專利名稱：hsa-miR-545miRNA及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物醫學材料技術領域，具體是涉及一種與癌癥發生相關的hsa-miR-545miRNA及其在制藥中的應用。
背景技術：
癌癥，亦稱惡性腫瘤，為由控制細胞生長增殖機制失常而引起的疾病。癌細胞除了生長失控外，還會局部侵入周遭正常組織甚至經由體內循環系統或淋巴系統轉移到身體其他部分。癌癥是當今世界死亡率最高的疾病之一。已嚴重威脅人類健康。mircoRNA簡稱miRNA，通常長度19-25個核苷酸，純在與各種生物鐘，是進化上保守的小分子單鏈RNA。miRNA基因通常是在核內由RNA聚合酶II(polII)轉錄的，最初產物pr1-miRNA。pr1-miRNA在Drosha RNase和其輔助因子Pasha的作用下被處理成70個核苷酸組成的pre-miRNA。RNA - GTP 和 exportin5 將 pre-miRNA 輸送到細胞質中。隨后，另一個 DicerRNase將其剪切產生約為22個核苷酸長度的miRNA:miRNA*雙鏈。這種雙鏈很快被引導進入沉默復合體(RISC)復合體中，其中一條成熟的單鏈miRNA保留在這一復合體中。成熟的miRNA結合到與其互補的mRNA的位點通過堿基配對調控基因表達。miRNA通過在轉錄后水平調節靶基因的表達在細胞中行使功能。在細胞增殖，生長，分化，凋亡的重要生理過程中起著重要的作用。因此，miRNA的表達異常往往與腫瘤的發生，轉移等相關。50%以上的miRNA定位在腫瘤相關基因組區域，包括染色體擴增區及脆性位點的。這些都表明，我們可以從miRNA調控的角度揭示腫瘤發生機制，并為腫瘤診斷和治療提供新的基因靶點和分子標記。
目前尚無關于hsa-miR-545用于肺癌診斷和治療的報道。
發明內容
本發明的目的之一是提供一種新的hsa-miR-545miRNA,該hsa_miR-545miRNA可以用于治療腫瘤。實現上述目的的技術方案如下。一種 hsa-miR-545miRNA，其堿基組成為 SEQ ID NO:1。本發明的另一目的是提供上述hsa-miR-545miRNA的應用。具體技術方案如下。hsa-miR-545miRNA在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發明的另一目的是提供一種治療腫瘤的藥物組合物。具體技術方案如下:一種治療腫瘤的藥物組合物，其活性成分包括有如上所述的hsa-miR-545miRNA。在其中一個實施例中，所述腫瘤為肺癌。本發明通過對miRNA的研究，進行腫瘤治療藥物的開發，提供一種新的hsa-miR-545miRNA及其在治療腫瘤藥物中的用途。本發明的hsa-miR-545可以有效的降低癌細胞的增殖，誘導癌細胞凋亡及動物成瘤能力，因此可以作為一種的抗癌藥物，特別是在治療肺癌中的應用，其癌癥治療中有極為重要的應用前景。
圖1是實時定量PCR檢測hsa-miR-545在成對的肺癌與癌旁組織中的表達水平，用5S的表達水平作標準化，數據來自3次獨立實驗(土SD);*，P〈0.05; **，P〈0.01; ***，P〈0.001。圖2是用celItiter試劑盒檢測hsa-miR-545對癌細胞的增殖作用。A,hsa-miR-545對A549細胞增殖的影響；B，hsa-miR-545對NIH-H460 (H460)細胞增殖的影響；*，P<0.05; **，P〈0.01; ***，P〈0.001。圖3是檢測hsa-miR-545對癌細胞凋亡作用。A，hsa-miR-545對A549細胞凋亡的影響；B, hsa-miR-545 對 H460 細胞凋亡的影響；*，P〈0.05;**，P〈0.01;***，P〈0.001。
圖4是動物成瘤實驗檢測hsa-miR-545對肺癌細胞A549皮下成瘤能力的作用，A，腫瘤圖片；B，腫瘤體積；C，腫瘤質量；*，P〈0.05;**，P〈0.01;***，P〈0.001。
具體實施例方式為了能夠更清楚地理解本發明的技術內容，特舉以下實施例結合附圖詳細說明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等人,分子克隆:實驗室手冊(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例中所用到的各種常用化學試劑，均為市售產品。miR-545mimics 序列:成熟序列:5，-UCAGCAAACAUUUAUUGUGUGC-3，(hsa_miR-545miRNA，SEQID N0.1)互補序列:3’-A⑶CGUUUGUAAAUAACACACG-5’(SEQ ID N0.2)。miR-545 inhibitor 序列:5，-mGmCmAmCmAmCmAmAmUmAmAmAmUmGmUmUmUmGmCmUmGmA-3，(SEQ ID N0.3)。其中，m為甲基化修飾。本發明所述的由hsa-miR_545miRNA制備的藥物可以是納米顆粒組合物、脂質組合物、由生物相容性分子和/或生物可降解分子組成。本發明所述的由hsa-miR_545miRNA制備的藥物,可以經腸內或胃腸外給藥。腸內給藥是口服給藥胃腸外給藥是血管內給藥、顱內給藥、胸膜內給藥、腫瘤內給藥、腹腔內給藥、肌肉內給藥、淋巴給藥、腺內給藥、皮下給藥、局部給藥、支氣管給藥、氣管內給藥、鼻內給藥、吸入給藥或者滴注給藥。本發明所述的由hsa-miR_545miRNA制備的藥物應用時,濃度在0.01mg/kg體重至10mg/kg體重，miR-506miRNA是由化學合成方法合成得到的；或者通過構建載體表達后純化，則以每劑量為IXlO5至IXlO14個病毒顆粒或者IOOmg至4000mg的DNA質粒載體。實施例1:實時定量PCR分析hsa-miR-545表達:1.樣本準備:收集15例肺癌病人手術切除標本，-80°C凍存，液氮運輸。
權利要求
1.一種堿基組成為 SEQ ID NO:1 的 hsa-miR-545miRNA。
2.權利要求1所述的hsa-miR-545miRNA在制備抗腫瘤藥物中的應用。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征是，所述腫瘤為肺癌。
4.一種治療腫瘤的藥物組合物，其特征是，其活性成分包括有權利要求1所述的 hsa_miR-545miRNA0
5.根據權利要求4所述的藥物組合物，其特征是，所述腫瘤為肺癌。
全文摘要
本發明公開了一種堿基組成為SEQ ID NO1的hsa-miR-545miRNA。本發明的hsa-miR-545可以有效的降低癌細胞的增殖，誘導癌細胞凋亡及動物成瘤能力，因此可以作為一種的抗癌藥物，特別是在治療肺癌中的應用。
文檔編號A61K48/00GK103233007SQ20131004724
公開日2013年8月7日 申請日期2013年2月5日 優先權日2013年2月5日
發明者張必良, 杜博文 申請人:中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院