一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜及其制備方法，其特征在于其成分按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽5～10份、白芨膠10～15份、原花青素1～2份、天門冬提取物8～10份、甘油5～10份、霍霍巴油2～5份、維生素E醋酸酯混合物1-2份、香精0.2-1.0份，表面活性劑1～2份、防腐劑0.15～0.2份；本發明將魚鱗或魚骨提取的膠原抗氧化肽經過TGase改性和與白芨膠復合交聯可使膠原蛋白的韌性、延展性、粘連性和熱穩定性得到較大的改善，其主要由天然動、植物中高分子物質構成，具有良好的韌性和延展性，可根據使用人不同的面部特征任意的延展，并且自身具有良好的粘性，不需要其它的粘合劑，使用方便安全。
【專利說明】一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物制品領域，具體涉及到一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜及其制備方法。
【背景技術】
[0002]膠原蛋白是自然界中存在最為廣泛的動物蛋白，它對紫外線的損傷具有良好的修復作用，而且它在化妝品配方中有良好的配伍性、穩定性及抗菌性。另外，膠原蛋白與皮膚有極好的吸附性和相容性，有阻斷褐色素生成的功能。同時，膠原水解物多膚鏈中含氨基、羥基等親水基團，對人體皮膚有保濕作用。除此之外，膠原蛋白結合護膚品晚霜使用具有活膚修復及保濕鎖水、加速細胞復制增殖、大幅提高角質層的代謝速度、修復受損細胞、減少皺紋增加彈性以及高效鎖水作用。經研究實驗表明，水解膠原蛋白溶液還具有抑菌防腐效果。不過，膠原蛋白本身具有機械性能和熱穩定性差的缺點，限制了其應用。通常使用的膠原蛋白基生物材料都要經過改性，以改善膠原蛋白物化方面的性能。。
[0003]膠原蛋白改性方法應用較多的是化學交聯，改性劑主要是戊二醛、碳化二亞胺類和環氧類化合物。而戊二醛與蛋白的反應過程可逆，生成schifT堿的結構不穩定，很容易水解產生具有代謝毒性的游離小分子醛（CN1861801A)。此外，常用的改性方法還有以膠原蛋白與其它天然高分子材料共混。雖然共混能夠借助氫鍵等次級鍵提高膠原蛋白的強度，并增添許多膠原蛋白不具有的優良性質，但是該方法改性的膠原蛋白膜材料在力學性能、熱穩定性、阻濕性等方面仍然不能滿足面膜材料的要求。
[0004]白芨為蘭科多年生草本植物白芨的地下地莖。含有淀粉、葡萄糖、揮發油、黏液質等成分，味苦、甘，性平且黏滑。外用可潤滑肌膚，除面上暗瘡。《藥性論》曰：“治面上斑瘡，令人肌滑。”《本草綱目》曰：“洗面黑，去暗斑。”它主要是潤膚白面，去斑滅瘢，而且能醫手足皸裂等，是古代美容的常用藥。白芨質地黏膩，含有膠質，它能改善局部血液循環，促進上皮細胞修復，能止血、斂瘡、潤膚和生肌。白芨鱗莖組織中含40%-50%天然水溶性多糖，俗稱白芨膠，其化學成分是葡萄甘露聚糖，兩種糖基的比例大約為4:1，膠的平均分子量65000-150000kD，具有抗炎、促凝血、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等生物學活性，是一種優良的天然增稠劑和成膜材料。白芨膠膠無抗原性和致熱原性，與機體組織能夠較好地相容，并可被機體緩慢地降解吸收，因此白芨多糖膠作為生物醫學材料具有潛在的發展前景，此外，白芨膠可替代化學增稠劑應用于日化產品中，具有對皮膚刺激性小，并有延緩皮膚衰老的功效。
[0005]隨著科學技術的發展和人民生活水平的不斷提高，化妝品在人們生活中占據越來越重要的位置，從而帶動了化妝品科學技術的發展。目前市場上銷售的面膜類美容化妝品有粉狀、或泥狀、或膏狀，主流面膜還是以紙質面膜為主，但其具有如下缺點：1.面膜的延展性不好，很難完全 符合每一個人的面部形狀特征；單純的膠原蛋白面膜熱穩定性低、韌性、延展性和粘連性差，不能較好的滿足面膜的使用性能，而且傳統的改性方法可能會水解產生有代謝毒性的游離小分子醛；且有效成分膠原多肽含量低，一般1%左右，而如果加入大量的膠原多肽其面膜的機械性能差的缺點，需加入大量的無效成分基質如成膜材料等；
