方法還可任選包括加入保護劑。當在本文中使用保護劑時，意指抗微生物的活性劑，例如慶大霉素、硫柳汞等等。特別是對于制備多-劑量組合物而言，優選加入保護劑。那些抗微生物的活性劑添加的濃度可以有效防止感興趣的組合物被任何微生物污染，或抑制任何微生物在感興趣的組合物中的生長。再者，該方法還可包括加入任何穩定劑，例如糖類(saccharides)、海藻糖、甘露糖醇、蔗糖等等，以便增加和/或維持產物的保質期。然而，已經意外地發現，在不加任何其它穩定劑的條件下，所得的配制劑在至少24個月的時間內是免疫學上有效的。
本發明更進一步之方面涉及由上述方法所得的產物。具體地，本發明涉及包括重組表達之PCV2 0RF2蛋白質的物質組合物。此外，本發明還涉及包括從昆蟲細胞培養物之上清液中回收的重組表達的PCV2 0RF2蛋白質的物質組合物。再者，本發明還涉及包括從昆蟲細胞培養物之上清液中回收的重組表達之PCV2 0RF2蛋白質之物質的組合物。優選的是，該物質之組合物還包括適合使病毒載體失活的制劑。優選的是，該失活劑為BEI。此夕卜，本發明還涉及一種物質組合物，包括從昆蟲細胞培養物之上清液中回收的重組表達的PCV2 0RF2蛋白質，并包括適合使病毒載體失活的試劑，優選是BEI，以及中和該失活劑的中和劑。優選的是，當使用BEI作為失活劑時，該中和劑是硫代硫酸鈉。在本發明另一個方面中，提供一種免疫組合物，它誘導免疫反應，更優選的是，它賦予對抗PCV2感染的臨床體征的保護性免疫力。該組合物通常包括由PCV2的可讀框
2(0RF2)表達的多肽或其片段，作為該組合物的抗原性組分。在本文中用來制備組合物，及用于本文提供的方法中的“PCV2 0RF2DNA和蛋白 質”，是在PCV2分離株中的一個高度保守的域，因此，任何PCV2 0RF2作為本文中使用的PCV0RF2 DNA和/或多肽的來源都將是有效的。優選的PCV2 0RF2蛋白質是SEQ ID NO: 11所示的蛋白質。優選的PCV2 0RF2多肽是在本文中以SEQ ID NO:5提供的，但本領域技術人員了解該序列在序列同源性上可以有多達6-10%的改變，而仍保留抗原性特征使其能夠用于免疫組合物中。免疫組合物的抗原性特征，可通過例如由實施例4提供之攻毒實驗來評估。此外，若與由SEQ ID N0:3或SEQ ID NO:4之多核苷酸序列編碼的PCV2 0RF2蛋白質相比較，經過修飾的抗原能賦予至少70%，優選的是80%，更優選90%保護性免疫力，則該經修飾抗原的抗原性特征是被保留的。當在本文中使用"免疫原性組合物"時，意指PCV2 0RF2蛋白質在宿主中誘發了 〃免疫反應〃，該反應為對P CV2 0RF2蛋白質之細胞和/或抗體介導的免疫反應。優選的是，該免疫原性組合物能夠賦予對抗PCV2感染，以及與其相關之臨床體征的保護性免疫力。在某些形式中，使用PCV2 0RF2蛋白質的免疫原性部分作為組合物中的抗原性組分。當在本文中使用〃免疫原性部分〃 一詞時，意指PCV2 0RF2蛋白質和/或多核苷酸各自的截短的和/或取代的形式，或者片段。優選的是，這類截短和/或取代的形式或片段，將包括來自全長0RF2多肽的至少6個鄰接氨基酸。更優選，截短和/或取代的形式或片段將具有來自全長0RF2多肽的至少10個，更優選至少15個，而甚至更優選至少19個鄰接氨基酸。就這一點，在本文中提供了兩個優選的序列，即SEQ ID N0:9和10。進一步應當了解，這類序列可能是更大的片段或截短形式的一部分。在本文中提供之優選PCV2 0RF2多肽是由SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4之核苷酸序列編碼的。但本領域技術人員還了解，該序列在序列同源性上多達6-20%的改變而仍保留抗原性特征，使其得以在免疫組合物中有用。在某些形式中，使用0RF2之截短或取代形式或片段作為組合物中的抗原性組分。優選的是，這類截短或取代形式或片段將包括來自全長0RF2核苷酸序列，例如SEQID N0:3或SEQ ID NO:4的至少18個鄰接核苷酸。更優選的，該截短或取代形式或片段將具有來自全長0RF2核苷酸序列，例如SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 4的至少30個，更優選至少45個，甚至更優選至少57個鄰接核苷酸。在本領域中所知的"序列同一性"，意指在兩個或多個多肽序列或兩個或多個多核苷酸序列之間的一種關系，即參考序列和待與該參考序列進行比較的給定序列。序列同一性是這樣確定的將給定序列與參考序列進行最優比對以產生最高的序列相似度(由各條序列之間的匹配所決定)，然后將給定序列與參考序列進行比較。當進行這類排列時，序列同一性是以位置-對-位置為基礎來確認的，例如，若在某個位置上的核苷酸或氨基酸殘基是相同的，則序列在該特定位點是"同一"的。然后將這樣的位置的總數除以參考序列中核苷酸或殘基的總數，得到百分比序列同一性。可由已知的方法迅速地計算出序列同一丨I"生，所述方法包括但不限于在計算機化分子生物學(ComputationalMolecular Biology), Lesk, A. N.,編輯，Oxford University Press, New York(1988),Biocomputing:Informatics and Genome Projects, Smith,D.ff.編輯,AcademicPress, New York (1993) ；Computer Analysis of Sequence Data),第 I 部，Griffin, A.M.和 Griffin, H. G.編輯,Humana Press, New Jersey (1994) ；Sequence Analysis inMolecular Biology), von Heinge, G. , Academic Press (1987) ；Sequence AnalysisPrimer, Gribskov, M.和 Devereux, J.編輯，M. Stockton Press, New York (1991)；以及Carillo1H.和 Lipman, D.，SIAM J. Applied Math. , 48:1073 (1988)中描述的那些，將其教導以提述的方式并入本文中。設計確定序列同一性的優選方法使得在受試序列之間得到最大的匹配。將確定序列同一性的方法編碼成在可公開獲得的計算機程序，其確定所給序列之間的序列同一性。這類程序的實例包括，但不限于GCG程序包(DeVereUX，J.編輯，Nucleic Acids Research, 12(I):387(1984))、BLASTP、BLASTN 和 FASTA(Altschul, S. F.等人，J. Molec. Biol. , 215:403-410 (1990)。可公開獲自NCBI和其它來源的BLASTX程序(BLAST 手冊，Altschul, S.等人，NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F.等人，J. Molec. Biol.，215:403-410(1990)，將其教導以提述的方式并入本文中)。這些程序使用缺省的缺口權重將序列適切地排列，以便在所給予序列和參考序列之間產生最高程度的序列同一性。舉例來說，具有與參考核苷酸序列有至少例如85%，更優選90%，甚至更優選95%的"序列同一性"之核苷酸序列的多核苷酸，意在表示除了所述給定多核苷酸序列可能相對于參考核苷酸序列的每100個核苷酸含有最多15個,優選最多10個,更優選最多5個點突變之外，所述給定多核苷酸的核苷酸序列與參考序列是相同的。換句話說，在對于參考核苷酸序列具有至少有85%,更優選90%,甚至更優選95%同一丨丨生之核苷酸序列的多核苷酸中，在參考序列中有最多15%，更優選10%，甚至更優選5%的核苷酸可能被刪除或被其它核苷酸取代，或可能有數目占參考序列之核苷酸總數的最多15%，更優選10%，甚至更優選5%的核苷酸被插入該參考序列中。參考序列的這些突變可發生在參考核苷酸序列的5'或3'端位點，或在這些末端位點之間的任何地方，或者在個別地散在于參考序列中的核苷酸之間，或在參考序列內形成一個或多個鄰接群體。同樣地，具有與參考氨基酸序列有至少例如85%，更優選90%，甚至更優選95%序列同一性之所給氨基酸序列的多肽，意在表示除了給定的多肽序列可能相對于參考氨基酸序列的每100個氨基酸包含最多15個，優選最多10個，更優選最多5個氨基酸改變之外，給定的多肽的氨基酸序列與參考序列是相同的。換言之，為獲得具有與參考氨基酸序列的至少85%，優選90%，甚至更優選95%的序列同一性的給定多肽序列，可將參考序列中的至多15%，優選至多10%，甚至更優選至多5%的氨基酸殘基刪除或用另一氨基酸取代，或者可以向參考序列中插入數目占參考序列氨基酸殘基總數的至多15%，優選至多10%，甚至更優選至多5%的氨基酸。參考序列的這些改變可發生于參考氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置處或這些末端位置之間的任何地方，或者個別地散布于參考序列的殘基間，或者散布成參考序列內一個或多個鄰接群體。優選地，不一致的殘基位置是通過保守氨基酸取代而相異的。然而，當測定序列同一性時，保守取代不算作匹配。本文中使用的"序列同源性"是指一種測定兩個序列的相關性的方法。為測定序列同源性，將兩個或兩個以上序列最優比對，必要時引入缺口。然而，與〃序列同一性〃相t匕，當測定序列同源性時，將保守氨基酸取代視為匹配。換言之，為獲得與參考序列具有95%序列同源性的多肽或多核苷酸，參考序列中的85%，優選90%，甚至更優選95%的氨基酸殘基或核苷酸必須與另一氨基酸或核苷酸匹配或與另一氨基酸或核苷酸構成保守取代，或可向參考序列中插入數目占參考序列氨基酸殘基或核苷酸總數(不包括保守取代)的至多15%，優選至多10%，甚至更優選至多5%的氨基酸或核苷酸。優選地，同源序列包含至少一段50個，甚至更優選至少100個，甚至更優選至少250個，甚至更優選至少500個核苷酸。"保守取代"是指氨基酸殘基或核苷酸被具有類似特征或性質(包括大小、疏水性等)的另一氨基酸殘基或核苷酸取代，使得總體功能性不發生顯著變化。〃經分離的〃意指〃通過人手〃而與其天然狀態有所改變，即若其出現在自然界， 則其已經改變和/或從其原始環境中移出。例如，當術語用于本文中時，天然存在于活有機體中的多核苷酸或多肽不是經"分離"的，但相同的多核苷酸或多肽與其天然狀態的共存物質分開后，則是經“分離”的。由此，本發明更進一步的方面涉及可有效降低與PCV2感染相關之臨床癥狀的嚴重性的免疫原性組合物，其包含PCV2 0RF2蛋白質。優選的是，該PCV2 0RF2蛋白質是上述那些中的任一個。優選的是，該PCV2 0RF2蛋白質為i)包括 SEQ ID NO: 5,SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10 或 SEQ ID NO: 11之序列的多肽；ii)與i)的多肽至少80%同源的任何多肽；iii) i)和/或ii)的多肽的任何免疫原性部分；iv)iii)的免疫原性部分，包括 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ IDNO: 10或SEQ ID NO: 11之序列中所含有的至少10個鄰接氨基酸，V)由包括SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4之序列的DNA編碼的多肽，vi)由與V)之多核苷酸至少80%同源的多核苷酸編碼的任何多肽，vii)由V)和/或vi)之多核苷酸編碼之多肽的任何免疫原性部分，viii)vii)之免疫原性部分，其中編碼該免疫原性部分的多核苷酸包括SEQ IDN0:3或SEQ ID N0:4之序列中所含有的至少30個鄰接核苷酸。優選的是，那些免疫原性部分中任一個都將具有由SEQ ID N0:3或SEQ ID NO:4之序列編碼之PCV2 0RF2蛋白質的免疫原性特征。根據另一方面，在免疫學組合物中提供PCV2 0RF2蛋白，其中PCV20RF2蛋白的抗原包含水平(antigen inclusion level)可有效用于誘發所需的免疫反應,即降低由PCV2感染的發生率，減輕PCV2感染的嚴重性，或預防由PCV2感染所致的一或多種臨床體征。優選地，PCV2 0RF2蛋白包含水平為每毫升最終免疫原性組合物至少0. g抗原(ii g/ml),更優選為約0. 2 u g/ml至約400 u g/ml,更優選為約0. 3 u g/ml至約200 u g/ml,甚至更優選為約0. 35 u g/ml至約IOOii g/ml,更優選為約0. 4 y g/ml至約50 y g/ml,更優選為約0. 45 u g/ml至約30 u g/ml,更優選為約0. 6 y g/ml至約15 u g/ml,甚至更優選為約
0.75 u g/ml至約8 u g/ml,甚至更優選為約I. 0 y g/ml至約6 u g/ml,更優選為約I. 3 y g/ml至約3. O ii g/ml,甚至更優選為約I. 4 ii g/ml至約2. 5 y g/ml,甚至更優選為約I. 5 y g/ml至約2. O ii g/ml,且最優選為約I. 6 ii g/ml。根據另一方面，0RF2抗原包含水平為每個劑量最終抗原組合物至少0.2/iig如上所描述的PCV2 0RF2蛋白(U g/劑)，更優選為約0. 2 ii g/劑至約400 u g/劑，更優選為約0. 3 ii g/劑至約200 y g/劑，甚至更優選為約0. 35 u g/劑至約100 y g/劑，更優選為約
