控制蜜蜂體表寄生螨的方法及驅螨劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物學技術領域，具體而言，本發明涉及一種驅螨劑和控制蜜蜂體表 寄生螨的方法。
【背景技術】
[0002] 蜜蜂的健康受到各種各樣病原體的威脅，例如：病毒，細菌，微孢子蟲和原生生物。 由這些病原體所導致的蜜蜂種群減少已經對蜂農和需要蜜蜂授粉的人造成了嚴重的經濟 損失。然而，蜜蜂體外寄生的螨蟲對蜜蜂健康的影響更加嚴重。在擁有養蜂業的大洲中，除 澳大利亞外，狄斯瓦螨是威脅蜜蜂健康的主要害蟲。在亞洲的大多數國家，梅氏熱厲螨也有 著同樣程度的危害。它們不僅可以通過吸噬淋巴液致使蜜蜂幼蟲和蜂蛹死亡，而且還可以 間接的傳播病毒及其它蜜蜂病原體。
[0003]目前常用來控制這兩種蜂螨的殺螨藥(如福化利和蟲螨脒）和其他一些化合物中， 大多數是通過擾亂螨蟲的神經系統來達到除螨目的的。然而，這些控制方法都存在缺陷：如 (1)可能是由于螨蟲的快速繁殖，蜂螨已經對這些常用殺螨劑產生了抗藥性；（2)這些物質 的交叉反應可能增強對蜜蜂的不利影響；(3)這些化合物殘存在蜂蜜產品中，人類食用后 會導致過敏和中毒反應。
[0004] 因此，人們迫切需要一種殺螨劑，既可以控制蜂螨，又對蜜蜂，環境和人類都很安 全。現在研究，人們已經知道TRP通道家族包括七個亞族，而且已經在很多哺乳動物的組 織、器官中發現了TRP通道。TRPAl亞族是2003年，Story及其同事發現，在小鼠的背根神 經節DRG發現的一種蛋白，發現在DRG中，TRPAl和PRPV共表達，提示這種通道可能介導了 傷害性冷刺激。現在研究認為溫度低于18度可激活基因TRPAl通道。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的第一問題在于克服現有殺螨劑導致過敏和中毒反應的問題，提 供一種控制蜜蜂體表寄生螨的方法，該方法簡便、靈敏、特異性強。
[0006] 本發明所要解決的第二技術問題在于提供一種驅螨劑用于本發明第一個方面的 方法。
[0007] 本發明所要解決的第三技術問題在于提供一種驅螨劑用于控制蜜蜂體表寄生螨 的方法的應用。
[0008] 為了解決現有技術中的這些問題，在第一個方面，本發明提供的技術方案是：本發 明提供了一種控制蜜蜂體表寄生螨的方法，以TRP蛋白通道為靶位點，將植物精油成分作 用于TRP蛋白通道的靶位點來控制蜜蜂體表寄生螨。
[0009] 優選地，本發明第一個方面的方法中，所述植物精油為能夠激活寄生螨TRP蛋白 通道的所有天然化合物或該植物精油包含有能激活寄生螨TRP蛋白通道的天然化合物。
[0010] 優選地，本發明第一個方面的方法中，所述植物精油為丁香酚、1，8-桉葉素、香芹 酚、雜酚油、茉莉酸甲酯、2-甲基壬基甲酮、橙花叔醇、側柏酮、2-十二烷酮、香葉基丙酮、桃 金娘烯醛、4-松油醇、P-香茅醇、a-松油醇、橙花醇、二烯丙基二硫、3, 7-二甲基-6-辛烯 醇、2-乙基-1，3-己二醇、P-環檸檬醛、薄荷醇中的一種或兩種以上的混合。
[0011] 優選地，本發明第一個方面的方法中，所述植物精油優選為a-松油醇。
[0012] 優選地，本發明第一個方面的方法中，所述a-松油醇彡〇. 3M。
[0013] 優選地，本發明第一個方面的方法中，所述植物精油能激活狄斯瓦螨的VdTRPAl 通道蛋白或梅氏熱厲螨的TmTRPAl通道蛋白。