2.由于面膜的粘性不好，很容易掉下來，給使用者帶來諸多不方便之處；3.面膜敷的時間過長會導致養分被面膜反吸回來，從而引起臉部皮膚干燥等缺陷；4.使用的載體及其他原材料，如透明質酸等昂貴，增加產品成本；文獻中有膠原蛋白和殼聚糖結合的面膜，但是由于殼聚糖水溶性差，其制備過程中需加入大量的刺激性酸性成分；且目前沒有膠原多肽和白芨膠結合的面膜上市。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供了一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜及其制備方法，其面膜膠原肽含量高，具有良好的韌性、延展性和保濕性、美容護膚，安全無毒，克服了單純的膠原蛋白面膜熱穩定性低、韌性、延展性和粘連性差等缺點，
[0007]本發明是通過如下技術方案實現的：
[0008]一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜，其特征在于其成分按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽5~10份、白芨膠10~15份、原花青素I~2份、天門冬提取物8~10份、甘油5~10份、霍霍巴油2~5份、維生素E醋酸酯混合物1-2份、香精0. 2-1. 0份，表面活性劑I~2份、防腐劑0. 15~0. 2份；所述的防腐劑為尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比為4 ：1 ;所述的表面活性劑為吐溫20 ;所述魚源膠原抗氧化肽為從魚鱗或魚骨中提取的膠原抗氧化肽；所述天門冬提取物為天門冬以水或含水乙醇提取的提取物。
[0009]更進一步的，所述的魚源膠原抗氧化肽美容面膜的制備方法，其特征在于包括下列步驟：
[0010]I)將魚源膠原抗氧化肽溶于蒸餾水中，50-60°C水浴加熱至完全溶解，制成質量分數為10%的膠原抗氧化肽溶液，`冷卻至室溫備用；將膠原抗氧化肽溶液中添加質量為膠原抗氧化肽的2%的TGase，50°C水浴條件下反應2h，80°C滅酶5min，冷卻至室溫；
[0011]2)將白芨膠浸入蒸餾水，待充分膨脹后，置50_60°C的水浴中使其溶解，加水稀釋至制成質量分數為20%的白芨膠溶液；
[0012]3)將上述制得的膠原蛋白溶液和白芨膠溶液混合，攪拌均勻，再加入原花青素混合均勻，于30-50°C恒溫攪拌1-3小時，制得原液；
[0013]4)將上述原液中，加入天門冬提取物，混合均勻，制得水相；將甘油、霍霍巴油、維生素E醋酸酯混合物、表面活性劑、香精和防腐劑混合均勻，制得油相；將上述水相和油相混合，充分攪拌均勻，在0. IMPa下減壓脫氣30min，制得混合溶液；
[0014]5)將上述混合溶液倒入模具中成型，于40_60°C干燥3-10小時，揭膜即得到膠原
抗氧化肽美容面膜。
[0015]優選的，所述魚源膠原抗氧化肽的制備方法為：
[0016]I)前處理：將魚鱗或魚骨原料清洗干凈，用料液質量比為I :20的0. lmol/L的NaOH溶液浸泡，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0017]2)脫鈣：魚骨原料用料液質量比為I :5的0. 5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH調pH7. 0-7. 8，每24小時更換一次EDTA溶液，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍，再用料液質量比為I :20的10%的異丙醇溶液浸泡24小時，再用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍；魚鱗原料用料液質量比為I :20的0. 4mol/L HCl溶液浸泡，同時用磁力攪拌器攪拌90分鐘后，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0018]3)水煮：將魚鱗或魚骨原料與料液質量比為I :1-2的水加入瞬間變壓提取灌上的高壓浸潰罐中，通過氣泵向高壓浸潰罐內充氣加壓8~lOkgf/cm2，浸泡1-2小時；將高壓浸潰罐內的物料放入瞬間變壓提取灌的高壓浸潰罐上的低壓提取灌內，加料液質量比為I :30的蒸餾水，抽真空，保持90°C低壓微沸煎煮1-2小時，提取液用雙層脫脂紗布過濾；
[0019]所述瞬間變壓提取灌包括設有蒸氣夾套的低壓提取灌，低壓提取灌上設有通過聯通閥連接的高壓浸潰罐，所述高壓浸潰罐上部設有可封閉的進料口、壓力表和連接氣泵的進氣閥；所述低壓提取灌的罐體上設有可封閉的進料口、出渣口、冷凝器和連有真空泵的抽氣閥；
