重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的制備方法與流程

本發明涉及藥劑制備領域，具體涉及一種重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的制備方法。

背景技術：

重樓(parispolyphylla)屬百合科(jiliaceae)，又名蚤休，近年來藥理學研究表明重樓總皂苷具有抑制腫瘤作用^[1]，而重樓總皂苷中以重樓皂苷i和重樓皂苷ii的抗腫瘤活性最強。目前，臨床應用的重樓制劑有散劑、配劑、洗劑、氣霧劑、膏劑等多種劑型，但多為藥材粉末或提取物直接入藥，劑型落后，制劑中有效成分含量低，生物利用度差。由于重樓總皂苷為脂溶性成分，其普通的溶液制劑存在吸收差，生物利用度低等缺點，嚴重影響了藥物的臨床療效。

技術實現要素：

為解決上述問題，本發明提供了一種重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的制備方法，開發了重樓總皂苷自微乳化釋藥系統，并采用固化技術將其制備成顆粒劑，用于提高重樓總皂苷的體外溶出速度，以改善提高生物利用度，從而為能夠更加合理地利用重樓資源，充分發揮重樓的藥效奠定實驗基礎。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的制備方法，包括如下步驟：

s1、分別精密稱量丙二醇單辛酸酯7.0g，tween-801.5g和丙二醇1.5g置于玻璃小瓶中，磁力攪拌混合均勻，得到自微乳化釋藥系統；

s2、精密稱量0.1g重樓總皂苷緩慢加入到所得的自微乳化釋藥系統中，磁力攪拌，使藥物完全溶解，形成均勻、透明的混合物，得重樓總皂苷自微乳化釋藥系統；

s3、稱取50.0g微晶纖維素加入到研缽中，向其緩慢滴加10.0g步驟s2所得的重樓總皂苷自微乳化釋藥系統溶液，邊加邊攪拌均勻，再加入質量分數為10.0％的pvpk30溶液制軟材，當軟材達到手握成團、輕壓即散的狀態后停止加液；

s4、將所得軟材過14目篩網制粒后，置于烘箱55℃烘干，20目篩網整粒，即得重樓總皂苷自微乳化顆粒劑。

本發明具有以下有益效果：

重樓總皂苷制備成自微乳化顆粒劑可顯著提高藥物的體外溶出速度，制備工藝簡單可行，對于藥品生產企業來說，生產過程更加簡便、穩定可控性強，可以降低生產成本，對于患者來說，藥品攜帶、服用更為方便，溶出度實驗結果表明，重樓總皂苷自微乳化釋藥系統和自微乳化顆粒劑的藥物溶出度在45min內均可達到85％以上。

附圖說明

圖1為本發明實施例中自微乳化釋藥系統的偽三元相圖。

圖2為本發明實施例中固體吸附材料最大自微乳化液體吸附量(n＝3)。

圖3為本發明實施例中重樓總皂苷微乳的粒徑分布。

圖4為本發明實施例中重樓總皂苷微乳的zeta電位圖。

圖5為本發明實施例中重樓總皂苷微乳的透射電鏡照片。

圖6為本發明實施例中重樓總皂苷固體脂質納米粒體外釋放曲線(n＝6)。

具體實施方式

為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

以下實施例中，所使用的器材分別包括：

agilent-1200高效液相色譜系統(7725i型進樣器，1500series型柱溫箱，2487型檢測器)(安捷倫科技有限公司)；bp211d電子天平(德國賽多利斯集團公司)；df2101s集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(河南鞏義英峪予華儀器廠)；zetasizernanos90動態光散射儀(英國馬爾文公司)；zetasizer2000has激光多普勒電泳分析儀(英國馬爾文公司)；jm21200ex透射電鏡(日本電子公司)；gc2120gx日立冷凍離心機(日本日立公司)

