長非編碼核糖核酸mrak009713小干擾rna在制備神經病理痛藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及神經病理痛鎮痛藥物用途發明領域。
【背景技術】
[0002] 疼痛是大多數疾病具有的共同癥狀，是人類共有而個體差異很大的一種不愉快的 感覺。由于疼痛給人們造成極大痛苦，據2001年第二期《國際疼痛學會通迅》報道：美國 106次國會通過一項決議，宣布從2001年元月一日起的十年為"疼痛控制和研究的十年"。 由此說明疼痛治療是世界難題。根據疼痛時程可將疼痛分為急性痛（生理性痛）和慢性痛 (病理性痛）。慢性痛包括炎癥痛、神經病理痛、癌癥痛，是臨床上常見主訴之一。由于慢性 痛機理復雜，其治療成為臨床上的難題。神經病理痛是指由神經系統損傷或疾病所引起的 疼痛綜合征，常常表現為自發性的疼痛，對機械、冷、熱等傷害性刺激產生痛覺過敏；對非傷 害性刺激產生觸誘發痛、痛覺倒錯和燒灼痛等神經病理性痛覺過敏。常規鎮痛藥副作用較 大（如嗎啡容易成癮），加之慢性痛持續時間長，對人身心健康危害較大，因此探明其發病 機制尋找安全有效的慢性痛防治方法是全世界科學家研究的熱點和重點。
[0003] 嘌呤類物質三磷酸腺苷（ATP)作為重要的信使物質參與痛覺信息傳遞。嘌呤受體 分為Pl和P2受體，ATP及其類似物作用于P2受體。P2受體分為配體門控性離子通道型受 體（P2X受體）和G蛋白偶聯型受體（P2Y受體）。外周感受器感受傷害性刺激后形成傷害 沖動是通過脊神經（背根）節初級感覺神經細胞傳入。疼痛、傷害性刺激使損傷細胞、應激 細胞以及感覺神經末梢本身釋放大量ATP，ATP及其作用的P2X受體涉及痛覺及傷害性信息 在初級感覺神經元的傳遞，其中主要是同聚性P2X3受體和異聚性P2X 2/3受體參與初級感覺 神經元的痛覺及傷害性信息傳遞。基因敲除P2X3受體和雙重基因敲除P2X 2/3受體的小鼠減 小了對福爾馬林致痛試驗的兩相反應。P2X#PP2X2/3受體介導神經病理痛的痛覺傳遞。神 經病理痛刺激時，P2X3受體和P2X 3mRNA表達增加，感覺神經元？2乂3受體介導ATP激活的門 控通道電流明顯增強。應用P2X3受體反義寡核苷酸及RNA干擾技術可使炎性痛大鼠模型 背根神經節的P2X3受體水平下調，進而明顯減輕P2X 3受體激動劑α，β -meATP和福爾馬林 所致的足底傷害性反應。這些發現為神經病理痛的發病機理提供了新的依據。申請人實驗 室以前的研究也顯示神經病理痛可導致背根感覺神經元P2X3受體表達增加。目前國外已 有研究生產P2X3受體拮抗劑（如R03)用于臨床治療疼痛的報道。
[0004] 隨著基因組測序計劃的完成以及新一代深度測序技術的應用，人們發現哺乳動物 細胞中多于95%的轉錄序列為非編碼核糖核酸（noncoding RNA，ncRNA)。非編碼RNA是一 類不編碼蛋白質但具有生物學調控功能的RNA分子，它可通過參與mRNA的穩定和翻譯水平 的調節、蛋白質的運輸、RNA的加工和修飾以及影響染色體的結構等機制，調控生物體的基 本生命活動，同時與一些重要疾病的病理生理過程相關。非編碼RNA包括短非編碼核糖核 酸（包括 siRNA、miRNA、piRNA)和長非編碼核糖核酸（long non-coding RNA, IncRNA)。長 度大于200個堿基（200nt)為長鏈非編碼核糖核酸（IncRNA)。目前長度小于50個核苷酸 的非編碼RNA(如microRNA、siRNA和piRNA)等的研究已取得突破性進展，但對具有功能的 長非編碼核糖核酸的研究不多。本發明通過坐骨神經慢性壓迫性損傷（CCI)大鼠模型，觀 察長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾核糖核酸處理后大鼠痛行為的變化，以及與介導 神經病理痛的P2X3受體表達變化的關系，為MRAK009713小干擾RNA用于慢性痛（即神經 病理痛）的預防和治療提供幫助。
【發明內容】
[0005] 本發明的第一個目的在于提供長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾RNA的第一 個新用途，即長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾RNA在制備治療神經病理痛藥物中的應 用。
[0006] 本發明的第二個目的在于提供長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾RNA的第二 個新用途，即長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾RNA在制備涉及卩2&受體介導神經系 統疾病防治藥物中的應用。
[0007] 長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾RNA可減輕神經病理痛大鼠的痛行為反應。 長非編碼核糖核酸MRAK009713小干擾RNA在防治神經病理痛的作用機理為：降低背根神經 節上的？2&受體表達，產生防治疼痛的作用。
【附圖說明】