[0020]4)酶解：在過濾液中放入復合蛋白酶進行酶解2_6h，酶解溫度為45_55°C，pH為7-8 ;然后在90-100°C下滅酶4-10min ;所述復合蛋白酶選自膠原蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶的至少兩種；復合蛋白酶的加入量按質量百分比為原料質量的0. 1-0. 5% ；
[0021]5)精制：酶解液經過離心后，上清液采用超濾膜過濾分離，收集分子量< 4000道爾頓的組分進行脫色，脫鹽，噴霧干燥或冷凍干燥，得到魚源膠原抗氧化肽粉末。
[0022]優選的，所述白芨膠的制備方法為：將白芨，粉碎，加6-8倍量的50_60°C水浸泡
6-8h，時時攪拌、濾過，濾液備用；藥渣再4-6倍量的50-60°C水浸泡2次，每次浸泡4h，濾過；合并3次濾液，濃縮成稠膏狀，冷卻后加95%乙醇，使含醇量達70%-75%，攪拌，即析出大量絮狀沉液，靜置lh，真空抽濾至干，真空干燥，研細，即得。
`[0023]酶交聯劑可以引起膠原多肽分子內或分子間的交聯反應，從而改善膠原多肽的性能。最常用的酶是谷氨酞胺轉移酶（TGase)。TGase能催化谷氨酞胺Y _氨基和賴氨酸的￡ -氨基形成交聯鍵，從而改善膠原多肽的流變特性和機械性能。分子量較大的膠原多肽的機械強度比分子量小的要高，但其抗氧化性能一般是隨著分子量的減小而增大，本發明將其經過TGase改性，改善了其機械性能，而其抗氧化性能降低不明顯，取得了意向不到的技術效果。
[0024]相對于現有技術，本發明的有益效果是：
[0025]I)本發明的膠原抗氧化肽美容面膜主要由天然動、植物中高分子物質構成，無毒、無味、無副作用；它不僅具有雙重保濕效果、好的韌性、延展性及粘接性、且還具有膚感更佳，深層潔膚的功能，是一種經濟實用有效的護膚美容化妝品。本發明中使用的交聯劑是原花青素，除了其本身具有的無毒性、強抗氧化性等優良的生物學性能外，采用它制備的美容面膜可避免游離小分子醛造成的代謝毒性現象和化學交聯劑在材料中的殘留；本發明將魚源膠原抗氧化肽經過TGase改性和與白芨膠復合交聯可使膠原蛋白的韌性、延展性、粘連性和熱穩定性得到較大的改善，克服了單純的膠原蛋白面膜熱穩定性低、韌性、延展性和粘連性差等缺點，且其魚源膠原抗氧化肽在TGase改性前后抗氧化性變化不明顯。本發明膠原抗氧化肽美容面膜具有良好的韌性和延展性，可根據使用人不同的面部特征任意的延展，并且自身具有良好的粘性，不需要其它的粘合劑，使用方便安全。經試驗，本發明的膠原抗氧化肽美容面膜的抗撕強度> 600g/cm3，吸水率> 25倍，其吸濕性和抗撕強度優異。
[0026]2)白芨膠屬多糖類，膠原抗氧化肽屬蛋白質類，蛋白質和糖類在一起可能存在氫鍵作用和靜電作用，再加上原花青素交聯作用，在胺基、羥基等之間相互交聯，進一步提高其力學強度。白芨膠作為成膜材料可以增加面膜的溶脹性和柔韌性，經過可以改善膠原海綿的機械強度，其對面部的粘附速度快，粘附牢度強，彈性好，透氣性好；白芨膠具有止血抗菌和促進傷口愈合，改善局部血液循環，能止血、斂瘡、潤膚和生肌；皮膚疾病大多由邪熱熾盛、肺胃蘊熱所致，天門冬具有滋陰，潤燥，清肺，降火的功效，《本草綱目》云：煮食之，令人肌體滑澤白凈，除身上一切惡氣不潔之疾。經試驗發明還具有美白的效果，白芨和天門冬中都有粘液質和多糖，加入到化妝品中可增加藥物的粘著性和膠化功能及藥物在皮膚表面形成薄膜的能力。本發明膠原抗氧化肽美容面膜采用甘油作保濕劑，結合膠原蛋白、白芨膠固有的保濕功能，從而實現了雙重保濕效果，而且其韌性決定了它具有很好的膚感。本發明的美容面膜不僅可以提高膠原蛋白面膜的保濕功能，還可以軟化角質層，有助于消除皺紋、面膜干燥過程中使得皮膚適度收縮，使得松弛肌膚繃緊、同時美白肌膚并是受損肌膚得到修復，達到美容的目的。
[0027]3)本發明采用水煮法和酶法提取膠原抗氧化肽，方法操作簡便，產品收率高。本發明的魚源膠原抗氧化肽具有強抗氧化活性，且可溶性好，無異味，可用于制備美容功能的化妝品。經預處理的魚鱗或魚骨原料經高壓浸潰后，水大量進入細胞膜內，然后經瞬間釋放壓力進入低壓提取灌內，可有效撐破細胞膜，有利于有效成分的快速溶出。采用溫浸+醇沉法提取純化白芨膠，不但減少了雜質含量，而且工藝簡單、大大降低了生產成本，所制得的白芨膠純度高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0028]下面結合附圖對本發明用到的設備作進一步說明：
