一種防治絕經后骨質疏松癥的中藥組合物及其制備方法與流程

本發明屬于中藥制劑領域，具體涉及一種防治絕經后骨質疏松癥的中藥組合物及其制備方法。

背景技術：

絕經后骨質疏松癥是中老年女性的常見慢性疾病，據全國十三個省市的流行病學調查結果，女性絕經后，59歲以上多患有此病癥，尤其值得關注的事實是，骨質疏松所致骨折等并發癥已經成為中老年女性生活質量下降和死亡的重要原因。中藥學的第一部專著《神農本草經》就有中藥“堅骨”“強骨”之論。時至現代，補腎中成藥為治療骨質疏松癥所常用。由于絕經后骨質疏松癥患者的病情、病程、體質等的不同，臨床用藥應依據辨證結果而發揮療效。

目前，防治絕經后骨質疏松癥的中藥，主要功效為補益肝腎、或補益脾腎、補腎壯陽等。本研究發現，絕經后骨質疏松癥患者以腎虛為本，多兼有氣虛、血瘀之候，如倦怠乏力、自汗少氣、腰背酸痛等。故臨床實踐需增補此類中藥組方，提高絕經后骨質疏松癥的療效。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種防治絕經后骨質疏松癥的中藥組合物及其制備方法，該中藥組合物可以補腎填精、益氣活血、壯骨強筋，主治絕經后骨質疏松癥，以及其他繼發性骨質疏松癥。

本發明的目的是這樣實現的：一種防治絕經后骨質疏松癥的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由以下質量份數的組分組成：淫羊藿15-20份，凍干鹿茸5-10份，黃芪15-20份，紅花5-10份，生地15-20份，牡蠣5-10份，所述淫羊藿為君藥，凍干鹿茸、黃芪、紅花為臣藥，生地為佐藥，牡蠣為使藥。

優選的，該中藥組合物由以下質量份數的組分組成：淫羊藿18份，凍干鹿茸8份，黃芪18份，紅花8份，生地18份，牡蠣7份。

優選的，該中藥組合物由以下質量份數的組分組成：淫羊藿20份，凍干鹿茸5份，黃芪20份，紅花10份，生地15份，牡蠣5份。

優選的，該中藥組合物由以下質量份數的組分組成：淫羊藿20份，凍干鹿茸10份，黃芪15份，紅花5份，生地20份，牡蠣10份。

該中藥組合物可制成各種藥學治療學上可接受的口服制劑。

所述口服制劑為片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑。

一種防治絕經后骨質疏松癥的中藥組合物的制備方法，該制備方法包括如下步驟：取凍干鹿茸、牡蠣，粉碎為極細粉，200目過篩，混勻，取淫羊藿、黃芪、生地、紅花加水煎煮三次，濾過，濾液合并，靜置；取上清液減壓濃縮成稠膏，與上述藥粉及輔料適量混勻，制成各種所需劑型。

與現有技術相比，本發明的優點在于。

1.本處方為具有補腎益氣活血功效的中藥復方。

本處方以淫羊藿為君，《本草經疏》稱淫羊藿“益腎肝則筋骨自堅”，并能“通氣行血”；以凍干鹿茸、黃芪、紅花為臣，《中藥大辭典》記載鹿茸有“壯元陽、補氣血、益精髓、強筋骨”之效；黃芪為益氣之要藥，使“氣能生精”，腎精充足，則骨壯髓榮，故《日華子本草》曰：“助氣壯筋骨，長肉補血”；紅花能行經絡之中瘀血，見于《本草綱目》：“活血，潤燥，止痛，散腫，通經”；生地佐之，制鹿茸、淫羊藿之偏勝，又滋補腎陰，如《本草匯言》：“生地，為補腎要藥，益陰上品，故涼血補血有功，血得補，則筋受榮，腎得之而骨強力壯”；牡蠣為使，入足少陰腎經，富含鈣類，《神農本草經》記載：“久服強骨節”。如此，鹿茸、牡蠣，源出一山一水，動靜相合；淫羊藿、生地，一陽一陰，陰陽互制；黃芪、紅花，一氣一血，氣血益精；動物藥、植物藥、礦物藥合為一方，取天地之精華，共奏補腎壯骨、益氣生精、活血止痛之效。

2.本處方中鹿茸的加工方法。

鹿茸的傳統加工方法為熱軋茸。由于鹿茸中含有多種活性物質，如促成骨、促造血、促神經因子等，多屬蛋白或多肽類物質，熱軋茸方法可破壞此類物質，從而失去生物活性。故采取冷凍干燥方法進行加工，可以有效避免具有生物活性的蛋白或多肽類物質丟失。

