芬戈莫德在治療根尖周炎中的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于根尖周炎的防治技術領域，具體涉及芬戈莫德（Fingolimod)在治療 根尖周炎中的用途。
【背景技術】
[0002] 根尖周炎為口腔的常見病、多發病，通常由齲病或牙髓病發展而來，病理特征主要 表現為根尖周牙槽骨的破壞與吸收。根尖周炎通常被認為是根管內微生物混合感染的結 果，因此其主要的臨床治療手段為通過根管治療以去除感染物質。但對以往X線片的調查 表明，根管治療后的患牙中有25%仍存在根尖周骨破壞；通過CT檢測發現約63%的患牙盡 管經過完善的根管治療，其根尖周骨缺損仍無法痊愈，最后可能需要采取根尖切除或將患 牙拔除。近來研宄表明，感染并非為根尖周炎骨破壞的唯一原因，根尖周炎的病理過程事實 上是機體對根管系統內抗原物質免疫反應。因此，尋找潛在免疫調節藥物以治療根尖周炎 已成為根管治療的重要輔助策略。
[0003]鞘氨醇-1-磷酸I型受體（Sphingosine-1-phosphatereceptor 1，SlPl)廣泛表達于絕大多數免疫細胞的表面，通過與其配體鞘氨醇-1-磷酸 (Sphingosine-l-phosphate,S1P)相結合，影響免疫反應的程度和發展，包括趨化炎性細胞 的浸潤、影響淋巴細胞的增殖及炎性因子的釋放、調控T細胞的分化方向等。由于SlPl在 多種疾病的發生發展中起著重要作用，SlPl的調節成為相關疾病的治療靶點。新型免疫調 節劑芬戈莫德（Fingolimod)為SlP受體調節劑，是子囊菌冬蟲夏草提取物的衍生物，化學 結構為2-氨基-2-[2 (4-辛基苯基）乙基]-1，3-丙二醇鹽酸鹽，相對分子質量為343. 94。 其藥理學研宄發現，Fingolimod在體內經磷酸化后能競爭性結合SlP的受體，并能促進細 胞膜上SlPl由胞外轉移至胞內，從而下調S1P/S1P1信號軸。
[0004] Fingolimod以其突出的優點越來越受到人們的關注。目前，涉及到Fingolimod 的報道有治療多發性硬化、炎癥性結腸炎、自身免疫性葡萄膜炎、骨質疏松等。但是，迄今為 止，Fingolimod在治療根尖周炎中的應用沒有被公開或使用。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供Fingolimod在治療根尖周炎中的應用。
[0006] 為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：
[0007] Fingolimod可通過改善根尖周炎病損區骨質破壞，達到治療根尖周炎的作用。
[0008]Fingolimod可通過減緩根尖周炎病損區炎癥細胞浸潤，達到治療根尖周炎的作 用。
[0009] Fingolimod可通過降低根尖周炎病損區SlPl表達水平，達到治療根尖周炎的作 用。
[0010] Fingolimod可通過降低根尖周炎病損區核因子kappaB受體激活劑配體 (ReceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKL)表達水平，達到治療根 尖周炎的作用。
[0011] Fingolimod的上述作用表明其可用于制備治療根尖周炎的藥物，具體為 Fingolimod可用于制備改善根尖周炎病損區骨質破壞、減緩根尖周炎病損區炎癥細胞浸 潤、降低根尖周炎病損區SlPl表達水平或降低根尖周炎病損區RANKL表達水平的藥物。
[0012] 本發明的有益效果主要體現在：提供了Fingolimod用于治療根尖周炎中的新用 途。該用途表明Fingolimod可用于制備治療根尖周炎的藥物。
【附圖說明】
[0013] 圖1是HE染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓7天、21天和35天導致大鼠下頒 第一磨牙遠中根根尖區骨破壞的干預效果圖。
[0014] 圖2是TRAP染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓7天、21天和35天導致大鼠下 頒第一磨牙遠中根根尖區破骨細胞的影響圖。
[0015] 圖3是免疫組織化學染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓導致大鼠下頒第一磨 牙遠中根根尖區SlPl表達的影響圖。