0.4 u g/劑至約50 u g/劑，更優選為約0. 45 u g/劑至約30 u g/劑，更優選為約0. 6 y g/齊[J至約15 y g/劑，甚至更優選為約0. 75 u g/劑至約8 ii g/劑，甚至更優選為約I. 0 ii g/劑至約6 ii g/劑，更優選為約I. 3 ii g/劑至約3. 0 ii g/劑，甚至更優選為約I. 4 ii g/劑至約
2.5 u g/劑,甚至更優選為約I. 5 ii g/劑至約2. 0 ii g/劑,且最優選為約I. 6 ii g/劑。用于根據本發明的免疫原性組合物中的PCV2 0RF2多肽可以用任何方式獲得，包括PCV2 0RF2的分離及純化、標準蛋白質合成及重組方法。用于獲得PCV2 0RF2多肽的優選方法在美國專利申請第11/034，797號中提供，其教導及內容以提述的方式并入本文中。簡言之，用含有PCV2 0RF2 DNA編碼序列的重組病毒載體感染易感細胞，由重組病毒表達PCV20RF2多肽，通過過濾從上清液回收所表達的PCV2 0RF2多肽，并用任何已知的方法，優選使用二元乙撐亞胺，使其失活化，隨后將其中和以終止失活化過程。因此，根據更進一步的方面，該免疫原性組合物包括i)任何上述的PCV20RF2蛋白質，優選具有上文所述的濃度，以及ii)表達該PCV2 0RF2蛋白質的病毒載體(優選是重組桿狀病毒)的至少一部分。此外，根據更進一步的方面，該免疫原性組合物包括i)任何上述的PCV2 0RF2蛋白質，優選具有上文所述的濃度，ii)表達該PCV2 0RF2蛋白質的病毒載體(優選是重組桿狀病毒)的至少一部分，以及iii) 一部分的細胞培養物上清液。根據PCV2 0RF2蛋白質之產生和回收過程的一個具體實施方案，通過孔尺寸優選 在大約0. 45到I微米之間的膜來過濾細胞培養物上清液。因此，更進一步的方面涉及這樣的免疫原性組合物，其包括i)任何上述的PCV20RF2蛋白質，優選是以上述的濃度，ii)表達該PCV2 0RF2蛋白質的病毒載體(優選是重組桿狀病毒)的至少一部分，以及iii) 一部分細胞培養物；其中大約90%的組分具有小于I微米的尺寸。根據更進一步的方面，本發明涉及免疫原性組合物，其包括i)任何上述的PCV20RF2蛋白質，優選是以上述的濃度，ii)至少一部分表達該PCV20RF2蛋白質的病毒載體，iii) 一部分細胞培養物，以及iv)使重組病毒載體失活的失活劑，優選是BEI，其中大約90%的組分i)至iii)具有小于I微米的尺寸。優選的是，BEI以有效使桿狀病毒失活的濃度存在。有效濃度在上文已有描述。根據更進一步的方面，本發明涉及免疫原性組合物，其包括i)任何上述的PCV20RF2蛋白質，優選是以上述的濃度，ii)至少一部分表達該PCV20RF2蛋白質的病毒載體，iii) 一部分細胞培養物，iv)使重組病毒載體失活的失活劑，優選是BEI，以及v)用于中止由該失活劑介導的失活化作用的中和劑，其中大約90%的組分i)至iii)具有小于I微米的尺寸。優選的是，若失活劑是BEI，則該組合物包括與BEI等量的硫代硫酸鈉。將多肽摻入可施用于對PCV2感染敏感的動物的組合物中。組合物的優選形式亦可包括本領域技術人員已知的額外組分(亦參見Remington ' s PharmaceuticalSciences (1990)。第18版，Mack Publ.，Easton)。另外,該組合物可包括一或多種獸醫學上可接受的載體。本文中使用的〃獸醫學上可接受的載體〃包括以下載體中的任一項及全部溶劑、分散介質、包衣(coatings)、佐劑、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌劑及抗真菌齊U、等張劑、吸附延遲劑等。在一個優選實施方式中，免疫原性組合物包含本文提供的PCV20RF2蛋白，優選具有上文所述的濃度，其與佐劑[優選卡巴普]及生理鹽水混合。在優選的具體實施方案中，免疫原性組合物包括本文提供的PCV20RF2蛋白質，優選具有上文所述的濃度，作為抗原性組分，將 其與佐劑，優選是卡巴普，以及生理鹽水混合。本領域技術人員應了解用于本文中的組合物可包括已知的可注射生理學可接受無菌溶液。為了制備非經腸注射或灌注的即用溶液，可以容易地獲得含水等張溶液諸如鹽水或相應的血漿蛋白質溶液。另外，本發明的免疫原性組合物及疫苗組合物可包括稀釋劑、等張劑、穩定劑或佐劑。稀釋劑可包括水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油等。等張劑典型地可包括氯化鈉、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖。穩定劑典型地包括白蛋白及乙二胺四乙酸的堿金屬鹽。適當的佐劑則是上述的那些。最優選是使用卡巴普，特別是卡巴普971P，優選是以上述的量(例如每個劑量大約500微克到大約5毫克，更優選以每個劑量大約750微克到大約2. 5毫克，最優選的是以每個劑量大約I毫克的量)使用。因此，本發明還涉及免疫原性組合物，其包括i)任何上述的PCV2 0RF2蛋白質，優選具有上述的濃度，ii)至少一部分表達該PCV2 0RF2蛋白質的病毒載體，iii) 一部分細胞培養物，iv)使重組病毒載體失活的失活劑，優選是BEI，以及v)用于中止由該失活劑介導之失活作用的中和劑，優選是與BEI等量的硫代硫酸鈉；以及vi)適當的佐劑，優選是具有上述量的卡巴普；其中大約90%的組分i)至iii)具有小于I微米的尺寸。根據更進一步的方面，該免疫原性組合物還包括可藥用的鹽類，優選是生理學可接受的濃度的磷酸鹽。優選的是，將該免疫原性組合物的PH值調整到生理pH值，也就是在大約6. 5到7. 5之間。因此，本發明還涉及免疫原性組合物，其每ImL包括i)至少I. 6微克上述的PCV20RF2蛋白質，ii)至少一部分表達該PCV2 0RF2蛋白質的桿狀病毒，iii) 一部分細胞培養物，iv)大約2到大約8mM的BEI, v)與BEI等量的硫代硫酸鈉；以及vi)大約I毫克的卡巴普971，以及vii)生理學可接受濃度的磷酸鹽；其中大約90%的組分i)至iii)具有小于I微米的尺寸，且該免疫原性組合物的PH值被調整到大約6. 5至7. 5。免疫原性組合物可進一步包括一或多種其它免疫調節劑，諸如白介素、干擾素或其它細胞因子。免疫原性組合物亦可包括慶大霉素(Gentamicin)及硫柳汞(Merthiolate) 0盡管適用于本發明的語境下的佐劑及添加劑的量及濃度可容易地由本領域技術人員決定，但本發明涵蓋這樣的組合物，其包含約50 u g至約2000 u g，優選約250 u g/ml劑量疫苗組合物的佐劑。在一個實施方案中，本文中使用的免疫原性組合物意圖涵蓋還指包含約Iu g/ml至約60 ii g/ml的抗生素,更優選少于約30 ii g/ml抗生素的疫苗組合物。因此，本發明還涉及免疫原性組合物，其包括i)任何上述的PCV2 0RF2蛋白質，優選具有上述的濃度，ii)至少一部分表達該PCV2 0RF2蛋白質的病毒載體，iii) 一部分細胞培養物，iv)使重組病毒載體失活的失活劑，優選是BEI，以及v)用于中止由該失活劑介導的失活化作用的中和劑，優選是與BEI等量的硫代硫酸鈉；vi)適當的佐劑，優選是上文所述的量的卡巴普971, vii)可藥用濃度的生理鹽水緩沖液,優選是磷酸鹽，以及viii)抗微生物活性劑；其中大約90%的組分i)至iii)具有小于I微米的尺寸。意外地發現，本文提供的免疫原性組合物在24個月的期間內是高度穩定的。還發現本文提供的免疫原性組合物，包括本文提供的表達PCV2 0RF2蛋白質的重組桿狀病毒，在降低與PCV2感染相關之臨床體征上是極為有效的。意外地發現，包括本文提供的表達PCV20RF2蛋白質之重組桿狀病毒的免疫原性組合物，比包含失活形式的完整PCV2病毒或經分離的病毒PCV2 0RF2抗原的免疫原性組合物更有效。具體而言，意外地發現了表達PCV20RF2蛋白質之重組桿狀病毒在極低濃度下(指最多0. 25微克/劑量的濃度)是有效的。PCV2 ORF2蛋白質的這種令人意外的高免疫原性潛能，可通過加入卡巴普而進一步增加。更進一步之方面涉及包括至少一個劑量的本文提供的PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物的容器，其中一個劑量包括至少2微克PCV2 0RF2蛋白質，優選的是2至16微克PCV2 0RF2蛋白質。該容器可包括從I至250個劑量的免疫原性組合物，優選的是其含有
1、10、25、50、100、150、200或250個劑量的PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物。優選的是，每個容器包括一個以上劑量的PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物，還包括抗微生物活性劑。那些試劑為例如抗生素，包括慶大霉素和硫柳汞，等等。因此，本發明一方面涉及包括從I到250個劑量的PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物的容器，其中一個劑量包括至少2微克 PCV2 0RF2蛋白質和慶大霉素和/或硫柳汞，優選是從大約I U g/ml到大約60 u g/ml的抗生素，優選的是低于大約30 y g/ml。更進一步的方面涉及一種試劑盒，其包括上述的任何容器，以及說明手冊，包括有關肌肉內施用至少一個劑量的PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物至小豬內以減少與PCV2感染相關之臨床癥狀的嚴重性的信息。此外，根據更進一步的方面，該說明手冊包括有關第二次或更多次施用至少一個劑量的PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物的信息，其中第二次施用或任何更多次施用與最初或任何前次施用相隔至少14天。優選的是，該說明手冊還包括施用免疫刺激物的信息。優選的是，該免疫刺激物應施用至少兩次。在免疫刺激物的第一和第二次施用，或任何更多次施用之間，優選有至少3天，更優選至少5天，甚至更優選至少7天。優選的是，在超過最初施用PCV20RF2蛋白質之免疫原性組合物至少10天，更優選15天，甚至更優選20天，甚至更優選至少22天，給予免疫刺激物。優選的免疫刺激物是例如鑰孔血藍蛋白(KLH)，優選是以不完全弗氏(Freund' s)佐劑乳化的鑰孔血藍蛋白(KLH/ICFA) o然而，當然可使用本領域技術人員已知的任何其它的免疫刺激物。當在本文中使用"免疫刺激物"時，意指任何可誘發普通免疫反應，而優選不引發或增加特異的免疫反應，例如對抗特定病原體的免疫反應的試劑或組合物。說明書還進一步教導以適當的劑量施用免疫刺激物。再者，套組還可包括一容器，其包括至少一個劑量的免疫刺激物，優選是一個劑量的KLH或KLH/ICFA。此外，還已經意外地發現，通過施用IngelVac PRRS MLV疫苗，進一步提高包含表達PCV2 0RF2蛋白質之重組桿狀病毒的免疫原性組合物(優選與卡巴普聯用)的免疫原性潛能(參見實施例5)。當存在PRRS感染時，PCV2臨床體征和疾病征候大大增加。然而，本文提供的免疫原性組合物和疫苗接種策略，大大地減少了該影響，并且超出了預期。換句話說，當以任何本文提供的PCV2 0RF2免疫原性組合物和Ingelvac PRRS MLV疫苗(Boehringer Ingelheim)處理動物,優選是豬時,觀察到了意想不到的協同效果。因此，本發明更進一步的方面涉及上文所述的試劑盒，包括本文提供的PCV2 0RF2的免疫原性組合物和說明手冊，其中該說明手冊還包括與PCV20RF2免疫原性組合物一起或者大約同時施用包括PRRS抗原，優選佐劑化(adjuvanted)之PRRS抗原的免疫原性組合物的信息。該 PRRS 抗原優選是 InyelVac8PRRS MLV(Boehringer Ingelheim)。本發明更進一步的方面還涉及試劑盒，其包括i)含有至少一個劑量的本文提供的PCV2 0RF2的免疫原性組合物的容器，以及ii)含有包括PRRS抗原，優選佐劑化
(adjuvanted)的PRRS抗原之免疫原性組合物的容器。該PRRS抗原優選是IngelVaC PRRS
MLV(Boehringer Ingelheim)。更優選的是,該試劑盒還包括說明手冊,其包括施用這兩種藥物組合物的信息。優選的是，它包含在含有PRRS的組合物之前施用含有PCV2 0RF2之組合物的信息。更進一步的方面，涉及任何本文提供的組合物在作為藥物，優選的是作為獸醫藥物，更優選作為疫苗的用途。再者，本發明還涉及任何在本文中描述之組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于減輕與PCV2感染相關之臨床癥狀的嚴重性。優選的是，該藥物用于預防PCV2感染，更優選在小豬中預防PCV2感染。
