彈性蛋白酶活性抑制劑的制作方法

專利名稱：彈性蛋白酶活性抑制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于制備作為化妝品組合物或食品組合物等使用的彈性蛋白酶活性抑制劑的應用，以及用于制備皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑的應用。
背景技術：
彈性蛋白在生物體內，廣泛分布于韌帶、血管壁、肺、皮膚的真皮以及關節等需要伸縮性的器官。彈性蛋白起到對這些器官的組織賦予彈性的作用，在皮膚中為了保持彈力或緊致等而發揮大的作用。已知彈性蛋白由于老化、紫外線、活性氧以及壓力等而其量緩慢減少。已知在皮膚 中，由于彈性蛋白減少而緩慢喪失皮膚的彈性，產生皺紋或松弛，成為老化的一個大原因。作為分解而使彈性蛋白減少的彈性蛋白酶中、與存在于皮膚的真皮基質中的彈性蛋白的分解有關的彈性蛋白酶，已知來自嗜中性粒細胞的彈性蛋白酶和來自成纖維細胞的彈性蛋白酶，其中，已知來自成纖維細胞的彈性蛋白酶對構成與皮膚的彈性維持相關的彈性纖維的彈性蛋白進行分解。因此，預測通過抑制其活性，能得到高的抗皺紋效果。

發明內容
本發明的主要目的在于，提供用于制備新的彈性蛋白酶活性抑制劑的應用。本發明人為了解決上述課題進行研究，發現吡咯并喹啉醌(以下有時簡稱為“PQQ”)對分解彈性蛋白的彈性蛋白酶的活性進行抑制。本發明是基于上述發現而完成的，提供用于制備下述彈性蛋白酶活性抑制劑的應用。第I項.一種吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽在制備彈性蛋白酶活性抑制劑中的應用。第2項.如第I項所述的應用，彈性蛋白酶為來自成纖維細胞的彈性蛋白酶。第2-2項.如第I項所述的應用，彈性蛋白酶為皮膚的彈性蛋白酶。第3項.如第I項或第2項所述的應用，彈性蛋白酶活性抑制劑含有0. 00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽。第4項.如第I項 第3項中的任意一項所述的應用，彈性蛋白酶活性抑制劑為化妝品組合物。第5項.一種吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽在制備皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑中的應用。第6項.如第5項所述的應用，皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑含有0. 00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽。第7項.如第5項或第6項所述的應用，皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑為化妝品組合物。
本發明中的彈性蛋白酶活性抑制劑作為化妝品組合物或食品組合物使用時，可以有效地提高皮膚的彈力，對皮膚賦予緊致或光澤，預防或改善皮膚的松弛、皺紋和/或灰暗。因此，本發明中的彈性蛋白酶活性抑制劑可以用于對皮膚賦予緊致或光澤、或者預防或改善皮膚的松弛或灰 暗。


圖I為表示PQQ抑制來自人皮膚成纖維細胞的彈性蛋白酶的活性的圖。圖2為表示PQQ抑制來自人皮膚成纖維細胞的彈性蛋白酶的活性、或者抑制來自人皮膚成纖維細胞的彈性蛋白酶的合成的圖。
