膠原基復合止血粉劑及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了膠原基復合止血粉劑及其制備方法，其特點是：使用三七素對I型膠原進行改性，用多聚賴氨酸修飾的殼聚糖，將改性后的I型膠原配制成濃度為1%～2%的溶液，將醫用明膠配制成1%～3%溶液，又將修飾的殼聚糖配制成1%～3%的溶液，再將上述三種溶液按質量比為0.5～1∶2～8∶8～2共混，在溫度4～10℃攪拌8～10h，冷凍干燥制成復合海綿。在室溫下，于超聲波清洗器中將復合海綿先后浸漬于改性劑和凝血因子中，充分水洗，經冷凍干燥，粉碎機粉碎制備得到膠原基復合止血粉劑。該粉劑既具有快速有效止血、抗菌、消炎鎮痛、促進創面愈合和修復的功能，又具備較好的粘附性、親水性、生物降解性和生物相容性，并且價格便宜，適用于創傷止血或修復。
【專利說明】膠原基復合止血粉劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種膠原基復合止血粉劑的制備方法，屬于創面愈合和修復的止血粉劑領域。
【背景技術】
[0002]在各類外科手術或創傷治療中，減少出血、降低出血時間，并隔離傷口與外界接觸，避免感染，有利于患者傷口的愈合。臨床上常規的粉狀止血劑的主要成分為無機物，或在其中添加一些快速止血的物質，如凝血酶、氨甲環酸，但這類材料止血效果差，有一定的免疫原性，不能被機體吸收或不能促進組織再生，已經不能滿足人們的需求。近年來，人們研制出了一類生物可吸收止血材料，其中膠原類止血材料受到人們的廣泛關注。1953年研究者發現了膠原具有止血作用，膠原可局部刺激血小板的粘附與凝聚，激活凝血系統。當血管壁受損破壞時，血液中的血小板會在膠原的刺激下迅速接觸、粘附，發生凝聚作用，生成纖維蛋白，形成血栓而阻止血液流動。目前，已有大量的膠原類止血劑出現，膠原類止血粉劑也有相關報道。粉狀止血劑具有不受創面大小及部位的限制的優點，與創面接觸面積大，有利于達到快速有效止血。中國專利CN1406628A以膠原纖維為原料，使用醛類對其進行改性，在密閉的容器中，向膠原纖維加入過量的干燥劑、醇和鹽酸溶液，攪拌24~72h，再經甘油水溶液清洗、真空干燥、粉碎機研磨得到粉劑止血劑。該止血劑止血較為迅速，促進傷口愈合。商品Endo—Avitene是一種15mmX 50mm棍壓的Avitene (干燥、疏松的粉狀或片狀的微晶膠原止血劑)，有一定的止血效果，可在2.6min內有效止血，觀察15min 后無再出血現象[Low RK, Moran ME, Goodnight JE Jr.Clinical correspondenceMicrofibrillar collagen hemostat during laparoscopicalIy directed liverbiopsy [J].J Lapa roendoscopic Surg, 1993，3:15]。美國專利 US6221357B1 公開了“一種具有促進止血作用的皮膚軟膏”，它由熱塑性樹脂或橡膠，與膠原、明膠或殼聚糖粉末組成，止血效果較好。膠原類止血材料能夠有效止血，促進組織再生和功能恢復作用。但是，現有的膠原基止血粉劑尚存在以下不足:
[0003]1.粘附性較差，給手術操作造成不必要的麻煩。
[0004]2.止血性能一般，功能單一，不能滿足市場的要求。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是針對現有技術的不足而提供的一種膠原基復合止血粉劑的制備方法。其特點是該止血粉劑具有較好的粘附性、親水性、良好的生物降解性能、生物相容性優良性能，又能夠快速有效止血、抗菌、消炎鎮痛、促進創面愈合和修復的膠原基復合止血粉劑。
