專利名稱：含有抗真菌劑和乙酸鹽緩沖液的組合物的制作方法
技術領域：
本發明的背景本發明涉及治療和/或預防真菌感染的組合物。
我們愈來愈需要新的抗真菌劑，它能有效地對抗由諸如念珠菌屬、曲霉屬、隱球菌屬和卡氏肺囊蟲所導致的條件霉菌感染。由于毒性和耐藥選擇，所以目前的治療如兩性霉素B和氟康唑是不足的。本發明的組合物據認為是既安全且能殺真菌的。
本發明的組合物含有一種化合物，它是用于作為抗菌的，特別是作為抗真菌劑或作為抗原蟲劑。作為抗真菌劑，它可用于控制絲狀真菌和酵母菌。特別適合用于哺乳動物中霉菌感染的治療，特別是那些由念珠菌屬如白色念珠菌、熱帶假絲酵母、克魯斯氏念珠菌、C.glabrata和C.pseudotropicalis以及曲霉屬如煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉。特別是，該組合物含有已發現可有效對抗兩性霉素B和氟康唑-耐藥的念珠菌株。該組合物也用于治療和/或預防卡氏肺囊蟲肺炎，免疫受損的病人如那些患有AIDS的病人特別容易感染該病。
本發明的組合物是安全、穩定、可復制的凍干制劑，它特別可用于對需要該藥物的病人給予抗真菌劑。
本發明的概述本發明涉及藥用組合物，其包括a)具有下式的藥用有效量的化合物和其藥學上可接受的鹽(在此也指“活性組分”)
b)藥學上可接受量的有效的乙酸鹽緩沖液以使得pH在約4和7之間；和c)藥學上可接受量的賦形劑例如蔗糖/甘露醇以形成凍干餅狀物。
在本發明的特定的實施方案中，將所述制劑制備為42mg/ml化合物Ⅰ、30mg/ml蔗糖、20mg/ml甘露醇、1.5mg/ml(25mM)的乙酸的溶液，用氫氧化鈉將其pH調至約6。隨后將該溶液裝至體積為1.25ml的小瓶中并凍干。如此制備的凍干餅狀物每小瓶中含有52.5mg化合物Ⅰ、62.5mg糖和31.25μM乙酸緩沖液。然后用21ml稀釋劑稀釋使該凍干餅狀物復制使用。從稀釋物中吸取20ml并復制至200ml輸液袋中。然后對病人輸注該溶液，該溶液含有約0.25mg/ml的化合物Ⅰ、約0.03mM或0.15mM乙酸鹽緩沖液、約0.3mg/ml填充劑，制備的組合物的pH約為5-7。
本發明的詳述本發明的制劑可提高藥用組合物的化學穩定性。該穩定性的優點為可以延長藥用產品的儲存期。以前的酒石酸鹽緩沖液的制劑含有藥學上顯著量的不需要的降解產物。使用乙酸鹽緩沖的制劑可以產生較少的降解物和更穩定的制劑。藥用組合物儲存期的延長可以提供顯著的經濟優勢。
已經發現當在乙酸鹽緩沖液存在下配制時，下式的化合物和其藥學上可接受的鹽儲存時顯著地更穩定。
美國專利4378804號對化合物Ⅰ提出了權利要求并對其進行了描述。其制備方法公開于上述專利以及美國專利5552521號中(1996年9月3日頒布)。
該化合物本身是高度不穩定的，可以各種方式降解，所述方式包括(但不限于)水解、二聚作用和氧化。然而，以前使用在酒石酸鹽緩沖的制劑中凍干該化合物的方式來克服該不穩定性。然而，該制劑在相對穩定的同時以相對高的速率產生降解。
提供改用乙酸鹽緩沖液，在延長該組合的儲存期的同時，凍干的產物更穩定、含有更少的不需要的降解物。這使其作為商業產品具有吸引力。
