艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供以丙酸菌和/或其發酵物為有效成分的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑、和具有艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制作用的益生元組合物。另外本發明還提供以1,4-二羥基-2-苯甲酸（DHNA）和/或有機酸為有效成分的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑、具有艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制作用的益生元組合物以及進而含有它們的食品組合物。另外，本發明還提供將它們攝取或給予的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制方法。
【專利說明】艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑
【技術領域】[0001]本發明涉及艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile，也稱為“艱難梭菌”)增殖抑制劑、和具有艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制作用的益生元(prebiotecs)組合物及含有該益生元組合物而成的飲食品組合物以及艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制方法。
【背景技術】
[0002]艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)是抗菌藥為誘因的痢疾或腸炎的主要致病菌，并且已知是偽膜性結腸炎的致病菌。艱難梭狀芽孢桿菌感染病的癥狀特征是從輕度的痢疾癥狀到如腸梗阻等致死性的重癥病態的寬范圍。此外，本感染病常常復發、難以治療，并且作為院內感染的致病菌也很重要，經常有在住院病例或老人院的入住者中院內集體發生的報告。在此時的臨床現場，由于難以用藥劑進行治療，因此強烈需要能夠特別簡便地使用的利用飲食品或益生元來緩解癥狀、抑制或預防感染病。
[0003]到目前為止，研究了對各種艱難梭狀芽孢桿菌感染病的應對辦法。例如，專利文獻I中公開了通過給予治療有效量的含有果糖低聚糖的未消化性低聚糖來抑制艱難梭狀芽孢桿菌導致的哺乳動物的感染病的方法。另外，專利文獻2中公開了通過在飲食品或飲料中添加或給予啤酒花提取物等來抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖，進而來治療或預防由此誘發的疾病。此外，專利文獻3中公開了一種稱為右旋水蘇堿⑶(turicine⑶)的細菌素，其伴隨著艱難梭狀芽孢桿菌等所導致的院內感染性感染病的增加，作為應對這些疾病的新型抗菌化合物，具有艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制效果。
[0004]現有技術文獻
[0005]專利文獻
[0006]專利文獻1:美國專利第5688777號說明書
[0007]專利文獻2:日本特開平11-221064號公報
[0008]專利文獻3:日本特表2011-505126號公報
【發明內容】
[0009]發明欲解決的課題
[0010]但是，在上述專利文獻公開的技術中，并沒有公開在促進有用的雙歧桿菌的增殖的同時抑制艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)的增殖等的益生元及益生元來源成分，并且到目前為止也并不知曉對其進行報告的例子。
[0011]因此，仍然希望繼續開發能夠以更簡便的方法且高的效果抑制艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)的增殖、并且由此實現癥狀緩解、進而抑制由其導致的感染病或對其預防的技術。
[0012]用于解決課題的手段
[0013]本
【發明者】們鑒于上述以往的問題進行了深入研究，結果發現了費氏丙酸桿菌(Propionibacterium freudenreichii )、特別是 ET-3 株或 ATCC9614T 株等的培養上清液能夠抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖。并且發現了，費氏丙酸桿菌ET-3株或ATCC9614T株等大量產生的1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)和/或有機酸顯著地抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖。
[0014]因此，本發明提供不影響雙歧桿菌、乳酸菌等有用細菌而顯著地抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖的益生元組合物及含有該益生元組合物而成的飲食品組合物、以及艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法。
