本發明涉及保健品及藥品技術領域，具體是一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物及其制備方法。
背景技術：
鱘魚（sturgeon）是指鱘形目的魚類，具有很高的經濟價值。目前，全世界鱘魚種類有27種，我國有8種。近幾十年來，由于環境污染及過度捕撈等人為因素的原因，致使有些鱘魚種類瀕臨滅絕。為了挽救這些瀕危物種，世界各國在鱘魚繁殖、放流、養殖等方面做了大量的工作。迄今為止，我國從國外引進了俄羅斯鱘、歐洲鰉、小體鱘、匙吻鱘等十幾個品種作為研究或者是人工養殖。我國鱘魚養殖的主要品有產于黑龍江的史氏鱘、達氏鱘，產于長江的中華鱘和從國外引進的俄羅斯鱘、西伯利亞鱘、小體鱘、小鱘等，其中史氏鱘和達氏鱘及其雜交種具有生長迅速、能耐低溫、遺傳可塑性強、肉感好等特點而倍受人們的喜愛。
鱘魚具有很高的經濟價值和藥用價值，是古今中外人們喜愛的水產品。鱘魚除背部骨板外，通體均為軟骨，軟骨在鱘魚各組織中占有較大的比重，該部位具有明顯的抗癌和補鈣作用，素有“鯊魚翅、鱘魚骨，食之明目壯陽，延年益壽”之說。現有研究表明：鱘魚軟骨中富含蛋白、多糖、多肽等活性因子，可用于多種疾病的治療。
膝關節骨性關節炎是一種以關節軟骨的變性、破壞及骨質增生為特征的慢性關節病，又稱增生性膝關節炎、老年性膝關節炎。它是一種慢性關節疾病，它的主要改變是膝關節軟骨面的退行性變和繼發性的骨質增生。主要表現是關節疼痛和活動不靈活，x線表現關節間隙變窄，軟骨下骨質致密，骨小梁斷裂，有硬化和囊性變。關節邊緣有唇樣增生。后期骨端變形，關節面凹凸不平。關節內軟骨剝落，骨質碎裂進入關節，形成關節內游離體。最近的調研數據顯示，全球風濕病患者約有4億人，是醫學領域中最為龐大的一個疾病族群。在中國，風濕性關節炎、類風濕性關節炎患者占人口總數的18％，發病率高達20％。換句話說，在中國，有2億多人不同程度地患有風濕性關節炎或類風濕性關節炎，其中有8000萬重癥患者。其中，50歲以上人群約50％患有風濕病，60歲以上人群的骨關節炎發病率達78.5%，70歲以上人群有90%出現膝關節軟骨退化、關節疼痛和關節炎，我國潮濕地區的發病率更高達40％。現在市面上有很多治療關節炎的藥物，這些藥物會有副作用，且不能根治，只能緩解。因此，需要一款無副作用且效果明顯的關節修復組合物。
現有技術如授權公告號為cn102626225b的中國發明專利，公開了一種具有增加骨密度和保護關節功能的保健食品及其制備方法，提供了一種由氨基葡萄糖、鈣劑和魚油組成的具有增加骨密度和保護關節雙重功效的保健食品設計方案。該保健食品能較好的促進骨質的吸收，增加骨密度，促進骨折愈合，延緩骨質疏松，但其對骨關節的修復能力較差，對軟組織的重建和恢復的作用效果較差。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種能有效消除關節腫痛，延緩骨質疏松，促進關節滑液的生成，加速軟組織的重建和恢復的基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物及其制備方法。
本發明針對背景技術中提到的問題，采取的技術方案為：一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物成份及其重量份為：鱘魚軟骨ii型膠原蛋白80~95份，鱘魚軟骨硫酸軟骨素1~10份，氨基葡萄糖5~15份，酪蛋白鈣0.1~1份。
作為優選，氨基葡萄糖為硫酸氨基葡萄糖或鹽酸氨基葡萄糖或n-乙酰氨基葡萄糖。
一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物的制備方法為：
1）脫脂：鱘魚軟骨組織搗碎機中破碎，按料液比1:10～25（w/v）加入naoh溶液（0.08~0.14mol/l），于2~5℃下攪拌18～36h（naoh溶液每4～8h更換一次），15000～20000rpm離心20～30min，收集沉淀物并洗至中性，按料液比1:10～25（w/v）加入正丁醇溶液（15%）浸泡36～54h除去殘留的脂肪；