具體實施例方式以下對本發明進行具體說明。本發明的應用為PQQ或其生理上可接受的鹽(以下有時簡稱為“鹽”)在制備彈性蛋白酶活性抑制劑中的應用。本發明中的彈性蛋白酶活性抑制劑含有PQQ或其鹽作為有效成分。 彈性蛋白酶代表性地已知在生物體內分解微生物或異物，防御生物體的來自嗜中性粒細胞的彈性蛋白酶和來自成纖維細胞的彈性蛋白酶。本發明的彈性蛋白酶活性抑制劑雖然也抑制來自任意細胞的彈性蛋白酶的活性，然而特別是有效地抑制來自成纖維細胞的彈性蛋白酶、其中來自皮膚成纖維細胞的彈性蛋白酶的活性。即，本發明中的彈性蛋白酶活性抑制劑有效地抑制皮膚的彈性蛋白酶。PQQ或其鹽PQQ為生物體的能量獲得體系中必需的氧化還原的輔酶。PQQ存在于動物、植物和細菌等多種生物體內，因此可以從各種生物中提取。此外，PQQ可以購入市售品。作為PQQ的鹽不進行限定，可以舉出例如鈉鹽和鉀鹽等堿金屬鹽，鈣鹽和鎂鹽等堿土類金屬鹽等。鹽中，優選為鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽。化妝品組合物<化妝品組合物的形杰>本發明的彈性蛋白酶活性抑制劑可以將PQQ或其鹽與作為化妝品成分可接受的公知的基劑或載體一起混合來形成化妝品組合物。對化妝品組合物的形態不特別限定，可以舉出例如液體劑、懸浮劑、乳劑、霜劑、軟膏劑、凝膠劑、搽劑、洗劑、氣霧劑、粉劑、泥敷劑、使藥液浸滲到無紡布等片中而成的片狀制劑以及唇膏等粘著劑等。其中，從使用感良好方面考慮，優選為液體劑、懸浮劑、乳劑、霜劑、軟膏劑、凝膠劑和洗劑，更優選為液體劑、乳劑、霜劑、凝膠劑和洗劑。此外，對化妝品組合物的具體用途不特別限定，可以舉出例如化妝水、乳液、乳霜、美容液、防曬用化妝品、面膜、護手霜、潤膚露和潤膚霜等基礎化妝品，洗面奶、卸妝品、沐浴液、洗發水和護發素等洗滌用化妝品，粉底、隔離霜、潤唇膏、口紅和腮紅等彩妝化妝品以及沐浴劑等。〈PQQ 的含量 > 化妝品組合物中的PQQ的含量相對于組合物的總量，優選為0. 00001重量％以上，更優選為0. 0001重量％以上，進一步更優選為0. 001重量％以上。此外，優選為10重量％以下，更優選為I重量％以下，進一步更優選為0.3重量％以下。若在上述范圍內，則以化妝品的通常用量就能得到充分的彈性蛋白酶活性抑制效果。此外，化妝品組合物中的PQQ的含量相對于組合物的總量,例如優選為0. 00001 10重量％，更優選為0. 0001 I重量％，進一步更優選為0. 001 0.3重量％。<基劑 載體>作為基劑或載體不特別限定，可以舉出例如石蠟、液體石蠟、角鯊烷、白蠟、膠態烴(液體石臘和聚乙烯的復合軟膏基質(/ 9 7 ★ 一 7 )等)、地蠟、精制地蠟、凡士林、硬脂、微晶蠟、a-烯經低聚物和輕質液體石蠟等烴，月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、二十二烷酸和異硬脂酸等脂肪酸，三(2-乙基己酸)甘油酯(三辛酸甘油酯)和三(辛酸/癸酸)甘油酯等三脂肪酸甘油酯，鯨蠟醇、硬脂醇和二十二烷醇等高級醇，甲基聚硅氧烷、 高聚甲基聚硅氧烷、二甲基硅氧烷 甲基(聚氧乙烯)硅氧烷 甲基(聚氧丙烯)硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷 甲基(聚氧乙烯)硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷 甲基(聚氧丙烯)硅氧烷共聚物、聚氧乙烯 甲基聚硅氧烷共聚物、聚(氧乙烯 氧丙烯) 甲基聚硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷 甲基鯨蠟氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷 甲基硬脂氧基硅氧烷共聚物、丙烯酸烷基酯共聚物甲基聚硅氧烷酯、交聯型甲基聚硅氧烷、交聯型甲基苯基聚硅氧烷、交聯型聚醚改性硅氧烷、交聯型烷基聚醚改性硅氧烷、交聯型烷基改性硅氧烷、十甲基環五硅氧烷、乙基三硅氧烷、甲基聚三甲基硅氧烷、甲基硅氧烷網狀聚合物、聚氧乙烯 