[0014] 優選地，本發明第一個方面的方法中，所述狄斯瓦螨的VdTRPAl通道蛋白的cDNA 具有如SeqNo.IVdTRPAl-USeqNo. 2VdTRPAl_S兩種序列；所述梅氏熱厲螨的TmTRPAl通 道蛋白的cDNA具有如SeqNo. 3TmTRPAl_S、SeqNo. 4TmTRPAl_Ll、SeqNo. 5TmTRPAl_L2 的 三種序列。
[0015] 在第二個方面，本發明提供了一種驅螨劑，其包括一種或兩種以上的植物精油，其 作用靶點為螨蟲的TRP蛋白通道。
[0016]優選地，本發明第二個方面的驅螨劑中，所述植物精油為能夠激活寄生螨TRP蛋 白通道的所有天然化合物。或該植物精油包含有能激活寄生螨TRP蛋白通道的天然化合 物。
[0017]優選地，本發明第二個方面的驅螨劑中，所述植物精油為丁香酚、1，8-桉葉素、香 芹酚、雜酚油、茉莉酸甲酯、2-甲基壬基甲酮、橙花叔醇、側柏酮、2-十二烷酮、香葉基丙酮、 桃金娘烯醛、4-松油醇、P-香茅醇、a-松油醇、橙花醇、二烯丙基二硫、3, 7-二甲基-6-辛 烯醇、2-乙基-1，3-己二醇、P-環檸檬醛、薄荷醇中的一種或兩種以上的混合。
[0018] 優選地，本發明第二個方面的驅螨劑中，所述植物精油為a-松油醇。
[0019] 優選地，本發明第二個方面的驅螨劑中，所述a-松油醇彡〇. 3M。
[0020] 優選地，本發明第二個方面的驅螨劑中，還包括可接受的輔料。
[0021] 在第三個方面，本發明提供了一種驅螨劑用于控制蜜蜂體表寄生螨。
[0022] 在本文中，術語"狄斯瓦螨"或簡稱"瓦氏螨"Varroadestructor，蜱螨目，瓦螨 科，瓦螨屬。狄斯瓦螨是蜜蜂的體外寄生蟲，寄生于工蜂（幼蟲和成蟲）體表，影響工蜂 的哺育采集防衛等行為；狄斯瓦螨進入巢房底部產卵，進而影響蜂群幼蟲的發育；最終影 響蜂群的繁殖與生產。
[0023] 在本文中，術語"梅氏熱厲螨"或簡稱"梅氏螨"Tropilaelapsmercedesae,蝶螨 目，厲螨科，熱厲螨屬，蜂螨多寄生在蜜蜂幼蟲體外，其生長繁殖過程均在封蓋的巢房內完 成。新生成螨隨蜂羽化出房，或從死亡幼蜂巢房蓋的穿孔處爬出，再潛入其他蜂幼房內寄生 繁殖。
[0024] 在本文中，術語"蜜蜂"指蜜蜂科、屬膜翅目，包括西方蜜蜂Apismellifera。
[0025] 在本文中，術語"a-松油醇"，一般工業品為三種異構體的混合物，a-松油醇有 左旋、右旋、消旋三種光學異構體，本發明a_松油醇包括三種異構體。
[0026] 在本文中，術語"植物精油"，是指從植物的根、莖、花、葉、果實、樹皮等部位，提取 出來的具有高度芳香及揮發性的脂溶性液體。植物精油包括單萜烯、單萜醇、單萜酮、香豆 素、酚類、醚類、醛類、倍半萜烯、倍半萜酮、倍半萜醇和氧化物，其種類廣泛，本文列舉出來 的只是其中的一小部分。通常植物精油微溶于水，溶于乙醇或DMS0。且本發明中，在本文中， 使用的植物精油可以直接采用其天然的液體形式，還可以添加適量的添加劑、輔料等；使用 的植物精油還可以采用固體吸附劑吸附精油的方式施加，來控制蜜蜂體表寄生螨。
[0027] 術語"輔料"，包括液體溶劑輔料，包括不限于如乙醇、DMSO;固體輔料，如固體吸 附劑、緩釋劑，如包括但不限于纖維素離子交換劑、離子交換樹脂、硅膠、活性炭、活性碳纖 維等所屬技術領域人員常用的技術手段。