[0015]本發明優選的方式涉及一種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制劑，其含有丙酸菌和/或其 發酵物作為有效成分。
[0016]另外，本發明的一個方式涉及一種具有艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)增殖抑制作用的益生元組合物，其是含有丙酸菌和/或其發酵物而成的。
[0017]作為上述增殖抑制劑或益生元組合物中的所述丙酸菌，優選為費氏丙酸桿菌 ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)。
[0018]本發明優選的方式涉及一種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制劑，其含有1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)和/或有機酸作為有效成分。
[0019]另外，本發明的另一方式涉及一種具有艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)增殖抑制作用的益生元組合物，其是含有1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)和/或有機酸而成的。
[0020]作為上述增殖抑制劑或益生元組合物中的所述1，4-二羥基-2-苯甲酸(DHNA)，優選為由費氏丙酸桿菌ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌ATCC9614T (Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)的發酵物得到的 DHNA 或為合成DHNA。DHNA可以通過本領域技術人員公知的手法來適當合成。并且，所述有機酸可列舉出乙酸、甲酸、丙酸等，特別優選為丙酸。
[0021]本發明的再一方式涉及一種具有艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制作用的飲食品組合物，其是含有有效量的丙酸菌和/或其發酵物而成的。
[0022]作為上述飲食品組合物中的所述丙酸菌，優選為費氏丙酸桿菌ET-3(Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)。
[0023]另外，本發明的又一方式涉及一種具有艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)增殖抑制作用的飲食品組合物，其是含有有效量的1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)和/或有機酸而成的。
[0024]作為上述飲食品組合物中的所述1，4_ 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)，優選由費氏丙酸桿菌 ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)的發酵物得到的 DHNA。
[0025]本發明的又一方式涉及一種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法，其特征在于，攝取或者給予含有有效量的丙酸菌和/或其發酵物而成的益生元組合物。
[0026]作為上述艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法中的所述丙酸菌，優選為費氏丙酸桿菌ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T (Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)。
[0027]另外,本發明的又一方式涉及一種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法，其特征在于，攝取或給予含有有效量的1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)和/或有機酸而成的益生元組合物。作為給予對象，可列舉出例如人或非人哺乳動物等。另外，本發明的上述增殖抑制方法包括例如體內(in vivo)、體外(in vitro)、離體(ex vivo)的方法。
[0028]作為上述艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法中的所述1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA),優選為由費氏丙酸桿菌ET-3 (Propionibacteriumfreudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T (Propionibacterium freudenreichiiATCC9614T)的發酵物得到的DHNA。