甲基聚硅氧烷共聚物、甲基氫化聚硅氧烷、三乙氧基甲硅烷基乙基聚二甲基硅氧基乙基己基聚二甲基硅氧烷和二甲基聚硅氧烷等硅油，乙二醇單乙酸酯、乙二醇二乙酸酯、三甘醇二乙酸酯、己二醇二乙酸酯和2-甲基-2-丙烯-1，I- 二醇二乙酸酯等二醇乙酸酯，三甘醇二戊酸酯、2，2，4_三甲基-1，3-戊二醇單異丁酸酯和2，2，4_三甲基-1，3-戊二醇二異丁酸酯等二醇酯，乙二醇二丙烯酸酯、二甘醇二丙烯酸酯、丙二醇單丙烯酸酯、2，2-二甲基-1，3-丙二醇二丙烯酸酯和1，3_ 丁二醇二丙烯酸酯等二醇丙烯酸酯，乙二醇二硝酸酯、二甘醇二硝酸酯、三甘醇二硝酸酯和丙二醇二硝酸酯等二醇二硝酸酯，2，2’-[1，4_苯二氧基]二乙醇，乙基纖維素、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素等纖維素衍生物，聚乙烯基吡咯烷酮，角叉菜膠，聚丁酸乙烯酯，聚乙二醇，二嚅烷，丁二醇己二酸聚酯，肉豆蘧酸異丙酯、肉豆蘧酸辛基十二烷基酯、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸鯨蠟基酯、異壬酸異壬酯和四(2-乙基己酸)季戊四醇酯等酯類，糊精和麥芽糊精等多糖類，乙醇和異丙醇等低級醇，乙二醇單甲醚、乙二醇單乙醚、乙二醇單丙醚、二甘醇單甲醚、二甘醇單乙醚、二甘醇單丙醚、二甘醇單丁醚、丙二醇單乙醚、丙二醇單丙醚、一縮二丙二醇單乙醚和一縮二丙二醇單丙醚等二醇醚，以及水等水性基齊Li等。其中，優選烴(特別是a -烯烴低聚物、角鯊烷、輕質液體石蠟和液體石蠟)、三脂肪酸甘油酯(特別是三(2-乙基己酸)甘油酯和三(辛酸/癸酸)甘油酯)、高級醇(特別是鯨蠟醇、硬脂醇和二十二烷醇)、硅油(特別是甲基聚硅氧烷、丙烯酸烷基酯共聚物甲基聚硅氧烷酯、交聯型甲基聚硅氧烷、十甲基環五硅氧烷、乙基三硅氧烷、甲基聚三甲基硅氧烷、甲基硅氧烷網狀聚合物、聚氧乙烯 甲基聚硅氧烷共聚物、甲基氫化聚硅氧烷、三乙氧基甲娃燒基乙基聚_■甲基娃氧基乙基己基聚_■甲基娃氧燒和_■甲基聚娃氧燒)、酷類(特別是異壬酸異壬酯和四(2-乙基己酸)季戊四醇酯)、多糖類(特別是糊精和麥芽糊精)、二醇醚(特別是二甘醇單乙醚)以及水。基劑或載體可以單獨使用一種或者組合使用兩種以上。<添加劑>此外，化妝品組合物中，在不損害本發明效果的范圍內，可以添加化妝品中可添加的公知的添加劑，例如表面活性劑、增稠劑、保存劑、PH調節劑、螯合劑、穩定劑、抗刺激劑、防腐劑、著色劑、分散劑、香料和珠光劑等。添加劑可以單獨使用一種或組合使用兩種以上。作為表面活性劑，可以舉出例如脫水山梨糖醇單異硬脂酸酯、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、脫水山梨糖醇五(2-乙基己酸)雙甘油酯和脫水山梨糖醇四(2-乙基己酸)雙甘油酯等脫水山梨糖醇脂肪酸酯類，單硬脂酸甘油酯和單硬脂酸蘋果酸甘油酯等脂肪酸甘油酯類，聚甘油單硬脂酸酯、聚甘油單異硬脂酸酯和聚甘油二異硬脂酸酯等聚甘油脂肪酸酯類，丙二醇單硬脂酸酯等丙二醇脂肪 酸酯類，聚氧乙烯氫化蓖麻油40(HC0-40)、聚氧乙烯氫化蓖麻油50(HC0-50)、聚氧乙烯氫化蓖麻油60(HC0-60)和聚氧乙烯氫化蓖麻油80等氫化蓖麻油衍生物，聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單硬脂酸酯(聚山梨醇酯60)、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單油酸酯(聚山梨醇酯80)和聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇異硬脂酸酯等聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯類，聚氧乙烯單椰油脂肪酸甘油酯，甘油烷基醚，烷基葡萄糖苷，聚氧乙烯鯨蠟基醚等聚氧化烯烷基醚，硬脂胺和油胺等胺類，聚氧乙烯 甲基聚硅氧烷共聚物、月桂基PEG-9聚二甲基硅氧基乙基聚二甲基硅氧烷和PEG-9聚二甲基硅氧基乙基聚二甲基硅氧烷等硅氧烷類表面活性劑等。