2）脫鈣：按料液比1:10～20（w/v）向固體物中加入edta-2na溶液（0.42~0.49mol/l，ph為7.0~8.0）浸泡18～30h（edta-2na溶液每3～6h更換一次），脫鈣；最后軟骨固體物用蒸餾水洗至中性、干燥；
3）提取：在步驟2最后得到的軟骨中按料液比1:10～25（w/v）置于乙酸溶液（0.46~0.54mol/l）中，攪拌提取18～36h，經15000～20000rpm離心15～30min，收集沉淀物；按料液比1:10～25(w/v)向沉淀物中加入乙酸溶液（0.46~0.54mol/l），按照軟骨重量的2.5～3.0%加入豬胃蛋白酶（≥3800u/g），于2~5℃下攪拌提取48～72h，15000～20000rpm離心20～30min，取上清液；
4）透析：將步驟3最后得到的上清液裝入透析袋，并放入tris-hcl磷酸緩沖液（0.046~0.053mol/l，ph為7.2~7.8）中，并在緩沖液中添加nacl至溶液最終濃度為2.6～3.0mol/l，透析24～36h至析出絮狀物沉淀，15000～20000rpm離心15～30min得沉淀物。將得到的沉淀用乙酸溶液（0.46~0.54mol/l）復溶后蒸餾水透析36～54h，透析液冷凍干燥得鱘魚軟骨ii型膠原蛋白；
5）超聲波輔助酶解處理：在步驟3最后得到的沉淀物中加入tris-hcl緩沖液（0.046~0.053mol/l，ph為7.8~8.5），加入軟骨重量的0.3～1.0%的胰蛋白酶，在300～500w超聲波輔助作用下，45～55℃水解2～4h，將反應后提取液置于90℃水浴10～15min，15000～20000rpm離心15～30min，上清液；
6）透析：將步驟5最后得到的上清液濃縮并裝入透析袋，用蒸餾水透析36～54h，透析液按體積加入1.0～1.5倍（v/v）90~98%的乙醇溶液，再逐漸加入naoh至其濃度為0.5～1.0mol/l，于2~5℃下靜置12～16h，離心得白色沉淀；白色沉淀轉移至透析袋，用蒸餾水透析8～12h，透析液干燥處理，得鱘魚軟骨硫酸軟骨素；
7）成品：按配方量混合鱘魚軟骨ii型膠原蛋白、鱘魚軟骨硫酸軟骨素、氨基葡萄糖和酪蛋白鈣，制成制劑，得到一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物。
與現有技術相比，本發明的優點在于：1）本發明能促進軟骨細胞的生成，能大量催生和補充關節滑液，潤滑關節軟骨面，減少磨損，增加關節部位的靈活度；2）本發明能有效促進膠原基質的生成，刺激結締組織細胞再生，進而加速軟組織的重建和恢復；3）本發明具有抑制微血管衍生的因子，還可增加抗體的產生，提高免疫能力，具有消炎和止痛的功效，可以減輕疼痛，改善運動能力；4）本發明可以抑制軟骨降解酶的活性，從而起到預防和治療關節退行性變的作用；5）本發明分子量小，人體對本發明的吸收利用率高，可有效增加骨密度，延緩骨質疏松；6）本發明安全無毒，無副作用，并充分利用鱘魚軟骨資源，變廢為寶。
具體實施例
下面通過實施例對本發明方案作進一步說明：
實施例1：
一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物成份及其重量份為：鱘魚軟骨ii型膠原蛋白80~95份，鱘魚軟骨硫酸軟骨素1~10份，氨基葡萄糖5~15份，酪蛋白鈣0.1~1份。
氨基葡萄糖為硫酸氨基葡萄糖或鹽酸氨基葡萄糖或n-乙酰氨基葡萄糖。
一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物的制備方法為：
1）脫脂：鱘魚軟骨組織搗碎機中破碎，按料液比1:10～25（w/v）加入naoh溶液（0.08~0.14mol/l），于2~5℃下攪拌18～36h（naoh溶液每4～8h更換一次），15000～20000rpm離心20～30min，收集沉淀物并洗至中性，按料液比1:10～25（w/v）加入正丁醇溶液（15%）浸泡36～54h除去殘留的脂肪；