[0029]圖I是瞬間變 壓力提取灌的結構示意圖；
[0030]圖中：1為高壓浸潰罐、2為視鏡、3為可封閉的進料口、4為壓力表、5為連接氣泵的進氣閥、6為低壓提取罐、7為冷凝器、8為蒸氣夾套、9為出渣口、10為放料閥、11連有真空泵的抽氣閥、12聯通閥。
【具體實施方式】
[0031]下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[0032]實施例一：
[0033]I、魚源膠原抗氧化肽的制備：
[0034]I)前處理：將魚鱗原料清洗干凈，用料液質量比為I :20的0. lmol/L的NaOH溶液浸泡，用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0035]2)脫鈣：魚鱗原料用料液質量比為I :20的0. 4mol/L HCl溶液浸泡，同時用磁力攪拌器攪拌90分鐘后，用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0036]3)水煮：將魚鱗或魚骨原料與料液質量比為I :1的水加入瞬間變壓提取灌上的高壓浸潰罐中，通過氣泵向高壓浸潰罐內充氣加壓8~lOkgf/cm2，浸泡2小時；將高壓浸潰罐內的物料放入瞬間變壓提取灌的高壓浸潰罐上的低壓提取灌內，加料液質量比為I :30的蒸餾水，抽真空，保持90°C低壓微沸煎煮I小時，提取液用雙層脫脂紗布過濾；
[0037]如圖I所示，所述瞬間變壓提取灌包括設有蒸氣夾套8的低壓提取灌6，低壓提取灌6上設有通過聯通閥12連接的高壓浸潰罐1，所述高壓浸潰罐I上部設有可封閉的進料口 3、壓力表4和連接氣泵的進氣閥5 ;所述低壓提取灌6的罐體上設有可封閉的進料口 3、出渣口 9、冷凝器7和連有真空泵的抽氣閥11 ；
[0038]4)酶解：在過濾液中放入復合蛋白酶進行酶解2_6h，酶解溫度為45_55°C，pH為7-8 ;然后在90-100°C下滅酶4-10min ;所述復合蛋白酶為堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶；復合蛋白酶的加入量按質量百分比為原料質量的0. 5% ；
[0039]5)精制：酶解液經過離心后，上清液采用超濾膜過濾分離，收集分子量< 4000道爾頓的組分進行脫色，脫鹽，噴霧干燥或冷凍干燥，得到魚源膠原抗氧化肽粉末。
[0040]2、白芨膠的制備：將白芨，粉碎，加8倍量的60°C水浸泡8h，時時攪拌、濾過，濾液備用；藥渣再加6倍量的60°C水浸泡2次，每次浸泡4h，濾過；合并3次濾液，濃縮成稠膏狀，冷卻后加95%乙醇，使含醇量達70%，攪拌，即析出大量絮狀沉液，靜置lh，真空抽濾至干，真空干燥，研細，即得。
[0041]3、天門冬提取物的制備：天門冬以8倍量的水提取2-3次，合并提取液，濃縮干燥，即得天門冬提取物。
[0042]4、膠原抗氧化肽美容面膜的制備：
[0043]處方按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽5份、白芨膠10份、原花青素1份、天門冬提取物10份、甘油5份、霍霍巴油2份、維生素E醋酸酯混合物1份、香精0. 2份，表面活性劑1份、防腐劑0. 15份；所述的防腐劑為尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比為4 ：1 ;所述的表面活性劑為吐溫20 ;所述魚源膠原抗氧化肽為從魚鱗或魚骨中提取的膠原抗氧化肽。
[0044]I)將魚源膠原抗氧化肽溶于蒸餾水中，50-60°C水浴加熱至完全溶解，制成質量分數為10%的膠原抗氧化肽溶液，冷卻至室溫備用；將膠原抗氧化肽溶液中添加質量為膠原抗氧化肽的2%的TGase，50°C水浴條件下反應2h，80°C滅酶5min，冷卻至室溫；
[0045]2)將白芨膠浸入蒸餾水，待充分膨脹后，置50_60°C的水浴中使其溶解，加水稀釋至制成質量分數為20%的白芨膠溶液；
[0046]3)將上述制得的膠原蛋白溶液和白芨膠溶液混合，攪拌均勻，再加入原花青素混合均勻，于40°C恒溫攪拌I小時，制得原液；
[0047]4)將上述原液中，加入天門冬提取物，混合均勻，制得水相；將甘油、霍霍巴油、維生素E醋酸酯混合物、表面活性劑、香精和防腐劑混合均勻，制得油相；將上述水相和油相混合，充分攪拌均勻，在0. IMPa下減壓脫氣30min，制得混合溶液；