其中，優選脂肪酸甘油酯類(特別是單硬脂酸甘油酯)、聚甘油脂肪酸酯類(特別是聚甘油單硬脂酸酯)、氫化蓖麻油衍生物(特別是聚氧乙烯氫化蓖麻油50 (HC0-50)、聚氧乙烯氫化蓖麻油60 (HC0-60))、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯類(特別是聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇異硬脂酸酯和聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單硬脂酸酯(聚山梨醇酯60))、聚氧化烯烷基醚(特別是聚氧乙烯鯨蠟基醚)以及硅氧烷類表面活性劑(特別是聚氧乙烯 甲基聚硅氧烷共聚物、月桂基PEG-9聚二甲基硅氧基乙基聚二甲基硅氧烷和PEG-9聚~■甲基娃氧基乙基聚_■甲基娃氧燒)。作為增稠劑，可以舉出例如瓜爾膠、槐豆膠、角叉菜膠、黃原膠、葡聚糖、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、海藻酸丙二醇酯、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯基甲基醚、羧基乙烯基聚合物、丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯共聚物、聚丙烯酸鈉、聚乙二醇、膨潤土、糊精脂肪酸酯、果膠、(丙烯酸羥乙酯/丙烯酰基二甲基牛磺酸鈉)共聚物、二硬脂二甲銨鋰蒙脫石、(丙烯酰二甲基牛磺酸銨/乙烯基吡咯烷酮)共聚物、聚乙二醇二硬脂酸酯、乙二醇三異硬脂酸酯和聚氧乙烯(20)甲基葡萄糖苷三異硬脂酸酯等。其中，優選黃原膠、丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯共聚物、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、聚乙二醇、羧基乙烯基聚合物、(丙烯酸羥乙酯/丙烯酰基二甲基牛磺酸鈉)共聚物、二硬脂二甲銨鋰蒙脫石、(丙烯酰二甲基牛磺酸銨/乙烯基吡咯烷酮)共聚物、聚乙二醇二硬脂酸酯、乙二醇三異硬脂酸酯和聚氧乙烯(20)甲基葡萄糖苷三異硬脂Ife酷。作為保存劑或防腐劑，可以舉出例如苯甲酸、苯甲酸鈉、脫氫乙酸、脫氫乙酸鈉、對羥基苯甲酸異丁酯、對羥基苯甲酸異丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸芐酯、對羥基苯甲酸甲酯和苯氧基乙醇等。其中，優選對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯和苯氧基乙醇。作為pH調節劑，可以舉出例如無機酸(鹽酸、硫酸、磷酸、多磷酸和硼酸等)、有機酸(乳酸、乙酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸、琥珀酸鈉、草酸、葡萄糖酸、富馬酸、丙酸、乙酸、天冬氨酸、e -氨基己酸、谷氨酸和氨基乙磺酸等)、葡萄糖酸內酯、乙酸銨、無機堿(碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣和氫氧化鎂等)以及有機堿(單乙醇胺、三乙醇胺、二異丙醇胺、三異丙醇胺和賴氨酸等)等。其中，優選琥珀酸、琥珀酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、三乙醇胺、氫氧化鉀和氫氧化鈉。