更進一步的方面涉及(i)預防PCV2感染或再感染，或(ii)在個體中減少或消除由PCV2引起之臨床癥狀的方法，包括對需要的受試者施用任何本文提供的免疫原性組合物。優選的是，該受試者是豬。優選的是，肌肉內施用該免疫原性組合物。優選的是，施用一或兩個劑量的免疫原性組合物，其中一個劑量包括至少大約2微克PCV2 0RF2蛋白質，更優選大約2到大約16微克，以及至少大約0. I到大約5毫克卡巴普，優選的是大約I毫克卡巴普。更進一步的方面涉及如上文所述之治療方法，其中第二次施用免疫原性組合物。優選的是，第二次施用是利用相同的免疫原性組合物來進行，優選具有相同量的PCV2 0RF2蛋白質。第二次施用優選也通過肌肉內施用。優選的是，第二次施用與最初施用相隔至少14天，更優選相隔最初施用至少4周。根據更進一步的方面，治療方法還包括施用免疫刺激物。優選的是，施用該免疫刺激物至少兩次。在免疫刺激物的第一和第二次投藥之間優選有至少3天，更優選至少5天，甚至更優選至少7天。優選的是，在最初施用PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物至少10天，更優選15天，甚至更優選20天，甚至更優選至少22天之后施用免疫刺激物。優選的免疫刺激物是例如鑰孔血藍蛋白(KLH)，優選是以不完全弗氏佐劑乳化的鑰孔血藍蛋白(KLH/ICFA) 0然而，可使用本領域技術人員已知的任何其它的免疫刺激物。以適當的劑量施用免疫刺激物是在本領域技術人員的普通知識范圍內。根據更進一步的方面，上文所述的治療方法還包括施用PRRS抗原。優選的PRRS抗原為 IngelVac16PRRS MLV(Boehringer Ingelheim)。優選的是，該 PRRS 抗原的施用在
時間上晚于(temporally beyond)PCV2 0RF2蛋白質免疫原性組合物的施用。根據更進一步的方面，本發明提供多價組合疫苗，其包括有效降低PCV2感染之發生率或減輕其嚴重性的免疫學作用劑，以及至少一種具有對抗其它在豬中引起疾病的生物的免疫原活性之組分。具體地，有效降低PCV2感染之發生率或減輕其嚴重性的免疫學作用劑為PCV2抗原。優選的是，該PCV2抗原是本文提供的PCV2 0RF2蛋白質，或任何上述的包括PCV2 0RF2蛋白質的免疫原性組合物。然而，應當理解，PCV2抗原還意指包含至少一種這樣的抗原的物質組合物所述抗原當施用豬時，可誘導、刺激或提高對抗PCV2感染的免疫反應。優選地，所述PCV2抗原是完整的PCV2病毒，優選為失活形式、活的但經修飾的PCV2病毒或減毒的PCV2病毒、包含至少一個PCV2的免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，包含至少一個PCV2的免疫原性氨基酸序列的任何其它的多肽或組分。當在本文中使用"免疫原性蛋白質"、"免疫原性多肽"或"免疫原性氨基酸序列"等術語時，意指任何這樣的氨基酸序列，其在宿主中誘發對抗包含該免疫原性蛋白質、免疫原性多肽或免疫原性氨基酸序列之病原體的免疫反應。當在本文中使用"免疫原性蛋白質"、"免疫性原多肽"或"免疫原性氨基酸序列"等術語時，包括任何蛋白質的全長序列、其類似物或其免疫原性片段。〃免疫原性片段〃意指這樣蛋白質的片段，它含有一個或多個表位，因此能誘發對抗相關病原體的免疫反應。可使用本領域中已熟知的許多表位定位技術中的任一種來確認這類片段。參見，例如EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology,第 66 冊(Glenn E. Morris,編輯，1996) Humana Press, Totowa, New Jersey。例如,可通過例如下面的方法來確定線性表位在固體支撐物上同時合成大量的肽，這些肽相當于蛋白質分子的部分，并使這些肽與抗 體反應，同時這些肽仍附接在支撐物上。這類技術為本領域中已知的，并在例如美國專利第4，708，871 號；Geysen 等人(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3998-4002 ；Geysen 等人(1986)Molec. Immunol. 23:709-715中描述。同樣的，通過確定氨基酸的空間構象，例如通過X-射線結晶術和2-維核磁共振,迅速地鑒定構象表位。例如參見上文Epitope MappingProtocols。該定義中還包括合成抗原,例如多表位(polyepitopes)、側翼表位(flankingepitopes),及其它重組抗原或合成得來的抗原。例如參見Bergmann等人，(1993)Eur.J. Immunol. 23:2777-2781; Bergmann 等人，(1996)，J. Tmmuno1. 157:3242-3249; Suhrbier, A.(1997), Immunol, and Cell Biol. 75:402-408;Gardner 等人，(1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, June 28-July 3,1998。。根據更進一步的具體實施方案，該PCV-2抗原是CilXO丨UXw (Boehringer
Ingelheim Vetmedica inc, St Joseph, MO, USA)、CircoVac^ (Merial SAS, Lyon, France)、
CircoVent (Intervet Inc. , Millsboro, DE, USA)或 Suvaxyn PCV-2 單削..R (Fort DodgeAnimal Health, Kansas City, KA, USA)。對組合物或疫苗的〃免疫學或免疫反應〃是在宿主中產生出對抗感興趣的組合物或疫苗的細胞和/或抗體介導之免疫反應。通常，"免疫反應"包括但不限于一種或多種下列效應特異地針對感興趣之組合物或疫苗中所含的抗原的抗體、B細胞、T輔助細胞、抑制性T細胞，和/或細胞毒性T細胞和/或yd T細胞的產生或激活。優選的是，宿主將展現出治療性或預防性的免疫反應，而得以提高對新感染的抵抗力，和/或降低疾病的臨床嚴重性。這樣的保護作用將表現為與宿主感染相關的上述癥狀的減少或缺如。優選的是，引起豬其它疾病之生物系選自下列所組成之群大葉性肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuopneumonia) (I);腺病毒(2) ;a病毒，如東方馬腦脊髓炎病毒(Eastern equine encephalomyelitis viruses) (3);支氣管炎博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica) (4);短螺旋體屬菌種(Brachyspira spp. ) (5),優選的是豬痢疾短螺旋體(B. hyodyentheriae) (6);結腸菌毛樣短螺旋體(B. piosicoli) (7),豬布魯氏菌(Brucellasuis),優選生物變型 1、2 和 3 (8);經典豬痕病毒(classical swine fever virus) (9);梭菌屬菌種(Clostridium spp.) (10),優選的是艱難梭菌(Cl. difficile) (11)、產氣莢膜梭菌(Cl. perffingens) A>B 和 C 型(12)、諾氏梭菌(Cl. novyi) (13)、敗毒梭菌(Cl. septicum)(14)、破傷風梭菌(Cl. tetani) (15);冠狀病毒(Coronavirus) (16),優選的是豬呼吸道冠狀病毒(Procine Respiratory Corona virus) (17);豬血蟲體(Eperyhrozoonosis suis)(18);豬紅斑丹毒絲菌(19);大腸桿菌(20);副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis),優選亞型 1、7 和 14(21);凝血性腦脊髓炎病毒(Hemagglutinating encephalomyelitisvirus) (22);日本腦炎病毒(23);細胞內勞索尼亞氏菌(Lawsonia intracellularis)(24)；鉤端螺旋體屬菌種(Leptospira spp.) (25),優選澳大利亞鉤端螺旋體(Leptospira australis) (26);犬鉤端螺旋體(Leptospira canicola) (27)；流感傷寒鉤端螺旋體(Leptospira grippotyphosa) (28);出血黃疸鉤端螺旋體(Leptospiraicterohaemorrhagicae) (29);問號鉤端螺旋體(Leptospira interrogans) (30);波摩那鉤端螺旋體(Leptospira pomona) (31);塔拉索夫鉤端螺旋體(Leptospira tarassovi)(32);分枝桿菌屬菌種(Mycobacterium spp.) (33),優選的是鳥分枝桿菌(M. avium) (34)、胞內分枝桿菌(M. intracellulare) (35)和牛分枝桿菌(M. bovis) (36);豬肺炎枝原體(Mycoplasma hyopneumoniae) (37);多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida) (38);豬巨細胞病毒(Porcine cytomegalovirus) (39);豬細小病毒(Porcine Parvovirus) (40)； 豬生殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)病毒(41);假狂犬病病毒(Pseudorabies virus) (42);輪狀病毒(Rotavirus) (43);沙門氏菌屬菌種(Salmonella spp.) (44),優選的是鼠傷寒沙門氏菌(S. thyhimurium) (45)和豬霍亂沙門氏菌(S. choleraesuis) (46);豬葡萄球菌(Staph, hyicus) (47);葡萄球菌屬菌種(Staphylococcus spp. ) (48),優選的是鏈球菌屬菌種(Streptococcus spp. ) (49),優選的是豬鏈球菌(Strep, suis) (50);豬皰疫病毒(Swine herpes virus) (51);豬流感病毒(Swine Influenza Virus) (52);豬痘病毒(Swine pox virus) (53);豬痘病毒(54);水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus) (55);豬水皰疫病毒(Virus of vesicularexanthema of swine) (56);哈德焦鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo) (57)和/或豬關節液枝原體(Mycoplasma hyosynoviae) (58)。下文中任何關于豬病原體的提述，可以指稱該病原體，例如豬肺炎枝原體(M. Hyo)，或者可以指稱該病原體后面()內的編號(可見上文)。例如，在提述豬肺炎枝原體時，可指稱“肺炎枝原體”或“(37) ”。因此，本發明涉及用來治療和/或預防豬的組合疫苗，其包括降低PCV2感染之發生率或減輕其嚴重性的免疫學作用劑，優選PCV2抗原，以及額外的免疫學活性組分，所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由任何豬病原體(I)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、(19)、(20)、(21)、(22)、(23)、(24)、(25)、(26)、(27)、(28)、(29)、(30)、(31)、(32)、(33)、(34)、(35)、(36)、(37)、(38)、(39)、(40)、(41)、(42)、(43)、(44)、(45)、(46)、(47)、(48)、(49)、(50)、(51)、(52)、(53)、(54)、(55)、(56)、(57)和/或(58)引起的感染，或者是所述豬病原體的免疫學活性組分。[組I]。當在本文中使用〃免疫學活性組分〃時，意指在施用該組分之動物中誘導或刺激免疫反應的組分。根據優選的具體實施方案，該免疫反應系針對該組分或包括該組分之微生物。根據更優選的具體實施方案，免疫學活性組分是經減毒的微生物，包括經修飾的活病毒(MLV)、滅活的微生物，或至少是微生物的免疫活性部分。當在本文中使用"微生物的免疫學活性部分"時，意指微生物之含有蛋白質、糖和/或糖蛋白的部分，其包括至少一種在施用該組分之動物中誘導或刺激免疫反應的抗原。根據更優選的具體實施方案，該免疫反應系針對該微生物的免疫學活性部分，或包括該免疫學活性部分的微生物。優選的是，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(41)引起的感染，或者是豬病原體(41)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(37)引起的感染，或者是豬病原體(37)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(I)引起的感染，或者是豬病原體(I)的免疫學活性組分。 