專利名稱：一種具有保肝降酶作用的中藥制劑及其生產方法
技術領域：
本發明屬于中醫藥領域,涉及以火炭母(寥科植物火炭母Polygonum chinenseL.的全草)為原料制備中藥制劑的方法，以及該中藥制劑的抗乙肝病毒和保肝降酶藥效學試
驗結果。
背景技術：
火炭母為寥科植物火炭母Polygonum chinense L.的全草。其味辛、苦, 性涼,有毒，具有清熱利濕，涼血解毒，平肝明目，活血舒筋的功效；主治痢疾，泄瀉，咽喉腫痛，白喉，百日咳，肝炎，帶下，癰腫，濕疹，角膜云翳，跌打損傷等[國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草.第2卷.上海上海科學技術出版社，1999 :647-649]。火炭母藥材資源豐富，我國中東部與西南各省均產，為民間常用的的中草藥之一。有關火炭母的藥理作用，現有研究文獻報道的不多。主要有抗菌作用[胡海濱.“耐藥菌株”中草藥篩選試驗的研究.廣東醫藥學院學報，1990，6 (I) :40-41]、抗腫瘤[韋金育等.50種廣西常用中草藥、壯藥抗腫瘤作用的篩選研究.廣西中醫藥大學學報，2003,6(4) 3-7]和抗病毒作用[張正等.60種中草藥抗乙型肝炎病毒的實驗研究.北京醫科大學學報，1988，3 (20) :211-213]。至2012年4月26日，已公開的、與火炭母有關的專利文獻共計45條，其中發明專利44條，全部是復方中藥制劑。以火炭母為單方開發的中藥制劑，尚未見有專利文獻報道。綜上所述，本發明具有充分的新穎性、創造性和實用性。
發明內容
發明人從火炭母中制備一種具有保肝降酶作用的乙醇提取部位，并將這一有效部位制備成中藥制劑，這在國內尚未見有文獻報道過。本發明的技術方案述及了從火炭母中提取具有保肝降酶作用的有效部位的方法、將這一有效部位制備成中藥制劑的方法、以及對這一中藥制劑進行保肝降酶動物試驗的方法和結果。火炭母保肝降酶有效部位的提取方法，尚未見有文獻報道。發明人通過科學研究發現，火炭母保肝降酶的有效成分溶解于65%以上的乙醇中，因此，發明中采用65% 95%的乙醇水溶液回流提取。因醇提液中含有大量的色素和葉綠素，本發明采用D3tll樹脂脫除。提取得到的有效部位，可制備成供口服的中藥制劑，如片劑、口服液、顆粒劑等，其制法與文獻記載的相應劑型的制法是通用的。有效部位與藥用輔料的重量比例范圍如下制劑中含火炭母提取物0. 1% 99. 9%，余量為藥劑成型輔料。與現有技術相比，本發明突出的實質性特點和顯著的進步是首次公開了從火炭母中提取保肝降酶有效部位的方法、將該有效部位制備成片劑、口服液、顆粒劑的方法、以及對該中藥制劑進行保肝降酶動物試驗的方法和結果。
具體實施例方式下列實施例子用于舉例說明本發明，并不是對本發明保護范圍的任何限制。一、下面是提取保肝降酶有效部位的實施例子提取實施例一火炭母全草，曬干，打成最粗粉，用12倍量70%乙醇水溶液回流提取2次，每次2小時；合并醇提液，濾過；濾液通過D3tll大孔樹脂柱(樹脂用量為藥材重量的3倍)，收集流出液，減壓濃縮至稀膏(藥材濃縮液=2:1，W/V)。提取實施例二 火炭母全草，曬干，打成最粗粉，用15倍量85%乙醇水溶液回流提取2次，每次2小時；合并醇提液，濾過；濾液通過D3tll大孔樹脂柱(樹脂用量為藥材重量的3倍)，收集流出液，減壓濃縮至稠膏(藥材濃縮液=4 1，W/V)，稠膏烘干，打成細粉(60-80 目)。 二、下面是將有效部位制備成藥物的實施例子藥物制劑實施例一按有效部位的得率計算，取相當于IOOOg火炭母生藥的有效部位干膏細粉，約重24g，加淀粉至總量100g，制粒，壓成片劑，素片重0. 3g，每片含火炭母生藥3g。藥物制劑實施例二 按有效部位的得率計算，取相當于IOOOg火炭母生藥的有效部位干膏細粉，約重35g,加糖粉至總量500g,制粒,得顆粒劑,分裝,每小包5g,每小包含火炭母生藥10g。