專利名稱：一種smancs油性制劑、制備方法和用途的制作方法
技術領域：
[I]本實用新型涉及ー種大分子抗癌藥SMANCS的油性制劑，具有生物活性穩定性高，臨床應用方便的特點，屬于化學藥物領域。
背景技術：
[2]SMANCS是由前田浩等人所開發的，世界上最早的大分子抗癌藥(參考文獻:Maeda H, Ueda M, Morinaga T, Matsumoto T, Conjugation of poly、styrene-co_maleicacia)derivatives to the antitumor protein neocarzinostatin:pronouncedimprovements in pharmacological properties, J Med Chem.28 (4):455-61,1985),可以應用于多種腫瘤的治療，作為原發性肝癌(hepatocellular carcinoma)的治療藥物，以碘化油(Iipiodol)為載體的動脈注射的方法在1993年被日本厚生勞動省所批準。[3]在化學結構上，SMANCS是由蛋白抗癌藥新制癌菌素(NCS)和苯こ烯馬來酸聚合物(SMA)組成的高分子抗癌劑，具有羰基的苯こ烯馬來酸聚合物通過酰胺連接NCS上的兩個氨基，從而形成下述大分子結構:(SMA) — (NCS) — (SMA)，其分子量為15000，是ー種大分子藥物，在通常情況下穩定性較 差。[4]目前常用的SMANCS使用方法為在零下30°C以下保存，在使用前與碘化油混合(I毫克SMANCS溶于I毫升碘化油中)，通過超聲波處理制作成SMANCS/碘化油懸濁液，經過導管注入腫瘤營養動脈(通常選擇肝動脈作為肝癌的治療途徑)。[5]這種方法在用于臨床治療中存在以下問題:1)該藥物在冷藏及室溫保存時有失活的可能；2)該藥物在臨床使用時需要準備2種制劑(SMANCS及碘化油)，在醫療現場通過超聲波處理、混合，這種操作方法導致手術的準備時間延長；3)由于是現場臨時配制，醫生在手術中無法有效對藥物劑量進行調整，如增減劑量；4)由于不同的醫生或者助理醫生對現場混合制備掌握的熟練程度不同，藥物的混合容易因為實施者的差異出現個體偏差，從而使治療結果出現波動，不利于治療的規范化。[6]在近期的研究中，本領域技術人員嘗試過將SMANCS制成ロ服制劑從而增加使用上的便利，然而考慮到SMANCS的生物學特性和大分子量的特征，不易為人體內的蛋白多肽消化液所吸收，人體利用度較低。[7]因此本領域依舊急需ー種SMANCS的藥物制劑，從而滿足使用簡單、劑量靈活、標準化生產等需求。
發明內容
[8]針對現有技術存在的缺陷，本發明的目的是提供ー種SMANCS油性制劑，能夠在臨床需要注射時隨即使用，不需要臨床配制。[9]本發明的另ー個目的提供ー種SMANCS油性制劑，具有良好的粘度，可以使藥物更長時間的聚集于腫瘤，提高治療效果。[10]本發明的還ー個目的是提供ー種SMANCS油性制劑，腫瘤選擇性更強，具有更滿意的臨床治療效果。[11]本發明的還ー個目的是提供一種制備方法，用于獲得上述SMANCS油性制劑。[12]進ー步的，本發明還公開了上述SMANCS油性制劑的用途。[13]為實現上述目的，本發明是通過下述技術方案實現的:[14] ー種SMANCS油性制劑，是ー種單ー制劑，包含(I)活性成分:SMANCS，即苯こ烯馬來酸新制癌菌素；(2)具有良好生物相容性的油性材料:包含碘化油。[15]通過上述組成方案，本發明的SMANCS油性制劑在臨床應用前已經制備成為一種單ー的藥劑成品，在臨床使用時根據需要可以隨時使用，而不需要像傳統的SMANCS那樣需要臨床上當場配制，從而改善了使用上的方便性；同時由于在使用前油性制劑即可生產，因此可以提供多種不同濃度規格的制劑，可以有效對藥物劑量進行調整，從而使得SMANCS治療應用更加簡便化，規范化和高效化。