Nadph氧化酶4抑制劑及其應用的制作方法

Nadph氧化酶4抑制劑及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及Nox4抑制劑、其藥物組合物以及它們的用于治療和/或預防骨質疏松癥或破骨細胞生成功能障礙，特別是骨質疏松的和預骨質疏松的破骨細胞生成功能障礙的應用。
【專利說明】NADPH氧化酶4抑制劑及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及在治療和/或預防骨質疏松癥和/或破骨細胞生成功能障礙(osteoclastogenesis dysfunction)如骨質疏松的或預骨質疏松的破骨細胞生成功能障礙中有用的藥劑。
【背景技術】
[0002]骨是一種取決于生物體(即使在成年期)的需求而發生永久性重塑的動態的器官。骨的形成由成骨細胞介導，而源自骨髓系(the myeloid linage)的破骨細胞吸收骨。在體內以及在培養模型中，破骨細胞生成需要分化因子“TNF-超家族的核因子kB配體的受體激活劑(RANKL, receptor activator of nuclear factor kappa B ligand)和巨曬細胞集落刺激因子(M-CSF, macrophage colony stimulating factor)”。M-CSF 誘導RANK、骨髓細胞上的RANKL受體的表達，而RANK配體的結合啟動破骨程序和破骨細胞基因如抗酒石酸酸性憐酸酶(TRAP, tartrate-resistant acid phosphatase)和組織蛋白酶K(Cathepsin K)的誘導。即使成熟的破骨細胞被RANKL激活，從而促進它們的存活和誘導導致骨再吸收的結構變化。細胞因子如TGFii能夠進一步促進破骨細胞生成。TGF3與氧化應激相關聯，因為它增加了活性氧簇(R0S, reactive oxygen species)的形成和誘導了 NADPH 氧化酶 Nox4 的表達(Sturrock et al., 2006, Am.J.Physiol Lung Cell Mol.Physiol.，290:L661-L673)。
[0003]破骨細胞生成功能障礙已經被廣泛描述為導致漸進性骨質流失的條件(Silvestris et al., 2011, Adv.Exp.Med.Biol., 714: 113-28 ；Maruotti etal., 2011, Clin.Exp.Med., Π (3): 137-45 ；ffang et al., 2011, Oral Dis., 17(2):129-42),特別是破骨細胞驅動的疾病如糜爛性關節破壞、牙根再吸收或先天牙齒萌出異常癥(primary eruption failure)和作為骨質疏松癥發展的處所(premices)。因此,禁止破骨細胞生成過程將會影響這些疾病的原因，然而增強破骨細胞功能將僅影響臨床結果，但會伴隨觸發增強骨代謝并可能導致不太有利的骨結構的不希望的副作用。
[0004]NADPH氧化酶(NOX)是通過生物膜轉移電子的蛋白。一般地，電子受體是氧氣且電子轉移反應的產物是超氧化物。因此，NOX酶的生物學功能是由氧氣產生活性氧簇(reactive oxygen species, R0S)。活性氧簇(ROS)是氧-衍生的小分子,包括氧自由基(超氧陰離子[.02_]，羥基[H0.]，過氧化氫[R00.]，烷氧基[ROe]和過氧羥基[Η00.])和某些或者是氧化劑和/或容易轉化成自由基如過氧化氫(H2O2)的非自由基。含氮的氧化劑，如一氧化氮也稱作活性氮簇(reactive nitrogen species, RNS)。ROS的產生通常是開始于超氧化物或過氧化氫生成的級聯反應。或者自發地，尤其在較低的PH值下，或者被超氧化物酶催化，超氧化物也歧化成過氧化氫。ROS產生的級聯反應中的其它要素包括超氧化物與一氧化氮生成過氧亞硝酸鹽(peroxynitrite)的反應,過氧化物酶-催化的由過氧化氫形成次氯酸的反應和導致羥基自由基生成的鐵-催化的芬頓反應(Fenton reaction)。
[0005]ROS極易與大量分子反應,這些分子包括其它小的無機分子如DNA,蛋白，脂質,碳水化合物和核酸。這種初始反應可以生成次級自由基，因此使潛在的傷害倍增。ROS不僅參與細胞損傷和殺傷病原體，而且還參與幾乎所有細胞和組織內的大量的可逆調節過程。然而，盡管ROS在調芐基礎生理過程中很重要，ROS的產生還可以不可逆地破壞或改變靶分子的功能。因此，逐漸將ROS確定為在生物有機體中破壞的主要貢獻者，即所謂的“氧化應激”。