[0048]5)將上述混合溶液倒入模具中成型，于40°C干燥10小時，揭膜即得到膠原抗氧化肽美容面膜。
[0049]實施例二 ：
[0050]I、魚源膠原抗氧化肽的制備：
[0051]I)前處理：將魚骨原料清洗干凈，用料液質量比為I :20的0. lmol/L的NaOH溶液浸泡，用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0052]2)脫鈣：魚骨原料用料液質量比為I :5的0. 5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH調pH7. 0-7. 8， 每24小時更換一次EDTA溶液，用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍，再用料液質量比為I :20的10%的異丙醇溶液浸泡24小時，再用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0053]3)水煮：將魚骨原料與料液質量比為I :2的水加入瞬間變壓提取灌上的高壓浸潰罐中，通過氣泵向高壓浸潰罐內充氣加壓8~IOkgf/cm2，浸泡I小時；將高壓浸潰罐內的物料放入瞬間變壓提取灌的高壓浸潰罐上的低壓提取灌內，加料液質量比為I :30的蒸餾水，抽真空，保持90°C低壓微沸煎煮2小時，提取液用雙層脫脂紗布過濾；
[0054]4)酶解：在過濾液中放入復合蛋白酶進行酶解2_6h，酶解溫度為45_55°C，pH為7-8 ;然后在90-100°C下滅酶4-10min ;所述復合蛋白酶為膠原蛋白酶、中性蛋白酶；復合蛋白酶的加入量按質量百分比為原料質量的0. 3% ；
[0055]5)精制：酶解液經過離心后，上清液采用超濾膜過濾分離，收集分子量≤ 4000道爾頓的組分進行脫色，脫鹽，噴霧干燥或冷凍干燥，得到魚源膠原抗氧化肽粉末。
[0056]2、白芨膠的制備：將白芨，粉碎，加6倍量的50°C水浸泡6h，時時攪拌、濾過，濾液備用；藥渣再加4倍量的50°C水浸泡2次，每次浸泡4h，濾過；合并3次濾液，濃縮成稠膏狀，冷卻后加95%乙醇，使含醇量達75%，攪拌，即析出大量絮狀沉液，靜置lh，真空抽濾至干，真空干燥，研細，即得。
[0057]3、天門冬提取物的制備：天門冬以10倍量的水提取2-3次，合并提取液，濃縮干燥，即得天門冬提取物。
[0058]4、膠原抗氧化肽美容面膜的制備：
[0059]處方按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽5份、白芨膠10份、原花青素1份、天門冬提取物8份、甘油10份、霍霍巴油5份、維生素E醋酸酯混合物2份、香精I. 0份，表面活性劑2份、防腐劑0. 2份；所述的防腐劑為尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比為4 ：1 ;所述的表面活性劑為吐溫20 ;所述魚源膠原抗氧化肽為從魚鱗或魚骨中提取的膠原抗氧化肽。
[0060]1)將魚源膠原抗氧化肽溶于蒸餾水中，50_60°C水浴加熱至完全溶解，制成質量分數為10%的膠原抗氧化肽溶液，冷卻至室溫備用；將膠原抗氧化肽溶液中添加質量為膠原抗氧化肽的2%的TGase，50°C水浴條件下反應2h，80°C滅酶5min，冷卻至室溫；
[0061]2)將白芨膠浸入蒸餾水，待充分膨脹后，置50_60°C的水浴中使其溶解，加水稀釋至制成質量分數為20%的白芨膠溶液；
[0062]3)將上述制得的膠原蛋白溶液和白芨膠溶液混合，攪拌均勻，再加入原花青素混合均勻，于50°C恒溫攪拌1-3小時，制得原液；
[0063]4)將上述原液中，加入天門冬提取物，混合均勻，制得水相；將甘油、霍霍巴油、維生素E醋酸酯混合物、表面活性劑、香精和防腐劑混合均勻，制得油相；將上述水相和油相混合，充分攪拌均勻，在0. IMPa下減壓脫氣30min，制得混合溶液；
[0064]5)將上述混合溶液倒入模具中成型，于40_60°C干燥3_10小時，揭膜即得到膠原抗氧化肽美容面膜。
[0065]實施例三：
[0066]1、魚源膠原抗氧化肽的制備：