[16]申請人通過大量實驗研究發現，通過增加SMANCS油性制劑的粘度可以使藥物更長時間的聚集于腫瘤，提高治療效果，因此相應的本發明還公開了ー種SMANCS油性制齊U，在上述基礎上，所述油性材料包含用于增加粘度的油性材料。[17]進ー步的，申請人通過研究發現，使用SMANCS治療癌癥時添加ー氧化氮可以增加SMANCS的腫瘤內傳送，因此相應的本發明提供了ー種SMANCS油性制劑，在上述基礎上含有一氧化氮供體，用于產生一氧化氮，所產生的一氧化氮是高脂溶性分子，可以在油劑中穩定存在，不會影響藥物的穩定性。[18]本發明公開的SMANCS油性制劑，由于可以在制備時調整各成分的用量，因此可以提供多種不同濃度規格的油性制劑，相對于目前市場上已有的Img SMANCS/lml碘化油的濃度，本發明可以提供更高的濃度范圍，從而大幅度増加治療的適應癥。同時從醫生角度來講，采用油性制劑臨床使用更加方便和規范，醫生可以根據具體情況選擇不同劑量的藥物進行治療；優選的是，SMANCS在油性制劑中的含量為l_2mg/ml，從而可以用于更廣泛的癌癥治療。[19]在本發明中，添加的用于增加粘度的油性材料的用量可以根據需要進行必要的調整，優選的是向碘化油中加入用于增加粘度的油性材料至用于增加粘度的油性材料濃度在油性制劑中的濃度(質量百分比)為5-10%。[20]在本發明中，一氧化氮供體在油性制劑中的含量需要考慮到既要產生一定量的ー氧化氮從而改善SMANCS的腫瘤內傳送效果，還需要考慮到一氧化氮在人體內的含量受到安全的限制，申請人通過實驗研究確定的一氧化氮供體在油性制劑中的用量為為1-100 Ii g/ml。[21]相應的，本發明提供了上述SMANCS油性制劑的制備方法，包括將SMANCS的凍結干燥品溶于具有良好生物相容性的油性材料中，或制成懸濁液，得到SMANCS的油性制劑的步驟。[22]當將其制備成含有增加粘度的油性材料的油性制劑時，具體的方法可以包括如下步驟:(1)將用于増加粘度的油性材料加入到碘化油中，在冰浴下用超聲波處理，使其完全溶解；(2)加入SMANCS，制成懸濁液，在冰浴下用超聲波使其完全溶解。[23]其中，所用的超聲波超聲的參數、時間等可以根據制備的需要由技術人員合理調整，本發明并不限制采用某個特定的參數，優選的，超聲波的超聲條件為:20-50kHz，0.2-0.5W/cm2。[24]優選的，步驟(I)的超聲波超聲時間為30秒-1分鐘；步驟(2)的超聲波超聲時間為3分鐘。[25]進ー步的，在上述制備方法的基礎上，還包括向SMANCS油性制劑中添加、溶解一氧化氮供體的步驟。[26]在上述制備方法中，通過調整SMANCS在油劑中的含量，可以制作成針對不同腫瘤的SMANCS油性制劑，從而獲得廣泛的濃度范圍。[27]相應的，本發明公開了上述SMANCS油性制劑在制備治療癌癥藥物中的用途。[28]在本發明的進ー步詳述和具體實施中，本發明公開了所用的各種成分的優選類型，以便更好、更清楚的說明本發明的發明實質，然而這種詳細描述并不構成對本發明的特別限制，不依靠這些細節信息而采用本發明技術領域其他通用的化學材料，只要其符合本發明上述對各組成成分作用所做的限定，依舊屬于本發明的保護范圍。[29]在本發明中，碘化油，英文名為Lipiodol,通常采用的是由法國LaboratorieGuerbet公司制造的。[30]在本發明中，用于增 加粘度的油性材料包括但不限于膽固醇，飽和脂肪酸(如棕櫚酸)，中鏈脂肪酸(如MCT，由日本NOF公司制造)及食用油(如橄欖油，芝麻油，豆油，花生油等)中的ー種和/或ー種以上的混合物。[31]在本發明中，所述的ー氧化氮供體包括但不限于硝化甘油，硝普納(SNP)，亞硝基こ酰青霉胺(SNAP)，3-嗎啉-悉尼酮亞胺(SIN-1)，硝酸異山梨酷(ISDN)，亞硝基こ酰半胱胺酸(SNO-NAC)，亞硝基谷胱甘肽(GSNO)，三硝基苯等芳香族硝基化合物，3-(2-羥基-1-甲基-2-亞硝基肼基)-N-甲基-1-丙胺N0C7等中的ー種和/或ー種以上的混合物。