[0006] 雖然Nox蛋白的唯一已知功能是產生活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)，Nox4與其它的NADPH氧化酶的不同之處在于它產生過氧化氫酶，而不是超氧化物，且在于組成型活性酶的活性受表達水平和導致急性激活的非信號通路的調控(Takac etal., 2011, J.Biol.Chem., 286:13304-13313 ；Helmcke et al., 2009, Antioxid.Redox.Signal.，11:1279-1287)。NADPH氧化酶Nox4在分化的細胞內普遍表達且Nox4的誘導已與間充質細胞如心肌細胞，脂肪細胞和平滑肌細胞中的分化過程相聯系。
[0007]通過破骨細胞的增加的作用，氧化應激已經涉及在細胞培養模型中增強的骨再吸收和骨質疏松癥以及破骨細胞生成(Lee et al., 2005, Blood, 106:852-859 ；Sasakiet al., 2009, J.Med.1nvest, 56:33-41) ?然而，盡管已經表明NADPH氧化酶在破骨細胞生成過程中被上調，且抑制所有Nox蛋白的組分，p22phox防止破骨細胞生成(Sasaki etal., 2009, above),但是每個催化活性Nox亞型的作用是不明確的或者有爭議的。Sasaki etal., 2009, Free Radical Biology&Medicine, 47, 189-199 提供的證據表明 Noxl 和 Nox2 被抑制以限制破骨細胞生成和在阻止ROS產生和破骨細胞生成中Nox4抑制效率低下以及上面的Lee et al.，2005得出的結論是Noxl而不是Nox2或Nox4在骨髓單核細胞-巨噬細胞譜系細胞(bone marrow monocyte-macrophage lineage cells)的 RANKL-誘導的 ROS產生中是重要的。
[0008]因此，研發致力于對破骨細胞，骨再吸收和破骨細胞生成的作用的用于治療骨質疏松癥的新的活性藥劑，是非常可取的。

【發明內容】

[0009]本發明針對的出乎意外的發現是，缺失Nox4基因導致骨中破骨細胞標記蛋白破骨細胞相關受體(OSCAR, osteoclast marker protein osteoclast-associatedreceptor)表達較低以及成骨細胞標記蛋白骨橋蛋白(the osteoblast marker proteinosteopontin)表達較高，從而結果為Nox4通過破骨細胞生成的調控控制骨量。特別地，本發明針對的出乎意外的發現是，在體內抑制Nox4能夠防止骨質流失。特別地，本發明針對通過使用根據本發明的Nox4抑制劑來防止Nox4上調的結果即破骨細胞生成功能障礙的能力。
[0010]本發明針對在治療和/或預防骨質疏松癥，特別是骨質疏松的或預骨質疏松的破骨細胞生成功能障礙中有用的Nox4抑制劑。值得注意的是，本發明涉及在抑制或降低Nox4活性中有用的新的分子。
[0011]第一方面，本發明提供了一種Nox4抑制劑，該Nox4抑制劑用于在治療和/或預防破骨細胞生成功能障礙和/或骨質疏松癥中使用。
[0012]第二方面，本發明提供了一種或多種Nox4抑制劑在制備用于治療和/或預防骨質疏松癥的藥物組合物中的應用。[0013]第三方面，本發明提供了新的Nox4抑制劑，及其互變異構體，幾何異構體，光學活性形式和藥學上可接受的鹽。
[0014]第四方面，本發明涉及用于作為藥物使用的新的Nox4抑制劑，及其互變異構體，幾何異構體，光學活性形式和藥學上可接受的鹽。
[0015]第五方面，本發明涉及含有至少一種根據本發明的Nox4抑制劑，及其互變異構體，幾何異構體，光學活性形式和藥學上可接受的鹽以及其藥學上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
[0016]第六方面，本發明涉及含有與至少一種在治療或預防骨質疏松癥中有用的共藥劑(co-agent)相結合的至少一種Nox4抑制劑，以及至少一種藥學上可接受的載體的藥物組合物。
[0017]第七方面，本發明涉及一種用于預防或治療破骨細胞生成功能障礙和/或骨質疏松癥的方法，包括在需要其的受試者中給藥有效量的一種或多種Nox4抑制劑。
[0018]第八方面，本發明涉及一種用于減少患者骨中破骨細胞生成的方法，包括在需要其的患者中給藥有效量的一種或多種Nox4抑制劑或其藥物制劑。
[0019]第九方面，本發明涉及Nox4抑制劑在制備用于預防和/或治療破骨細胞生成功能障礙和/或骨質疏松癥的藥物制劑中的應用。