藥物制劑實施例三按有效部位的得率計算，取相當于IOOOg火炭母生藥的有效部位稀膏，體積約500ml，加白砂糖1200g，加熱溶解，最后加水到2000ml，過濾，得口服液，分裝，每支IOml,每支含火炭母生藥5g。三、下面是藥理作用試驗方法及結果藥理實驗一對急性肝損傷的保護作用I. I分組及給藥取“藥物制劑實施例一”所得的片劑(以下稱為“火炭母片”)為實驗對象。取SPF級健康SD大鼠25只，雌雄兼用，體重為200+20g，實驗室飼養穩定2d后，隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、火炭母片高劑量組和火炭母片低劑量組共5組，每組5只。各組均灌胃給藥，每日I次，連續7d。火炭母片高劑量組和低劑量組灌胃劑量分別為2. Og kg'I. Og kg_i(按生藥量算)，陽性對照組聯苯雙酯劑量為0. 05g kg'空白對照組和模型組給予等體積蒸餾水。I. 2造模及取材末次給藥Ih后，空白對照組腹腔注射等體積花生油，其余各組分別皮下注射60%四氯化碳花生油溶5mL .kg—1，禁食不禁水24h后，摘除眼球取血，血液放置lh，3000r -min^1離心3min，取上層血清，-4°C冰箱中保存，供ALT、AST、MDA、SOD等生化指標的測定；同時取肝大葉組織于4%中性緩沖福爾馬林溶液中固定，供切片用。I. 3數據處理與統計分析各項實驗數據均以表示，對組間比較進行獨立樣本t檢驗，以EXcel2003統
計軟件進行統計。I. 4 結果I. 4. I血清生化指標
與空白對照組相比，模型組血清中ALT、AST和MDA活性均顯著升高，SOD活性顯著降低，說明模型建立成功；與模型組相比，火炭母片高、低劑量組血清ALT和MDA活性均較模型組明顯降低，SOD均較模型組明顯升高，AST活性無明顯改變。血清生化指標結果表明，火炭母片對四氯化碳致大鼠肝損傷具有保護作用，提示火炭母片對肝細胞的保護可能是通過抗自由基，抑制脂質過氧化機制而發揮作用。見表I。表I火炭母片對四氯化碳致大鼠肝損傷血清生化指標的影響
iaij 劑量(生藥量)ALTASTMDASOD
(g kg'1)(IU L'1)(IU-L'1) (nmol mL'1) (U mL-1)
空白對照組-10.5±7.28** 45.41±5.56** 2.76±0.42** 179.16±1.93**
模型組-254.06±18.67 164.94±28.71 4.57±0.55 173.68士1.81
陽性對照組0.0533.39±11.37** 82.24±30.55** 2.07±0.97** 178.03±1.99*
高劑量組2.0119.94±23.10** 142.24±12.28 3.26±0.47** 178.03士] .65*
低劑量組_LO_128.50士25.58** 147.41 土 15.40 3.42±0.58* 176.83±1.62
* :與模型組比較P < 0. 05，** :與模型組比較P < 0. 01。I. 4. 2組織病理觀察病理組織切片顯微鏡下觀察可見，空白對照組肝組織肝小葉結構清晰，肝細胞索以中央靜脈為中心，向四周呈放射狀，肝細胞為多邊形，核大、核膜清晰、核仁明顯；模型組肝組織損傷嚴重，肝小葉結構模糊不清，小葉內肝細胞廣泛水腫、空泡狀，有點狀及碎片狀壞死，伴中性粒細胞、單核細胞等炎癥細胞浸潤，病變以環中央靜脈分布為主；陽性對照組在中央靜脈周圍肝細胞輕度水腫，僅有少量小空泡狀病變；火炭母片高、低劑量組水腫程度輕微，有小空泡狀病變，無明顯組織壞死。病理組織切片結果表明，火炭母片對四氯化碳致大鼠肝損傷的肝細胞壞死程度有較大改善。(圖略)I. 5 結論火炭母醇提物對大鼠急性肝損傷具有良好保護作用。