一種他莫昔芬組合物及其制劑的制作方法

本發明屬于生物醫藥科學領域，具體涉及一種他莫昔芬組合物及其制劑。

背景技術：

癌癥，目前已成為全世界人類健康的最大殺手。各國科學家為攻克癌癥付出艱苦卓絕的努力，但仍然無法完全克制這一疾病，令其成為人類健康面臨的最大威脅和恐懼。

經過不懈的研究和探索，多種多樣的抗癌藥物被開發用于癌癥的藥物治療。全球各國已批準上市的抗癌藥物大約有130～150種。用這些藥物配制成的各種抗癌藥物制劑大約有1300～1500種。除此之外，還有大量的新型的抗癌藥物不斷研發推出。而在這些藥物當中，有許多藥物由于水溶性太差而難以實現進一步的開發和應用。

使用增溶劑與藥物分子組成超分子藥物是一種促進藥物分子在水中溶解進而增強藥效的簡單有效方法。但是這一方法中所使用的增溶劑必須滿足一下幾個條件：首先增溶劑本身無毒，其次是增溶劑的加入能夠提高或者不影響藥物分子本身的藥效，同時實現藥物分子在水溶液體系中較好的溶解性。

他莫昔芬是一種人工合成的非甾體類雌激素拮抗藥物，擇性雌激素受體調節劑，用于治療晚期乳腺癌和卵巢癌。但在水中的溶解度極低，因此在臨床應用中效率低下。

枸櫞酸他莫昔芬目前主要有片劑、膠囊、注射劑等劑型供臨床使用，這些劑型在胃腸道溶出度較差，生物利用度不高。cn1389199a公開了一種枸櫞酸他莫昔芬緩釋片，cn1654037a公開了一種枸櫞酸他莫昔芬分散片。然而這種制劑成本高、生物利用度低，不能很好地應用于臨床。

綜上所述，能否利用現有技術，選擇合適的新型增溶劑，通過超分子主客體作用形成超分子藥物，簡單有效的提高抗癌藥物分子他莫昔芬的溶解性，是實現抗癌藥物藥效提高的關鍵。

技術實現要素：

本發明的目的是針對現有技術中他莫昔芬水溶性不足的問題，提供一種含水溶性柱[6]芳烴的他莫昔芬組合物，水溶性柱[6]芳烴在水中具有良好的溶解度，毒性低，并且能夠通過主客體相互作用高效的提高他莫昔芬在水中的溶解度，同時提高該藥物的抗癌藥效。

一種他莫昔芬組合物，含有可增加他莫昔芬在水中溶解度的水溶性柱[6]芳烴，所述水溶性柱[6]芳烴為式(ⅰ)～(ⅲ)所示化合物中的至少一種，

優選地，所述的他莫昔芬組合物由他莫昔芬與水溶性柱[6]芳烴以摩爾比為0.1～1:1組成。

進一步優選，他莫昔芬與水溶性柱[6]芳烴的摩爾比為0.3～0.6：1，他莫昔芬在水中的溶解性差，溶解度僅有5.90×10^–3mg/ml，在該比例范圍內，所述的他莫昔芬組合物能在水中完全溶解。

作為優選，所述水溶性柱[6]芳烴為式(ⅰ)所示的全羧酸銨鹽柱[6]芳烴(縮寫為wp6)，全羧酸銨鹽柱[6]芳烴的堿性較弱，對細胞的滲透的影響較小，其在水中的溶解度為92.4±1.5mg/ml，他莫昔芬能夠和全羧酸銨鹽柱[6]芳烴形成主客體絡合物wp6-t，從而增強他莫昔芬在水中的溶解性和抗癌藥效。

本發明還提供了含上述他莫昔芬組合物的制劑，該制劑由他莫昔芬組合物和藥學上可接受的載體或其他藥用活性成分組成。

優選地，所述制劑為固體制劑、半固體制劑或液體制劑。

其中，所述制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、口服液等口服用常見劑型；所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規的藥物載體，由選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助溶劑、助懸劑、潤濕劑、色素、香精、溶劑、穩定劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種組成。

所述制劑為輸液、水針、粉針等常見注射用常見劑型；所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規的藥物載體，由選自滲透壓調節劑、ph調節劑、增溶劑、助溶劑、凍干保護劑、抗氧劑和穩定劑中的一種或幾種組成。

本發明中所使用的水溶性柱[6]芳烴本身細胞毒性較低，而他莫昔芬組合物對于乳腺癌細胞mcf-7以及海拉細胞hela兩種癌細胞均表現出了相比于自由的他莫昔芬藥物更強的致死效率。說明該他莫昔芬組合物不僅具有很好的水溶性，而且具有較他莫昔芬更高的殺死癌細胞的效率。