[0020]第十方面，本發明涉及Nox4抑制劑在制備用于預防和/或治療骨質疏松的破骨細胞生成和預骨質疏松的破骨細胞生成的藥物制劑中的應用。
[0021]第^ 方面，本發明涉及一種破骨細胞生成(ostoeclastogenesis)抑制劑的確定方法。
[0022]本發明的其它特征和優點通過以下詳細說明將是顯而易見的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1示出了小鼠中Nox4基因敲除對骨密度、破骨細胞的數量、分化和ROS形成的影響。A:實施例2中測定的小梁骨密度；B:如von Kossa, 1901，Beit.Path.Anat.，29:163所述的馮?科薩技術(von Kossa technique)染色的股骨末梢未脫鈣切片的圖片；C:實施例2中測定的最終力(Ultimate force)(最大頻率，Fmax) ；D:實施例3中測定的組織形態學分析計數的TRAP陽性破骨細胞(N.0c)的數量以及E:如Mukherjee et al.，2008，J.Clin.1nvest.,118:491-504 所述的使用 Sigma-Aldrich(www.sigma_aIdrich.com) 387A-1KT方法的用Mayer的帆紫(hemalaun)反染的TRAP染色切片的典型圖片；F:如Shen et al.，2005，J.Biol.Chem.，280，40589-98所述的對股骨裂解液的破骨細胞標記蛋白破骨細胞相關受體(OSCAR)、成骨細胞標記骨橋蛋白和裝載參照3-磷酸甘油醛脫氫酶(loading control GADPH)的免疫印跡分析(Western blot analysis) ;G, H:如實施例3 所述的通過TRAP染色確定的由骨髓細胞體外分化的破骨細胞的數量(G)和典型圖片(H) ；1:實施例3中測定的預分化脾(spIeenocytes)中活性氧簇(ROS)百分數；n≥3 ;*ρ〈0.05。
[0024]圖2示出了如實施例3所述的在野生型和Νοχ4-/_小鼠中測定的骨形成標記物(原骨膠原IN-末端肽，ΡΙΝΡ)的血清濃度㈧與那些骨再吸收標記物(TRAP5b)比較的血清濃度(B)和羧基末端膠原交聯結(CTX)的血清濃度(C) ；n ≥3 ;*p〈0.05。
[0025] 圖3示出了如實施例2所述的測定取自野生型和Nox4-/-小鼠的股骨末梢的(A)小梁寬度和(B)厚度的形態計量學；n ^ 3 ;*p〈0.05。
[0026]圖4示出了 Nox4在RANKL誘導信號中的作用及其上的Nox4抑制劑的效果，如實施例4所述的向骨髓來源的單核細胞提供M-CSF使用(RANKL)或不使用RANKL(ctl)預處理30h，在骨髓來源的單核細胞中通過Fura2熒光來測定細胞內Ca2+。A:野生型和Nox4-/-小鼠細胞的比較:在野生型細胞中Nox4抑制劑(化合物(I)或溶劑對鈣離子濃度的影響；n ^ 3 ;*ρ〈0.05。
[0027]圖5示出了如實施例5所述的在體內Νοχ4對于骨質流失的作用。A:對取自健康受試者和骨質疏松癥患者或佩吉特氏病(Morbus Paget)患者的人骨材料染色的Nox4強度的統計學分析，η = 3-4 ;*ρ〈0.05 ；B,C:卵巢切除6周后股骨末梢的骨小梁密度。野生型(WT)動物(未標記，no label),用它莫西芬(tamoxifen)處理的野生型動物(WT)和用它莫西芬處理的 Nox4-Flox-Flox-ERT2-Cre+/0 小鼠(N4_Cre*/*)的比較。η = 8-12 ;*ρ〈0.05 (C)；用溶劑(ctl)或Νοχ4抑制劑處理η = 11-14共6周的野生型(WT)動物的比較⑶。 [0028]統計學分析:所有的值是平均值土標準誤(SEM)。經ANOVA (方差分析)后經LSD事后比較檢驗(LSD post hoc testing)進行數據分析，P值小于0.05的被認為統計學上顯著，WT:野生型小鼠；N4-/-:Nox4敲除小鼠。
[0029]圖6示出了在體內Nox4對于骨質流失的作用。如實施例5所述的用Nox4抑制劑處理的野生型(WT)動物與假手術動物(sham operated animals),對照(即動物進行卵巢切除術并用溶劑(ctl)處理)和帕米膦酸二鈉組(pamidronat group)相比較，帕米膦酸二鈉組即動物進行卵巢切除后用帕米膦酸二鈉處理，10mg/kg,每周一次。A，B:卵巢切除后6周股骨末梢總的(A)和骨小梁(B)骨密度；*p〈0.05 ；C, D:通過校準的微型CT技術測定的卵巢切除后6周股骨末端總的(C)和骨小梁⑶骨密度的恢復；E:總斷裂強度(與圖1所述類似)。