陜產重樓總皂苷(實驗室提取純化，批號：sx20140502，純度＞90.0％)；重樓皂苷i對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111590-201604，純度：93.6％)，重樓皂苷ii對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111593-201303，純度：92.5％)；丙二醇單辛酸酯(capryol90，批號：261803n01)，丙二醇雙癸酸酯(labrafacpg，批號：l3849173)，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(labrasol，批號：m1848211)(均由嘉法獅惠贈)；油酸乙酯(批號：482837)，蓖麻油(批號：372917)，聚乙二醇-15羥基硬脂酸酯(solutolhs15，批號：s93821)，聚氧乙烯蓖麻油(cremophorel，批號：73216)(均由巴斯夫惠贈)；吐溫80(批號：20160314)，peg400(批號：20151112)，peg600(批號：20160105)，丙二醇(批號：20150917)(由南京威爾化工有限公司提供)。

實施例

飽和溶解度測定

選擇自微乳化釋藥系統中常用的輔料，考察重樓總皂苷在常用輔料中的溶解度。將一定量的油相、乳化劑、助乳化劑加入到單獨的具塞試管中，分別向其中加入過量的重樓總皂苷原料藥，渦旋混合5min，再將混合物放置在振蕩水浴中在37℃條件下攪拌72小時以達到溶解平衡，取出試管中溶液，在4192g離心力下離心10min，上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，取續濾液適量經甲醇稀釋后采用hplc法測定重樓總皂苷的含量，并計算重樓總皂苷在各種輔料中的飽和溶解度。

表1重樓總皂苷在不同輔料中的飽和溶解度(n＝3)

選擇對重樓總皂苷具有較高溶解能力的輔料有助于提高自微乳化釋藥系統的載藥能力。通過溶解度測定結果可知，重樓總皂苷在所篩選的油相丙二醇單辛酸酯中溶解度為最大，在乳化劑tween-80中溶解度最大，在助乳化劑丙二醇中溶解度最大。因此最終選擇對重樓總皂苷溶解度較大的丙二醇單辛酸酯作為油相、tween-80作為乳化劑，丙二醇作為助乳化劑，繪制偽三元相圖，對重樓總皂苷自微乳化處方進行篩選。

偽三元相圖的繪制

采用加水滴定法繪制重樓總皂苷自微乳化釋藥系統的偽三元相圖，篩選自微乳化釋藥系統的組分配比。固定乳化劑tween-80和助乳化劑丙二醇的配比為km＝1∶1作為混合乳化劑(s)，分別按照1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的配比混合油相丙二醇單辛酸酯(o)和混合乳化劑(s)，在37℃水浴中，磁力攪拌速度為50轉/min下滴加水相，目測觀察，形成微乳時記錄加水量，使用origin8.0軟件繪制自微乳化區域面積，進而確定丙二醇單辛酸酯(o)和混合乳化劑(s)的比例。

由偽三元相圖可知，在乳化劑與助乳化劑的配比為1∶1時可以形成較大的自微乳化區域面積。考慮到自微乳化釋藥系統的稀釋能力，以及乳化劑可能會對胃腸道產生刺激等毒副作用，選擇油相(o)與混合乳化劑(s)的比值為7∶3。最終確定自微乳化釋藥系統處方組成為：丙二醇單辛酸酯作為油相、tween-80作為乳化劑，丙二醇作為助乳化劑，最佳配比為7.0∶1.5∶1.5。

重樓總皂苷自微乳化釋藥系統的制備

分別精密稱量丙二醇單辛酸酯7.0g，tween-801.5g和丙二醇1.5g置于玻璃小瓶中，磁力攪拌混合均勻，得到自微乳化釋藥系統；精密稱量0.1g重樓總皂苷緩慢加入到上述自微乳化釋藥系統中，磁力攪拌，使藥物完全溶解，形成均勻，透明的混合物，即得重樓總皂苷自微乳化釋藥系統。

重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的制備

固體吸附材料篩選

分別選用乳糖、甘露醇、微粉硅膠、微晶纖維素作為自微乳化液體吸附材料，精密稱取上述固體吸附材料各5.0g，緩慢滴加重樓總皂苷自微乳化釋藥系統液體，邊加邊攪拌均勻，待粉末出現潮濕狀態時停止加入，記錄自微乳化液體加入量，考察不同吸附材料對重樓總皂苷自微乳化釋藥系統的最大吸附量，實驗結果見圖2。