[0067]1)前處理：將魚鱗原料清洗干凈，用料液質量比為I :20的0. lmol/L的NaOH溶液浸泡，用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0068]2)脫鈣：魚鱗原料用料液質量比為I :20的0. 4mol/L HCl溶液浸泡，同時用磁力攪拌器攪拌90分鐘后，用自來水沖洗pH至中性(沖洗10遍左右)，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0069]3)水煮：將魚鱗原料與料液質量比為I :1. 5的水加入瞬間變壓提取灌上的高壓浸潰罐中，通過氣泵向高壓浸潰罐內充氣加壓8~lOkgf/cm2，浸泡I. 5小時；將高壓浸潰罐內的物料放入瞬間變壓提取灌的高壓浸潰罐上的低壓提取灌內，加料液質量比為I :30的蒸餾水，抽真空，保持90°C低壓微沸煎煮I. 5小時，提取液用雙層脫脂紗布過濾；
[0070]4)酶解：在過濾液中放入復合蛋白酶進行酶解2_6h，酶解溫度為45_55°C，pH為7-8 ;然后在90-100°C下滅酶4-10min ;所述復合蛋白酶選自膠原蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶的至少兩種；復合蛋白酶的加入量按質量百分比為原料質量的0. 3% ；
[0071]5)精制：酶解液經過離心后，上清液采用超濾膜過濾分離，收集分子量< 4000道爾頓的組分進行脫色，脫鹽，噴霧干燥或冷凍干燥，得到魚源膠原抗氧化肽粉末。
[0072]2、白芨膠的制備：將白芨，粉碎，加8倍量的60°C水浸泡8h，時時攪拌、濾過，濾液備用；藥渣再加6倍量的60°C水浸泡2次，每次浸泡4h，濾過；合并3次濾液，濃縮成稠膏狀，冷卻后加95%乙醇，使含醇量達70%，攪拌，即析出大量絮狀沉液，靜置lh，真空抽濾至干，真空干燥，研細，即得。
[0073]3、天門冬提取物的制備：天門冬以10倍量的50%乙醇提取3次，合并提取液，濃縮干燥，即得天門冬提取物。
[0074]4、膠原抗氧化肽美容面膜的制備：
[0075]處方按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽10份、白芨膠15份、原花青素2份、天門冬提取物8份、甘油8份、霍霍巴油4份、維生素E醋酸酯混合物I. 5份、香精0. 5份，表面活性劑I. 5份、防腐劑0. 2份；所述的防腐劑為尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比為4 ：1 `;所述的表面活性劑為吐溫20 ;所述魚源膠原抗氧化肽為從魚鱗或魚骨中提取的膠原抗氧化肽。
[0076]I)將魚源膠原抗氧化肽溶于蒸餾水中，50-60°C水浴加熱至完全溶解，制成質量分數為10%的膠原抗氧化肽溶液，冷卻至室溫備用；將膠原抗氧化肽溶液中添加質量為膠原抗氧化肽的2%的TGase，50°C水浴條件下反應2h，80°C滅酶5min，冷卻至室溫；
[0077]2)將白芨膠浸入蒸餾水，待充分膨脹后，置50_60°C的水浴中使其溶解，加水稀釋至制成質量分數為20%的白芨膠溶液；
[0078]3)將上述制得的膠原蛋白溶液和白芨膠溶液混合，攪拌均勻，再加入原花青素混合均勻，于30°C恒溫攪拌2小時，制得原液；
[0079]4)將上述原液中，加入天門冬提取物，混合均勻，制得水相；將甘油、霍霍巴油、維生素E醋酸酯混合物、表面活性劑、香精和防腐劑混合均勻，制得油相；將上述水相和油相混合，充分攪拌均勻，在0. IMPa下減壓脫氣30min，制得混合溶液；
[0080]5)將上述混合溶液倒入模具中成型，于40°C干燥10小時，揭膜即得到膠原抗氧化肽美容面膜。
[0081]實施例四：
[0082]I、魚源膠原抗氧化肽的制備：
[0083]I)前處理：將魚骨原料清洗干凈，用料液質量比為I :20的0. lmol/L的NaOH溶液浸泡，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0084]2)脫鈣：魚骨原料用料液質量比為I :5的0. 5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH調pH7. 4，每24小時更換一次EDTA溶液，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍，再用料液質量比為I :20的10%的異丙醇溶液浸泡24小時，再用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍；
