專利名稱：一種氯霉素免疫原的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種氯霉素免疫原，特別是涉及一種氯霉素免疫原的制備方法。
背景技術：
氯霉素免疫原的制備通常要實施合成氯霉素免疫原過程，然而，在合成氯霉素免 疫原過程中，現有的方法有混合酸酐法和重氮化法，前者操作步驟復雜，影響因素多，且使 用揮發性的氯甲酸異丁酯對人體有害；后者獲得的免疫原連接臂太短，免疫原性差。并且， 現有方法所花費的時間需要80小時左右，這樣，會使得合成氯霉素免疫原過程延長，造成 生產效率降低，產品成本增加，同時，對后續使用成本也隨著提高，另外，其偶聯比率一般僅 在4-12左右。
發明內容
本發明的目的是要提供一種改進的氯霉素免疫原的制備方法，它不但能有效地制 得氯霉素免疫原，而且，操作過程簡單，生產效率高。 為了達到上述的目的本發明是這樣實現的本發明的氯霉素免疫原的制備方法包 括下列主要步驟 (i)將牛血清蛋白、氯霉素琥珀酸鈉、碳二亞胺，以摩爾比i : 50 : 1200分別溶解
在磷酸鹽緩沖液中，然后將三種溶液混合，在室溫下反應2小時，期間緩慢搖動使溶液充分 反應； (2)將反應后的液體裝入透析袋內，再放入1L磷酸緩沖液中透析48小時，每8小 時換液一次； (3)收集透析袋內的液體，在-20°〇預冷凍2小時，然后在-50°〇下冷凍干燥，得到 氯霉素免疫原的白色固體粉末。 所述的磷酸緩沖液是ra為7. 4，含量為0. Olmol/L的磷酸緩沖液。 所述的透析袋是半周長為22mm，截留分子量為14000的透析袋。 由于本發明改進了現有的氯霉素免疫原的制備方法，且具有如下優點 1、通過該方法，成功的制備氯霉素免疫原，在合成氯霉素免疫原過程中，使用的是
氯霉素衍生物氯霉素琥珀酸鈉，并采用碳二亞胺一步法。目前該方法還沒有在其他氯霉素
免疫原的合成中見到。 2、通過該方法，制備氯霉素免疫原，使制備過程得到了簡化，大大節約了制備免疫 原的時間，以往需要分兩個步驟進行偶聯合成，而使用本方法只需要一個步驟即可以完成， 按照以往的方法制備免疫原需要80小時左右，而使用本方法只需要50小時左右，這樣使制 備過程得到了簡化，大大節約了制備氯霉素免疫原的時間，提高了生產效率，其效率可提高 37.5%左右，并且，也降低了生產成本。 3、通過該方法，制備氯霉素免疫原，使得偶聯比率大大提高，以往偶聯比率一般在 4-12左右，而采用本方法制備的免疫原的偶聯比率在25-36之間，為進一步提高氯霉素藥物殘留酶聯免疫檢測方法的準確度和靈敏度奠定了堅實的基礎。并且，還有利于普及推廣 應用。
具體實施例方式
以下將對本發明的一種氯霉素免疫原的制備方法作進一步的詳細描述。
具體步驟如下 1、稱取8. 5g的氯化鈉、2. 85g磷酸氫二鈉、0. 2g氯化鉀，O. 27g磷酸二氫鉀加入 800ml的蒸餾水，調節ra(酸堿度)至7.4，再加入蒸餾水，配置成1000mL，濃度為0.01mo1/ L的磷酸緩沖液； 2、稱取10mg(0.45iimo1)的牛血清蛋白加入2ml的磷酸緩沖液(ffl為7. 4，含量為 0. Olmol/L)制成5mg/mL的牛血清蛋白水溶液； 3、稱取10mg(22. 5 y mol)的氯霉素琥珀酸鈉加入2ml的磷酸緩沖液(ffl為7. 4，含 量為0. Olmol/L)制成5mg/mL的氯霉素水溶液； 4、稱取104mg (540 y mol)碳二亞胺加入lml磷酸緩沖液(PH為7. 4，含量為 0. Olmol/L)制成104mg/ml的水溶液； 5、在10mL的離心管中分別加入5mg/mL的牛血清溶液2ml、 104mg/mL的碳二亞胺 水溶液lml，混勻后加入20mg/mL的氯霉素琥珀酸鈉水溶液2mL，在室溫下反應2小時；
6、將反應好的液體加入透析袋(半周長22mm，截留分子量14000)中，放入裝有1L 磷酸緩沖液。H為7. 4，含量為0. Olmol/L)的燒杯中，透析48小時，每8小時換液一次；
7、將透析好的液體，在_201:預冷凍2小時，然后在-S(TC下冷凍干燥，制得氯霉素 免疫原的白色固體粉末。
權利要求
一種氯霉素免疫原的制備方法，其特征在于包括下列主要步驟(1)將牛血清蛋白、氯霉素琥珀酸鈉、碳二亞胺，以摩爾比1∶50∶1200分別溶解在磷酸鹽緩沖液中，然后將三種溶液混合，在室溫下反應2小時，期間緩慢搖動使溶液充分反應；(2)將反應后的液體裝入透析袋內，再放入1L磷酸緩沖液中透析48小時，每8小時換液一次；(3)收集透析袋內的液體，在-20℃預冷凍2小時，然后在-50℃下冷凍干燥，得到氯霉素免疫原的白色固體粉末。
2. 根據權利要求1所述的一種氯霉素免疫原的制備方法，其特征在于所述的磷酸緩沖 液是ra為7. 4，含量為0. Olmol/L的磷酸緩沖液。
3. 根據權利要求1所述的一種氯霉素免疫原的制備方法，其特征在于所述的透析袋是 半周長為22mm，截留分子量為14000的透析袋。
全文摘要
一種氯霉素免疫原的制備方法。其特征在于包括下列主要步驟將牛血清蛋白、氯霉素琥珀酸鈉、碳二亞胺，以摩爾比1∶50∶1200分別溶解在磷酸鹽緩沖液中，然后將三種溶液混合，在室溫下反應2小時，期間緩慢搖動使溶液充分反應；將反應后的液體裝入透析袋內，再放入1L磷酸緩沖液中透析48小時，每8小時換液一次；收集透析袋內的液體，在-20℃預冷凍2小時，然后在-50℃下冷凍干燥，得到氯霉素免疫原的白色固體粉末。本發明的氯霉素免疫原的制備方法不但能有效地制得氯霉素免疫原，而且，操作過程簡單，生產效率高。為提高氯霉素藥物殘留酶聯免疫檢測方法的準確度和靈敏度奠定了堅實的基礎。并且，還有利于普及推廣應用。
文檔編號G01N33/53GK101759799SQ20081020769
公開日2010年6月30日 申請日期2008年12月25日 優先權日2008年12月25日
發明者姜有聲, 方偉, 楊先樂, 胡鯤, 黃宣運 申請人:上海海洋大學