藥理實驗二體外抗乙肝病毒2. I試藥的配制含火炭母提取物試液的配制取“提取實施例二”所得的干膏lg，加入二甲基亞砜5OmL,配置濃度為0. 02g ^mL-1的藥液,無菌環境下用0. 22 y m的微孔濾器過濾,再用細胞培養液分別配制成16、8、4、2、1、0. 5mg rnL^1等6個不同濃度的藥液，置于4°C冰箱中保存，待用。PBS磷酸鹽緩沖溶液的配制取PBS磷酸緩沖鹽，用超純水配制成0. OlN(pH =7. 2 7. 4)的緩沖溶液，在無菌環境下用直徑為0. 22 y m的微孔濾器過濾，置于4°C冰箱中保存，待用。消化液的配制用PBS磷酸鹽緩沖溶液配制成0. 25%胰蛋白酶溶液，在無菌環境下用0. 22 的微孔濾器過濾，置于4°C冰箱中保存，待用。2. 2HepG2. 2. 15細胞株的復蘇與培養將液氮冷凍保存的H印G2. 2. 15細胞于37°C水浴融化后吸入離心管中，加入10倍量的培養液，混勻，IOOOr HiirT1低速離心，除去上清液，用培養液再清洗一次。然后將細胞株接種至培養瓶中，置細胞培養箱中在37°C、5% CO2環境下生長，視細胞生長情況每I 3d更換一次培養液。在長滿H印G 2. 2. 15細胞的培養瓶中，倒去培養液，加入0. 25 %胰酶，37°C消化3 4min，加培養液輕輕吹打成單細胞懸液，I 3傳代。待細胞長滿后再次消化，用細胞計數板計數后，加培養液稀釋成濃度為I X IO4個 mL—1的細胞懸液，接種于96孔細胞培養板中，每孔180iiL，37°C，5% CO2培養24h，細胞貼壁生長成單層后進行實驗。2. 3藥物對細胞毒性的檢測參照Mosmann建立的MTT法[13]檢測藥物對H印G2. 2. 15細胞生長的抑制作用。細胞貼壁生長成單層后，設置分別加入藥液20 u L，使培養液孔內終濃度為I. 6,0. 8,0. 4、
0.2,0. 1,0. 05,0. 025mg -L^1等7個濃度梯度組，同時設不加藥物的細胞對照組，每組重復5孔。藥物作用72h后，各孔加入MTT 20 u L并繼續培養4h。傾去上清液，加入PBS緩沖溶液清洗2次，倒置吸水紙上輕輕拍干，確保吸凈無殘留。每孔加入二甲基亞砜150 u 1，振蕩器上振蕩5min。用酶標儀在490nm處測定每孔的吸光值(OD)，計算細胞破壞率(見公式I)，以及運用藥物抑制濃度計算軟件I. 0. 0版(L0GIT法)計算藥物的半數有毒濃度TC5Q。
權利要求
1.一種中藥制劑，其特征在于以重量計，火炭母提取物在制劑中所占的比例為0.5% 99. 5%，余量為藥劑成型輔料。
2.根據權利要求I所述的中藥制劑，其特征在于制備方法如下①干火炭母粗粉，用濃度為65% 95%的乙醇水溶液回流提取；②醇提液流過D3tll大孔樹脂柱，以脫除色素和葉綠素，收集流出液；③流出液回收溶劑至稀膏；④制劑的制備方法有2種第一種稀膏中加入白砂糖粉，溶解，混勻，制成口服液；第二種稀膏進一步制成干膏，干膏打成細粉后與賦形輔料混勻，制成片劑、顆粒劑。
3.根據權利要求I所述的中藥制劑，其特征在于具有保肝降酶作用。
全文摘要
本發明屬于中醫藥領域，涉及一種具有抗乙肝病毒和保肝降酶作用的中藥制劑，特別是一種以火炭母(蓼科植物火炭母Polygonum chinense L.的全草)的提取物制成的中藥制劑；研究結果表明，該中藥制劑能抑制HBsAg和HBeAg的分泌，并且能顯著降低四氯化碳所致急性肝損傷大鼠的血清ALT和MDA，顯示出良好的保肝降酶作用。
文檔編號A61K36/704GK102697871SQ20121018399
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月6日 優先權日2012年6月6日
發明者張可鋒, 朱華, 王孝勛, 高雅 申請人:廣西中醫藥大學