一種人參籽提取物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及中藥技術領域，具體的說是涉及一種人參籽提取物及其制備方法和應 用。
【背景技術】
[0002] 皮膚老化是由自然因素或非自然因素造成的皮膚衰老現象。人出生后皮膚組織日 益發達，功能逐漸活躍，當到達某種年齡就會開始退化，這種退化往往在人們不知不覺中慢 慢進行。引起皮膚老化的原因有很多，如光老化和外界因素造成的膠原蛋白和彈力蛋白的 減少、細胞過早消耗完分裂次數，提前進入程序衰老等。
[0003] 細胞增殖是生物體生長、發育、繁殖和遺傳的基礎，細胞以分裂的方式進行增殖。 Hayf lick研究發現，正常細胞有一定的壽命，它們的增殖能力也不是無限的，而是有一定的 界限，這就是有名的Hayflick界限理論。細胞增殖越快，細胞生命就越短。減緩了細胞增 殖就是延長了細胞的生命，延緩了老化的進程，達到抗老化作用。減緩細胞的增殖，讓皮膚 細胞暫時處于休眠狀態，避免過早讓皮膚細胞消耗完增殖能力，保留肌膚年輕的資本，是減 緩肌膚老化的合理方法之一。
[0004] 人參籽，又稱為人參子，為五加科人參屬植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的果 實，其是內含一粒種子的果核，常用于體虛乏力，頭昏失眠，胸悶氣短。人參籽中的總皂苷含 量約為1-2%，人參籽中還含有高達40%的不飽和脂肪酸，30%的蛋白質。此外，人參籽中 還含有11種微量元素，人參多糖，氨基酸，多肽等成分，對生物體內的代謝過程起著很大作 用。到目前為止，還未發現對人參籽對于皮膚細胞增殖的抑制作用的研究報道。
【發明內容】
[0005] 有鑒于此，本發明的目的在于提供一種人參籽提取物及其制備方法，使所述人參 籽提取物具有顯著的細胞增殖抑制活性，能夠應用于細胞增殖抑制中以及制備細胞增殖抑 制劑，具有成為抗皮膚老化產品的潛在優勢。
[0006] 在中藥領域，人參籽常用于體虛乏力，頭昏失眠，胸悶氣短等癥，而本發明經過創 造性研究發現，人參籽經過特定方法提取的提取物具有較好地細胞增殖抑制活性，能夠用 于細胞增殖抑制劑的制備中。
[0007] 本發明所述人參籽提取物的制備方法，包括：
[0008] 步驟1、人參軒加水提取，獲得人參軒提取液；
[0009] 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹脂，依次用去離子水、由低到高的梯 度濃度乙醇溶液進行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v % -95v/v %濃度乙醇洗脫 的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。
[0010] 本發明所述人參籽提取物可以是來自30v/v% -95v/v%濃度中各單一濃度乙醇 洗脫的洗脫液，也可以是它們的混合物。
[0011] 作為優選，所述制備方法包括：
[0012] 步驟1、人參籽加水提取，獲得人參籽提取液；
[0013] 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹脂，依次用去離子水、由低到高的梯 度濃度乙醇溶液進行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v% (也可稱為30v/v%乙 醇洗脫部位，以下類同）、7〇ν/ν%、95ν/ν%濃度乙醇洗脫的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲 得人參籽提取物。
[0014] 作為優選，步驟1為：
[0015] 人參籽粉碎，按lg: 10mL比例加入去離子水，于水浴鍋中80-90°C微沸，提取兩次， 每次1小時，離心，上清液過濾，收集所有濾液，獲得人參籽提取液。
[0016] 作為優選，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙醇溶液為30v/v% -95v/v%濃度的 梯度濃度乙醇溶液。在本發明的一些【具體實施方式】中，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙 醇溶液為由30v/v%乙醇溶液、70v/v%乙醇溶液和95v/v%乙醇溶液組成的梯度濃度乙醇 溶液。
[0017] 作為優選，所述大孔吸附樹脂為HP-20型大孔吸附樹脂。
[0018] 同時，本發明還提供由本發明所述制備方法提取的人參籽提取物，優選地，所述人 參籽提取物總黃酮含量為〇. 14-1. 91 %。
[0019] 將本發明制備方法獲得人參籽提取物進行細胞增殖抑制活性的檢測，結果顯示所 述人參籽提取物能夠顯著抑制皮膚成纖維細胞增殖。據此，本發明提供了人參籽提取物在 抑制皮膚細胞增殖以及在制備皮膚細胞增殖抑制劑中的應用。作為優選，所述皮膚細胞為 皮膚成纖維細胞。
[0020] 由以上技術方案可知，本發明以人參籽為原材料，經過特殊方法提取獲得一種人 參籽提取物，所提取的人參籽提取物具有顯著的皮膚細胞增殖抑制活性，能夠用于皮膚細 胞增殖抑制劑的制備中，具有成為抗皮膚老化產品的潛在優勢。
【附圖說明】
[0021] 圖1所示為人參籽提取物對人皮膚成纖維細胞增殖的抑制活性柱形圖。
【具體實施方式】
[0022] 本發明實施例公開了一種人參籽提取物及其制備方法和應用。本領域技術人員可 以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本 領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的應用已經通過較 佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的 產品及方法進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
[0023] 為了進一步理解本發明，下面結合實施例對本發明提供的一種人參籽提取物及其 制備方法和應用進行詳細說明。
[0024] 實施例1 :本發明所述人參籽提取物的制備
[0025] 將50g市售的人參籽粉碎，按1:10 (g/ml)加入去離子水，于水浴鍋中80-90°C微 沸，提取兩次，每次1小時，離心，上清液過濾，收集所有濾液，減壓濃縮，用HP-20大孔樹脂 層析吸附，依次用去離子水、30%乙醇洗脫、70%乙醇洗脫和95%乙醇洗脫，分別收集去離 子水、30 %、70 %和95 %乙醇洗脫液減壓蒸除溶劑依次得到人參籽提取物A、人參籽提取物 B、人參籽提取物C和人參籽提取物D。
[0026] 實施例2 :人參籽提取物中總黃酮含量測定