[0030]統計學分析:所有的值是平均值土標準誤(SEM)。經ANOVA后經LSD事后比較檢驗(LSD post hoc testing)進行數據分析，p值小于0.05的被認為統計學上顯著。
【具體實施方式】
[0031]以下各段提供了組成根據本發明的化合物的各種化學部分的定義且旨在說明書和權利要求書中一致應用，除非另外明確陳述的定義提供了更廣泛的定義。
[0032]本發明所用的“N0X4抑制劑”是指能夠完全或部分抑制，阻止，減輕，或直接干擾N0X4的任何物質。該術語直接被定義為影響酶的酶活性，細胞定位，蛋白穩定性，信使RNA或Nox4蛋白的表達的化合物。優選地，在使用只表達NOX亞型N0X4蛋白，如重組蛋白N0X4的膜的無細胞測定中，Nox4抑制劑應該能夠降低酶活性和ROS的產生。因此，術語“抑制劑”是指包括，但不限于，完全或部分抑制NADPH氧化酶4活性的分子。根據一種具體的實施方式，與其它Nox蛋白如Nox2相比，Nox4抑制劑有一種主要的Nox抑制活性組分。
[0033]例如，N0X4抑制劑包括在骨退化初始能夠防止或減少破骨細胞分化或降低破骨細胞數量的物質，因此，N0X4抑制劑能夠防止、減少或消除破骨細胞生成功能障礙。例如，N0X4抑制劑包括小分子、肽、類肽物(peptidomimetics)、嵌合蛋白、天然或非天然蛋白質,核酸衍生的聚合物(如DNA和RNA適配體，siRNAs，shRNAs，PNAs，或LNAs)，與N0X4有拮抗活性的融合蛋白、抗體拮抗劑如中和性抗N0X4抗體或能夠驅動N0X4拮抗劑表達的基因治療載體。
[0034]特別地，N0X4抑制劑是在功能性活性氧簇(ROS)產生試驗中呈現出小于5微摩爾的抑制常數 Ki 的藥劑，例如 Gaggini et al., 2011, Bioorganic and Medicinalchemistry, Vol.19 (23)，6989-6999中所述的那些N0X4抑制劑。例如，N0X4抑制劑是在使用只表達NOX亞型N0X4蛋白，如重組蛋白N0X4的膜的無細胞測定中，抑制ROS產量在1_2微摩爾范圍內的藥劑。
[0035]術語“siRNA”是指小干擾RNA，其是能夠敲除或沉默來自靶基因的靶mRNA的雙鏈RNA(大約19-23個核苷酸)。作為寡核苷酸，人工合成的siRNAs可以化學合成，作為短發夾RNAs，人工合成的siRNAs可以克隆到質粒或病毒載體(腺病毒，逆轉錄病毒或慢病毒)以在任何類型的細胞中產生瞬時或穩定性轉染(Martin et al.，2007，Ann.Rev.Genomics Hum.Genet.，8:81 — 108 ；Huang et al.，2008，Expert.0pin .Ther.Targets, 12 (5)，637-645)。
[0036]根據本發明的治療或方法的術語“療效”能夠基于在疾病或病癥響應于根據本發明的用途或方法的過程中的變化進行測定。例如，根據本發明的治療或方法的療效可以通過骨質流失的減少，和/或骨礦物質密度的增加(通過X線斷層攝影術或密度計量學或雙能量X射線骨密度儀進行測定)以及在骨質疏松患者中骨翻轉原生質標記物(plasmamarkers)如骨膠原片段的變化和/或骨質疏松性骨折的風險的降低，或者通過在患者如絕經后的婦女，呈現出進食障礙或過度使用如口服皮質類固醇(即氫化可的松)或抗雌激素類的藥物的個體中發展成為骨質疏松癥特別是破骨細胞生成功能障礙的風險的降低進行測定。在另一方面，根據本發明的治療或方法的療效可以通過對骨密度、骨礦物質化或骨代謝標記物如堿性磷酸酶，C-端肽I型膠原蛋白(CTX)和骨鈣素部分進入血液的測量進行測定。
[0037]本發明所用的術語“有效量”是指引起破骨細胞分化和/或破骨細胞計數或破骨細胞生成的可檢測的降低的根據本發明的至少一種N0X4抑制劑或其藥物制劑的量。
[0038]本發明所用的術語“破骨細胞生成功能障礙”是指與繼發性原因如由固定(immobilization)、溶骨性骨轉移和骨腫瘤引起的佩吉特氏骨質流失的增多的骨翻轉或骨再吸收相關的任何病癥。本發明所用的術語“破骨細胞生成功能障礙”是指與繼發性原因如佩吉特氏病，由固定(immobilization)、溶骨性骨轉移和骨腫瘤引起的骨質流失,如由破骨細胞過度活躍引起的骨再吸收，作為增加破骨細胞的形成或細胞活性增強的結果的增多的骨再吸收相關的任何病癥。在另一種實施方式中，破骨細胞生成功能障礙包括糜爛性關節破壞，如已發現的(類風濕)關節炎，骨關節病糖尿病，骨轉移，牙根再吸收或先天牙齒萌出異常癥(primary eruption failure),由于失活導致的伴有骨質流失和骨萎縮的繼發性甲狀芳腺功能九進癥。