根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(7)引起的感染，或者是豬病原體(7)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(24)引起的感染，或者是豬病原體(24)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(38)引起的感染，或者是豬病原體(38)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(21)引起的感染，或者是豬病原體(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(40)引起的感染，或者是豬病原體(40)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(2)引起的感染，或者是豬病原體(2)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(44)引起的感染，或者是豬病原體(44)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(50)引起的感染，或者是豬病原體(50)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(19)，優選(20)和/或(21)引起的感染，或者是豬病原體(19)，優選(20)和/或(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(22)引起的感染，或者是豬病原體(22)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(41)和(37)引起的感染，或者是豬病原體(41)和(37)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體⑴和(41)引起的感染，或者是豬病原體⑴和(41)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(I)和(37)引起的感染，或者是豬病原體(I)和(37)的免疫學活性組分。
根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(I)、(41)和(37)引起的感染，或者是豬病原體(I)、(41)和(37)的免疫學活性組分。在優選的形式中，該組合以卡巴普佐劑化(adjuvanted with Carbopol)。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體⑴和(21)引起的感染，或者是豬病原體⑴和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(21)和(41)引起的感染，或者是豬病原體(21)和(41)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(21)和(37)引起的感染，或者是豬病原體(21)和(37)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(21)和(38)引起的感染，或者是豬病原體(21)和(38)的免疫學活性組分。
根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(7)和(19)引起的感染，或者是豬病原體(7)和(19)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(38)和(33)，更優選(34)、(35)和/或(36)引起的感染，或者是豬病原體(38)和(33)，更優選(34)、(35)和/或(36)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(49)，優選(50)和(21)引起的感染，或者是豬病原體(49)，更優選(50)和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(49)，更優選(50)、(20)和(21)引起的感染，或者是豬病原體(49)，更優選(50)、(20)和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(49)，優選(50)、(20)和(21)引起的感染，或者是豬病原體(49)，優選(50)、(20)和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(49)，更優選(50)、(20)、(38)和(21)引起的感染，或者是豬病原體(49)，更優選(50)、(20)、(38)和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(49)，優選(50)、(20)、(33)和(21)引起的感染，或者是豬病原體(49)，優選
(50)、(20)、(33)和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(49)，優選(50)、(20)、(38)、(33)和(21)引起的感染，或者是豬病原體(49)，優選(50)、(20)、(38)、(33)和(21)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(41)、(40)和(19)引起的感染，或者是豬病原體(41)、(40)和(19)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(38)、(4)和(19)引起的感染，或者是豬病原體(38)、(4)和(19)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(38)、⑷、(21)和(19)引起的感染，或者是豬病原體(38)、⑷、(21)和(19)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(20)，更優選(20)、(31)和(38)引起的感染，或者是豬病原體(20)、(31)和
(38)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(5)，優選(5)和(24)引起的感染，或者是豬病原體(5)和(24)的免疫學活性組分。 根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(1)，更優選(I)和(5)引起的感染，或者是豬病原體(I)和(5)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(41)，優選(40)、(27)、(28)、(29)、(31)、(19)和(59)引起的感染，或者是豬病原體(41)、(40)、(27)、(28)、(29)、(31)、(19)和(57)的免疫學活性組分。根據另一個方面，[組合I]的所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由豬病原體(6)，優選(6)、(19)、(38)和(58)引起的感染，或者是豬病原體(I)和(5)的免疫學活性組分。根據進一步的方面，組合疫苗的所述額外的免疫學活性組分選自Enterisol Ileitis> Enterisol Ileitis FF，Enterisol sc-54，Enterisol SC-54FF, Enterisol ery-alc, Ingelvac app alc, Ingelvae AR4, Ingelvac HP-1, Ingelvac hpe-i, Ingdvac M. hyo, Ingelvac PRRS mlv, Ingelvac PRRS ATP, Ingelvac PRV-G I, Eeprocyc PRRs ple, Reprocye⑩
PLE, Tetguard , ToxivaC AD + E, Toxivac Plus Pars ius,(都來自
Boehringer Ingelheim, St. Joseph, MO, USA) ;Circovent，Porcilis Coli, PorcilisERY+PARV0，Porcilis EryjPorcilis Glasser，Porcilis Parvo,Porcilis PorcoliDF，Porcilis APP，Porcilis AR-T，Porcilis AR-T DF，Porcilis Porcoli，PorcilisPorcoli Diluvac forte，PorciIis PRRS，PorciIis Porcol 5,Porc iIi sAujeszky, Porcilis Begonia Diluvac,Porcilis Begonia I. D. A. L. , Porcilis Begonia
Unisole, Porcilis M_ hyo, Porcilis Atrinord, Myco Silencer BPMj Myco Silencer BPMEj Myco Silencer me, Myco Silencer M, Myco Silencer Once, Myco Silencer MEHj Rhinogen⑩ BPEj Rhinogeil CTE 5000，Rhinogen CTSE，Score, Sow Bac E 11, Sow Bae CE 11, Sow Bac TREC, ProSystem CE, ProSystem RCE, ProSystem⑩ trec, ProSystem Pillmune, ProSystem Rotamune 與Imugan n, ProSystem Rota, ProSystem Rotamune kv, ProSystem TG-Emune Rota 與 Imugan II，ProSystem TGE/Rota, ProSystem TG-Emune⑩與 ImugeirK.. ProSystem TGE ,MaGESTIC 7, MaGESTI C8,MaGESTic 與 Spur , MaGESTic 7 與 Spur , MaGESTic 8 與 Spur ,End-FLUence 與 Jtaugen il, End-FLUence 2，PRRomiSE , PRV-Begonia
與 Dlluvac Forte , Argus SC/ST, Strep Bac, Strep Bac⑩與 Imugen II，Colis
orb, Heptavac, Lambivac, Porcovac plus, Erysorb Parvo (都來自 Intervetlnc. ,Millsboro, DE, USA);Hyoresp, Circovac, Neocolipor, Parvoruvac, Parvosuin, Progressis, Vir
af lu, Akipor 6. 3, Jespur gl_, Jesflu gl-(都來自 MerialLTD, Duluth, GA) ; ER BAC⑩PLUS，ER BAC , E R BACPLUS^LEPTOFERM-5
E R BAC Leptoferm-5( 5 Farrowsur鐵 Farrowsure B， FARROWSURE PLUS B, FARROWSURE.. PLUS, PARROWSURF PRV, FARROWSUREB-PRV, FLUSURE , FLUSURE RTU, FLUSURE /ER BACK PLUS, FLUSURE /ER BAC PLUS ,FLUSUREfVI/RESPISUREl!,FLIJSURE /RESPISURE8
RTU, FLUSURE /RESPISURE-ONE*/ER BACR PLUS, FLUSURE /RespiSureI ONE /ER BAC Plus , FLUSURE /RESPISURE ONE , FLUSURE /RESPISURE I ONE⑩’ FLUSURE/Farrowsure Plus,FLUSURE/Farrowsure Plus
B, LITTERGUARD* LT-C，LITTERGUARD LT, PleuroGuard 4, PneumosuisIII，Stellamune One, Stellamune UnojStellamune Once, Stellamune Mono, StellamuneMycoplasma, Respisure One, Respisure , Respisure I ONE , Respisure
IOne /ER Bac Plus ，Enduracell T, Zylexis (原名 Baypamune)，Atrobac 3，Brati V a c K: B ra i i Vac -Bf
Lq)U)rem!'5IMl)an.(卜Vac:.K:丄PR-Vac ^ Killccl5 PLVad. PR-Vac