[0029]另外，本發明的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑如后所述，具有對雙歧桿菌、乳酸菌等有用細菌沒有影響而顯著抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖的效果。因此，作為本發明的增殖抑制劑的利用方式，可列舉出例如與對雙歧桿菌、乳酸菌等有用細菌的增殖具有影響作用的抗生素或抗菌藥并用的方式。即，本發明的增殖抑制劑作為與抗生素或抗菌藥的并用劑是有用的。
[0030]作為可與本發明的增殖抑制劑并用的抗生素，可列舉出例如林可霉素系抗生素、 內酰胺系抗生素、氨基糖苷系抗生素、大環內酯系抗生素、四環素系抗生素、氯霉素系抗`生素、肽系抗生素、磷霉素等；作為本發明的抗菌藥，可列舉出例如磺胺藥、抗結核藥、喹啉酮系抗菌藥、新喹啉酮系抗菌藥、抗病毒藥、抗真菌藥等。這些抗生素或抗菌藥由于可能會引起艱難梭狀芽孢桿菌的增殖，因此應出于抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖的目的來并用。另外，甲硝唑(metronidazole)、萬古霉素(vancomycin)、非達霉素(Fidaxomicin)等對艱難梭狀芽孢桿菌有效的抗生素以補充作用的形式與本發明的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑并用也包含在本發明的范圍內。
[0031]另外，本發明還涉及丙酸菌和/或其發酵物在制造艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制劑中的用途。
[0032]此外，本發明還涉及1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)和/或有機酸在制造艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制劑中的用途。
[0033]另外,本發明還涉及用于艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制的丙酸菌和/或其發酵物。
[0034]此外,本發明還涉及用于艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制的1,4-二羥基-2-苯甲酸(DHNA)。
[0035]發明效果
[0036]本發明的益生元組合物促進作為腸內有用的細菌的雙歧桿菌的增殖，并且不影響乳酸菌的增殖。因此，含有費氏丙酸桿菌ET-3株及ATCC9614T株以及DHNA等的本發明的益生元組合物不僅能夠促進雙歧桿菌等的增殖，而且能夠抑制作為極有害的細菌的艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)的增殖。因此，本發明能夠提供具有非常有用的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制作用的益生元組合物及含有該益生元組合物而成的飲食品組合物以及艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制方法。【專利附圖】
【附圖說明】
[0037]圖1為表示本發明的益生元組合物對艱難梭狀芽孢桿菌的增殖抑制活性的曲線圖。
[0038]圖2為表示本發明的益生元組合物對艱難梭狀芽孢桿菌的增殖抑制活性的曲線圖。
[0039]圖3為表示本發明的益生元組合物對雙歧桿菌(Bifidobacterium 1ngum0LB6001株)的增殖的影響的曲線圖。
[0040]圖4為表示本發明的益生元組合物對乳酸菌(L.bulgaricus)的增殖的影響的曲線圖。
[0041]圖5為表示本發明的益生元組合物對乳酸菌(S.thermophilus 0LS3059株)的增殖的影響的曲線圖。
[0042]圖6為表示本發明的丙酸對艱難梭狀芽孢桿菌的增殖的影響的曲線圖。
[0043]圖7為保藏編號FERM BP-8115 (費氏丙酸桿菌ET-3株)的保藏證明的復印件。
[0044]圖8為保藏編號FERM BP-8115 (費氏丙酸桿菌ET-3株)的存活證明的復印件。
【具體實施方式】
[0045]以下對本發明詳細地進行說明，但本發明并不受以下所述的各方式的限定。
[0046]丙酸菌自古即被用作埃曼塔拉奶酪等的發酵劑，其安全性已得到確認。作為本發明的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑或益生元組合物中含有的丙酸菌的例子，可列舉出費氏丙酸桿菌ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)、費氏丙酸桿菌ATCC9614T (Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)、費氏丙酸桿菌 IF012424(Propionibacterium freudenreichii IF012424)、詹氏丙酸桿菌(Propionibacteriumjensenii)、產丙酸丙酸桿菌(Propionibacterium acidipropionici)等屬于丙酸桿菌屬的微生物。其中，特別優選費氏丙酸桿菌ET-3株、費氏丙酸桿菌ATCC9614T株。