與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：

(1)水溶性柱[6]芳烴制備方法簡便，綠色環保，細胞毒性低，同時通過主客體相互作用提高難溶抗癌藥物他莫昔芬在水中的溶解性；

(2)本發明他莫昔芬組合物，大大提高了他莫昔芬在水中的溶解度，制成口服制劑，有利于他莫昔芬的溶出和吸收，可大大提高他莫昔芬的生物利用度；

(3)本發明他莫昔芬組合物溶于水后形成的主客體絡合物具有很高的癌細胞的致死效率，可作為一類新型抗癌藥物。

附圖說明

圖1為wp6提高他莫昔芬溶解性的實驗數據結果圖；

圖2為wp6、wp6-t及他莫昔芬對于乳腺癌細胞mcf-7以及海拉細胞hela兩種癌細胞的毒性試驗結果圖。

具體實施方式

實施例1

全羧酸銨鹽柱[6]芳烴wp6的合成路線：

稱取全羥基柱[6]芳烴c0.730g于100ml圓底燒瓶中，依次加入2.59g的氯乙酸乙酯，6.62g的無水碳酸鉀，50ml的乙腈，氬氣保護，85～90℃下攪拌反應48～50小時。反應結束后，過濾，旋干溶劑，將所得固體溶于100～120ml的二氯甲烷中，用100～150ml的水洗滌三次，無水硫酸鈉干燥30～35min，過濾，用硅膠柱層析分離，洗脫劑用：石油醚：乙酸乙酯＝3：1，濃縮得白色固體，即為全酯基柱[6]芳烴b(0.74g，產率46％)。

稱取全酯基柱[6]芳烴b0.74g于100ml圓底燒瓶中，依次加入1.60g的naoh固體，40ml的乙醇，20～22ml的水，上述體系在90～95℃下反應12～13小時，冷卻至室溫，加入鹽酸酸化，有大量固體析出，抽濾，濾餅用蒸餾水洗滌3～4次，真空干燥，得白色固體，即為全羧基柱[6]芳烴a(0.61g，產率93％)。

取全羧基柱[6]芳烴a0.56于50ml圓底燒瓶中，加入40～45ml氨水，室溫下攪拌反應4～5小時。減壓旋干，得白色固體，即為全羧基銨鹽柱[6]芳烴wp6(0.62g,產率為99％)。

本實施例制備的產品表征數據如下：

全酯基柱[6]芳烴b：

¹hnmr(400mhz,cdcl3,298k,ppm):δ7.04(s,12h),4.56(s,24h,),3.87(s,12h),3.60(m,36h)；¹³cnmr(400mhz,cdcl3,298k,ppm):δ169.8,148.9,128.5,114.4,65.5,51.8,29.7,29.3。

全羧基柱[6]芳烴a：

¹hnmr(400mhz,dmso-d6,298k,ppm):δ12.96(s,12h),7.11(s,12h),4.71(s,12h),4.42(s,12h),3.74(s,12h)；¹³cnmr(400mhz,dmso-d6,298k,ppm):δ170.5,148.4,128.0,114.2,65.0,28.6。

全羧基銨鹽柱[6]芳烴wp6:

¹hnmr(400mhz,d2o,298k,ppm):δ6.71(s,12h),4.20(s,24h),3.87(2,12h)；¹³cnmr(400mhz,d2o,298k,ppm):176.8,150.1,128.4,115.9,67.9,30.1。

wp6對他莫昔芬溶解度影響實驗：

以wp6在水中的溶解度為范圍，將wp6溶解于水中，設置其濃度梯度為1.63～81.68mg/ml。將過量的抗癌藥物他莫昔芬粉末加入配好的wp6水溶液，在25℃下充分攪拌24～25小時后，用22μm水相濾膜濾除過量的未溶解的他莫昔芬固體，他莫昔芬和wp6形成主客體絡合物wp6-t，得到含wp6-t的溶液。他莫昔芬含量測定方法如下，在d2o溶劑中，通過加入一定量的內標化合物均苯三甲酸鈉后，在¹h-nmr核磁氫譜上顯示相應的質子信號。通過相應的質子信號峰的積分面積比例與內標化合物的加入量可以計算得到樣品溶液中所溶解的他莫昔芬的含量。

實驗結果如圖1所示。

由實驗結果分析可知：

wp6能夠有效地通過主客體相互作用形成主客體絡合物wp6-t，從而提高難溶性抗癌藥物他莫昔芬在水中的溶解度，在測試范圍內，最高可以將他莫昔芬在水中的溶解度提高至4.64mg/ml，與他莫昔芬自身的溶解度5.90×10^–3mg/ml相比，顯著提高。

檢測wp6，主客體絡合物wp6-t及他莫昔芬對于兩種癌細胞乳腺癌細胞mcf-7以及海拉細胞hela的致死效率。

在96孔板中，5％co2，36至37攝氏度環境下孵育乳腺癌細胞mcf-7和海拉細胞hela23至24小時備用。

分別配制wp6、主客體絡合物wp6-t、他莫昔芬的不同濃度梯度的標準溶液0.5μm、1μm、2μm、5μm、10μm、15μm、20μm備用。其中，主客體絡合物wp6-t的配制方法為：首先配制5mm的wp6水溶液，然后過量的他莫昔芬粉末加入該溶液，在25℃下充分攪拌24～25小時，濾除未溶解多余的他莫昔芬，將溶液稀釋至所需的濃度；由于他莫昔芬自身溶解度過低，其溶液的配制方法為：先將他莫昔芬粉末大量地溶于dmso，配制成他莫昔芬的濃溶液，然后稀釋至所需濃度，同時使細胞培養體系中dmso的含量不超過5％，保證細胞存活不受溶劑影響。