2）脫鈣：按料液比1:10～20（w/v）向固體物中加入edta-2na溶液（0.42~0.49mol/l，ph為7.0~8.0）浸泡18～30h（edta-2na溶液每3～6h更換一次），脫鈣；最后軟骨固體物用蒸餾水洗至中性、干燥；
3）提取：在步驟2最后得到的軟骨中按料液比1:10～25（w/v）置于乙酸溶液（0.46~0.54mol/l）中，攪拌提取18～36h，經15000～20000rpm離心15～30min，收集沉淀物；按料液比1:10～25(w/v)向沉淀物中加入乙酸溶液（0.46~0.54mol/l），按照軟骨重量的2.5～3.0%加入豬胃蛋白酶（≥3800u/g），于2~5℃下攪拌提取48～72h，15000～20000rpm離心20～30min，取上清液；
4）透析：將步驟3最后得到的上清液裝入透析袋，并放入tris-hcl磷酸緩沖液（0.046~0.053mol/l，ph為7.2~7.8）中，并在緩沖液中添加nacl至溶液最終濃度為2.6～3.0mol/l，透析24～36h至析出絮狀物沉淀，15000～20000rpm離心15～30min得沉淀物。將得到的沉淀用乙酸溶液（0.46~0.54mol/l）復溶后蒸餾水透析36～54h，透析液冷凍干燥得鱘魚軟骨ii型膠原蛋白；
5）超聲波輔助酶解處理：在步驟3最后得到的沉淀物中加入tris-hcl緩沖液（0.046~0.053mol/l，ph為7.8~8.5），加入軟骨重量的0.3～1.0%的胰蛋白酶，在300～500w超聲波輔助作用下，45～55℃水解2～4h，將反應后提取液置于90℃水浴10～15min，15000～20000rpm離心15～30min，上清液；
6）透析：將步驟5最后得到的上清液濃縮并裝入透析袋，用蒸餾水透析36～54h，透析液按體積加入1.0～1.5倍（v/v）90~98%的乙醇溶液，再逐漸加入naoh至其濃度為0.5～1.0mol/l，于2~5℃下靜置12～16h，離心得白色沉淀；白色沉淀轉移至透析袋，用蒸餾水透析8～12h，透析液干燥處理，得鱘魚軟骨硫酸軟骨素；
7）成品：按配方量混合鱘魚軟骨ii型膠原蛋白、鱘魚軟骨硫酸軟骨素、氨基葡萄糖和酪蛋白鈣，制成制劑，得到一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物。
實施例2：
1）鱘魚軟骨ii型膠原蛋白的制備：
①鱘魚軟骨組織搗碎機中破碎，按料液比1:15（w/v）加入naoh溶液（0.1mol/l），于4℃下攪拌30h（naoh溶液每5h更換一次），18000rpm離心25min，收集沉淀物并洗至中性，按料液比1:20（w/v）加入正丁醇溶液（15%）浸泡48h除去殘留的脂肪，1:15（w/v）向固體物中加入edta-2na溶液（ph7.4，0.5mol/l）浸泡18h（edta-2na溶液每3h更換一次），脫鈣；最后軟骨固體物用蒸餾洗至中性、干燥。
②將上述預處理的鱘魚軟骨按料液比1:15（w/v）置于乙酸溶液（0.5mol/l）中，攪拌提取30h，經18000rpm離心20min，收集沉淀物；按料液比1:15(w/v)向沉淀物中加入乙酸溶液（0.5mol/l），按照軟骨重量的2.5%加入豬胃蛋白酶（≥3800u/g），于4℃下攪拌提取64h，15rpm離心20min，上清液裝入透析袋放入tris-hcl磷酸緩沖液（0.05mol/l，ph7.5）中，添加nacl至溶液最終濃度為2.8mol/l，透析30h至析出絮狀物沉淀，20000rpm離心25min得沉淀物。將得到的沉淀用乙酸溶液（0.5mol/l）復溶后蒸餾水透析48h，透析液冷凍干燥得鱘魚軟骨ii型膠原蛋白。
2）鱘魚軟骨硫酸軟骨素的制備：
①超聲波輔助酶解處理：取鱘魚軟骨ii型膠原蛋白提取后的殘留物加入到tris-鹽酸緩沖液（0.05mol/l，ph7.8），加入軟骨重量的0.5%的胰蛋白酶，在400w超聲波輔助作用下，50℃水解4h，將反應后提取液置于90℃水浴10min，20000rpm離心20min，得上清液；