本發明也涉及治療由念珠菌屬、曲霉屬和卡氏肺囊蟲引起的真菌感染的方法，該方法包括以治療真菌感染的有效量給予需要此治療的病人含有式Ⅰ化合物的組合物。本發明另外涉及在病人中預防卡氏肺囊蟲感染的方法，該方法包括給予預防量的式Ⅰ化合物。
本發明的乙酸鹽緩沖的制劑包括有效量的乙酸鹽以提供藥學上可接受的pH，例如提供pH環境在5-8范圍內，優選約6-約7。為提供有效量的乙酸鹽緩沖液以獲得所需的pH，可以使用適當量的乙酸鈉和乙酸或適當量的乙酸和氫氧化鈉。緩沖劑存在的范圍一般為約12.5nM-約200nM，優選范圍為約25nM-約50nM。
賦形劑例如填充劑，即賦形劑糖用于提供美觀的適當凍干餅狀物、活性組分的固體稀釋劑和適當的水分的吸收劑。用于本發明的糖包括蔗糖、乳糖、甘露醇或它們的組合。已經發現蔗糖和甘露醇提供更穩定的制劑并使組合物形成藥學上美觀的餅狀物。所述賦形劑存在的量一般為約10-200mg/ml，優選約40-60mg/ml。
該組合物并不限于活性組分、乙酸鹽緩沖液和填充劑，也可以包括其它的藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。該制劑適于在通常用于制藥工業的玻璃容器內長期儲存，例如以濃縮形式儲存于標準USP的Ⅰ型硼硅酸鹽玻璃容器內。
一般根據下列步驟制備本發明的組合物1)將填充劑或藥物的組合溶于水中；2)加入乙酸并將pH調至約3.7(如果需要)；3)加入化合物Ⅰ并用堿將pH調至約5至約6使其溶解；4)過濾如此制得的溶液并裝填入凍干小瓶中并于-50℃冷凍；5)將冷凍的制劑于-20℃冷凍干燥，于15℃第二次干燥(完整循環需要2天)；和6)將冷凍干燥的小瓶封口并于約5℃儲存。
組合物的冷凍干燥制劑可以在給藥時用適當的稀釋劑稀釋以獲得終濃度，例如約5.0mg/ml，它適于轉移至輸液袋中以供需要此活性組分的病人使用。
術語“藥學上可接受的鹽”指活性組分的非毒性鹽，包括一、二或三酸的形式，它們通常是通過使游離的堿與適當的有機或無機酸反應制備。適合為酸加成鹽以及提供四價鹽的陰離子的鹽的藥學上可接受的鹽是那些由下列酸衍生的鹽例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、馬來酸、檸檬酸、乙酸、酒石酸、琥珀酸、草酸、蘋果酸、谷氨酸、雙羥萘酸等，并包括涉及Journal of Pharmaceutical Science(66,2(1977))所列的藥學上可接受的鹽的其它酸。
術語“藥學上有效量”指可以在研究者或臨床醫生正研究的組織、系統或動物中產生生物或治療反應的活性組分的量。
本發明的組合物可以給予需要治療和/或預防真菌感染的病人。它們可以用于治療念珠菌屬例如白色念珠菌、熱帶假絲酵母、克柔氏念珠菌、C.glabrata和C.pseudotropicalis，和曲霉屬例如煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉。它們也可以用于治療和/或預防卡氏肺囊蟲肺炎，免疫受損的病人如那些患有AIDS的病人特別容易感染該病。