[0047]這些菌體可以單獨也可以多種組合使用。
[0048]作為本發明的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑或益生元組合物中使用的丙酸菌和/或其發酵物，可通過將所述丙酸桿菌屬微生物按照常規方法進行培養而得到。可將得到的發酵物本身和/或其處理物用作本發明的增殖抑制劑或益生元組合物。處理物可以使用例如含有菌體的發酵物、將發酵物過濾或除菌而得到的濾液、用特定溶劑提取而得到的提取物、用蒸發器等將發酵物、其濾液、提取物、上清液濃縮而得到的濃縮物、它們的干燥物(冷凍干燥或其他)等經過處理工序而得到的處理物。
[0049]作為優選的丙酸菌和/或其發酵物的添加量，根據發酵物的濃縮度等的不同而不同。例如，在將通過國際公開小冊子第W02005/033323號說明書的實施例1中記載的方法制造的丙酸菌的發酵物濃縮至DHNA濃度達到100μ g/ml的情況下，其添加量相對于本發明的增殖抑制劑或益生元組合物為0.1~10重量％、優選為0.3~5重量％。
[0050]作為本發明的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑或益生元組合物中含有的1，4- 二羥基-2-苯甲酸(DHNA)，可以使用通過化學合成或生物合成得到的DHNA中的任一種，優選為通過生物合成得到的DHNA。本發明中，特別優選使用費氏丙酸桿菌(Propionibacteriumfreudenreichii)ET_3株或費氏丙酸桿菌ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichiiATCC9614T)所大量產生的DHNA。例如，可以將通過對丙酸桿菌屬微生物按照常規方法進行培養而得到的發酵物本身和/或其處理物用作DHNA。處理物可以使用例如含有菌體的發酵物、將發酵物過濾或除菌而得到的濾液、利用規定溶劑提取而得到的提取物等粗制物、或它們的精制物、利用蒸發器等將發酵物、其濾液、提取物、上清液濃縮而得到的濃縮物、它們的干燥物(冷凍干燥或其他)等經過處理工序而得到的處理物。作為DHNA的濃度，可以根據用途等進行適當調整，為I~250 μ g/ml、優選為I~5 μ g/ml。
[0051 ] 本發明還提供含有益生元組合物的飲食品組合物。
[0052]本發明的含有益生元組合物的飲食品組合物具體地，可以在飲食品組合物例如牛奶、清涼飲料、發酵乳(酸奶、酸奶飲料)、奶酪、面包、餅干、脆餅、比薩餅、配方奶粉、流食、病者用食品、幼兒用奶粉等食品、哺乳婦女用奶粉等食品、營養食品等中添加本發明的益生元組合物，然后將其攝取。另外，關于其性狀，可以采用通常使用的飲食品的狀態，例如固體狀(粉末、顆粒狀或其他)、糊狀、液狀至懸浮狀、流食狀、果凍狀、片劑狀、顆粒狀、膠囊狀等通常可流通的所謂飲食品形狀。其中，從能夠簡便地攝取的角度、吸收性的角度等出發，本發明的飲食品組合物優選以飲料的形態提供。
[0053]關于其他成分沒有特殊限定，當在飲食品組合物中含有本發明的益生元組合物來使用的情況下，可以將水、蛋白、糖質、脂質、維生素類、礦物質類、有機酸、有機堿、果汁、調味劑類等作為主成分使用。作為蛋白，可列舉出例如全脂奶粉、脫脂奶粉、部分脫脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白濃縮物、乳清蛋白分離物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、K-酪蛋白、乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳鐵蛋白、大豆蛋白、雞蛋蛋白、肉蛋白等動植物性蛋白、它們的水解物；黃油、乳清礦物質、奶油、乳清、非蛋白態氮、唾液酸、磷脂、乳糖等各種乳來源成分等。作為糖質，可列舉出通常的糖類、加工淀粉(除糊精外，還有可溶性淀粉、british starch、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、食物纖維等。作為脂質，可列舉出例如豬油、魚油等、它們的分離油、氫化油、酯交換油等動物性油脂；棕櫚油、紅花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它們的分離油、氫·化油、酯交換油等植物性油脂等。作為維生素類，可列舉出例如維生素A、胡蘿卜素類、維生素B族、維生素C、維生素D族、維生素E、維生素K族、維生素P、維生素Q、煙酸、尼克酸、泛酸、生物素、肌醇、膽堿、葉酸等；作為礦物質類，可列舉出例如鈣、磷、鉀、鎂、氯、鈉、酮、鐵、猛、鋅、硒、鉻、鑰、銀、乳清礦物質等。作為有機酸，可列舉出例如蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸等。這些成分可以單獨也可以2種以上組合使用，可以使用合成品和/或大量含有它們的飲食品。
[0054]上述飲食品組合物可以通過將本發明的益生元組合物與上述必要成分的適當量混合按照常規方法來制造。