由實驗結果可知，微晶纖維素對重樓總皂苷自微乳化釋藥系統的吸附量最大為(0.928±0.022)g/g，因此選擇微晶纖維素作為其吸附固化材料制備重樓總皂苷自微乳化顆粒劑，具體的，重樓總皂苷自微乳化顆粒劑通過以下步驟制備：

稱取50.0g微晶纖維素加入到研缽中，向其緩慢滴加10.0g重樓總皂苷自微乳化釋藥系統溶液，邊加邊攪拌均勻，再加入10.0％的pvpk30溶液制軟材，當軟材達到“手握成團，輕壓即散”狀態后停止加液，軟材過14目篩網制粒，放入烘箱55℃烘干，用20目篩網整粒后即得重樓總皂苷自微乳化顆粒劑。

重樓總皂苷自微乳化釋藥系統表征

粒徑分布和zeta電位測定

取重樓總皂苷自微乳化釋藥系統少量，加適量蒸餾水稀釋，輕輕振搖，形成淡藍色透明狀液體；取重樓總皂苷自微乳化顆粒劑適量，加適量蒸餾水稀釋，用玻璃棒輕輕攪拌，取混懸液適量在2683g離心力下離心5min，離心液上層淡藍色透明狀液體。分別取兩種液體適量，經蒸餾水稀釋適量倍數后使用zetasizernanos90動態光散射分析法測定兩種樣品的平均粒徑和多分散系數(測定溫度25℃，測定波長λ＝633nm，散射角90°)；使用zetasizer2000has激光多普勒電泳分析測定兩種樣品的zeta電位(測定溫度25℃)。

實驗結果表明，重樓總皂苷自微乳化釋藥系統和重樓總皂苷自微乳化顆粒劑形成微乳的平均粒徑分別為(58.6±16.4)nm和(68.1±12.1)nm，pdi分別為(0.183±0.04)和(0.209±0.05)，zeta電位分別為(-20.2±1.9)mv和(-18.9±1.5)mv。說明將重樓總皂苷自微乳化釋藥系統固化成顆粒劑后未改變其性質。

微觀形態觀察

取重樓總皂苷自微乳化釋藥系統少量，加適量蒸餾水稀釋，輕輕振搖，形成淡藍色透明狀液體。取上述液體適量涂覆到200目的銅篩網上，用濾紙吸去部分水分，用2％的磷鎢酸水溶液染色10min，自然晾干，在透射電鏡觀察微乳液滴的表面形態、結構和粒徑大小，并拍攝照片。

通過透射電鏡照片可觀察到，重樓總皂苷自微乳化釋藥系統形成的微乳大小均一，呈圓整、規則球形，大部分粒子的粒徑在50nm左右，未發現有藥物結晶析出。

釋藥行為評價

采用《中國藥典》2015年版四部“通則0931”溶出度測定法考察重樓總皂苷自微乳化釋藥系統和重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的體外溶出速度。釋放介質為ph6.8磷酸鹽緩沖液(含0.5％tween80)，介質體積為250ml，介質溫度為(37±0.5)℃，槳轉速為50轉/min。將重樓總皂苷自微乳化釋藥系統、重樓總皂苷自微乳化顆粒劑和重樓總皂苷原料藥分別加入溶出杯中，分別在5，10，15，30，45，60min取樣5ml(同時補加等溫溶出介質5ml)，經44729g離心力下離心10min，取上清液，采用hplc法^[11]測定重樓總皂苷含量。

溶出曲線研究表明，重樓總皂苷原料藥在60min內的累計溶出度不足45％，重樓總皂苷自微乳化釋藥系統、重樓總皂苷自微乳化顆粒劑的溶出度在45min內均可達到85％以上，說明將重樓總皂苷制成自微乳化釋藥系統及顆粒劑后，可顯著提高藥物溶出的速率和程度。

以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。