將上述溶液加入到乳腺癌細胞mcf-7和海拉細胞hela的培養基中，在36～37℃下繼續孵化4～5小時。用mtt法測定上述兩種細胞的存活率，以此來測定wp6、wp6-t、他莫昔芬的細胞毒性

實驗結果如圖2所示，其中圖(a)為wp6、wp6-t、他莫昔芬對乳腺癌細胞mcf-7的相對細胞活性；圖(b)為wp6、wp6-t、他莫昔芬對海拉細胞hela的相對細胞活性。

結果顯示，wp6在測試的濃度范圍內都具有較低的細胞毒性，且他莫昔芬由于處理時間較短，在4～5小時的孵化時間內也沒有顯示出明顯的細胞毒性，而wp6-t對于兩種測試癌細胞，都顯示出明顯的隨濃度增大而升高的較強的細胞毒性，表明具有良好的抗癌效果，能增強他莫昔芬的抗癌藥效。

實施例2

全羧酸鈉鹽柱[6]芳烴的合成：

取實施例1制備的全羧基柱[6]芳烴a

取全羧基柱[6]芳烴a0.67～0.68g于50ml圓底燒瓶中，加入0.2～0.3gnaoh固體，30ml水，室溫下攪拌反應12～13h。用1.0m～1.5m的鹽酸溶液調節ph至6.5左右，減壓旋干體系中的水，得白色固體，即為全羧基鈉鹽柱[6]芳烴(0.79～0.80g,產率為97～100％)。

本實施例制備的產品全羧基鈉鹽柱[5]芳烴的表征數據如下：

¹hnmr(400mhz,d2o,298k,ppm):6.58(s,12h),4.08(s,24h),3.75(s,12h)；¹³cnmr(400mhz,d2o,298k,ppm):179.76,152.64,130.86,117.64,70.65,32.62。

實施例3

全羧酸鉀鹽柱[6]芳烴的合成：

取實施例1制備的全羧基柱[6]芳烴a

取全羧基柱[6]芳烴a0.67～0.68g于50ml圓底燒瓶中，加入0.2～0.3gnaoh固體，30ml水，室溫下攪拌反應12～13h。用1.0m～1.5m的鹽酸溶液調節ph至6.5左右，減壓旋干體系中的水，得白色固體，即為全羧基鈉鹽柱[6]芳烴(0.88～0.89g,產率為97～100％)。

本實施例制備的產品全羧基鈉鹽柱[5]芳烴的表征數據如下：

¹hnmr(400mhz,d2o,298k,ppm):6.58(s,12h),4.08(s,24h),3.75(s,12h)；¹³cnmr(400mhz,d2o,298k,ppm):179.76,152.64,130.86,117.64,70.65,32.62。

實施例4

將全羧酸銨鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.3:1混合，得到他莫昔芬組合物，所得他莫昔芬組合物在水中可溶解為澄清透明溶液，得到含主客體絡合物wp6-t的水溶液。

實施例5

將全羧酸銨鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.5:1混合，得到他莫昔芬組合物，所得他莫昔芬組合物在水中可溶解為澄清透明溶液，得到含主客體絡合物wp6-t的水溶液。

實施例6

將全羧酸銨鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.7:1混合，得到他莫昔芬組合物，所得他莫昔芬組合物在水中可溶解為澄清透明溶液，得到含主客體絡合物wp6-t的水溶液。

實施例7

將全羧酸銨鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為1:1混合，得到他莫昔芬組合物，所得他莫昔芬組合物在水中可溶解為澄清透明溶液，得到含主客體絡合物wp6-t的水溶液。

實施例8

將全羧酸鈉鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.5:1混合，得到他莫昔芬組合物，所得他莫昔芬組合物在水中可溶解為澄清透明溶液。

實施例9

將全羧酸鉀鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.5:1混合，得到他莫昔芬組合物，所得他莫昔芬組合物在水中可溶解為澄清透明溶液。

實施例10

將全羧酸銨鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.5:1混合，得到他莫昔芬組合物，粉碎過100目篩后，灌裝膠囊。膠囊經輻照滅菌即制成他莫昔芬組合物膠囊。

實施例11

將全羧酸銨鹽柱[6]芳烴與他莫昔芬以摩爾比為0.5:1混合，得到他莫昔芬組合物，粉碎過100目篩后，再將該藥物組合物粉末與微晶纖維素以質量比為1：1混合充分，壓片，包衣，制成片劑，片劑經輻照滅菌即制成他莫昔芬組合物片。