②上清液濃縮至原1/3體積裝入透析袋，用蒸餾水透析48h，透析液按體積加入1.5倍（v/v）95%乙醇，再逐漸加入naoh至其濃度為0.8mol/l，于4℃下靜置16h，離心得白色沉淀；白色沉淀轉移至透析袋，用蒸餾水透析12h，透析液干燥處理，得鱘魚軟骨硫酸軟骨素。
3）一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物及其制備方法如下：
①取鱘魚軟骨ii型膠原蛋白850g，鱘魚軟骨硫酸軟骨素50g，氨基葡萄糖100g，酪蛋白鈣5g混合均勻，過100目篩；
②將混合物粉末上膠囊填充機進行充填。制成0.3g/粒的膠囊。
③經包裝、成品檢驗，得到產品。
實施例3：
1）鱘魚軟骨ii型膠原蛋白的制備：
①鱘魚軟骨組織搗碎機中破碎，按料液比1:20（w/v）加入naoh溶液（0.1mol/l），于3℃下攪拌30h（naoh溶液每5h更換一次），18000rpm離心25min，收集沉淀物并洗至中性，按料液比1:20（w/v）加入正丁醇溶液（15%）浸泡48h除去殘留的脂肪，1:15（w/v）向固體物中加入edta-2na溶液（ph7.4，0.5mol/l）浸泡18h（edta-2na溶液每3h更換一次），脫鈣；最后軟骨固體物用蒸餾洗至中性、干燥。
②將上述預處理的鱘魚軟骨按料液比1:20（w/v）置于乙酸溶液（0.5mol/l）中，攪拌提取30h，經18000rpm離心20min，收集沉淀物；按料液比1:15(w/v)向沉淀物中加入乙酸溶液（0.5mol/l），按照軟骨重量的2.5%加入豬胃蛋白酶（≥3800u/g），于4℃下攪拌提取64h，15rpm離心20min，上清液裝入透析袋放入tris-hcl磷酸緩沖液（0.05mol/l，ph7.5）中，添加nacl至溶液最終濃度為2.8mol/l，透析30h至析出絮狀物沉淀，20000rpm離心25min得沉淀物。將得到的沉淀用乙酸溶液（0.5mol/l）復溶后蒸餾水透析48h，透析液冷凍干燥得鱘魚軟骨ii型膠原蛋白。
2）鱘魚軟骨硫酸軟骨素的制備：
①超聲波輔助酶解處理：取鱘魚軟骨ii型膠原蛋白提取后的殘留物加入到tris-鹽酸緩沖液（0.05mol/l，ph7.8），加入軟骨重量的0.7%的胰蛋白酶，在400w超聲波輔助作用下，50℃水解4h，將反應后提取液置于90℃水浴13min，20000rpm離心20min，得上清液；
②上清液濃縮至原1/3體積裝入透析袋，用蒸餾水透析48h，透析液按體積加入1.5倍（v/v）95%乙醇，再逐漸加入naoh至其濃度為0.8mol/l，于3℃下靜置16h，離心得白色沉淀；白色沉淀轉移至透析袋，用蒸餾水透析12h，透析液干燥處理，得鱘魚軟骨硫酸軟骨素。
3）一種基于鱘魚軟骨活性成分的關節修復組合物及其制備方法如下：
①取鱘魚軟骨ii型膠原蛋白850g、鱘魚軟骨硫酸軟骨素50g、氨基葡萄糖100g、酪蛋白鈣5g、白樺脂酸0.02g和人寡肽-10.01g混合均勻，過100目篩。上述配方能增加軟骨細胞的活力，促進軟骨細胞的生成，修補因長期磨損而變得畸形的軟骨；同時能大量催生和補充關節滑液，減少關節之間的摩擦，對關節起到保護作用；白樺脂酸和人寡肽-1不僅能促進軟骨細胞中膠原蛋白和粘多糖的合成，從而增加軟骨細胞的活力，而且還能促進骨膠原蛋白的生成，增加骨密度；
②將混合物粉末上膠囊填充機進行充填。制成0.3g/粒的膠囊。
③經包裝、成品檢驗，得到產品。
本發明的操作步驟中的常規操作為本領域技術人員所熟知，在此不進行贅述。
以上所述的實施例對本發明的技術方案進行了詳細說明，應理解的是以上所述僅為本發明的具體實施例，并不用于限制本發明，凡在本發明的原則范圍內所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應包含在本發明的保護范圍之內。