Plus (都來自 Pfizer Inc.，New York,NY,USA) ;Suvaxyn MH One,Suvaxyn
Respii end - MHjSuvaxyn Mycoplasma,Suvaxyn Aujeszky Bartha+Diluent，Suvaxyn
Aujeszky Bartha+o/w,Suvaxyn Aujeszky-Flu, Suvaxyn Aujeszky 783+o/w, SuvaxynEryjSuvaxyn Flu, Suvaxyn M. hyo, Suvaxyn MH-OnejSuvaxyn Parvo STjSuvaxyn Parvo/E, Suvaxyn RespiFeild APP, Suvaxyn RespiFend HPS, Suvaxyn RespiFend 腿/HPS, Suvaxyn RespiFend# MH, Suvaxyn AR/T/E, Suvaxyn EC-4, Suvaxyn E, Suvaxyn -E, Suvaxyn E-oral, Suvaxyn PLE, Suvaxyn PLE/PrV gpl-，Suvaxyn LE + B, Suvaxyn PLE + B，Suvaxyn .. PLE + B/PrVgpl-，Suvaxyn SIV, Suvaxyn SlV/Mh-one, Suvaxyn P, Suvaxyn PrVgpl-, Suvaxyn PCV-2 One Shot (都來自 Fort DodgeAnimal Health, OverlandPark, KS, USA (Wyeth) ; SCOl IR M [ iN F:R:,
SCOl IRMl INF^H -C,SCOURMUNE⑩-CR，AR-PAC'K-PD r FR,
AR-PARAPAC 十ER, M+ Rhusigen , M+PAC , MaxiVac Excell 3,
MaxiVac hini, MaxiVaeD H3N2, MaxiVac -FLU, MaxiVae -M+,
MaxiVac ExC€ll , MaxiVac Excell 3，PARAPAC , PNEU PAC ,
PNEU PAC#-ER, PNEU PAC⑩+ER, PRV/Marker Gold , PRV/Marker Gold , PRV/
Marker Gold -MaxiVaC FLU, Rhusigen , Gletvax 6, Covexin 8, M+PAC, Gletvax
plus, M-Parapac SS PAG (都來自 Schering-Plough Animal Health Corporation,Kenilworth,NJ,USA);AMERVAC-PRRS, AUSKIPRA-BK, AUSKIPRA-GN,⑶LISUIN-CL,COLISUIN-TP, ERYSIPRAVAC, GRIPORK, HIPRASUIS-GLASSER. MYPRAVAC SUIS, NE
UMOSUIN, PARVOSUIN, PARVOSUIN-MR, PARVOSUIN-MR/AD, RINIPRAVAC-DT, SUIPRAVAC-PRRS,SUIPRAVAC-RC, TOXIPRA PLUS(都來自 Laboratorios Hipra S.A. , Amer, Girona,Spain);Clostricol, ColiporcPlus, Haeppovac, Per-C-Porc, Porciparvac, RESPIPORC ART+EP, RESPIPORC FLU, Respiporc M.HYO I SHOT,Rhusiovac, Rotlauf-Lebendimpfstoff, Salmoporc, Suisaloral, AK-vac MK35(都來自 IDTImpfstoffwerk DessaTornau, Tornau, Germany) ;Mypravac Suis, (Albrecht GmbH, Germany) ;Haemo Shield
P, Parapleuro Shield P> Parapleuro Shield P+BE, RhinJcell FD, Rhini Shield
TX4, Prefarrow Shield 9, Prefarrow Strep Shield , Ciostratox BCD, Ciostratox
C, ClOStratOX Ultra C1300, Porcine ￡et)lizer 3+C, Porcine Pili Shield +C5
Porcine Pili Shield 'r^Porcine Ecollzer 3, Ery Serum1^Ery Shield1^Ery Vac
Oral, Ery Shield +L5, PanSTAR Ery, Erycell ParvO Shield E, Parvo Shield
L5E，Parvo Shield L5, Parvo Shield , Para Slticld ^ .. PneumoSTAR SIV, PneumoSTAR Myco, Lepto Shiel d 5，Myco Shield SallT10 Shield 2，Salmo Shield
Live, Amitox Tet C. Perfingens Type A Toxoid (都來自 Novartis Animal Health, Bas
el, Switzerland) ; Nit ro-Sal (Akro);或任何包含在上述組合物中的抗原。或者，當PCV2抗原已存在于任何那些疫苗中時，將(i)如本文所述的PCV抗原添加到這些組合物/抗原的任一者中，或(ii)將這些組合物/抗原的任一者中的PCV抗原用本文所述的PCV2抗原替代。根據進一步的方面，組合疫苗的所述額外的免疫學活性組分選自Enterisol ileitis, Enterisol ileitis FF, Enterisol⑩ sc-54, Enterisol SC-54FF, Enterisol
ery-alc, Ingelvac app alc, Mgeivac AR4，Ingdvac hp-i, Ingelvac HPE-1, Ingelvac M. hyo, Ingelvac PRRS mlv, Ingelvac prrsatp, ingelvac
PRV-Gi, Reprocyc PRRS ple, Reprocye⑩ ple, Tetguard , Toxivac
AD+E, Toxivac Plus Parsius,(都來自 Boehringerlngelheim, St. Joseph, MO,USA) ;Circovent, Porcilis Coli, Porcilis ERY+PARVO, Porcilis Ery,Porci I isGlasser, Porcilis Parvo, PorciIis Porcoli DF, Porcilis APP,PorcilisAR-T, Porcilis AR-T DF, Porcilis Porcoli,Porcilis Porcoli Diluvacforte,Porcilis PRRS, Porcilis Porcol 5,Porcilis Aujeszky, Porcilis BegoniaDiluvac,Porcilis Begonia I.D.A.L.,PorciIis Begonia Unisole, PorciIis
M. hyo, Porcilis Atrinord, Myco Silencer BPM, Myco Silencer BPME, Myco Silencer
me, Myco Silencer M, Myco Silencer Once, Myco Silencer meh, Rhinogen
bpe, Rhinogen cte 5000, Rhinogen ctse, Score, Sow Bac E ii, Sow Bac
CE ii, Sow Bae trec, ProSystem CE, ProSystem RCE, ProSystem
TREC, ProSystem Pillmune, ProSystem Rotamune 與 Imugan
II，ProSystem Rota, ProSystem Rotamune KV, ProSystem TG-Emune
Rota 與 Imugan II，ProSystem TGE/Rota, ProSystem TG-Eniune
與 Imugen , ProSystem TGE, MaGESTic 7，MaGESTic 8, MaGESTic 與
Spur , MaGESTic 7 與 Spur , MaGESTic 8 與 Spur , End-FLUenee馨
與 Imugen I I，End-FLUence⑩ 2, PRRomiSE , PRV-Begonia 與
Dlluvac Forte , Argus SC/ST, Strep Bac, Strep Bac 與 Imugen II, Colisorb, Heptavac, Lambivac, Porcovac plus, Erysorb Parvo (都來自 Intervetlnc. , Millsboro, DE, USA);Hyoresp, Circovac, Neocolipor, Parvoruvac, Parvosuin, Progressis, Viraflu, Akipor 6. 3, Jespur gl-, Jesflu gl-(都來自 MerialLTD, Duluth, GA) ; ER BAC
PLUS, ER BAC , E R BACr PLUS/LEPT0FERM-5**ER BAC Lepioterm-5 , l::arrowsure , Farrowsure B, FARROWSURE"
plus B, FARROWSURE pi.ls，FARROWSURE PRV, farrowsureB-PRV, FLUSURE , FLUSURE RTU, FLUSURE /ER BAC*. pLUS, FLUSURE /ER BAC PLUS ,
flusure /respisure 5 flusure /respisure
RTU , FLUSURESPISURF-ONEK-ER BAC；< PLUS, FLUSURE /RespiSure I ONE /ER BAC Plus , FLUSURE /RESPISURE ONE ,FLUSURE /RESPISURE I ONE , FLUSURE/Farrowsure Plus, FLUSURE/Farrowsure
Plus B, [ } i I bRGUARD LT-C, LI I ItRCjl.., ARD LT, I11 euro Ciuard
4，Pneumosuis III，Stellamune One, Stellamune UnojStellamune Once, StellamuneMono, Stel lamune Mycoplasma，Resp i sure One, Respisiire ，Re sp i sure
I ONE , Respisure I ◎聽⑩/ER Bac PlllS , Enduracel I T, Zylexis (原名 Baypamune), Atrobac 3， BiatiVac^,
Leptofenn-51 wParvo-Vac /Leptofemn-5 , PR-Vac -Killed, PR-Vac ,
PR-Vac Plus (都來自 Pfizer Inc. , New York, NY, USA) ; Suvaxyn MHOne, Suvaxyn RespiFend MH, Suvaxyn Mycoplasma, Suvaxyn Aujeszky
Bartha+Diluent, Suvaxyn Aujeszky Bartha+o/w, Suvaxyn Aujeszky-Flu, SuvaxynAujeszky 783+o/w, Suvaxyn Ery, Suvaxyn Flu, Suvaxyn M. hyo, Suvaxyn MH-One, Suvaxyn
Parvo ST, Suvaxyn Parvo/E, Suvaxyn RespiFend APP, Suvaxyn RespiFend HPS, Suvaxyn RespiFend MH/HPS, Suvaxyn RespiFend MH, Suvaxyn ar/t/e, Suvaxyn ec-4, Suvaxyn E, Suvaxyn -E, Suvaxyn E-oral, Suvaxyn PLE, Suvaxyn PLE/PrV gpl-, Suvaxyn LE+B, Suvaxyn PLE+B, Suvaxyn PLE+B/PrV gpl-, Suvaxyn siv, Suvaxyn siv/Mh-one, Suvaxyn P, Suvaxyn PrV gpl-, Suvaxyn PCV-20ne Shot (都來自 Fort Dodge Animal Health, OverlandPark, KS, USA (Wyeth); SCOURMUNE ,
SCOl ^RMUNl-K -C,SCOliRMliNl- K--CR,AR-IiACUD : 1；R.