使用本發明的組合物的劑量根據各種因素選擇，這些因素包括類型、種屬、年齡、體重、性別和病人的醫療狀況；治療的疾病的嚴重程度；給藥的途徑；病人的腎和肝功能；使用的特定的活性組分或其鹽。一般的熟練醫生可以容易地決定并開出預防、對抗或阻止疾病的發展所需的藥物有效量。
靜脈給藥時，活性組分的最優選劑量為約1.67-約33μg/kg/min，輸液速率為約200ml/小時。為給予該量的活性組分，本發明的組合物應含有0.025-0.50 mg/ml活性組分(基于50kg體重的病人)。
一般根據下列制備活性組分，化合物Ⅰ首先將下式的化合物Ⅱ
還原得到下式的化合物Ⅲ
隨后，將其轉化為下式的化合物Ⅳ
然后，通過替換苯硫基將其立體選擇性地轉化為化合物Ⅰ。
在另一方法中，使化合物Ⅱ與苯硫酚反應得到下式的化合物Ⅳ-a
隨后，將化合物Ⅳ-a還原為下式的化合物Ⅳ
然后，通過用苯硫基替換將其立體選擇性地轉化為化合物Ⅰ。
化合物Ⅰ的制備a)化合物Ⅲ的合成和分離將化合物Ⅱ(15.9g,89％(面積)純度，3.4％水(重量)，0.0128mol)加至無水THF(0.64L)中，通過3A分子篩回流干燥該懸浮液至＜10％水(摩爾)。另外加入無水THF復制該混合物至原體積，用冰/水/甲醇浴冷卻該懸浮液至低于4℃。
用10分鐘加入無水BH3·SMe2(10.91g,0.144mol)，將該反應混合物維持在0-4℃。用HPLC監測反應進程至原料與產物的比例為1∶1表明反應結束(3.5h)。在4小時時，將該混合物冷卻至-12℃，用2NHCl(0.036L)緩慢終止反應。用水將該溶液稀釋至1.14L。化合物Ⅲ的分析產量為6.60g(47％)。
將驟冷的溶液稀釋至4L，上樣于LiChroprep RP-C18吸附劑(158g)的介質-壓力柱上。上樣后，用1.2L水洗滌該柱，用1.9L的1∶4(體積比)乙腈∶水洗脫所述胺，然后用3.8L的1∶3(體積比)乙腈∶水洗脫所述胺。
合并富含部分(cuts)(＞80％面積)，用水稀釋成1∶7.3(體積比)乙腈∶水溶液(共1.7L)。將該化合物上樣于上述同一柱上，用0.57L水洗滌該柱。用0.57L甲醇洗脫所需化合物。合并富含部分(＞85％面積)，旋轉蒸發和靜態高真空濃縮得到6.81g(純度為87％(重量)，6.8％水(重量))，含有化合物Ⅲ(其中R1為二甲基三癸基)鹽酸鹽5.92g，分離產率為43％。
b)苯基硫化物(化合物Ⅳ)的制備將化合物Ⅲ(5.80g,0.00533mol)加至0.23L無水乙腈中，冷卻至-5℃，此時加入苯硫酚(3.10g,0.028mol)。用至少20分鐘加入TFA(36g,24.5ml,0.308mol)以保持該反應混合物的溫度低于0℃。將反應物維持在-10℃-0℃至HPLC分析顯示原料＜3％(面積)(3.75h)。此時，緩慢(1h)加入冷卻的水(0.56L)，同時冷卻該反應混合物維持溫度低于5℃。為三氟乙酸鹽的α-和β-苯基硫化物加成物d分析產量為4.82g(71％)。