[0085]3)水煮：將魚骨原料與料液質量比為I :1. 5的水加入瞬間變壓提取灌上的高壓浸潰罐中，通過氣泵向高壓浸潰罐內充氣加壓8~lOkgf/cm2，浸泡I. 5小時；將高壓浸潰罐內的物料放入瞬間變壓提取灌的高壓浸潰罐上的低壓提取灌內，加料液質量比為I :30的蒸餾水，抽真空，保持90°C低壓微沸煎煮I. 5小時，提取液用雙層脫脂紗布過濾；
[0086]4)酶解：在過濾液中放入復合蛋白酶進行酶解2_6h，酶解溫度為45_55°C，pH為
7-8 ;然后在90-100°C下滅酶4-10min ;所述復合蛋白酶為膠原蛋白酶、中性蛋白酶；復合蛋白酶的加入量按質量百分比為原料質量的0. 3% ；
[0087]5)精制：酶解液經過離心后，上清液采用超濾膜過濾分離，收集分子量< 4000道爾頓的組分進行脫色，脫鹽，噴霧干燥或冷凍干燥，得到魚源膠原抗氧化肽粉末。
[0088]2、白芨膠的制備：將白芨，粉碎，加6倍量的50°C水浸泡6h，時時攪拌、濾過，濾液備用；藥渣再加4倍量的50°C水浸泡2次，每次浸泡4h，濾過；合并3次濾液，濃縮成稠膏狀，冷卻后加95%乙醇，使含醇量達70%，攪拌，即析出大量絮狀沉液，靜置lh，真空抽濾至干，真空干燥，研細，即得。
[0089]3、天門冬提取物的制備：天門冬以10倍量的70%乙醇提取2次，合并提取液，濃縮干燥，即得天門冬提取物。
[0090]4、膠原抗氧化肽美容面膜的制備：
[0091]處方按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽10份、白芨膠10份、原花青素I. 5份、天門冬提取物10份、甘油10份、霍霍巴油4份、維生素E醋酸酯混合物2份、香精0. 7份，表面活性劑2份、防腐劑0. 15份；所述的防腐劑為尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比為4 ：1 ;所述的表面活性劑為吐溫20 ;所述魚源膠原抗氧化肽為從魚鱗或魚骨中提取的膠原抗氧化肽。
[0092]I)將魚源膠原抗氧化肽溶于蒸餾水中，50_60°C水浴加熱至完全溶解，制成質量分數為10%的膠原抗氧化肽溶液，冷卻至室溫備用；將膠原抗氧化肽溶液中添加質量為膠原抗氧化肽的2%的TGase，50°C水浴條件下反應2h，80°C滅酶5min，冷卻至室溫；
[0093]2)將白芨膠浸入蒸餾水，待充分膨脹后，置50_60°C的水浴中使其溶解，加水稀釋至制成質量分數為20%的白芨膠溶液；
[0094]3)將上述制得的膠原蛋白溶液和白芨膠溶液混合，攪拌均勻，再加入原花青素混合均勻，于50°C恒溫攪拌1-3小時，制得原液；
[0095]4)將上述原液中，加入天門冬提取物，混合均勻，制得水相；將甘油、霍霍巴油、維生素E醋酸酯混合物、表面活性劑、香精和防腐劑混合均勻，制得油相；將上述水相和油相混合，充分攪拌均勻，在0. IMPa下減壓脫氣30min，制得混合溶液；
[0096]5)將上述混合溶液倒入模具中成型，于40_60°C干燥3_10小時，揭膜即得到膠原
抗氧化肽美容面膜。
[0097] 實施例五：本發明膠原抗氧化肽和美容面膜在抑制細胞黑色素合成的試驗
[0098]小鼠B16黑色素瘤細胞己成為定量評價黑色素合成的模型系統。取對數生長期的B16細胞，經0. 25%(重量百分數）胰酶消化，以RPMI-1640完全培養基配成密度為5*105/mL細胞懸液，接種于細胞培養板，置于37°C、5%(體積百分數）C02的培養箱內培養。
[0099]貼壁24h后，棄培養液，分別加入質量比為5%的膠原抗氧化肽的完全培養液(樣品I為5%的膠原抗氧化肽溶液，樣品2為含量5%的膠原抗氧化肽的實施例二的美容面膜溶液)，對照組加入等體積的完全培養基，繼續培養48h。分別測定細胞內黑色素含量、酪氨酸酶活性和還原型谷胱甘肽含量。
[0100]表本發明膠原抗氧化肽和美容面膜在抑制細胞黑色素合成的影響
【權利要求】
1.一種魚源膠原抗氧化肽美容面膜，其特征在于其成分按重量百分比計為：魚源膠原抗氧化肽5~10份、白芨膠10~15份、原花青素I~2份、天門冬提取物8~10份、甘油5~10份、霍霍巴油2~5份、維生素E醋酸酯混合物1-2份、香精0. 2-1. 0份，表面活性劑1~2份、防腐劑0. 15~0. 2份；所述的防腐劑為尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比為4 ：1 ;所述的表面活性劑為吐溫20 ;所述魚源膠原抗氧化肽為從魚鱗或魚骨中提取的膠原抗氧化肽；所述天門冬提取物為天門冬以水或含水乙醇提取的提取物。