[0006]本發明的目的由以下技術措施實現，其中所述原料份數除特殊說明外，均為重量份數。
[0007]膠原基復合止血粉劑的制備方法包括以下步驟:[0008]I)三七素的制備
[0009]在超聲波頻率均為20~40kHz，功率為50~120w，將三七粉100份浸潰在濃度為75~95wt%的乙醇溶液10~20倍中15~20h，再重復浸潰在濃度為75~95wt%的乙醇溶液5~10倍中5~10h，靜置0.5~1.0h分離，合并兩次浸潰液，留作它用；殘洛晾干,加入10~15倍的水浸提15~20h ;再用5~10倍水重復浸提6~IOh,離心分離得到濾液，將濾液直接經過葡聚糖凝膠柱和0001X7離子交換樹脂進行過濾層析，流速為0.5~3ml/min，合并濾液，用3~7%的活性炭除色，再將濾液減壓濃縮，噴霧干燥制得三七素粉末；
[0010]2)膠原基復合止血粉的制備
[0011](I)三七素改性I型膠原的制備:
[0012] 將I~2份的I型膠原溶解于在濃度為0.05~0.5M的醋酸溶液100份中，配制成濃度為I~2wt%的膠原溶液；將三七素0.05~0.5份加入到上述膠原溶液中，使得三七素與I型膠原的質量比為0.5~2: 8~9.5，于溫度4-10°C，攪拌2~10h，得到復合母液A ；
[0013](2)多聚賴氨酸修飾殼聚糖的制備:
[0014]將I~3份脫乙酰度50%~95%的殼聚糖溶解在濃度為0.05~0.5M的醋酸溶液100份中，配制成濃度為1%~3wt%的溶液；再將0.1~3份的多聚賴氨酸加入到上述溶液中，使其多聚賴氨酸濃度為0.1~3wt%，在室溫下攪拌10~60min，得到復合母液B ；
[0015](3)膠原基復合海綿的制備:
[0016]將0.5~1.0份的醫用明膠溶解在濃度為0.05~0.5M的醋酸溶液100份中，配制成0.5%~1.0wt%的溶液，得復合母液C ;再將上述復合母液A、復合母液B和復合母液C按質量比為0.5~1: 2~8: 8~2共混，在溫度4-10°C，攪拌8~10h，冷凍干燥得到復合海綿；
[0017](4)復合海綿的改性及膠原基復合止血粉的制備:
[0018]在超聲波頻率均為20~40kHz，功率為50~120w，將上述復合海綿浸潰在濃度為IOmmol~50mmol或0.01~10%的改性劑100份中0.5~10h，用超純水反復清洗，繼續在上述超聲波條件下，再將復合海綿浸潰于濃度為100~500U/ml或10~50mmol/L的凝血因子100份中0.5~lh，最后經冷凍干燥、粉碎機粉碎，用劑量為6~30KGy6°Co消毒滅菌，成型包裝，獲得膠原基復合止血粉劑。
[0019]所述I型膠原是從豬皮、豬腱、牛皮、牛腱、驢皮、鼠皮或鼠尾腱中的任一種。
[0020]所述改性劑為戊二醛、甲醛、甲基乙二醛、碳化二亞胺、京尼平、環氧化合物、鋁鈦金屬配合物和琥珀酸酐中的至少一種。
[0021]所述凝血因子為凝血酶、纖維蛋白原、纖連蛋白和氯化鈣中的至少一種。
[0022]所述殼聚糖的脫乙酰度為50~95%。
[0023]所述膠原基復合止血粉劑的制備方法制備得到的膠原基復合止血粉劑。
[0024]性能測試
[0025]1、膠原基復合止血粉劑的性能參數指標的測定方法如表1所示。
[0026]表1膠原基復合止血粉劑所具有的性能參數指標的測定方法
[0027]
【權利要求】