[0055]本發明的飲食品組合物中的益生元組合物的含量可根據其目的、用途等來任意地確定。本發明并不限定于此，作為其含量，相對于總量，通常為5重量％以上、更優選為10重量％以上。通過將其攝取或給予，能夠簡便地進行艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)增殖抑制，甚至能夠緩解癥狀、抑制或預防感染病。
[0056]需要說明的是，本說明書中引用的全部現有技術文獻通過參照納入本說明書中。
[0057]實施例
[0058]以下舉出實施例對本發明進一步詳細地進行說明，但本發明并不限定于此。其中，實施例中，“％”的表述除特別說明的情況外表示重量％。[0059][實施例1]
[0060].本發明的作為益生元組合物的丙酸菌培養上清液的制備
[0061]將費氏丙酸桿菌ET-3株(2001年8月9日以FERM BP-8115保藏于日本獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心(日本國茨城県I < 市東I 丁目I番地I中央第6 (郵便番號305 — 8566))、費氏丙酸桿菌ATCC9614T株(費氏丙酸桿菌基準株，從American Type Culture Collection(ATCC)購得)、從市售的埃曼塔拉奶酪中分離得到的費氏丙酸桿菌株(N0.32-1)在30°C厭氧條件下進行活化及預培養48小時，然后進一步在30°C厭氧條件下培養72小時。將培養物離心分離(離心分離條件:8000rpm、4°C、10分鐘)，回收培養上清液，過濾器滅菌，將得到的培養上清液作為本發明的益生元組合物，保存在-80°C下。
[0062].艱難梭狀芽孢桿菌的培養
[0063]艱難梭狀芽孢桿菌JCM1296T株(艱難梭狀芽孢桿菌基準株)為從理研BioResourceCenter購得，按照所附的手冊進行復原。
[0064].抑制試驗
[0065]將如上制備的艱難梭狀芽孢桿菌以1%接種到預先保持厭氧狀態的BHI培養基上。向其中添加本發明的益 生元組合物或DHNA，在37°C厭氧條件下培養24小時。在將培養液充分攪拌后，測定OD65c!(島津分光光度計BioSpecl600、株式會社島津制作所制)。將結果制成曲線圖示于圖1。其中，對得到的數據利用Tukey-Kramer法進行多重比較檢驗，各組n=3、*為p〈0.05、**為p〈0.01。其中，費氏丙酸桿菌ATCC9614T及費氏丙酸桿菌ET-3相對于對照組為p〈0.01。
[0066][結果]
[0067]在添加了 5%的本發明的益生元組合物的體系中，24小時培養后的OD65tl顯著降低，由此可知本發明的益生元組合物有效地抑制艱難梭狀芽孢桿菌的增殖。
[0068][實施例2]
[0069].本發明的益生元組合物中所含的DHNA的制備
[0070]將DHNA (Sigma-Aldrich 制)IOOmg 溶解于 0.5ml 的 DMSO 中，制成 IM 的 DMSO 溶液。用BHI培養基稀釋10倍，制成IOOmM,然后過濾器滅菌。同時，將DMSO用BHI培養基稀釋10倍，制成溶液，過濾器滅菌。其后的稀釋全部用DMSO溶液進行10倍稀釋，使總濃度的DHNA溶液中含有10%的DMS0。由于將0.1%的這些DHNA溶液添加到菌培養液中制成本發明的益生元組合物，因此DMSO的最終濃度均為0.01%。
[0071]?抑制試驗
[0072]關于本發明的益生元組合物對實施例1中使用的艱難梭狀芽孢桿菌的增殖抑制效果，與實施例1同樣地進行抑制試驗。具體地，對于各試樣，將含有DHNA的本發明的益生元組合物以各種濃度添加(I μ Μ、10 μ Μ、20 μ M、50 μ M)。得到的結果如圖2的曲線圖所示。其中，利用Tukey-Kramer法進行多重比較檢驗，各組η=3、*為ρ〈0.05。其中，對于10 μ M~50 μ Μ，相對于 DMSO 組，為 ** 即 ρ〈0.01。
[0073]如圖2所示，通過添加10 μ M以上的DHNA，艱難梭狀芽孢桿菌的增殖得到顯著抑制。
[0074][實施例3][0075].雙歧桿菌及乳酸菌培養上清液的制備
[0076]將從雙歧桿菌(B.longum) 0LB6001 株(FERM P-13610)及“明治 bulgaria 酸奶”(商品名:明治乳業公司制)分離得到的保加利亞乳酸桿菌(L.bulgaricus)在37°C厭氧條件下培養18小時。將嗜熱鏈球菌(S.thermophilus)0LS3059株(FERM P-15487)在30°C厭氧條件下培養30小時。將培養物離心分離(離心分離條件:8000rpm、4°C、10分鐘)，回收培養上清液，過濾器滅菌，將得到的培養上清液作為比較組合物保存于_80°C (乳酸菌在實施例4中使用)。
[0077].本發明的益生元組合物對雙歧桿菌的增殖的影響
[0078]向雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)0LB6001株中添加實施例2中使用的DHNA或0.0P/oDMSO (對照)，在37°C厭氧條件下培養12小時。在將培養液充分攪拌后，測定OD65tl(島津分光光度計BioSpecieOO、株式會社島津制作所制)。將結果制成曲線圖示于圖3。其中，利用Tukey-Kramer法進行多重比較檢驗,各組n=3、*為p〈0.05。其中，對于10 μ M~50 μ Μ，相對于 DMSO 組，為 ** 即 ρ〈0.01。