2.權利要求1所述的魚源膠原抗氧化肽美容面膜的制備方法，其特征在于包括下列步驟： 1)將魚源膠原抗氧化肽溶于蒸餾水中，50-60°C水浴加熱至完全溶解，制成質量分數為10%的膠原抗氧化肽溶液，冷卻至室溫備用；將膠原抗氧化肽溶液中添加質量為膠原抗氧化肽的2%的TGase，50°C水浴條件下反應2h，80°C滅酶5min，冷卻至室溫； 2)將白芨膠浸入蒸餾水，待充分膨脹后，置50-60°C的水浴中使其溶解，加水稀釋至制成質量分數為20%的白芨膠溶液； 3)將上述制得的膠原蛋白溶液和白芨膠溶液混合，攪拌均勻，再加入原花青素混合均勻，于30-50°C恒溫攪拌1-3小時，制得原液； 4)將上述原液中，加入天門冬提取物，混合均勻，制得水相；將甘油、霍霍巴油、維生素E醋酸酯混合物、表面活性劑、香精和防腐劑混合均勻，制得油相；將上述水相和油相混合，充分攪拌均勻，在0. 1MPa 下減壓脫氣30min，制得混合溶液； 5)將上述混合溶液倒入模具中成型，于40-60°C干燥3-10小時，揭膜即得到膠原抗氧化肽美容面膜。
3.根據權利要求2所述的魚源膠原抗氧化肽美容面膜的制備方法，其特征在于所述魚源膠原抗氧化肽的制備方法為： 1)前處理：將魚鱗或魚骨原料清洗干凈，用料液質量比為I:20的0. lmol/L的NaOH溶液浸泡，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍； 2)脫鈣：魚骨原料用料液質量比為I:5的0. 5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH調pH7. 0-7. 8，每24小時更換一次EDTA溶液，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍，再用料液質量比為I :20的10%的異丙醇溶液浸泡24小時，再用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍；魚鱗原料用料液質量比為I :20的0. 4mol/L HCl溶液浸泡，同時用磁力攪拌器攪拌90分鐘后，用自來水沖洗pH至中性，再用蒸餾水沖洗3遍； 3)水煮：將魚鱗或魚骨原料與料液質量比為I:1-2的水加入瞬間變壓提取灌上的高壓浸潰罐中，通過氣泵向高壓浸潰罐內充氣加壓8~lOkgf/cm2，浸泡1-2小時；將高壓浸潰罐內的物料放入瞬間變壓提取灌的高壓浸潰罐上的低壓提取灌內，加料液質量比為I :30的蒸餾水，抽真空，保持90°C低壓微沸煎煮1-2小時，提取液用雙層脫脂紗布過濾； 所述瞬間變壓提取灌包括設有蒸氣夾套的低壓提取灌，低壓提取灌上設有通過聯通閥連接的高壓浸潰罐，所述高壓浸潰罐上部設有可封閉的進料口、壓力表和連接氣泵的進氣閥；所述低壓提取灌的罐體上設有可封閉的進料口、出渣口、冷凝器和連有真空泵的抽氣閥； 4)酶解：在過濾液中放入復合蛋白酶進行酶解2-6h，酶解溫度為45-55°C，pH為7-8；然后在90-100°C下滅酶4-10min ;所述復合蛋白酶選自膠原蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶的至少兩種；復合蛋白酶的加入量按質量百分比為原料質量的0. 1-0. 5% ； 5)精制：酶解液經過離心后，上清液采用超濾膜過濾分離，收集分子量< 4000道爾頓的組分進行脫色，脫鹽，噴霧干燥或冷凍干燥，得到魚源膠原抗氧化肽粉末。
4.根據權利要求2所述的魚源膠原抗氧化肽美容面膜的制備方法，其特征在于所述白芨膠的制備方法為：將白芨，粉碎，加6-8倍量的50-60°C水浸泡6-8h，時時攪拌、濾過，濾液備用；藥渣再4-6倍量的50-60°C水浸泡2次，每次浸泡4h，濾過；合并3次濾液，濃縮成稠膏狀，冷卻后加95%乙醇，使含醇量達70%-75%，攪拌，即析出大量絮狀沉液，靜置lh，真空抽濾至干，真空干燥，研細，即得。
【文檔編號】A61K8/73GK103705431SQ201410010011
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月9日 優先權日:2014年1月9日
【發明者】宋理平, 冒樹泉, 許 鵬, 馬國紅, 張延華, 王愛英, 吳君, 王秉利 申請人:山東省淡水漁業研究院