[0028] 現有技術中的大部分驅蟲劑和驅螨劑是作為配體通過刺激味覺或嗅覺感受體以 達到驅蟲驅螨目的，這些受體是通過G蛋白偶聯受體起到效果的。而TRPAl瞬時受體電位 (TRP)Al通道為一種陽離子通道，擁有傷害性刺激感受器的功能，在遇到有害刺激時能夠 引起動物的傷害回避行為。我們通過檢測存在于植物精油中的天然化合物是否能夠激活 TRPAl通道以尋找潛在的趨螨劑。TRPAl離子通道還從未做為一個靶標用來研發驅螨劑或 者殺螨劑和現有的驅螨劑機理完全不同。這些天然化合物植物精油能特異的、有效的驅趕 螨蟲，但不會傷害蜜蜂，也不會污染食用蜂產品。另外，類似的方法也可以被用于控制人類 和其它哺乳動物的寄生螨蟲。
[0029] 相比于現有技術中的解決方案，本發明的驅螨劑及驅螨方法的有益效果是：
[0030] 1.特異性強：本發明由于作用于TRPAl瞬時受體電位（TRP)Al通道，控制蜜蜂體 表寄生螨，具有很強的特異性。
[0031] 2.本發明的方法對于蜜蜂和食用蜂蜜產品的人類都無毒副作用，不會傷害蜜蜂， 也不會污染食用蜂產品，也不會產生抗藥性。
[0032] 3.本發明由于采用天然植物成分作為驅除劑，相對于化學合成物，對于環境更加 友好，更加環保。
【附圖說明】
[0033] 下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述：
[0034] 圖1為a-松油醇在瓦氏螨感染蜂群中的濃度測試。
[0035] 圖2A為橙花醇、a_松油醇、丁香酚、香芹酚、薄荷醇、橙花叔醇、偵彳柏酮、香葉基丙 酮的鈣離子成像法圖譜；橫坐標為時間，縱坐標為細胞內鈣離子熒光指示劑fura-2的熒光 強度在化合物流入腔膛期間與未流入時的比值。化合物名稱下面的橫線表示化合物流入腔 膛所跨越的時間。
[0036] 圖2B為2-十二烷酮、2-乙基-1,3-己二醇、雜酚油、二烯丙基二硫、3, 7-二甲 基-6-辛烯醇、茉莉酸甲酯、4-松油醇、P-香茅醇、1，8-桉葉素、桃金娘烯醛的鈣離子成像 法圖譜。橫坐標為時間，縱坐標為細胞內鈣離子熒光指示劑fura-2的熒光強度在化合物 流入腔膛期間與未流入時的比值。化合物名稱下面的橫線表示化合物流入腔膛所跨越的時 間。
【具體實施方式】
[0037] 為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發明進行詳細地描述。需要特別指 出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構成對本發明范圍的限制。依據本說明書的論 述，本發明的許多變化、改變對所屬領域技術人員來說都是顯而易見的。
[0038] 以下將以舉例形式進行說明，如有未詳盡之處，可以參見常用的實驗手冊。螨蟲 購自蘇州丁氏養蜂場。精油材料來源見下表1。巢式RT-PCR(聚合酶，日本T0Y0B0公司）， (Trizol(Invitrogen公司），5'-FullRACE試劑盒（日本TOYOBO公司），3'RACE試劑 盒（SMARTerRACE,Clontech公司），HEK293 細胞（Invitrogen公司），Dsred轉染指不劑 (Clonetech公司），Ac5.l/V5_HisB載體（Invitrogen公司），fura-2(Invitrogen公司）。
[0039] 一、分離狄斯瓦螨的TRPAl(簡VdTRPAl)cDNA
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