一種抗菌肽的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種抗菌肽，該抗菌肽的序列為Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys(SEQ?ID?NO：1)。本發明所述的抗菌肽適宜制成水溶液的殺菌劑，該殺菌劑具有廣譜殺菌作用，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(金葡菌)或綠膿桿菌均有較強的殺滅作用。
【專利說明】一種抗菌肽
【技術領域】
[0001]本發明涉及含有5~11個氨基酸的直鏈肽，該肽為一種細菌抗菌肽。
【背景技術】
[0002]人們對于健康的追求程度隨著人們生活質量的改善而提高。但是目前工業化生產和社會發展所導致的環境污染已經嚴重影響到人們的健康生活，其中細菌滋生是一個重要的原因。這些細菌一方面本身可以對人體產生極大的危害，導致感染和疾病；另一方面會成為載體，傳播病毒。同時，細菌也無處不在，特別是在室內、車內這些環境相對封閉、以及公共場所這些環境相對較為復雜的地方，細菌更易傳播并導致疾病。傳統的殺菌劑具有一定的局限性，如乙醇對皮膚刺激性大；而廣泛應用的抗生素則會導致細菌的抗藥性，產生超級細菌，是人類面臨困境。因此，研發并生產新型殺菌物質對人們健康水平和生活質量的提高具有重要意義。
[0003]抗菌肽的是科學家首先在昆蟲體內發現的一類具有抗菌活性的肽物質，由氨基酸聚合而成。其因具有高抗菌活性、低毒性、抗菌/抗病毒/抗寄生蟲、耐藥性發生概率小、代謝產物安全無害等特點，而受到研究者們的關注。但是由于其成本高，且抗菌性不易調控，而在一定程度上應用受到了限制。
[0004]近年來，一些小分子抗菌肽受到了研究者們的關注，如Lys-Arg-Trp-Trp-Lys-Trp-Trp-Arg-Arg，Lys-Trp-Lys-Trp-Trp-Lys-Trp-Lys-Lys-Cys, Arg-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Arg-Ar g-Cys 等(Hilpert K et al.Chemistry&Biology.2009 ; 16:58-69)。據上述文獻報道，這些小分子抗菌肽在具有一定抗菌性的同時，由于其分子量小，還具有合成成本低，不存在免疫反應的優點。但是，上述的小分子肽的PH穩定性差，殺菌效果不
理相
>zb ο
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種抗菌肽，該抗菌肽具有pH穩定性好的優點。
[0006]一種抗菌肽,該抗菌肽的序列為 Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQ ID NO: I)ο
[0007]上述抗菌肽可按SEQ ID NO:1所示序列采用多肽合成儀合成得到。
[0008]由于本發明所述的抗菌肽的pH穩定性好，因此適宜制成水溶液的殺菌劑，該殺菌劑每升含有SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽3~7 μ mol。
[0009]本發明所述的殺菌劑每升還含有乙醇80~120mL和甘油10mL。其中，所述的乙醇既有消毒作用又可增加作用在皮膚上清涼感覺；所述的甘油可對皮膚進行滋潤。
[0010]上述殺菌劑由以下方法制備成:
[0011]取SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇和甘油攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘，即得殺菌劑。[0012]本發明所述的抗菌肽具有廣譜殺菌作用，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(金葡菌)或綠膿桿菌均有較強的殺滅作用。本發明所述的抗菌肽還具有安全無刺激的優點，相比于乙醇，本發明所述抗菌肽所制成的殺菌劑對細胞的刺激性小。
【具體實施方式】
[0013]下述實施例1~4所用抗菌肽委托上海吉爾多肽有限公司按SEQ ID NO:1~4所示序列合成。
[0014]實施例1
[0015]1、殺菌劑樣品的制備
[0016]取3μΜ SEQ ID NO:1所示序列的抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘即得。
[0017]2、殺菌劑對照品及其制備
[0018]對照品1:取 3 μ M序列為 Lys-Arg-Trp-Trp-Lys-Trp-Trp-Arg-Arg (SEQ ID NO:2)的抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘即得。
[0019]對照品2:取 3μΜ 序列為 Lys-Trp-Lys-Trp-Trp-Lys-Trp-Lys-Lys-Cys (SEQ IDNO:3)抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇IOOmL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5 分鐘即得。
[0020]對照品3:取 3 μ M 序列為 Arg-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Arg-Arg-Cys (SEQ IDNO:4)抗菌肽溶于500mL去離子水中后，加入乙醇120mL和甘油IOmL攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘即得。
[0021 ] 對照品4:體積濃度為75 %的醫用乙醇。
[0022]3、細菌滅活率檢測實驗
[0023]取ImL樣品和對照品I~4分別加入鹽酸調節pH至3后，每一種殺菌劑中分別加入大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(金葡菌)及綠膿桿菌懸液，配成細菌濃度為109cfu/mL的菌液。在5s和Imin后，取出菌液，梯度稀釋后涂瓊脂板計數。實驗中以ImL去離子水溶液為空白組，進行相同處理，并依照其中的細菌存活數計算各組的細菌滅活率。結果如下表1和2所示。
[0024]表1 5s內的細菌滅活率)
[0025]
I對照品I I對照品2 I對照品3 I對照品4~
大腸桿菌 35.31 28.12 17.12 20.23 30.12
金葡菌~ 38.12 30.13 15.25 16.13 28.43
綠膿桿菌 38.84 27.12 13.22 16.09 34.52
[0026]表2 Imin內的細菌滅活率
[0027]
【權利要求】
1.一種抗菌肽，該抗菌肽的序列為 Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQID NO:1)。
2.一種殺菌劑，該殺菌劑為水溶液，該水溶液中每升含有權利要求1所述的抗菌肽3~7 μ mol ο
3.根據權利要求2所述的一種殺菌劑，其特征在于，所述的殺菌劑每升還含有乙醇80~120mL和甘油IOmL0
4.一種制備權利要求3所述的殺菌劑的方法，該方法由以下步驟組成:取序列為Lys-Trp-Arg-Arg-Lys-Trp-Lys-Arg-Arg-Cys (SEQ ID NO:1)的抗菌肽溶于 500mL 去離子水中后，加入乙醇和甘油攪拌均勻，再加入去離子水至1000mL,攪拌5分鐘，即得殺菌劑。
【文檔編號】A61K38/08GK103951732SQ201410193905
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月8日 優先權日:2014年5月8日
【發明者】胡云睿, 王琳, 張明燈, 林成燊, 張偉 申請人:南方醫科大學