將該溶液上樣于步驟a所述的相同的柱上，用水(0.57L)洗滌該柱，然后用甲醇(0.5L)洗脫吸附的有機化合物。旋轉蒸發和靜態高度真空濃縮富含部分。得到7.20g(純度為57％(重量)，5.1％(重量)水))粗品苯基硫化物三氟乙酸鹽，為無定形泡沫狀固體。正確的分離步驟得到的苯基硫化物的產量為4.10g(61％)，為93∶7的α-和β-縮醛胺非對映體混合物。
c)化合物Ⅳ轉化為化合物Ⅰ-1在室溫攪拌下，將粗品苯基硫化物三氟甲酸鹽(8.4g粗品，純度57％(重量)，0.00377mol)加至乙二胺(24ml)中。將產生的溶液攪拌1.5小時以便完全替換，然后加入甲醇(40ml)，接著加入乙酸(45ml)，于冰浴冷卻下保持溫度低于25℃。產生稠狀淤漿。加入水(160ml)使該淤漿溶解，通過用己烷(75ml)輕輕振搖萃取水層。用水(40ml)回萃取己烷層，通過燒結玻璃漏斗中的多孔介質過濾合并的水層，然后用50mm直徑的C18柱經制備性HPLC純化，用22％乙腈/78％的0.15％乙酸水溶液作為洗脫劑。冷凍干燥富含部分得到4.2g 85％(重量)的純品化合物Ⅰ-1，為二乙酸鹽，分離步驟產率為78％。
d)化合物Ⅰ-1的結晶將上述固體(2.3g)溶于乙醇(25ml)中，然后加入水(2.7ml)。通過燒結玻璃漏斗過濾該溶液以便去除外來的物質。向該濾液中加入乙酸(0.14ml)，接著緩慢加入(1.75h)乙酸乙酯(14ml)。對該溶液種晶，并將其老化1h。用5h加入其余的乙酸乙酯(32ml)并再放置1h。在燒結玻璃漏斗上收集結晶的固體，并將其用乙醇/乙酸乙酯/水(分別為6ml/9ml/0.5ml)洗滌。在氮氣流下干燥濕濾餅得到1.91g(1.75g分析值，88％回收率)化合物Ⅰ-1的二乙酸鹽。
實施例1制劑1的制備組分 用量化合物Ⅰ 42mg/ml蔗糖 30mg/ml甘露醇 20mg/ml乙酸1.5mg/ml氫氧化鈉適量調至pH5-6.2裝填體積0.875ml-1.8ml一般而言，向25ml容量燒瓶中加入0.75g蔗糖和0.5g甘露醇、約17.5ml水、75mg/ml的乙酸溶液0.5ml和42mg/ml的化合物Ⅰ。混合該溶液，用1M氫氧化鈉將該溶液的pH調至6。用水調整體積并確保pH。通過Millex-GV注射器濾器過濾該溶液，以每瓶1.75ml的量裝入10ml的管制玻璃瓶中。用冷凍干燥塞子部分塞住所述瓶并冷凍干燥，在所述瓶底得到固體冷凍干燥餅狀物。
用10.5ml稀釋凍干制劑，吸取10ml，在對病人給藥前稀釋至200ml使終濃度為0.25mg/ml。
根據上述方法制備含有下列組分的另外的制劑(每一制劑按40-42mg/ml活性組分濃度的溶液制備)表1
將所述制劑以冷凍干燥物的形式于5℃儲存，每隔約4周測試其穩定性。用本領域技術人員已知的標準方法經梯度HPLC測定穩定性和降解物的形成。
令人吃驚地發現制劑1、5、7和8比其它制劑顯著更穩定，并顯示顯著少的不需要的降解物。
序列表(1)一般資料(ⅰ)申請人Nerurkar,ManeeshHunke,William AKaufman.Michael J(ⅱ)發明名稱抗真菌組合物(ⅲ)序列數1(ⅳ)通信地址(A)收信人Elliott Korsen(B)街道P.O.Box 2000,126 E.Lincoln Ave.