[0079][結果]
[0080]可知通過添加本發明的含有DHNA的益生元組合物，0LB6001株的增殖得到顯著促進。即表示，本發明的益生元組合物對有用細菌非但沒有影響而且具有增殖促進效果。因此可知，在進行艱難梭狀芽孢桿菌的增殖抑制時，對有用細菌的增殖沒有影響(反而具有增殖促進效果)。
[0081][實施例4]
[0082].本發明的益生元組合物對乳酸菌的增殖的影響
[0083]為了研究本發明的含有DHNA的益生元組`合物(DHNA濃度:I μ M~50 μ Μ)對實施例3中使用的L.bulgaricus及S.thermophilus 0LS3059株的影響，與實施例3同樣地進行試驗，將結果示于圖4及圖5。與實施例3同樣地可知，通過添加本發明的含有DHNA的益生元組合物，對L.bulgaricus及S.thermophilus 0LS3059株的增殖沒有影響。因此可知，在進行艱難梭狀芽孢桿菌的增殖抑制時，對有用細菌的增殖沒有影響。
[0084][實施例5]
[0085].本發明的丙酸對艱難梭狀芽孢桿菌的增殖的影響
[0086]將1%的培養24小時、OD65tl達到1.2的經增殖的艱難梭狀芽孢桿菌(C.difficileJCMl296株)培養液添加到培養基中，同時添加各種有機酸，使終濃度達到100 μ Μ，測定24小時后的OD65tl值。將結果制成曲線圖示于圖6所示。
[0087]如圖6所示，通過添加丙酸，艱難梭狀芽孢桿菌的增殖得到抑制。
[0088]產業上的可利用性
[0089]本發明的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制劑或益生元組合物對腸內的有用細菌即雙歧桿菌或乳酸菌的增殖沒有影響或對增殖是有效的，而另一方面能夠抑制極有害的細菌即艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)的增殖。因此，基于含有費氏丙酸桿菌ET-3株及ATCC9614T株以及DHNA等的本發明的益生元組合物，能夠提供具有非常有用的艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制作用的益生元組合物及含有該益生元組合物而成的飲食品組合物以及艱難梭狀芽孢桿菌增殖抑制方法，產業上的可利用性非常高。
【權利要求】
1.一種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制劑，其含有丙酸菌和/或其發酵物作為有效成分。
2.根據權利要求1所述的藥劑，其中，所述丙酸菌為費氏丙酸桿菌ET-3(Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)。
3.一種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制劑，其含有1，4-二羥基-2-苯甲酸即DHNA和/或有機酸作為有效成分。
4.根據權利要求3所述的藥劑，其中，所述1，4-二羥基-2-苯甲酸即DHNA為從費氏丙酸桿菌 ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)的發酵物得到的。
5.一種與抗生素或抗菌藥并用的并用劑，其含有權利要求1~4中任一項所述的藥劑。
6.—種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法,其特征在于,攝取或給予含有有效量的丙酸菌和/或其發酵物而成的益生元組合物。
7.根據權利要求6所述的艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)增殖抑制方法，其特征在于，所述丙酸菌為費氏丙酸桿菌ET-3 (Propionibacterium freudenreichiiET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T (Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)。
8.—種艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)增殖抑制方法,其特征在于,攝取或給予含有有效量的1，4- 二羥基-2-苯甲酸即DHNA和/或有機酸而成的益生元組合物。
9.根據權利要求8所 述的艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)增殖抑制方法，其特征在于，所述1，4-二羥基-2-苯甲酸即DHNA為由費氏丙酸桿菌 ET-3 (Propionibacterium freudenreichii ET-3)或費氏丙酸桿菌 ATCC9614T(Propionibacterium freudenreichii ATCC9614T)的發酵物得到的。
【文檔編號】A61K31/192GK103717227SQ201280024085
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2012年3月15日 優先權日:2011年3月29日
【發明者】利光孝之, 池上秀二, 伊藤裕之 申請人:株式會社明治