[0008] 圖1為坐骨神經慢性壓迫性損傷模型大鼠機械縮足反射閾值變化圖。長非編碼核 糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理后對CCI大鼠的機械痛行為具有抑制作用。包括對 照組；假手術組；慢性坐骨神經壓迫性損傷組；慢性坐骨神經壓迫性損傷+長非編碼核糖核 酸MRAK009713的小干擾RNA處理組；慢性坐骨神經壓迫性損傷+亂序的小干擾RNA陰性對 照組。其中\〈〇. 05, #p〈0. 01表示和正常組比較，#p〈0. 05, ##p〈0. 01表示與坐骨神經慢性 壓迫性損傷模型組比較。
[0009] 圖2為坐骨神經慢性壓迫性損傷模型大鼠熱縮足反射閾值變化圖。長非編碼核糖 核酸MRAK009713的小干擾RNA處理后對坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠的熱敏痛行為具有 抑制作用。實驗分組包括：對照組；假手術組；慢性坐骨神經壓迫性損傷組；慢性坐骨神經 壓迫性損傷+長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理組；慢性坐骨神經壓迫性損 傷+亂序的小干擾RNA陰性對照組。其中\〈0. 05, wp〈0. 01表示和正常組比較，#p〈0. 05，##p〈0. 01表示與坐骨神經慢性壓迫性損傷模型組比較。
[0010] 圖3為坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠背根神經節（DRG)長非編碼核糖核酸 MRAK009713的實時定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應（realtime RT-PCR)檢測結果圖。長非編 碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理后可降低坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠 DRG上 調的長非編碼核糖核酸MRAK009713水平。實驗分組包括：對照組；假手術組；慢性坐骨神 經壓迫性損傷組；慢性坐骨神經壓迫性損傷+長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA 處理組；慢性坐骨神經壓迫性損傷+亂序的小干擾RNA陰性對照組。其中wp〈0. 01表示和 正常組比較，#p〈〇. 05, ##p〈0. 01表示與坐骨神經慢性壓迫性損傷模型組比較。
[0011] 圖4為坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠 DRG的？2乂3受體realtime RT-PCR檢測結 果圖。長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理后可降低坐骨神經慢性壓迫性損 傷大鼠 DRG上調的？2&受體水平。實驗分組包括：對照組；假手術組；慢性坐骨神經壓迫性 損傷組；慢性坐骨神經壓迫性損傷+長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理組； 慢性坐骨神經壓迫性損傷+亂序的小干擾RNA陰性對照組。其中wp〈0.0 l表示和正常組比 較，##P〈〇. 01表示與坐骨神經慢性壓迫性損傷模型組比較。
[0012] 圖5為坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠 DRG的P2X3受體免疫組織化學檢測結果圖。 長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理后可降低坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠 DRG上調的？2&受體水平。圖5 (a)為免疫組織化學實驗結果圖，圖5 (b)為實驗數據分析 比較柱狀圖，實驗分組包括：對照組；假手術組；慢性坐骨神經壓迫性損傷組；慢性坐骨神 經壓迫性損傷+長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理組；慢性坐骨神經壓迫性 損傷+亂序的小干擾RNA陰性對照組。其中#p〈0. 01表示和正常組比較，##p〈0. 01表示與 坐骨神經慢性壓迫性損傷模型組比較。
[0013] 圖6為坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠 DRG的P2X3受體蛋白印跡檢測結果圖。長 非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理后可降低坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠 DRG 上調的？2&受體水平。圖6(a)為蛋白印跡實驗結果圖，圖6(b)為實驗數據分析比較柱狀 圖，實驗分組包括：對照組；假手術組；慢性坐骨神經壓迫性損傷組；慢性坐骨神經壓迫性 損傷+長非編碼核糖核酸MRAK009713的小干擾RNA處理組；慢性坐骨神經壓迫性損傷+亂 序的小干擾RNA陰性對照組。其中\〈0. 05表示和正常組比較，##p〈0. 01表示與坐骨神經慢 性壓迫性損傷模型組比較。
[0014] 圖7為坐骨神經慢性壓迫性損傷大鼠