3.本處方中牡蠣的加工方法。

牡蠣含80%～95%的碳酸鈣、磷酸鈣及硫酸鈣，并含鎂、鋁、硅及氧化鐵等。

本處方所用牡蠣為球磨機粉碎，多呈納米級、微米級極細粉，加之200目過篩，更加有利于促進胃腸道吸收。

附圖說明

圖1為本發明各組分配伍交叉實驗24hbmscs增殖比較圖。

圖2為本發明各組分配伍交叉實驗48hbmscs增殖比較圖。

圖3為本發明各組分配伍交叉實驗72hbmscs增殖比較圖。

圖4為本發明各組分配伍交叉實驗9dalp蛋白活性表達圖。

圖5為本發明各組分配伍交叉實驗12dalp蛋白活性表達圖。

具體實施方式

實施例1。

取凍干鹿茸100g、牡蠣100g，粉碎為極細粉，200目過篩，混勻。取淫羊藿200g、黃芪200g、生地200g、紅花100g加水煎煮三次，濾過，濾液合并，靜置；取上清液減壓濃縮成稠膏，與上述藥粉及輔料適量混勻，制成顆粒，干燥，壓制成2000片，包糖衣或薄膜衣，即得。

成人劑量：每次4片（每片含生藥0.5g），每日2-3次，口服。

實施例2。

1.本發明對絕經后骨質疏松癥的療效。

（1）顯著提高骨密度。

骨密度全稱是骨骼礦物質密度，是骨骼強度的一個重要指標，是骨質疏松癥診斷與評價療效的金標準。

①去卵巢絕經后骨質疏松癥大鼠模型制備。

采用一次性摘除大鼠雙側卵巢法建立骨質疏松癥動物模型。給予模型組大鼠10%水合氯醛注射液（3ml/kg體重），肌肉注射麻醉，于腰背部脊柱兩側做縱行切口暴露卵巢組織，絲線結扎其周圍組織后，將其完整切除，然后逐層縫合傷口。假手術組以同樣的方式手術暴露雙側卵巢，但不摘除。正常組不進行手術。

②實驗藥物。

補腎益氣活血方（成人每日劑量/60kg體重）：淫羊藿20g、凍干鹿茸10g、生地20g，黃芪20g、紅花10g、牡蠣10g。

大鼠等效劑量給藥計算公式（g/kg）

=成人每日劑量（60kg體重）÷60kg×6.25。

③給藥方案。

正常組、假手術組及模型空白組大鼠給予0.9%生理鹽水灌胃，其余各組給予相應藥物灌胃，容積為0.875ml/100g體重。

每日上午9時給藥1次共8周。

④取材。

各組大鼠按對應藥物治療8w，最后一次灌胃后，禁食24h，稱重后按3ml/kg//的劑量給予10%水合醛腹腔注射麻醉，用碘伏消毒手術部位，開腹后用5ml注射器抽取腹主動脈血液，低溫離心機3000r/min離心15min，取血清，-20℃冷藏保存。取出大鼠左后肢股骨，并以生理鹽水浸潤的紗布包裹之后再用錫紙包裹，-70℃凍存，待后續dax檢測骨密度。

⑤檢測指標及結果。

如表1所示，與正常組相比較，模型空白組左后肢股骨骨密度顯著降低（p＜0.01），假手術組密度未見明顯變化（p＞0.05）；與模型空白組相比較，各治療組骨密度均有不同程度的升高，陽性藥物福善美組與補腎益氣活血組比較，兩者間無顯著差異（p＞0.05）。

注：與正常組比較：^*p＜0.05，^**p＜0.01；與假手術組比較：^△p＜0.05，^△△p＜0.01；

與模型空白組相比較：^☆p＜0.05,^☆☆p＜0.01；與福善美組比較：^◇p＜0.05，^◇◇p＜0.01。下表同此。

結果表明，去卵巢大鼠出現骨密度下降的骨質疏松，模型建立成功。補腎益氣活血組骨密度值明顯增高。

（2）顯著促進骨形成。

alp（alkalinephosphatase）即堿性磷酸酶，為成骨細胞活性的標志物；opg（osteoclastogenesisinhibitoryfactor）即骨保護素，又稱破骨細胞抑制因子，是一種生長因子受體，屬于腫瘤壞死因子（tnf）受體家族。alp、opg是比較公認的標志骨形成的骨代謝評價指標。

