一種含有miRNA-873的藥物組合物及其用圖
【技術領域】
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[0001]本發明屬于生物制藥技術領域，涉及一種內源性非編碼小RNA的新藥及其用途，尤其是一種含有miRNA-873的藥物組合物及其預防或治療心臟疾病的用途。
【背景技術】
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[0002]心血管疾病是人類健康和生命的主要威脅，是人類健康的頭號殺手，全世界范圍內每年有一千七百多萬人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌癥死亡率的總和；隨著人民生活水平日益提高和飲食結構的改變，心血管疾病死亡率呈明顯上升趨勢，已超過癌癥成為第一大致死原因。根據國家衛生部近期公布的最新統計結果表明，我國18歲及以上居民高血壓患病率為18.8%，估計全國患病人數1.6億多，由此造成的心肌肥厚、心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相關心臟疾病的病人達幾千萬。目前關于心臟疾病發病機理尚不完全清楚，心臟疾病的預防、診斷和治療尚不能達到讓人滿意的效果，急需開發新的技術、方法用于心臟病的診斷、防治。miRNA是新近研究發現的一類內源性非編碼小RNA分子，許多研究表明miRNA對于維持心臟正常生理功能具有重要作用，心臟中的miRNA異常表達與許多心臟疾病的發生相關。因此，將miRNA作為心臟疾病治療的靶點，開發相關藥物具有潛在的臨床應用價值。單一的miRNA可以同時作用于多個靶基因的mRNA的表達，藥物作用于一個miRNA可以調節多個參與心臟發病基因的表達，影響多個信號通路，從整體上達到治療疾病的目的。由于miRNA在心臟病理狀態下表達水平不同，因此可以通過檢測miRNA的表達水平來預測診斷疾病。
[0003]心肌細胞死亡是許多心血管疾病的細胞學基礎。細胞死亡主要包括凋亡和壞死兩種形式，過去的觀點認為細胞凋亡受信號通路調控，而壞死不受信號通路調控，是一種被動的細胞死亡形式。近年來研究發現細胞壞死(Necroptosi s)，是一個主動的、高度有序的、由基因控制及一系列酶參與的過程，對正常胚胎發育，維持細胞群體及惡性病變過程中均起重要作用，在保證多細胞生物的健康生存過程中扮演著關鍵的角色。細胞壞死信號通路調控，涉及蛋白激酶RIPl和RIP3等分子，同時細胞壞死的調控分子與炎癥、神經系統疾病、免疫功能異常密切相關。在許多心肌損傷或心臟病理狀態下，如心肌缺血再灌注損傷、心肌肥大、心力衰竭等，心肌細胞均會發生壞死。然而心肌細胞壞死的信號通路還遠未闡明，miRNA在調控心肌細胞壞死過程中的通路也有待進一步研究，所以尋找心臟中特異表達的、參與心肌細胞壞死的miRNA，闡明其作用機理，對于開發以miRNA為策略的心臟疾病的診斷、治療具有及其重要的意義和應用前景。
【發明內容】
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[0004]本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，尋求提供一種含有miRNA-873的藥物組合物及其預防或治療心臟疾病的用途。
[0005]為了實現上述目的，本發明涉及的含有miRNA-873的藥物組合物包括miRNA-873、1,2- 二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP)、DC膽固醇、1，2- 二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)、聚乙二醇2000 (PEG2000)和磷酸鹽緩沖液，每毫升含有miRNA-873的藥物組合物中1，2_ 二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP)含量為0.5-25mg，miRNA-873與1，2_ 二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP)的摩爾比為1:150-205，DC膽固醇含量為0.l_5mg，l，2-二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)含量為0.l-20mg，聚乙二醇2000(PEG2000)含量為l_80mg，其余為磷酸鹽緩沖液。
[0006]本發明所述miRNA-873 的序列為 5’ -GCAGGAACUUGUGA⑶CUCCU-3’。
[0007]本發明所述磷酸鹽緩沖液的pH值為6.0-8.00
[0008]本發明的含有miRNA-873的藥物組合物，用于治療心肌梗死、心肌缺血損傷、心肌肥厚或心肌纖維化的心臟疾病。
[0009]本發明涉及的含有miRNA-873的藥物組合物在心臟中高表達，心肌缺血損傷和H2O2誘導的心肌細胞死亡過程中，miRNA-873表達顯著下調；通過轉染miRNA-873藥物組合物或miRNA-873轉基因小鼠加強miRNA-873的表達能夠抑制心肌細胞壞死及心肌缺血損傷，心肌梗死面積減少；心肌缺血再灌注損傷后，過表達miRNA-873能夠減輕缺血再灌注損傷所致的壞死，減小心肌梗死面積，過表達miRNA-873還能改善缺血再灌注損傷所致的心功能的損傷；miRNA-873通過抑制心肌細胞壞死對心臟具有保護作用，miRNA-873對許多心臟疾病具有潛在的預防和治療價值。
[0010]本發明設計的藥物組合物與現有技術相比，H2O2誘導或心肌缺血損傷過程中miRNA-873表達顯著下調，miRNA-873的下調能誘導心肌細胞壞死的發生；miRNA_873在缺血再灌注動物模型的心肌組織中表達下調，過表達miRNA-873的心臟特異性轉基因小鼠，可以抵抗心肌缺血再灌注損傷，心肌梗死面積減少，心功能顯著改善。通過將miRNA-873藥物組合從冠狀動脈注射入小鼠心臟，發現心肌缺血損傷程度明顯被抑制，動物模型證明miRNA-873對缺血性心臟病的治療作用，將miRNA-873與載體包裝形成藥物分子，通過口服或注射用于防治心臟疾病和改善心臟功能，阻止心肌纖維化及心肌重構的發生；其藥物組合物制備工藝簡單，藥效明顯，使用方便，治療環境友好。
【附圖說明】
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[0011]圖1為心肌缺血損傷及H2O2誘導的心肌細胞死亡過程中miRNA-873表達水平的變化的試驗結果示意圖，圖中A為原代心肌細胞H2O2處理miRNA-873表達水平的試驗結果示意圖；B為小鼠心肌缺血miRNA-873表達水平的試驗結果示意圖。
[0012]圖2為miRNA-873過表達抑制H2O2誘導的心肌細胞壞死的實驗結果示意圖。原代心肌細胞轉染miRNA-873藥物組合物，檢測miRNA-873過量表達對H2O2誘導的心肌細胞壞死的作用。圖中使用碘化丙啶(PI)染色標記壞死心肌細胞，DAPI染色標記心肌細胞的細胞核，計算發生壞死的細胞數占心肌細胞數目的百分比。
[0013]圖3為miRNA-873過表達抑制心肌缺血損傷實驗結果示意圖，圖中A為小鼠經冠動脈注射miRNA-873藥物組合物后，其心臟的左心室面積(LV)所占的百分比和危險區總面積(AAR)所占的百分比實驗結果示意圖；圖中B為小鼠經冠動脈注射miRNA-873藥物組合物后對缺血再灌注手術(I/R)引起的心肌壞死的實驗結果示意圖。
【具體實施方式】