1.一種膠原基復合止血粉劑的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟: 1)三七素的制備 在超聲波頻率均為20~40kHz，功率為50~120W，將三七粉100份浸潰在濃度為75~95wt%的乙醇溶液10~20倍中15~20h，再重復浸潰在濃度為75~95wt%的乙醇溶液5~10倍中5~IOh,靜置0.5~1.0h分離，合并兩次浸潰液，留作它用；殘洛晾干，加入10~15倍的水浸提15~20h ;再用5~10倍水重復浸提6~10h，離心分離得到濾液,將濾液直接經過葡聚糖凝膠柱和0001X7離子交換樹脂進行過濾層析，流速為0.5~3ml/min，合并濾液，用3~7%的活性炭除色，再將濾液減壓濃縮，噴霧干燥制得三七素粉末； 2)膠原基復合止血粉的制備 (1)三七素改性I型膠原的制備: 將I~2重量份的I型膠原溶解于在濃度為0.0500.5M的醋酸溶液100重量份中，配制成濃度為I~2wt%的膠原溶液；將三七素0.05~0.5份加入到上述膠原溶液中，使得三七素與I型膠原的質量比為0.5~2: 8~9.5，于溫度4-10°C，攪拌2~10h，得到復合母液A ; (2)多聚賴氨酸修飾殼聚糖的制備: 將I~3重量份脫乙酰度50%~95%的殼聚糖溶解在濃度為0.05~0.5M的醋酸溶液100重量份中，配制成濃度為1%~3wt%的溶液；再將0.1~3重量份的多聚賴氨酸加入到上述溶液中，使其多聚賴氨酸濃度為0.1~3wt%，在室溫下攪拌10~60min，得到復合母液B ； (3)膠原基復合海綿的制備: 將0.5~1.0重量份的醫用明膠溶解在濃度為0.05~0.5M的醋酸溶液100重量份中，配制成0.5%~1.0wt%的溶液，得復合母液C ;再將上述復合母液A、復合母液B和復合母液C按質量比為0.5~1: 2~8: 8~2共混，在溫度4-10°C，攪拌8~10h，冷凍干燥得到復合海綿； (4)復合海綿的改性及膠原基復合止血粉的制備: 在超聲波頻率均為20~40kHz，功率為50~120w，將上述復合海綿浸潰在濃度為IOmmol~50mmol或0.01~10%的改性劑100重量份中0.5~10h，用超純水反復清洗，繼續在上述超聲波條件下，再將復合海綿浸潰于濃度為100~500U/ml或10~50mmol/L的凝血因子100重量份中0.5~lh，最后經冷凍干燥、粉碎機粉碎，用劑量為6~30KGy6°Co消毒滅菌，成型包裝，獲得膠原基復合止血粉劑。
2.如權利要求1所述膠原基復合止血粉劑的制備方法，其特征在于所述I型膠原是從豬皮、豬腱、牛皮、牛腱、驢皮、鼠皮或鼠尾腱中的任一種。
3.如權利要求1所述膠原基復合止血粉劑的制備方法，其特征在于改性劑為戊二醛、甲醛、甲基乙二醛、碳化二亞胺、京尼平、環氧化合物、鋁鈦金屬配合物和琥珀酸酐中的至少一種。
4.如權利要求1所述膠原基復合止血粉劑的制備方法，其特征在于凝血因子為凝血酶、纖維蛋白原、纖連蛋白和氯化鈣中的至少一種。
5.如權利要求1所述膠原基復合止血粉劑的制備方法，其特征在于殼聚糖的脫乙酰度為50~95%。
6.如權利要求1所述膠原基復合止血粉劑的制備方法制備得到的膠原基復合止血粉劑，其性能符合以下要求: (1)氯化鈉含量:<3%(m/m)； (2)重金屬含量:<10 μ g/g(m/m)； (3)羥脯氨酸含量:不小于總蛋白含量的8%(m / m)； (4)粒度:10~120目； (5)細胞毒性 :細胞毒性反應不大于I級。
【文檔編號】A61P7/04GK103721247SQ201410009613
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2014年1月9日 優先權日:2014年1月9日
【發明者】但年華, 劉新華, 但衛華, 馬文杰, 富勇 申請人:北京華信佳音醫療科技發展有限責任公司, 四川大學