[32]在本發明中，由于能夠提供更廣泛的藥劑濃度，所述的采用SMANCS油性制劑治療的癌癥不僅包括傳統的原發性肝癌(肝細胞癌)，還包括能夠用于治療轉移性肝癌，膽囊癌，膽管癌，腎癌，卵巣癌，肺癌，癌性胸水，癌性腹水等傳統上認為的非SMANCS典型適應癥的腫瘤疾病。[33]在用于治療不同的癌癥時，所用的藥劑濃度是臨床研究和臨床如研究可以確定的，例如針對原發性肝癌，通常用lmg/ml的制劑，對于其他的例如轉移性肝癌，膽囊癌，腎癌等非SMANCS典型適應癥的腫瘤，高濃度的制劑(1.2-2.0mg/ml)采用動脈注射療法具有很好的治療效果，如腎癌及轉移性肝癌采用1.8mg/ml的制劑。[34]本發明的SMANCS油性制劑，具有生物活性穩定性高，臨床應用方便的特點，尤其是通過添加一氧化氮可進ー步提高藥物的腫瘤選擇性傳送，從而大幅度提高藥物的臨床治療效果。
[35]圖la、lb為本發明的油性制劑添加具有增加粘度作用的油性材料(膽固醇、棕櫚酸)粘度變化示意圖；[36]圖2為本發明油性制劑與其他制劑對比的溫度穩定性圖，顯示不同溫度孵育條件下的活性變化；[37]圖3為本發明油性制劑的由油系向水系的移行的示意[38]圖4為本發明油性制劑與其他制劑對比的對HeLa細胞的增殖抑制作用示意圖；[39]圖5為本發明的油性制劑與其他制劑對比的in vivo抗腫瘤效果示意圖。
具體實施例方式[40]實施例1[41] SMANCS與碘化油，制成1.5mg/ml的油性制劑。[42]實施例 2[43] SMANCS與碘化油，分別添加膽固醇，使膽固醇含量為1%、2%、4%、5%、6%、8%,制成1.5mg/ml的油性制劑。[44]實施例 3[45]SMANCS與碘化油，分別添加棕櫚酸，使棕櫚酸含量為5%、10%，制成1.5mg/ml的油性制劑。[46]實施例 4[47] SMANCS與碘化油,添加硝化甘油至濃度為IOy g/ml,制成兩種1.5mg/ml的腫瘤選擇性強化型油性制劑。[48]實施例 5[49]SMA NCS與碘化油，添加棕櫚酸至其濃度為5%、10%，添加硝化甘油至濃度為10 u g/ml,制成兩種1.5mg/ml的腫瘤選擇性強化型油性制劑。[50]實施例 6[51] SMANCS與碘化油，添加膽固醇至其濃度為5%、8 %，添加硝化甘油至濃度為10 u g/ml,制成兩種1.5mg/ml的腫瘤選擇性強化型油性制劑。[52]實施例 7[53]SMANCS與碘化油，分別添加棕櫚酸，使棕櫚酸含量為5%、10%，制成lmg/ml的油性制劑。[54]實施例 8[55] SMANCS與碘化油，添加硝化甘油至濃度為10 u g/ml，制成兩種lmg/ml的腫瘤選擇性強化型油性制劑。[56]實施例 9[57]SMANCS與碘化油，添加棕櫚酸至其濃度為5%、10%，添加硝化甘油至濃度為IOii g/ml,制成兩種lmg/ml的腫瘤選擇性強化型油性制劑。[58]基于同樣方法，通過調整SMANCS的用量可以得到其他濃度的油性制劑，例如
1.2mg/ml、2.0mg/ml等。在配制時,通常是以Iml碘化油為基準進行配制的,然而本領域技術人員容易得知，任意其他用量的碘化油，只要通過調整SMANCS與碘化油的用量比例，即可得到所要求的濃度。[59]對于以上實施例制備的油性制劑，申請人采用多種技術指標對其性能進行了測試。[60]在以下試驗檢測中，所采用的測試方法分別為:[61] 1.藥物濃度(活性)的測定方法