AR-PA熟PAC..SH-ER. M + Rhusigen , M+PAC , MaxiVac Excell 3,MaxiVac HlNl, MaxiVac H3N2, Maxi￥ac -FLU, MaxiVac -M+,MaxiVac Excell , MaxiVac Excell 3，PARAPAC , PNEU PAC , PNEU PAC -E.R,PNEU PAC ⑩.ERs PRV/Marker Gold , PRV/Marker Gold , PRV/Marker Goid -MaxiVac FLU, Rhusigen , Gletvax 6，Covexin 8，M+PAC, Gletvaxplus, M-Parapac SS PAC (都來自 Schering-Plough Animal Health Corporation,Kenilworth, NJj USA);AMERVAC-PRRS, AUSKIPRA-BK, AUSKIPRA-GN, COLISUIN-CL,⑶LISUIN-TP，ERYSIPRAVAC, GRIPORK, HIPRASUIS-GLASSER, MYPRAVAC SUIS
，NEUMOSUIN,PARVOSUIN, PARVOSUIN-MR, PARVOSUIN-MR/AD, RINIPRAVAC-DT, SUIPRAVAC-PRRS, SUIPRAVAC-RC, TOXIPRA PLUS (都來自 Laboratorios Hipra S. A. , Amer, Girona，Spain);Clostricol,Coliporc Plus, Haeppovac, Per-C-Porc，Porciparvac, RESPIPORC ART+EP，RESPIPORC FLU,Respiporc M. HYO I SHOT, Rhusiovac, Rotlauf-Lebendimpfstoff， Salmoporc，Suisaloral，AK-vac MK35(都來自 IDTImpfstoffwerk DessaTo
rnau,Tornau,Germany);Mypravac Suis, (Albrecht GmbH,Germany);Haemo Shield
P, Parapleuro Shield P，Parapleuro Shield P+BE, Rhinicell FD, Rhini Shield
TX4，Prefarrow Shield 9，Prefarrow strep SliieM⑩，Ciostratox BCD, Ciostratox⑩
c- Ciostratox Ultra C1300, Porcine EcoMzei 3+C, Porcine Pili Shield T +C,
Porcine Pili Shield 'r^Porcine Ecolizer 3, Ery Serum 1^Ery Shield Ery Vac
Oral, Ery Shield +L5, PanSTAR Ery, Erycell Pai'VO Shield E, Parvo Shield L5E，Parvo Shield L5, Parvo Shield , Para Shield , PneumoSTAR SIV, PneumoSTAR
Myco, Lepto Shield 5, Myco ShieWTySalmo Shield 2，Salmo Shield
Live, Amitox I Cl' . Perfingens Type A Toxoid (都來自 Novartis Animal Health, Basel, Switzerland) ; Nitro-Sal (Akro);或任何包含在上述組合物中的抗原。或者，當PCV2抗原已存在于任何那些疫苗中時，將(i)如本文所述的PCV抗原添加到這些組合物/抗原的任一者中，或(ii)將這些組合物/抗原的任一者中的PCV抗原用本文所述的PCV2抗原替代。配制劑(formulations)本發明的一項重要方面是制備組合疫苗(combination vaccines)。本領域技術人員知道可包含在該組合物中的額外組分(還參見Remington ' s PharmaceuticalSciences. (1990).第18版Mack Publ.，Easton)。專家可使用已知的注射用、在生理學上可接受的無菌溶液。為了制備立即可用的非經腸注射或輸液用溶液，可容易地獲得等張水溶液，例如生理鹽水或相應的血漿蛋白質溶液。藥物組合物可以冷凍干燥或干制備物的形式存在，可在使用之前，在無菌的條件下直接以已知的注射用溶液加以重建，例如作為包含多個部分的試劑盒。
此外，本發明之免疫和疫苗組合物可包含一種或多種在獸醫上可接受的載體。當在本文中使用時，〃獸醫上可接受之載體〃包括任何和所有的溶劑、分散介質、包衣(coatings)、佐劑、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌和抗真菌劑、等張劑、延遲吸收的試劑，
坐坐寸寸o稀釋劑可包括水、生理鹽水、右旋糖、乙醇、甘油等等。等張劑可包括氯化鈉、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇和乳糖等等。穩定劑包括白蛋白和乙二胺四乙酸的堿金屬鹽類等
坐寸o優選的佐劑是上述的那些。免疫原性組合物更可包含一種或多種其它的免疫調節劑，例如白介素、干擾素或其它的細胞因子。免疫原性組合物還可包括慶大霉素和硫柳汞。在本發明之語境中所使用的佐劑和添加物的含量或濃度，可由本領域技術人員容易地 確定，本發明意圖涵蓋包括從大約50微克到大約2000微克佐劑的組合物，而更優選大約250 y g/ml劑量的疫苗組合物。在另一優選的具體實施方案中，本發明意圖涵蓋包括從大約
IU g/ml到大約60 u g/ml抗生素，更優選低于大約30 u g/ml的抗生素的疫苗組合物。根據更進一步的具體實施方案，首先將組合疫苗脫水。若先通過其它方法將該組合物冷凍干燥或脫水，然后在接種疫苗之前，以含水(例如生理鹽水、PBS (磷酸緩沖之生理鹽水))或非-含水溶液(例如油乳劑(以礦物油或植物/可代謝油為基礎/單或雙乳劑為基礎)、以招為基礎、以卡波姆(carbomer)為基礎的佐劑)，將該組合物再水合。劑量和施用根據本發明，施用于豬的有效量的組合疫苗能提供對抗PCV2和上文列舉之至少一種額外病原體引起之微生物感染的有效免疫力。上文列舉了用以治療和預防微生物學疾病之抗原的優選組合。根據更進一步的具體實施方案，以大約2至4周的間隔，將I或2個劑量的組合疫苗施用于豬。例如，當動物大約2至3周到大約8周大時，進行第一次施用。在第一次疫苗接種的第一次施用之后大約I至大約4周，進行第二次施用。根據更進一步的具體實施方案，在施用第二個劑量之后間隔3至12個月進行再接種。后續疫苗劑量的施用優選每6個月到一年進行一次。在另一優選的具體實施方案中，在大約2至3周齡之前接種疫苗的動物應再接種。后續疫苗劑量的施用優選每年一次。組合疫苗的有效量，將視疫苗的成分和施用時間表而定。通常，當在組合疫苗中使用失活病毒或經修飾的活病毒制備物時，疫苗每個劑量含有大約IO2至大約IO9TCID5tl，優選的是每個劑量大約IO3至大約IO8TCID5tl，更優選每個劑量大約IO4至大約IO8TCID5tlt5 —般而言，失活抗原的用量通常比經修飾的活病毒更高。通常，當在組合疫苗中使用細菌抗原時，該疫苗每個劑量含有大約IO3至大約IO9個菌落形成單位(CFU)，優選每個劑量大約IO4到大約IO8(CFU)，更優選每個劑量大約IO5到大約IO6(CFU)。亞單位疫苗通常以每個劑量至少
0.2微克抗原的抗原包含水平來施用，優選的是大約0. 2到大約400微克/劑量，更優選大約0. 3到大約200微克/劑量，甚至更優選大約0. 35到大約100微克/劑量，甚至更優選大約0. 4到大約50微克/劑量，甚至更優選大約0. 45到大約30微克/劑量，甚至更優選大約0. 6到大約15微克/劑量，甚至更優選大約0. 75到大約8微克/劑量，甚至更優選大約
1.0到大約6微克/劑量，而甚至更優選大約I. 3到大約3. 0微克/劑量。例如，PCV20RF2抗原的抗原包含水平，優選的是本文提供的PCV2 0RF2蛋白質，含有大約2微克到大約150微克，更優選大約2微克到大約60微克，甚至更優選大約2微克到大約50微克，甚至更優選大約2微克到大約40微克，甚至更優選大約2微克到大約30微克，甚至更優選大約2微克到大約25微克，甚至更優選大約2微克到大約20微克，甚至更優選大約4微克到大約20微克，而甚至更優選大約4微克到大約16微克。在包含(37)的組合疫苗的情況下，優選是使用至少I至10個log,更優選5-10個log,最優選的是6-8個log。在包含(41)的組合疫苗的情況下，優選使用至少I至10個log,更優選3-10個log,最優選的是5-6個log。可以皮內(intradermally)、氣管內或陰道內之方式施用根據本發明之組合物。優選是以肌肉內或鼻內之方式施用該組合物。在動物身上，可證明依上文所述通過靜脈內或通過直接注射至靶組織來施用所述藥物組合物是有利的。對于全身施用，靜脈內、血管內、肌肉內、鼻內、動脈內、腹腔內、口服或鞘內路徑是優選的。更多局部應用可通過皮下、皮內(intradermally)、皮內(intracutaneously)、心臟內、葉內(intralobally)、髓內、肺內，或直接或在接近待治療之組織處(結締組織、骨組織、肌肉組織、神經組織、表皮組織)實施。依據期望的治療期間和效力，可施用根據本發明之組合物一或多次，還可間歇地施用，例如按日為基礎，持續數天、周或月，并以不同的劑量。治療方法 本發明另一重要的實施方案，是預防或治療由PCV2以及一種或多種豬致病性微生物引起的疾病的方法，其中以適當的劑量，將PCV2抗原(優選本文提供的PCV2 0RF2蛋白質)和額外的免疫學活性組分施用于有需要的動物，所述額外的免疫學活性組分可有效治療和/或預防由所述其他豬致病性微生物引起的感染。根據更進一步的方面，該PCV2 0RF2蛋白質是上文所述的抗原性組合物的一部分。因此，本發明的另一項方面涉及組合疫苗，其包括本文提供的任一種抗原性組合物，且其包括PCV2 0RF2蛋白質和可有效治療和/或預防由所述其他豬致病性微生物引起的感染的其他免疫學活性組分。附圖