(C)城市Rahway(D)州NJ(E)國家美國(F)郵政編碼07065(ⅴ)計算機可讀形式(A)媒體類型軟盤(B)計算機IBMPC兼容機(C)操作系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0,版本#1.30(ⅵ)當前申請數據(A)申請號(B)提交日期(C)分類(ⅷ)代理律師/代理人資料(A)姓名Korsen,Elliott(B)注冊號32705(C)參考/檔案號19636(ⅸ)電訊資料(A)電話908-594-5493(B)傳真908-594-4720(2)SEQ ID NO:1的信息(ⅰ)順序特征(A)長度6個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型未知(D)拓撲學環狀(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假擬無(ⅳ)反意義鏈無(ⅹⅰ)順序描述SEQ ID NO1Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa1 權利要求
1．用于靜脈給予病人的藥用組合物，包括a)具有下式的藥用有效量的化合物和其藥學上可接受的鹽
b)藥學上可接受量的賦形劑例如有效的填充劑以形成凍干餅狀物；和c)藥學上可接受量的有效的乙酸鹽緩沖液以得到藥學上可接受的pH。
2．權利要求1的藥用組合物，包括a)藥用有效量的化合物Ⅰ；b)約10-200mg/ml范圍的賦形劑，例如有效的填充劑或填充劑的組合以形成凍干餅狀物；和c)藥學上可接受量的有效的乙酸鹽緩沖液以得到pH在約4和7之間。
3．權利要求2的組合物，包括約5-200mg/ml的化合物Ⅰ或其藥學上可接受的鹽，約12.5mM-約200mM的乙酸鹽緩沖液，約10-200mg/ml的填充劑和水。
4．權利要求3的組合物，包括約30-50mg/ml的化合物Ⅰ或其藥學上可接受的鹽，約20-60mM的乙酸鹽緩沖液，約30-70mg/ml的有效的填充糖或填充糖組合以形成凍干餅狀物和水。
5．權利要求4的組合物，包括42mg/ml的化合物Ⅰ或其藥學上可接受的鹽，25mM的乙酸鹽緩沖液，30mg/ml的蔗糖，20mg/ml的甘露醇和水。
6．權利要求4的組合物，包括42mg/ml的化合物Ⅰ或其藥學上可接受的鹽，50mM的乙酸鹽緩沖液，30mg/ml的蔗糖，20mg/ml的甘露醇和水。
7．治療和/或預防哺乳動物真菌感染的方法，包括用藥用有效量的權利要求1的組合物靜脈治療哺乳動物。
8．權利要求7的方法，其中所述哺乳動物為人。
9．在病人中治療由念珠菌屬引起的感染的方法，包括給予所述病人有效量的權利要求1的組合物。
10．在病人中治療由念珠菌屬引起的感染的方法，包括給予所述病人有效量的權利要求5的組合物。
11．在病人中治療由念珠菌屬引起的感染的方法，包括給予所述病人有效量的權利要求6的組合物。
12．在病人中治療由曲霉屬引起的感染的方法，包括給予所述病人有效量的權利要求1的組合物。
13．在病人中治療由曲霉屬引起的感染的方法，包括給予所述病人有效量的權利要求5的組合物。
14．在病人中治療由曲霉屬引起的感染的方法，包括給予所述病人有效量的權利要求6的組合物。
15．在需要此治療或預防的病人中，治療或預防由卡氏肺囊蟲引起的感染或疾病的方法，包括給予所述病人預防或治療有效量的權利要求1的組合物。
16．在需要此治療或預防的病人中，治療或預防由卡氏肺囊蟲引起的感染或疾病的方法，包括給予所述病人預防或治療有效量的權利要求5的組合物。
17．在需要此治療或預防的病人中，治療或預防由卡氏肺囊蟲引起的感染或疾病的方法，包括給予所述病人預防或治療有效量權利要求6的組合物。
18．制備含有具有下式的化合物和其藥學上可接受的鹽的藥用組合物的方法，該方法包括下列步驟
a)將填充劑或藥物的組合溶于水中；b)加入乙酸并將pH調至約3.7；c)加入化合物Ⅰ并用堿將pH調至約4-7；d)過濾由此制得的溶液；e)冷凍所述溶液；和f)冷凍干燥冷凍的溶液。
19．通過權利要求18的方法制備組合物。
全文摘要
本發明為用于靜脈給予病人的藥用組合物,包括a)藥用有效量的式(Ⅰ)的化合物和其藥學上可接受的鹽;b)藥學上可接受量的賦形劑例如有效的填充劑以形成凍干餅狀物;和c)藥學上可接受量的有效的乙酸鹽緩沖液以得到pH在約4和7之間。
文檔編號A61P31/10GK1222082SQ97195514
公開日1999年7月7日 申請日期1997年4月15日 優先權日1996年4月19日
發明者M·J·內魯爾卡, W·A·亨克, M·J·考夫曼 申請人:麥克公司