[62]方法1:與原藥新制癌菌素的活性測定方法相同，通過測定其對滕黃微球菌(Micrococcus Iuteus)增埴的抑制作用來評價。由于新制癌菌素及SMANCS對滕黃微球菌的抗菌活性與其抗腫瘤活性平行，所以該方法(細菌感受性試驗)，為標準的SMANCS活性測定、評價方法，具體方法為瓊脂擴散試驗(disk agar diffusion test),詳細的操作步驟為本領域技術人員所熟知，例如參考該文獻:Maeda H, Takeshita J, Yamashita A,Lymphotropic accumulation of an antitumor antibiotic protein,neocarzinostatin,Eur J Cancer.16(5):723-31,1980。[63]方法2:使用人宮頸癌培養細胞HeLa，通過測定其對該培養細胞的增殖抑制作用來評價。具體方法如下:將HeLa細胞(250-300個)置于直徑35毫米的培養皿(FALCON ,美國Becton Dickinson公司產品)中，加入含有10 牛血清的minimumessential medium (MEM)，37 °C，5%ニ氧化碳的條件下培養18小時，使細胞附著于培養皿。之后用PBS磷酸鹽緩沖液沖洗細胞2次，再加入I毫升無血清MEM，然后添加各種濃度的SMANCS油性制劑50微升，37°C，5%ニ氧化碳的條件下培養I小吋。之后用PBS磷酸鹽緩沖液沖洗細胞2次，再加入含有10%牛血清的MEM，在37°C，5%ニ氧化碳的條件下繼續培養7-8天。最后用I %的亞甲基藍將細胞染色，記數所形成的細胞集落(約由50個細胞組成)，通過所細胞集落數的變化(減少)來評價SMANCS的抗腫瘤活性。[64] 2.藥物穩定性的測定[65] I)溫度對藥物穩定性的影響:將上述各種SMANCS油性制劑分別置于零下30°C、4°C、室溫(25°C )、37°C、43°C及56°C的環境中，定時采取部分樣本，通過上述的瓊脂擴散試驗來測定其抗菌活性。[66]2)超聲波處理對藥物穩定性的影響:將上述各種SMANCS油性制劑進行超聲波處理(UP50H，德國 Dr.Hielscher GmbH 公司產品，20_50kHz，.0.2-.0.5W/cm2)，定時采取部分樣本(最長處理時間為10分鐘)，同樣進行抗菌活性測定。[67]3)藥物由油系向水系的移行:取上述各種SMANCS油性制劑3毫升，加入等量的PBS磷酸緩沖液(pH 7.0)后移入15毫升試管中，在37°C恒溫水浴中振蕩(1Hz，振蕩幅度10厘米)孵育。定時分別從油層及水層中采取部分樣本，同上測定其抗菌活性。同時為同其他水溶性抗癌藥物進行比較，采用多柔比星(阿霉素)及絲裂霉素C進行同樣試驗。其溶液的調制方法分別如下。多柔比星:首先以5毫克/毫升的濃度溶解于泛影葡胺(事先調整其比重使其與各種油性溶劑載體的比重相同)中，再加入等量的各種油性溶劑載體，通過超聲波處理制成懸濁液。絲裂霉素C:通過添加少量卵磷脂使其溶解于各種油性溶劑載體中。[68] 3.粘度測定[69]利用旋轉式與振蕩式流變儀(安東帕Physcia MCR101，奧地利)測量添加不同油性材料的SMANCS油性制劑的粘度(25°C及37°C )。[70]4.1n vivo 抗腫瘤效果[71]腫瘤模型:[72] I)兔肝臟移植腫瘤VX2模型:新西蘭白兔在苯巴比妥(30mg/kg，靜注)麻酔下開腹，將乳頭瘤VX2腫瘤組織(約2X2X2立方毫米大小)植入肝左前葉內。植入腫瘤2周后開始治療。以動物的死亡率及腫瘤大小的變化來評價治療效果。
[73] 2)小鼠背部S180肉瘤模型:將小鼠肉瘤細胞S180經小鼠腹腔培養傳代2_3次后，分離清洗腹水中的腫瘤細胞，計數后將2X IO6細胞經皮下注入雄性ddY小鼠背部皮下。植入5-7天后，當腫瘤長至大小約直徑5-6mm時，開始治療。以腫瘤的增長速度(大小變化)即定期測量腫瘤的體積來評價治療效果。[74]實驗ー:粘度測定[75]取等量的碘化油，測試添加用于增加粘度的油性材料對油性制劑粘度的影響，測試結果如附圖la、Ib所示。[76]分別以實施例2、3與未添加增加粘度油性材料的油性制劑相比較，參考附圖la、lb可以看到，添加膽固醇( 8% )或飽和脂肪酸(棕櫚酸，10% )后，SMANCS油性制劑在室溫(25°C )的粘度增加5倍以上，在37°C時也增加3-4倍；總體上，增加此類油性材料會顯著改善制劑的粘度。[77]實驗ニ:粘度對油性制劑抗腫瘤效果的影響[78]分別將實施例4與實施例5、6中添加5%、8%膽固醇的油性制劑、添加5%、10%棕櫚酸的油性制劑的抗腫瘤效果進行了比較，檢測其抗腫瘤效果，結果如下表所示:表I SMANCS油性制劑粘度變化與抗腫瘤效果