簡要說明圖I為PCV2 0RF2重組桿狀病毒的優選構建過程的流程圖，以及圖2a和2b分別為如何產生根據本發明之組合物的流程圖。優選實施方式詳述下列實施例展示根據本發明之優選的材料和程序。然而，應了解這些實施例僅為了解釋而提供，其中任何內容均不應視為對本發明之全部范圍的限制。實施例I本實施例比較使用本發明之方法和現有技術中已知的方法的0RF2的相對產率。以大約I. OxlO6個Sf+細胞/mL，在300mL昆蟲不含血清的培養基Excell 420 (JRHBiosciences, Inc. , Lenexa, KS)中，分別接種四個 IOOOmL轉瓶(spinner flask)。母細胞培養物(master cell culture)鑒定為 Sf+(草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)母細胞忙備物，第19代，批號#N112_095W。用來產制Sf+母細胞貯備物的細胞系獲自Protein SciencesCorporation, Inc. , Meriden, CT。用于本實施例之Sf+細胞株限制在第19至59代之間。其它的代數也可用于本發明的目的，但為了將過程放大以供大規模生產，至少傳代至19代或許是必要的，而傳代超過59代可能對表達有影響，雖然對此沒有進行研究。更詳細地說，使來自液氮儲存的起始Sf+細胞培養物在無菌轉瓶中恒定攪拌下懸浮生長于Excell 420培養基中。使培養物生長在裝有25至150mL的Excell 420無血清培養基的IOOmL至250mL轉瓶中。當細胞繁殖至I. 0-8. OxlO6個細胞/mL的密度時，以0. 5-1. 5xl06個細胞/mL的種植密度，將它們分配至新的容器中。接下來的培養物培養在尺寸最多達36升的轉瓶中，或最多300升的不銹鋼生物反應器中，在25-29°C下持續2-7天。在接種之后，在27°C下培養燒瓶4小時。然后，以含有PCV2 0RF2基因(SEQ IDNO: 4)的重組桿狀病毒接種每個燒瓶。如下制備含有PCV2 0RF2基因的重組桿狀病毒以PCR擴增來自PCV2之北美株系的PCV2 0RF2基因，使其含有5' Kozak' s序列(SEQ IDNO: I)和 3' EcoRl 位點(SEQ ID NO:2)，克隆至Ij pGEM-T-Easy 載體(Promega, Madison, WI)內。然后，接著將其切下并亞克隆到轉移載體pVL 1392 (BD Biosciences Pharmingen, SanDiego, CA)內。在本文中該亞克隆的部分以SEQ ID N0:7表示。將含有PCV2 0RF2基因的
PVL1392 質粒命名為 N47-064Y，然后與 BaculoGokr (BD Biosciences Pharmingen)桿狀
病毒DNA共轉染到Sf+昆蟲細胞(Protein Sciences, Meriden, CT)內，產生含有PCV2 0RF2基因的重組桿狀病毒。該新的構建體在本文中以SEQ ID N0:8表示。噬斑純化含有PCV20RF2的重組桿狀病毒，且使母病毒種株(Master Seed Virus, MSV)在SF+細胞株中增殖、分 成等份試樣且儲存于_70°C。使用桿狀病毒特異性引物的PCR-RFLP，將MSV肯定地鑒定為PCV2 0RF2桿狀病毒。在間接熒光抗體測定中利用多克隆血清或單克隆抗體檢測到感染了PCV2 0RF2桿狀病毒而產生MSV或工作病毒種株(Working Seed Virus)的昆蟲細胞表達PCV2 0RF2抗原。另外，憑借N-末端氨基酸測序確認了 PCV2 0RF2桿狀病毒的身份。還根據9C.F.R. 113. 27(c)、113. 28及113. 55測試了 PCV2 0RF2桿狀病毒MSV的純度。接種于轉瓶中的每一重組桿狀病毒具有不同的病毒感染復數(MOI)。將瓶I用7. 52mL的.088M0I的種株接種;瓶2用3. OlmL的0. 36M0I的種株接種;瓶3用I. 5mL的0. 18M0I的種株接種；將瓶4用0. 75mL的0. 09M0I的種株接種。本文提供構建PCV2 0RF2重組桿狀病毒的基本步驟的示意性流程圖作為圖I。用桿狀病毒接種后，隨后將轉瓶在27°C ±2°C下培養7天，同時還在IOOrpm下攪動。所述轉瓶使用通風蓋以允許空氣流動。對于接下來的7天，每24小時自每一轉瓶取樣品。提取(extraction)后，將每一樣品離心并將離心沉淀及上清液兩者分離，隨后經由
0.45 V- m-1. Oum孔徑的膜微過濾。隨后，通過ELISA測定定量所得樣品中存在的0RF2的量。用蛋白G純化的豬抗PCV2 Pab IgG (在PBS中1:250稀釋)作為捕捉抗體，在0. 05M碳酸鹽緩沖液(pH9. 6)中稀釋至1:6000進行ELISA測定。隨后，將100 u L抗體置于微量滴定板的孔中，密封，并在37°C下溫育過夜。隨后，用包含 0. 5mL Tween 20 (Sigma, St. Louis, MO)、IOOmL 10X D-PBS (GibcoInvitrogen, Carlsbad, CA)及899. 5mL蒸懼水的洗漆溶液將板洗漆三次。隨后,將250 u L封閉溶液(5g Carnation脫脂奶粉(Nestle, Glendale, CA)加于IOmLD-PBS中，用蒸懼水補至IOOmL)添加至每個孔中。下一步為洗滌測試板，然后添加預稀釋的抗原。預稀釋抗原的制備是通過將200 U L稀釋劑溶液(999. 5mL D-PBS中加0. 5mL Tween 20)添加到稀釋板上的每個孔中。隨后，將樣品以1:240的比率及1:480的比率稀釋，且隨后將這些稀釋樣品中的每一個取IOOii L，添加至稀釋板上的一個頂部孔中(即，一個頂部孔容納IOOiiL的1:240的稀釋物，另一個頂部孔容納IOOy L的1:480的稀釋物)。隨后在板的剩余部分上進行連續稀釋，即連續地從一個孔移出IOOy L轉移至板上相鄰的下一個孔中。每個孔在進行下一次轉移之前先混合。測試板的洗滌包括用洗滌緩沖液洗滌該板三次。隨后，將該板密封并在37°C溫育一小時，然后用洗滌緩沖液再洗滌三次。所使用的檢測抗體為PCV 0RF2的單克隆抗體。將檢測抗體以稀釋劑溶液稀釋至1:300，然后將100 u L經稀釋的檢測抗體添加至孔中。隨后，將板密封并在37°C溫育一小時，然后用洗滌緩沖液洗滌三次。隨后，將正常兔血清(Jackson Immunoresearch, West Grove, PA)添加至稀釋劑溶液中至1%濃度而制成偶聯稀釋劑。將山羊抗小鼠的偶聯抗體(H+l)-HRP (Jackson Immunoresearch)用偶聯稀釋劑稀釋至1:10，000。隨后，將100 u L經稀釋的偶聯抗體添加至每個孔中。隨后，將該板密封并在37°C溫育45分鐘，然后用洗滌緩沖液洗滌三次。將與等體積過氧化物酶底物B(KPL)混合的 IQQ U L 底物(TMB 過氧化物酶底物，Kirkgaard and Perry Laboratories (KPL),Gaithersberg，MD)添加至每個孔中。將板在室溫下溫育15分鐘。隨后，向所有孔中添加IOOu L的IN HCl以終止反應。隨后，使該板通過ELISA讀取器。此測定的結果提供于以下表I中表I
天數j轉瓶~ 離心沉淀中的0RF2(ug)~ 上清液中的0RF2(ug)~
~ I47.5312
~257.4622
~353.4414
~458.6412
~ I43.0144
~265.6162
~370. 5632
~464.9724
~5 I31. 74100
~5234.93142
~5347.8490
~5455. 1486
~6 ITUi158
~6218.13182
~6334.78140
權利要求
1.一種多價組合疫苗，包括對減少2型豬圓環病毒感染的發生或減輕2型豬圓環病毒感染的嚴重性有效的免疫學作用劑，以及至少ー種能有效對抗在豬中引起疾病的其它生物的免疫原活性組分。
2.權利要求I的多價組合疫苗，其中所述對減少2型豬圓環病毒感染的發生或減輕2型豬圓環病毒感染的嚴重性有效的免疫學作用劑是2型豬圓環病毒抗原。
3.權利要求2的多價組合疫苗，其中所述2型豬圓環病毒抗原是失活的2型豬圓環病毒抗原、活的經修飾或減毒的2型豬圓環病毒、包含2型豬圓環病毒的至少ー種免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒、或包含2型豬圓環病毒的至少ー種免疫原氨基酸序列的任何其它多肽或組分。
4.權利要求I至3中任ー項的多價組合疫苗，其中所述2型豬圓環病毒抗原是由與2型豬圓環病毒的0RF2具有至少80%序列同一性的DNA序列所編碼的蛋白質。
5.權利要求I至4中任ー項的多價組合疫苗，其中該2型豬圓環病毒抗原是由桿狀病毒表達的ORF2抗原。
6.權利要求I至4中任ー項的多價組合疫苗，其中所述能有效對抗在豬中引起疾病的其它生物的免疫原活性組分選自由下列生物的抗原所組成的群組大葉性肺炎放線桿菌；腺病毒；α病毒，如東方馬腦脊髄炎病毒；支氣管炎博德特氏菌；短螺旋體屬菌種，優選豬痢疾短螺旋體；結腸菌毛樣短螺旋體，豬布魯氏菌，優選生物型1、2和3 ;經典豬瘟病毒；梭菌屬菌種，優選艱難梭菌、產氣莢膜梭菌Α、B和C型、諾氏梭菌、敗毒梭菌、破傷風梭菌；冠狀病毒，優選豬呼吸道冠狀病毒；豬血蟲體；豬紅斑丹毒絲菌；大腸桿菌；副豬嗜血桿菌，優選亞型1、7和14 ;凝血性腦脊髄炎病毒；日本腦炎病毒；細胞內勞索尼亞氏菌；鉤端螺旋體屬，優選澳大利亞鉤端螺旋體；犬鉤端螺旋體；流感傷寒鉤端螺旋體；出血黃疸鉤端螺旋體；和問號鉤端螺旋體；波摩那鉤端螺旋體；塔拉索夫鉤端螺旋體；分枝桿菌屬菌種，優選鳥分枝桿菌、胞內分枝桿菌和牛分枝桿菌；豬肺炎枝原體；多殺巴斯德氏菌；豬巨細胞病毒；豬細小病毒；豬生殖與呼吸綜合征(PRRS)病毒；假狂犬病病毒；輪狀病毒；沙門氏菌屬菌種，優選鼠傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌；豬葡萄球菌；葡萄球菌屬菌種，優選鏈球菌屬菌種，優選豬鏈球菌；豬皰疹病毒；豬流感病毒；豬痘病毒；豬痘病毒；水泡性口炎病毒和豬水皰疫病毒。