去卵巢絕經后骨質疏松癥大鼠模型制備、實驗藥物、給藥方案同前。

取材：各組大鼠按對應藥物治療8周，最后一次灌胃后，禁食24小時，稱重后按3ml/kg的劑量給予10%水合醛腹腔注射麻醉，用碘伏消毒手術部位，開腹后用5ml注射器抽取腹主動脈血液，低溫離心機3000r/min離心15min，取血清，-20℃冷藏保存待測alp、opg。

檢測指標及結果。

2.1骨形成指標血清alp測定。

如表2所示，與正常組相比較，假手術組血清alp含量未見明顯差異（p＞0.05），模型空白組血清alp含量明顯減少（p＜0.01）；與假手術組相比較，模型空白組alp含量明顯減少（p＜0.01）；與模型空白組相比較，各用藥組血清alp含量均明顯增加（p＜0.01）。

2.2骨保護素（opg）測定。

如表3所示，與正常組相比較，假手術組血清opg未見明顯差異（p＞0.05）；模型空白組血清opg明顯減少（p＜0.01）；與模型空白組相比較，各用藥組血清opg均明顯增加（p＜0.01），福善美組與補腎益氣活血組血清opg未見明顯差異（p＞0.05）。

結果表明，去卵巢大鼠出現血清alp、opg含量明顯減少，呈明顯骨形成減低；補腎益氣活血組可明顯提高alp、opg含量，從而促進骨形成。

（3）顯著抑制骨吸收。

tracp(tartrateresistantacidphosphatase)即抗酒石酸酸性磷酸酶，為骨吸收和破骨細胞活性的良好標志物,測定血清tracp有助于了解生理條件和各種病理條件下的骨代謝狀況。

去卵巢絕經后骨質疏松癥大鼠模型制備、實驗藥物、給藥方案、取材同前。

骨吸收指標血清tracp測定。

如表4所示：與正常組相比較，假手術組血清tracp含量未見明顯變化（p＞0.05），模型空白組血清tracp含量明顯升高（p＜0.01）；與假手術組相比較，模型空白組tracp含量明顯升高（p＜0.01）；與模型空白組相比較，各用藥組血清tracp含量明顯降低（p＜0.01）。福善美組與補腎益氣活血組血清tracp含量未見明顯差異（p＞0.05）。

結果表明，去卵巢大鼠出現血清tracp含量明顯升高，呈明顯骨吸收增強；補腎益氣活血組可明顯降低tracp含量，從而抑制骨吸收。

2.本發明有效成分組分配伍對骨髓間充質干細胞成骨分化的影響。

本發明有效成分及標準品來源。

鹿茸凍干粉（遼寧清原鹿場）、黃芪甲苷（遼寧北方藥檢科技開發有限公司產品，批號201314）、淫羊藿苷（遼寧北方藥檢科技開發有限公司，產品批號200415）、地黃苷a（北京盈澤納新化工技術研究院，產品批號xj0706la14）、羥基紅花黃色素a（遼寧北方藥檢科技開發有限公司，產品批號201308）。

本發明有效成分組分配伍方案。

采用正交設計方案：5因素3水平正交設計l18(3⁵)。按正交設計方案，進行五因素三水平藥物干預，實驗分為20組，正常對照組（dmem+10ml/dl胎牛血清含100u/ml青、鏈霉素）、成骨轉化對照組（簡稱轉化液組）（成分：dmem+10ml/dl胎牛血清含100u/ml青、鏈霉素+1×10^-7mol/l地塞米松+50g/l維生素c+10mmol/lb-甘油磷酸鈉）、正常組+中藥正交組分配伍組（1-18組）。

大鼠骨髓間充質細胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，bmscs）饋贈自遼寧中醫藥大學基礎醫學院實驗室。

（1）補腎益氣活血方有效成分組分配伍可明顯促進bmscs增殖。

mtt法測定24、48、72hbmscs增殖分化情況。

各組bmscs24h增殖比較：與正常組比較，第1、3、4、7、8、9、10、11、13組bmscs增殖未見顯著差異（p＞0.05），其余各組增殖情況均有顯著上升（第5、6、15組p＜0.05；其余組p＜0.01）；與轉化液組比較，給藥各組均有顯著差異（p＜0.01）；各中藥正交組分配伍組組間比較發現，第18組bmscs增殖顯著高于其他各組（vs第17組p＜0.05；p＜0.01）。見圖1。

各組bmscs48h增殖比較：與正常組比較，第1、3、5、7、8、9、11、12、13組bmscs增殖未見顯著差異（p＞0.05），其余各組增殖情況均有顯著上升（vs第2、6、10、14、15組p＜0.05；p＜0.01）；與轉化液組比較，第17、18組未見顯著差異（p＞0.05），其余各組均有顯著差異（vs第4、16組p＜0.05，p＜0.01）；各中藥正交組分配伍組組間比較發現，第17、18組bmscs增殖顯著高于其他各組（p＜0.01）。見圖2。

各組bmscs72h增殖比較：與正常組比較，轉化液組、第15、16、17組bmscs增殖未見顯著差異（p＞0.05），其余各組增殖情況均有顯著上升（vs第10、12、13、18組p＜0.05；p＜0.01）；與轉化液組比較，第10、12、13、15、16、17組未見顯著差異（p＞0.05），其余各組均有顯著差異（vs第5、6、7、11組p＜0.05，p＜0.01）；各中藥正交組分配伍組組間比較，第16、17、18組bmscs增殖顯著高于其他各組。見圖3。

bmscs增殖時效變化總結：正常組、轉化液組及16、17、18組，均于48h到達增殖峰值（24hvs48hp＜0.01，48hvs72hp＜0.01）。

表5正常組、轉化液組及16、17、18組bmscs24、48、72h增殖變化。

16、17、18組的補腎益氣活血方組分配伍：16組為淫羊藿苷高劑量，鹿茸低劑量，黃芪甲苷、羥基紅花a中劑量，地黃苷a高劑量。17組為淫羊藿苷高劑量，鹿茸中劑量，黃芪甲苷、羥基紅花a高劑量，地黃苷a低劑量。18組為淫羊藿苷高劑量，鹿茸高劑量，黃芪甲苷、羥基紅花a低劑量，地黃苷a中劑量。

表6bmscs增殖時效與16、17、18組組分配伍量效關系。

（2）補腎益氣活血方有效成分組分配伍可明顯促進bmscs成骨分化。

bmscs成骨分化是骨形成的基礎。在定量指標方面，成骨細胞標志蛋白alp增高。

各組細胞9天、12天alp蛋白活性表達情況（elisa法）各組細胞9dalp蛋白活性表達比較：與正常組比較，各組alp蛋白活性均顯著增高（vs第2組p＜0.05，p＜0.01）；與轉化液組比較，各組均有顯著差異（p＜0.01）；各中藥正交組分配伍組間比較，第16、18組alp蛋白活性表達最高（p＜0.01）。見圖4。

各組細胞12dalp蛋白活性表達情況：與正常組比較，第2組未見顯著變化（p＞0.05），其余各組alp蛋白活性均顯著增高（vs第3組p＜0.05，p＜0.01）；與轉化液組比較，第16、18組未見顯著差異（p＞0.05），其余各組均有顯著差異（p＜0.01）；各中藥正交組分配伍組間比較發現，第16、18組alp蛋白活性表達高于其余各組（p＜0.01）。見圖5。

如表7所示，正常組、轉化液組及16、18組9dalp活性表達均高于6d（p＜0.01）；正常組、轉化液組及16、18組12dalp活性表達均高9d（p＜0.01）。

表7alp蛋白活性（成骨分化）時效與16、18組組分配伍量效關系。

綜上所述，根據體內、體外實驗結果，補腎益氣活血方及其組分配伍具有促進骨髓間充質干細胞增殖及成骨分化，促進骨形成，提高骨密度，改善骨代謝的作用，從而發揮防治絕經后骨質疏松癥的功效。從本方有效成分組分配伍分析，淫羊藿為本方君藥，劑量略高；益氣活血的黃芪甲苷、羥基紅花a、鹿茸配伍劑量比相近，為本方臣藥；地黃苷a為本方佐藥。補腎益氣活血方組分配伍確有療效基礎，可為組分配伍中藥研發提供實驗依據。

實施例3。

淫羊藿18份，凍干鹿茸8份，黃芪18份，紅花8份，生地18份，牡蠣7份，加入適量的輔料，制成顆粒劑。

實施例4。

淫羊藿20份，凍干鹿茸5份，黃芪20份，紅花10份，生地15份，牡蠣5份，加入適量的輔料，制成丸劑。

實施例5。

淫羊藿20份，凍干鹿茸10份，黃芪15份，紅花5份，生地20份，牡蠣10份，加入適量的輔料，制成膠囊劑。