[0027] 以實施例1人參籽提取物為檢測對象，同時加入人參籽水提物、以及實施例1中 水洗脫部位的人參籽提取物，按照中華人民共和國藥典（2010版）方法，以蘆丁為標準品， 測定提取物中總黃酮含量。測定步驟為：1)標準曲線制作：精密量取對照品溶液lml、2ml、 3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，各加30%乙醇至6. 0ml，加5%亞硝酸鈉溶液lml。 混勻，放置6分鐘，再加10 %硝酸鋁溶液lml，搖勻，放置6分鐘。加氫氧化鈉試液10ml，再 加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應試劑為空白，用紫外-可見分光光度法，在 510nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。2)取一定 量樣品置于25ml容量瓶中，其它按照標準曲線制備步驟，自"加亞硝酸鈉溶液lml"起，依法 測定吸光度，同時取供試品溶液3ml，除不加氫氧化鈉試液外，其余同上操作，作為空白，計 算提取物中總黃酮含量（以蘆丁計）。結果見表1。
[0028] 表1人參籽提取物中總黃酮含量
[0030] 實施例3 :細胞增殖抑制活性的檢測
[0031] 按照實施例1制備的人參籽提取物，完全溶于去離子水，分別配制成0. 8 μ g/ml~ 100 μ g/ml待測溶液，用于測定對細胞增殖的抑制活性。測定步驟為：首先將人成纖維細胞 種入96孔板中（2000細胞/孔，200 μ L);培養72小時后移除培養基，加入待測溶液10 μ L， 培養24小時后，采用ΜΤΤ法通過測定細胞相對數量從而計算出細胞的增殖率。ΜΤΤ法的檢 測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性ΜΤΤ還原為水不溶性的藍紫色結晶 甲瓚并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細胞中的甲瓚，用微孔分光光 度計測定550nm波長吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，ΜΤΤ結晶形成 的量與活細胞數成正比，結果見圖1。
[0032] 由圖1可知，本發明人參籽提取物A-D均具有對皮膚成纖維細胞增殖的抑制作用， 其中人參籽提取物B和人參籽提取物C在0. 8 μ g/ml~100 μ g/ml的濃度范圍內，隨著濃 度的增大，增殖抑制作用增強。
[0033] 以上實施例的說明只是用于幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出，對 于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行 若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種人參籽提取物的制備方法，其特征在于，包括： 步驟1、人參籽加水提取，獲得人參籽提取液； 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹脂，依次用去離子水、由低到高的梯度濃 度乙醇溶液進行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v % -95v/v %濃度乙醇洗脫的洗 脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。2. 根據權利要求1所述制備方法，其特征在于，包括： 步驟1、人參籽加水提取，獲得人參籽提取液； 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹脂，依次用去離子水、由低到高的梯度濃 度乙醇溶液進行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v %、70v/v %、95v/v %濃度乙醇 洗脫的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。3. 根據權利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟1為： 人參籽粉碎，按lg: IOmL比例加入去離子水，于水浴鍋中80-90°C微沸，提取兩次，每次 1小時，離心，上清液過濾，收集所有濾液，獲得人參籽提取液。4. 根據權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙醇溶 液為30v/v% -95v/v%濃度的梯度濃度乙醇溶液。5. 根據權利要求4所述制備方法，其特征在于，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙醇 溶液為由30v/v %乙醇溶液、70v/v %乙醇溶液和95v/v %乙醇溶液組成的梯度濃度乙醇溶 液。6. 根據權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂為HP-20型大孔吸附 樹脂。7. 權利要求1-6任意一項所述制備方法制備的人參籽提取物。8. 根據權利要求7所述人參籽提取物，其特征在于，總黃酮含量為0. 14-1. 91 %。9. 權利要求7所述人參籽提取物在抑制皮膚細胞增殖以及在制備皮膚細胞增殖抑制 劑中的應用。10. 根據權利要求9所述應用，其特征在于，所述皮膚細胞為皮膚成纖維細胞。
【專利摘要】本發明涉及中藥技術領域，公開了一種人參籽提取物及其制備方法和應用。本發明所述人參籽提取物的制備方法將人參籽加水提取，所得人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹脂，依次用去離子水、由低到高的梯度濃度乙醇溶液進行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v％-95v/v％濃度乙醇洗脫的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。本發明以人參籽為原材料，經過特殊方法提取獲得一種人參籽提取物，所提取的人參籽提取物具有顯著的皮膚細胞增殖抑制活性，能夠用于皮膚細胞增殖抑制劑的制備中，具有成為抗皮膚老化產品的潛在優勢。
【IPC分類】A61P17/00, A61P17/18, A61K36/258
【公開號】CN105232600
【申請號】CN201510690663
【發明人】方兆華, 宋肖潔, 沈忠海, 陸政政
【申請人】伽藍（集團）股份有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2015年10月22日