[0039]通常情況下，受試者中的破骨細胞生成功能障礙可以通過測定骨密度表現組織學或破骨細胞酶如抗酒石酸堿性磷酸酶(tartrat-resistant alkaline phosphatase)的原生質測量的測定進行檢測。
[0040]如本發明所用的，“治療(treatment)”和“治療(treating) ”諸如此類一般意指獲得期望的藥理學和生理學效果。該效果就預防或部分預防疾病，癥狀或其病癥(conditions)而言是預防性的和/或就部分或完全治愈疾病，病癥，癥狀或對疾病有反作用而言是治療性的。本發明所用的術語“治療(treatment)”包括在哺乳動物尤其是人類中疾病的任何治療，以及包括:(a)使易患病但還沒有被診斷患病的受試者免于疾病；(b)抑制疾病，即阻止它的發展；或緩解疾病，即使疾病和/或其癥狀或病癥消退。
[0041]本發明所用的術語“受試者”是指哺乳動物。例如，本發明所涵蓋的哺乳動物包括人類，靈長類，家養動物如牛，羊，豬，馬等。
[0042] 術語“藥學上可接受的鹽或復合物(complexes)”是指本發明下面規定的化合物的鹽或復合物。這樣的鹽的例子包括，但不限于，通過本發明的化合物與有機或無機堿或有機的伯，仲或叔烷基胺反應形成的堿加成鹽，有機或無機堿如氫氧化物，如那些選自由堿金屬(鈉，鉀或鋰)、堿土金屬(如鈣或鎂)組成的組的金屬陽離子的碳酸鹽或碳酸氫鹽。這樣的鹽的其它例子包括，但不限于，根據本發明的化合物與有機或無機酸如鹽酸，草酸或類似物質反應形成的酸加成鹽。
[0043]“藥學上的活性衍生物(Pharmaceutically active derivative) ”是指在給藥給受試者時能夠直接或間接提供本發明所公開的活性的任何化合物。術語“間接”也包括通過內源性酶或代謝可以轉化成藥物的活性形式的前體藥物。所述前體藥物是根據本發明的化合物的衍生物，并表現出具有化學或代謝分解的基團的NADPH氧化酶4抑制活性，以及在體內通過溶劑分解在生理條件下可以轉化成藥學上的活性化合物的化合物。本發明進一步涵蓋了根據本發明的化合物的任何互變異構體。
[0044]根據本發明的Nox4抑制劑
[0045]在一種實施方式中,本發明提供了一種在ROS產生的功能測定中表現出對Nox4抑制活性從IOnM或更低至500nM的抑制常數(Ki)的N0X4抑制劑。
[0046]在另一種【具體實施方式】中，提供的N0X4抑制劑是siRNA。
[0047]在另一種【具體實施方式】中，提供的N0X4抑制劑是抗-N0X4抗體。
[0048]在另一種【具體實施方式】中，提供的N0X4抑制劑選自以下組:
[0049]4-(2-氟-4-甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)_5_(吡啶_3_基甲基)_1Η_吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0050]2-(2-氯苯基)-4_ (4-甲氧基苯基)-5-(批嗪-2-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0051]4-(4-氯苯基)-2_ (2-甲氧基苯基)-5-(吡嗪-2-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0052]2-(2-氯苯基)-4-(2-氟-4-甲氧基苯基)-5-[(1_甲基-1H-吡唑-3-基)甲基]-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0053]4-(2-氟-5-甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)_5_(吡啶_3_基甲基)_1Η_吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0054]2-(2-氯苯基)-5-[(2-甲氧基吡啶-4-基)甲基]_4_甲基-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0055]2- (2-甲氧基苯基)-4-甲基-5-(吡啶_3_基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]批啶-3，6(2H，5H)-二酮；
[0056]4- (4-氯-2-氟苯基)-2- (2-甲氧基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；[0057]4- (5-氯-2-氟苯基)-2- (2-氯苯基)_5_ (吡啶_3_基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0058]2-(2-氯苯基)-5-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]_4_甲基-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0059]4- (4-氯-2-氟苯基)-2- (2-氯苯基)_5_ (吡啶_3_基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0060]4- (5-氯-2-氟苯基)-2- (2-氯苯基)_5_ (吡啶_4_基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0061]4-(2-氟-5-甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)-5_[(1_甲基-1H-吡唑_3_基)甲基]-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0062]4- (5-氯-2-氟苯基)-2- (2-甲氧基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0063]2-(2-氯苯基 )-4_甲基-5-(吡啶-3-基甲基)_1Η_吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6(2H，5H)-二酮；
[0064]2-(2-氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(批嗪-2-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶-3，6(2H，5H)-二酮；
[0065]2-(2-氯苯基)-4-(2-氟苯基)-5-(批啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶-3，6(2H，5H)-二酮；
[0066]2-(2-氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(批啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶-3，6(2H，5H)-二酮；
[0067]4- (4-氯-2-氟苯基)-2- (2-氯苯基)_5_ (吡啶_4_基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶 _3，6(2H，5H)-二酮；
[0068]2-(2-甲氧基苯基)-4-(3-甲氧基苯基)-5-[(1_甲基-1H-吡唑-3-基)甲基]-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0069]2- (2-氯苯基)-4- (2-氟-4-甲氧基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0070]4-(2-氟-4-甲氧基苯基)-2-(2-甲氧基苯基)-5_[(1_甲基-1H-吡唑_3_基)甲基]-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0071]2-(2-甲氧基苯基)-4-(4-甲氧基苯基)-5-[(1_甲基-1H-吡唑-3-基)甲基]-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0072]2-(2-甲氧基苯基)-4-(3-甲氧基苯基)_5_(吡啶-3-基甲基)_1Η_吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0073]2-(2-氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(批啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]吡啶-3，6(2H，5H)-二酮；
[0074]4-(4-氯-2-氟苯基)-2_ (2-氯苯基)-5-[(2-甲氧基吡啶-4-基)甲基]_1Η_吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0075]2- (2-氯苯基)-4- (2-氟-4-甲氧基苯基)-5-(吡啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]吡啶-3，6 (2H, 5H) - 二酮；
[0076]2-(2-氯苯基)-4_ (2，6-二氟苯基)-5-(批啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4，3_c]
【權利要求】
1.一種Nox4抑制劑，所述Nox4抑制劑用于在預防和/或治療破骨細胞生成功能障礙和/或骨質疏松癥中使用。
2.根據權利要求1所述的Nox4抑制劑，其中，在ROS產生的功能測定中，Nox4抑制劑表現出對Nox4抑制活性從約IOnM或更低至500nM的抑制常數(Ki)。
3.根據權利要求1或2所述的Nox4抑制劑，所述Nox4抑制劑用于預防和/或治療骨質疏松癥。
4.根據權利要求1或2所述的Nox4抑制劑，所述Nox4抑制劑用于預防和/或治療骨質疏松的或預骨質疏松的破骨細胞生成功能障礙。
5.根據權利要求1或2所述的Nox4抑制劑，所述Nox4抑制劑用于在預防和/或治療選自佩吉特氏病，由固定、溶骨性骨轉移和骨腫瘤引起的骨質流失的繼發性原因的骨再吸收中使用。
6.根據權利要求1或2所述的Nox4抑制劑，所述Nox4抑制劑用于在預防和/或治療糜爛性關節破壞，骨關節病糖尿病，骨轉移，牙根再吸收或先天牙齒萌出異常癥，由于失活導致的伴有骨質流失和骨萎縮的繼發性甲狀旁腺功能亢進癥中使用。
7.選自以下組的Nox4抑制劑:
8.根據權利要求7所述的Nox4抑制劑，所述Nox4抑制劑用于作為藥物使用。
9.含有至少一種根據權利要求7所述的Nox4抑制劑，以及其藥學上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
10.根據權利要求1-6中任意一項所述的用于使用的Nox4抑制劑,其中,所述Nox4抑制劑為根據權利要求7所述的Nox4抑制劑。
11.根據權利要求1-6或10中任意一項所述的用于使用的Nox4抑制劑,其中，所述Nox4抑制劑與至少一種在治療或預防骨質疏松癥中有用的共藥劑給藥。
12.根據權利要求11所述的Nox4抑制劑，其中，所述共藥劑選自二膦酸鹽，雌激素和維生素D。
13.含有與至少一種在預防和/或治療破骨細胞生成功能障礙和/或骨質疏松癥中有用的共藥劑相結合的至少一種Nox4抑制劑，以及至少一種藥學上可接受的載體的藥物組合物。
14.根據權利要求13所述的藥物組合物，其中，所述Nox4抑制劑為根據權利要求7所述的Nox4抑制劑。
15.根據權利要求13或14所述的藥物組合物，其中，所述共藥劑選自二膦酸鹽，雌激素和維生素D。
16.一種破骨細胞生成的抑制劑的確定方法，包括以下步驟: (i)用Nox4的編碼或者表達系統接觸待篩選的物質； (ii)評價所述系統的Nox4活性或Nox-4表達能力； (iii)將步驟(ii)中的Nox4活性或Nox4表達能力與不存在所述物質的系統的Nox4活性或Nox4表達能力進行比較； (iv)選擇一種在步驟(iii)中觀察到Nox4活性或Nox4表達能力降低的物質。
17.一種用于預防或治療受試者中破骨細胞生成功能障礙和/或骨質疏松癥的方法，包括在需要其的受試者中給藥有效量的一種或多種Nox4抑制劑。
18.一種用于減少受試者骨中破骨細胞生成的方法，包括在需要其的受試者中給藥有效量的一種或多種Nox4抑制劑或其藥物制劑。
19.根據權利要求17 或18所述的方法，其中，所述受試者患有骨質流失，骨質流失由破骨細胞過度活躍引起，作為增加破骨細胞形成或細胞活性增強的結果。
20.根據權利要求17或18所述的方法，其中，所述受試者患有破骨細胞生成功能障礙。
21.根據權利要求17或18所述的方法，其中，所述受試者患有選自佩吉特氏病，由固定、溶骨性骨轉移和骨腫瘤引起的骨質流失的繼發性原因的骨再吸收。
22.根據權利要求17或18所述的方法，其中，所述受試者患有破骨細胞生成功能障礙包括糜爛性關節破壞，如已發現的(類風濕)關節炎，骨關節病糖尿病，骨轉移，牙根再吸收或先天牙齒萌出異常癥，由于失活導致的伴有骨質流失和骨萎縮的繼發性甲狀旁腺功能亢進癥O
【文檔編號】A61K31/444GK103945844SQ201280055349
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2012年11月9日 優先權日:2011年11月11日
【發明者】R·布蘭德斯, K·施羅德, P·佩治, B·拉勒, F·加吉尼 申請人:吉恩基奧泰克斯股份有限公司