權利要求
1.ー種SMANCS油性制劑，其特征在于，為單ー制劑，包含(I)活性成分:SMANCS，即苯こ烯馬來酸新制癌菌素；(2)具有良好生物相容性的油性材料:包含碘化油。
2.根據權利要求1所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，所述油性材料還包含用于增加粘度的油性材料。
3.根據權利要求2所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，所述用于増加粘度的油性材料為膽固醇、飽和脂肪酸、中鏈脂肪酸、食用油中的ー種和/或ー種以上的混合物。
4.根據權利要求1所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，還包含一氧化氮供體。
5.根據權利要求4所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，所述ー氧化氮供體選自硝化甘油、硝普納、亞硝基こ酰青霉胺、3-嗎啉-悉尼酮亞胺、硝酸異山梨酷、亞硝基こ酰半胱胺酸、亞硝基谷胱甘肽、芳香族硝基化合物，3-(2-羥基-1-甲基-2-亞硝基肼基)-N-甲基-1-丙胺中的ー種和/或ー種以上的混合物。
6.根據權利要求1所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，SMANCS在油性制劑中的含量為 l_2mg/ml。
7.根據權利要求2所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，所述用于増加粘度的油性材料在油性制劑中的濃度為5-10%。
8.根據權利要求4所述的SMANCS油性制劑，其特征在于，一氧化氮供體在油性制劑中的含量為1-1OOii g/ml。
9.ー種SMANCS油性制劑的制備方法，其特征在于，將SMANCS的凍結干燥品溶于具有良好生物相容性的油性材料中，或制成懸濁液，即得SMANCS的油性制劑。
10.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于，包括下述步驟:(I)將用于増加粘度的油性材料加入到碘化油中，在冰浴下用超聲波處理，使其完全溶解；(2)加入SMANCS，制成懸濁液，在冰浴下用超聲波使其完全溶解。
11.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于，超聲波的超聲條件為:20-50kHz，0.2-0.5W/cm2。
12.根據權利要求11所述的制備方法，其特征在于，步驟(I)的超聲波超聲時間為30秒-1分鐘；步驟⑵的超聲波超聲時間為3分鐘。
13.根據權利要求9所述的制備方法，其特征在于，還包括向SMANCS油性制劑中添加、溶解一氧化氮供體的步驟。
14.SMANCS油性制劑在制備治療癌癥藥物中的用途。
15.根據權利要求14所述的用途，其特征在于，所述癌癥包括原發性肝癌，轉移性肝癌，膽囊癌，膽管癌，腎癌，卵巢癌，肺癌，癌性胸水，癌性腹水。
全文摘要
本發明公開了一種SMANCS的油性制劑，為單一制劑，包含(1)活性成分SMANCS，苯乙烯馬來酸新制癌菌素，為新制癌菌素NCS與苯乙烯-馬來酸共聚物SMA的化學結合體；(2)具有良好生物相容性的油性材料包含碘化油。本發明公開的油性制劑克服了傳統的SMANCS保存條件復雜、臨床使用不方便的缺陷，具有使用方便，可以靈活調整藥劑濃度的效果。
文檔編號A61K45/00GK103110577SQ20121033259
公開日2013年5月22日 申請日期2012年9月10日 優先權日2012年9月10日
發明者前田浩, 方軍 申請人:美國Gca醫藥有限公司