[0016] 圖4是免疫組織化學染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓導致大鼠下頒第一磨 牙遠中根根尖區RANKL表達的影響圖。
[0017] 圖5是免疫組織化學染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓導致大鼠下頒第一磨 牙遠中根根尖區骨保護素（〇steoprotegrin，OPG)表達的影響圖。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例，對本發明作進一步詳細的說明。以下實施例用于進一步說明本 發明的內容，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發 明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。
[0019] 實施例1
[0020] 1 ?實驗動物和材料：
[0021] 1.1實驗動物
[0022] 所有的實驗程序符合武漢大學口腔醫學院倫理委員會的指導原則。SPF級雌性 Wistar大鼠48只，體重200~220克，購于湖北省實驗動物中心，分籠飼養。
[0023] 1. 2實驗材料
[0024] Fingolimod購置于美國LClaboratories公司，參考藥物說明書，用生理鹽水制 備成藥物工作濃度0. 4mg/mL。
[0025] 2.動物分組及大鼠根尖周炎動物模型的建立：
[0026] 2. 1動物分組
[0027] 隨機分成7天模型對照組、7天Fingolimod給藥組、21天模型對照組、21天 Fingolimod給藥組、35天模型對照組、35天Fingolimod給藥組，每組8只。常規飼養、稱體 重并做標記。
[0028] 2. 1大鼠根尖周炎動物模型的建立
[0029] 腹腔注射16. 7%的烏拉坦溶液（0. 8mg/g)使大鼠麻醉后，用1/4號球鉆（瑞士登 士柏公司）在大鼠雙側下頒第一磨牙的遠中窩處開髓，開髓深度約為球鉆直徑，注意避免 穿通髓室底，以能用K挫探穿髓點為開髓成功的標準；將髓腔直接暴露于口腔環境中，常規 飼養7天、21天或35天。
[0030] 3?實驗方法：
[0031] 3.1給藥方案
[0032]Fingolimod給藥組于模型建立后第 1、2、5、8、11、13、15、16、19、22、23、25、28、31、 33天分別用灌胃方式給藥（3mg/kg);模型對照組進行生理鹽水灌胃處理。所有大鼠預定時 間頸椎脫白處死并分離下頒骨組織。
[0033] 3. 2標本的采集和切片制備
[0034] 分離的下頒骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，所有標本流水沖洗24h后轉入10%的 乙二胺四乙酸（EDTA)中，隔天換液，室溫脫鈣1個半月，以ImL注射器無阻力通過第三磨牙 牙冠為標準，終止脫鈣。修整標本，保留下頒第一磨牙周圍l_2mm組織。標本流水沖洗24h， 50%、60%、70% (可過夜）、80%、90%、95%1(可過夜）、95%11上行梯度酒精脫水，每個 梯度2h，正丁醇繼續脫水透明3d。隨后置入含正丁醇：石蠟（比例為1:1，v/v)的蠟缸中 浸蠟3h，再置入含純低熔點石蠟的蠟缸中浸蠟3h，再用高熔點石蠟進行包埋，使下頒骨頰 面朝下。行4ym近遠中向連續切片，展片后用表面黏附有多聚賴氨酸的載玻片撈片，傾斜 控水后，將切片編號裝入烤片架，60°C烤箱烤片2-3h后取出常溫保存。
[0035] 3. 3HE染色
[0036] 選取標本中部可明顯顯示下頒第一磨牙遠中根根管、根尖孔的切片，放入染缸中。 將染缸放入60°C烤箱中烤片lh。在通風櫥中快速將二甲苯I倒入染缸脫蠟20min，換二甲 苯II脫蠟 15min。標本 100%I、100%II、95%I、95%11、90%、80%、70%下行梯度酒精入 水，每個梯度2-3min，細水流自來水沖洗5min。蘇木素染液染色l-2min，流水沖洗3min， PBS溶液浸泡IOmin返藍；伊紅染液染色l-2min，流水沖洗3min。70%、80%、90%、95%I、 95%II、100%I、100%II上行梯度酒精脫水，每個梯度倒進倒出，放入通風櫥中干燥。玻片 放入二甲苯中透明約15s后取出，滴加液態中性樹膠，用合適長度的蓋玻片封片，在通風櫥 的攤片板上，待中性樹膠凝固后即可鏡下觀察拍照。
[0037] 3. 4 抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant