中藥桑杜糖免疫增強劑及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種由中藥桑葉多糖和杜仲多糖制成的免疫增強劑，由桑葉多糖和杜仲多糖制成，本發明的桑杜糖増免劑在體外能顯著刺激雞淋巴細胞增殖；配合新城疫疫苗免疫雛雞，能顯著提高血清抗體效價，促進淋巴細胞增殖，增強雛雞細胞免疫和體液免疫；配合豬藍耳疫苗免疫仔豬，能顯著提高血清抗體效價；配合豬藍耳疫苗免疫蛋雞，能顯著提高藍耳卵黃抗體效價，提高疫苗的免疫應答。
【專利說明】中藥桑杜糖免疫增強劑及其應用【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥桑杜糖免疫增強劑，由桑葉多糖和杜仲多糖組成，簡稱桑杜糖増免劑，屬于畜禽免疫佐劑領域。
【背景技術】
[0002]動物的病毒性傳染病，如高致病性禽流感、新城疫、傳染性法氏囊病等，嚴重危害畜牧業的發展，造成嚴重的經濟損失，一直受到世界的廣泛關注。免疫接種是防控這些疫病暴發的最好措施。然而單獨接種疫苗通常產生相對較弱的免疫力。免疫佐劑能增強疫苗的免疫應答，使保護時間延長。許多免疫佐劑如弗氏佐劑和脂多糖因易引起全身性反應(如惡心，發熱，過敏反應，嗜酸性粒細胞增多，中毒，麻痹以及自身免疫性疾病)和局部炎癥反應(炎癥，疼痛，腫脹，壞死，潰瘍和膿腫)而限制了其廣泛應用。因此，研制高效安全的新型免疫佐劑成為防控動物傳染病的熱點。許多中藥證明具有免疫增強作用，且高效安全。但大多數組方復雜，給藥不便。隨著集約化養殖業的發展，動物群體飲水給藥具有更明顯的優勢。本發明，進行了組分藥篩選、方劑篩選和劑量篩選，結合便于應用等方面綜合比較，研制成功由桑葉多糖和杜仲多糖制成的桑杜糖増免劑。
【發明內容】
[0003]本發明針對當前動物疫病防控現有技術中急需高效、安全的免疫增強劑或疫苗佐劑的問題，提供一種由桑葉多糖和杜仲多糖制成的新型中藥免疫增強劑。
[0004]本發明一種新型中藥免疫增強劑，其特征在于，每1000ml藥液由桑葉150g和杜仲皮145g制成。藥液中的桑葉多糖含量不低于0.2%，杜仲多糖的含量不低于0.1%。
[0005]生產每1000mL藥液的工藝流程為:桑葉水煎2次，合并濾液，醇沉后干燥，640mL水溶解；杜仲乙醇脫脂后，水煎2次，合并濾液，醇沉后干燥，360mL水溶解。兩種溶液混勻，分裝，即得。
[0006]桑葉多糖的提取工藝為桑葉加30倍質量水煎煮2次，第一次1.5小時，第二次I小時。杜仲多糖的提取工藝為杜仲皮加4倍質量無水乙醇回流脫脂2次，后水煎2次，第一次1.5小時，第二次I小時。
[0007]有益效果:本發明的基礎工作，首先選擇有免疫增強作用的中藥多糖，比較它們的增強免疫作用，篩選出作用較好的桑葉多糖、杜仲多糖，按不同比例組成多個復方，通過系列試驗比較，證明復方的效果強于單味藥，篩選出效果最好的組方配比(表1 )。
[0008]本領域的技術人員可以通過正交試驗確定了桑葉多糖和杜仲多糖的提取條件，優化多糖溶解性條件，確定了桑杜糖増免劑的生產工藝。
[0009]與現有技術相比，本發明優點如下:
[0010]1.與化學佐劑相比，桑杜糖増免劑效果可靠，且來源于天然中藥，無毒副作用，無藥殘隱患，保障動物源食品安全；生產對環境無污染，符合綠色環保的要求。
[0011]2.與傳統中藥方劑相比，桑杜糖増免劑處方精煉，成分明確，工藝簡化，質量可控，給藥方便，成本較低。
[0012]3.與同類中藥成分方劑相比，桑杜糖増免劑功效提高，配合新城疫疫苗免疫雛雞，能顯著增強細胞免疫和體液免疫，提高疫苗的免疫應答。
【具體實施方式】
[0013]1.制備工藝
[0014](I)桑葉多糖的制備以提取物中的桑葉多糖得率為指標，對加水量、提取時間、提取次數、醇沉用乙醇濃度進行正交試驗，確定桑葉多糖的最佳提取工藝為加30倍水，煎煮2次，第一次1.5h，第二次lh。取桑葉150g，按以上工藝水煎，合并濾液，加入95%乙醇使醇含量達75%，靜置12h，沉淀65°C干燥，640mL水溶解，得桑葉多糖水溶液。
[0015](2)杜仲多糖的制備以提取物中的桑葉多糖得率為指標，對脫脂乙醇量、加水量、提取時間、提取次數進行正交試驗，確定杜仲多糖的最佳提取工藝為加4倍質量95%乙醇回流脫脂2次，加20倍水，煎煮2次，第一次1.5h，第二次lh。取杜仲皮145g，按以上工藝脫月旨，水煎，合并濾液，加入95%乙醇使醇含量達75%，靜置12h，沉淀65°C干燥，360mL水溶解，得桑葉多糖水溶液。
[0016](3)藥液制備將桑葉多糖溶液和杜仲多糖溶液混合，分裝。用苯酚-硫酸法測定多糖含量，HPLC法測定蘆丁和松脂醇二葡萄糖苷的含量。藥液中多糖含量不低于0.3%、蘆丁含量不低于0.025%，松脂醇二葡萄糖苷不低于0.01%。
[0017]2.增強免疫效果比較
[0018](I)體外增強免疫效果
[0019]以桑杜糖増免劑為試驗材料，另制備對照方I (桑葉提取物+杜仲多糖)和對照方
2(桑葉多糖+杜仲提取物2份)。首先測定3個方劑對雞外周血淋巴細胞的安全濃度，然后將3個方劑用細胞培養液(RPMI1640)分別稀釋成250、125、62.5,31.25和15.625 μ g/mL一共5種個工作濃度，分別加入到培養的雞外周血淋巴細胞中，用MTT法測定淋巴細胞增殖(A57tl值)，作為淋巴細胞增殖的指標。并按公式計算淋巴細胞刺激指數(SI) =SI=(藥物組A570值一細胞對照組A570值)/細胞對照組As u值(其中A為平均值)，比較3個方劑的作用強弱。
[0020]結果:①淋巴細胞增殖的變化:桑杜糖増免劑在250、125、62.5和31.25 μ g.mL—1時A57tl值顯著大于細胞對照組(P < 0.05)，對照方I和對照方2在250、125和62.5μ g ?π 1時A57tl值顯著大于細胞對照組(P < 0.05)。
[0021]表1各組淋巴細胞增殖的變化(A57tl值)
[0022]
【權利要求】
1.一種中藥免疫增強劑，其特征在于由桑葉多糖和杜仲多糖制成，每1000ml免疫增強劑由桑葉100-200g和杜仲皮100-200g制成，優選由桑葉140_160g和杜仲皮135_155g制成；所述的免疫增強劑中包括或者不包括額外的中藥提取物；進一步優選的，不含有其它化學活性成分。
2.根據權利要求1所述的中藥免疫增強劑，其特征在于，藥液中的桑葉多糖含量介于0.2-0.6%之間，杜仲多糖的重量百分含量介于0.1-0.5%之間。
3.權利要求1或2所述中藥免疫增強劑，其特征在于，由以下方法制備而成:桑葉水煎2次，醇沉后，干燥醇沉物，水溶解，得桑葉多糖溶液；杜仲脫脂后，醇沉，干燥醇沉物，水溶解，得杜仲多糖溶液，兩種溶液混勻，分裝。
4.根據權利要求3所述中藥免疫增強劑，其特征在于，桑葉多糖的提取工藝為桑葉加30倍質量水煎煮2次，第一次1.5小時，第二次I小時，多糖的提取工藝為杜仲皮加5倍質量無水乙醇回流脫脂2次，后20倍水煎2次，第一次1.5小時，第二次I小時。
5.權利要求1-4任意一項所述的中藥免疫增強劑在增強疫苗免疫應當中或者在制備增強疫苗免疫應當的藥物中的應用，優選的，所述的免疫疫苗為新城疫疫苗或豬藍耳疫苗。
6.一種疫苗試劑盒，其特征在于所述的疫苗試劑盒包括權利要求1-4任意一項所述的中藥免疫增強劑。
7.根據權利要求6所述的疫苗試劑盒，所述的疫苗試劑盒中包括新城疫疫苗或豬藍耳疫苗，優選的，所述 的中藥免疫增強劑以每單位劑量疫苗配合ImL中藥免疫增強劑的比例存在于試劑盒中。
【文檔編號】A61K39/39GK103768594SQ201410010826
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月9日 優先權日:2014年1月9日
【發明者】蔣春茂, 陳曉蘭, 王德云, 楊海峰, 武彩虹, 鄭義, 戴建華, 陳未, 何祥來 申請人:江蘇農牧科技職業學院