7.權利要求1-6任ー項的多價組合疫苗，其中所述能有效對抗在豬中引起疾病的其它生物的免疫原活性組分選自由下列物質中包含的抗原或它們的組合所組成的群組Enterisol⑩ ileitis, Enterisol⑩ ileitis ff, Enterisol sc-54, Enterisol SC-54FF, Enterisol ery-alc, Ingelvac app alc, Ingelvac AR4, Ingelvac hp-i, Ingelvac hpe-i, IngelvacD M. hyo, Ingelvac PRRS mlv, Ingelvac PRRS atp, Ingelvac prv-gi, Reprocyc prrsPLE, Reprocyc PLE, Tetguard , Toxivac AD+E, Toxivac PlusParsius,(都產自 Boehringer Ingelheim, St. Joseph, MO, USA);Circovent, Porcilis Coli,PorcilisERY+PARVO，Porcilis EryjPorcilis GlasserjPorcilis ParvojPorcilis PorcoliDF，Porcilis APP，Porcilis AR-T，Porcilis AR-T DF，Porcilis Porcoli，PorcilisPorcoli Diluvac forte,PorciIis PRRS，PorciIis Porco I 5,PorciIisAujeszkyj Porcilis Begonia Diluvac，Porcilis Begonia I. D. A. L. ,Porcilis BegoniaUnisole, Porcilis M. hyo, Porcilis Atrinord, Myco SilenCP * BPM, Myco Siicnccr·^'BPME, Myco Silencer me, Myco Silencer m, Myco Silencer Once, Myco Silencer MEH, Rhinogen bpe, Rhinogen CTE 5000，Rhinogen CTSE，Score, SowE 11, Sow BaC(g CE 11, Sow Bae trec, ProSystem CE, Pro System RCE，ProSystem trec，ProSystem Pillmune，ProSystem Rotamune 與 Imugan I I， ProSystem Rota, ProSystem RotamuneKV, ProSystem. 了(__i-「niune⑩ Rota 與 Imugai⑩ 11，ProSystem tge/Rota, ProSystem TG Emune 與 Imugen ， ProSystem TGEj MaGESTic·7，MaGESTIC 8，MaGESTic 與 Spur ，MaGESTic 7 與 Spur 5 MaGESTie⑩ 8 與Spur , End-FLUenee 與 taugen II，Efid-FLUence 2，PRRomiSE ,PRV-Begonia 與 Dlluvac Forte ，ArgllS SC/ST, Strep Bacj Strep BftC 與ImUiUCll巾II, Colisorbj Heptavacj Lambivacj Porcovac plus, Erysorb Parvo (都產自 Intervet Inc.，MillsborojDEj USA);HyorespjCircovacjNeocolipor，ParvoruvacjParvosuin,Progressisj Virafluj Akipor 6. 3,Jespur gl-，JesfIu gl-(都來自 MerialLTD, Duluth, GA); ER BAG* plus, ER BAC , ER BAG PLUSZLEPTOFERM-Se'ER BAC Leptoferm-5_, Farrowsure , Farrowsure B，FARROWSUREi^PLUS B, FARROWSURli PLUS, FARROWS! IRF h PRV, FARROWSURE B-PRV，FLUSURE , FLUSURE RTU, FLUSURE /ER BAC PLUS, FLUSURE /ER BAC PLUS ,J； ] I [ [ I j； I ....R j；I 1.7 I ミ]；J Ij； TM ,.R |； | 義 fR T u，FLUSURE -'"RRSPISUEE -ONE*/ER BAC* plus, Flusuretm/RespiSure I ONE /ER BAC Plus , FLUSURE /RESP I SURE ONE.8,FLUSURE /RESPISURE I ONE , FLUSURE/Farrowsure Plus, FLUSURE/FarrowsurePlus B, LITTERGUARD* LT-C，LITTERGUARD* LT，PlenroGnard"1·4，Pneumosuis III，Stellamune One, Stellamune UnojStellamune Once, StellamuneMono, Stel lamune Mycoplasma，Resp i sure One， Respisure , RespisureI ONE , Respi sure I One /ER Bac Plus , Enduracel I T, Zylexis (原名 Baypamune), AtTObaC 3， BratiVilC , BratfVaC -B Leptofenii-5 rMI^rvo-Vac(Rv'Lepiofenn-5 } PR-Vacig--Killed, PR-Vac ,PR-Vac Plus (都來自 Pfizer Inc. , New York, NY, USA) ; Suvaxyn MHOne, Suvaxyn RespiFend MH, Suvaxyn Mycoplasma，Suvaxyn AujeszkyBartha+Diluent，Suvaxyn Aujeszky Bartha+o/w, Suvaxyn Aujeszky-FlujSuvaxynAujeszky 783+o/w, Suvaxyn Eryj Suvaxyn Flu, Suvaxyn M. hyo, Suvaxyn MH-Onej SuvaxynParvo ST, Suvaxyn Parvo/E, Suvaxyn RespiFend APP, Suvaxyn RespiFeild HPSj Suvaxyn RespiFeild MH/HPS, Suvaxyn RespiFend MH, Suvaxyn AR/T/Ej Suvaxyn· EC-4, Suvaxyn Ej Suvaxyn -Ei Suvaxyn E-oral, Suvaxyn PLEj Suvaxyn PLE/PrV gpl-, Suvaxyni) le+b，Suvaxyn ple+b, Suvaxyn PLE+B/PrV gpl-，Suvaxyn siv，Sirvaxyn siv/Mh-one，Suvaxyn P, Suvaxyn PrV gpl-, Slivaxyil PCV-20ne Shot (都來自 Fort Dodge Animal Health, OverlandPark, KS, USA (Wyeth) ; SCOURMUNE ,scourmune -c5 scourmune#-cr, ar-pac -pd+er,AR-PARAPAC 4 ER, M+ Rliusigen , M+PACS, MaxiVac Exce腿3’MaxiVac⑩ hini，MaxiVac H3N2，MaxiVadFLU, MaxiVac -M+,MaxiVac Excell ，MaxiVac Excell 3，PARAPAC , PNEU PAC , PNEU PAC⑩-ER,PNEU PAC +ER, PRV/Mar ker Gold , PRV/Mar ker Gold , PRV/Marker Goid -MaxiVaC FLU, Rhusigen , Gletvax 6，Covexin 8，M+PAC, Gletvaxplus, M-Parapac'iASS PAC (都來自 Schering-Plough Animal Health Corporation, Kenilworth, NJ, USA);AMERVAC-PRRS, AUSKIPRA-BK, AUSKIPRA-GN,⑶LISUIN-CL, COLISUIN-TP, ERYSIPRAVAC, GRIPORK, i 11 IM^ASUIS-Cil ASSI^R.. MYP RAVAC SUIS,NEUMOSUIN, PARVOSUIN, PARVOSUIN-MR, PARVOSUIN-MR/AD, RINIPRAVAC-DT, SUIPRAVAC-PRRS, SUIPRAVAC-RC, TOXIPRA PLUS (都來自 Laboratorios Hipra S. A. , Amer, Girona,Spain);Clostricol, ColiporcPlus, Haeppovac, Per-C-Porc, Porciparvac, RESPIPOR C ART+EP, RESPIPORC FLU,Respiporc M. HYO I SHOT,Rhusiovac, Rotlauf-Lebendimpfstoff, Salmoporc, Suisaloral, AK-vac MK35 (都來自 IDTImpfstoffwerk DessaTornau, Tornau, Germany) ;Mypravac Suis, (Albrecht GmbH, Germany) ; Haemo Shield'JvP，Parapleuro Shield P, Parapleuro Shield P+BE，Rhillicell FD，Rhini Shield TX4，Prefarrow §hidd 9，Prefarrow Strep Shield , Clostratox BCD，CloStratGX#c, Clostratox ultra C1300, Porcine Ecolizer 3+C，Porcine Pili Shield +C Porcine Pili Shield Porcine Ecolizei# 3, Ery Serum Ery SMeld Eiy VacOral, Ery Shield +L5, PanSTAR Eryj EryccII1 ^Parvo Shield E, Parvo Shield L5E，Parvo Shield L5, Parvo Shield , Para Shield , P neumoSTAR SIVj PneumoSTAR My c o , Lepto Shiel d 5，Myco Shield SaImo Shield 2，Salmo Shield Live, Amitox Tet1^fC. Perfingens Type A Toxoid (都來自 Novartis Animal Health, Basel，Switzerland);Nitro-Sal (Akro)。
全文摘要
本發明涉及多價PCV2免疫原性組合物和制備此類組合物的方法。本發明提供一種用于回收由豬2型圓環病毒可讀框2表達的蛋白質的改進方法。還提供一種重組PCV2ORF2蛋白，和包含PCV2ORF2蛋白的免疫原性組合物。此外，提供多價組合疫苗，它們包含能有效減少PCV2感染發病率或減輕其嚴重性的免疫劑，優選PCV2ORF2蛋白，或者一種包含PCV2ORF2蛋白的免疫原性組合物，以及對抗豬中其它致病生物的至少一種免疫原活性組分。
文檔編號A61K39/295GK102698263SQ20121014173
公開日2012年10月3日 申請日期2006年12月28日 優先權日2005年12月29日
發明者格雷格.尼采爾, 梅里爾.謝弗, 菲利普.韋恩.海斯, 邁克爾.B.魯夫, 馬克.艾科邁耶 申請人:貝林格爾.英格海姆維特梅迪卡有限公司