作為螯合劑，可以舉出例如乙二胺四乙酸(依地酸)、乙二胺四乙酸鹽(鈉鹽(依地酸鈉日本藥典、EDTA-2Na等)和鉀鹽等)、植酸、葡萄糖酸、多磷酸以及偏磷酸等。其中，優選依地酸鈉。作為穩定劑，可以舉出例如聚丙烯酸鈉、二丁基羥基甲苯和丁基羥基茴香醚等。 作為抗刺激劑，可以舉出例如甘草提取物、海藻酸鈉和2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿等。作為著色劑，可以舉出例如無機顏料和天然色素等。作為珠光劑，可以舉出例如乙二醇二硬脂酸酯、乙二醇單硬脂酸酯和三甘醇二硬脂酸酯等。其中，優選乙二醇二硬脂酸酯。<其它的活件成分> 化妝品組合物中，在不妨礙本發明效果的范圍內，例如可以配合抗氧化成分、抗老化成分、抗炎成分、美白成分、角質軟化成分、細胞賦活成分、維生素類、促進血液循環成分、保濕成分、對DNA損傷具有預防和/或修復作用的成分、紫外線吸收成分、紫外線散射成分、洗滌成分、抗菌成分以及收斂成分等化妝品中可以添加的其它活性成分。其它活性成分可以單獨使用一種或組合使用兩種以上。作為抗氧化成分，可以舉出例如來源于植物(例如葡萄、人參、聚合草等)的成分，原花青素、生育酚及其衍生物、抗壞血酸及其衍生物、橙皮苷、葡糖基橙皮苷、麥角硫因、亞硫酸氫鈉、異抗壞血酸及其鹽、類黃酮、谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽-S-轉移酶、過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、硫氧還蛋白、牛磺酸、硫代牛磺酸和亞牛磺酸等。其中，優選葡萄籽提取物、葡萄葉提取物、人參提取物、聚合草葉提取物、原花青素、生育酚及其衍生物(特別是S-生育酚和a-生育酚)、抗壞血酸及其衍生物(特別是抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯鈉、抗壞血酸磷酸酯鎂和抗壞血酸四異棕櫚酸酯(抗壞血酸四(2-己基癸酸)酯))、橙皮苷、葡糖基橙皮苷和麥角硫因。作為抗老化成分，可以舉出例如水解大豆蛋白、類視黃醇(視黃醇及其衍生物、視黃酸和視黃醛等)、潘氨酸、激動素、熊果酸、姜黃提取物、鞘氨醇衍生物、硅、硅酸、N-甲基-L-絲氨酸和甲羥戊酸內酯等。其中，優選鹵蟲提取物、水解大豆蛋白、視黃醇、視黃醇乙酸酯和視黃醇棕櫚酸酯。作為抗炎成分，可以舉出例如來源于植物(例如聚合草)的成分，尿囊素、爐甘石、甘草酸或其衍生物、甘草次酸或其衍生物、氧化鋅、愈創木奧(”<70 > )、鹽酸吡哆醇、薄荷醇、樟腦、松節油、吲哚美辛和水楊酸或其衍生物等。其中，優選聚合草葉提取物、尿囊素、甘草酸二鉀和甘草次酸硬脂酯。作為美白成分，可以舉出例如熊果苷、氫醌、曲酸、鞣花酸、植酸、白黎蘆醇(
^ 一> )、洋甘菊ET、抗壞血酸或其衍生物、維生素E或其衍生物、泛酸或其衍生物、凝血酸以及具有美白作用的植物成分(例如植物提取物或精油)等。其中，優選熊果苷、氫醌、曲酸、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯鈉、抗壞血酸磷酸酯鎂、抗壞血酸四異棕櫚酸酯(抗壞血酸四(2-己基癸酸)酯)和凝血酸。作為角質軟化成分，可以舉出例如羊毛脂、尿素、植酸、乳酸、乳酸鹽、乙醇酸、水楊酸、蘋果酸和檸檬酸等。其中，優選乳酸、乳酸鈉、乙醇酸、水楊酸和植酸。作為細胞賦活成分，可以舉出例如來源于植物(例如越橘)的成分，Y-氨基丁酸和e -氨基己酸等氨基酸類，視黃醇及其衍生物、硫胺、核黃素、鹽酸吡哆醇和泛酸類等維生素類，乙醇酸和乳酸等a -羥基酸類，單寧，類黃酮，皂角苷，尿囊素和感光素301號等。其 中，優選越橘葉提取物、視黃醇、視黃醇乙酸酯和視黃醇棕櫚酸酯。作為維生素類，可以舉出例如視黃醇、視黃醇乙酸酯和視黃醇棕櫚酸酯等視黃醇衍生物、視黃醛、視黃酸、視黃酸甲酯、視黃酸乙酯、視黃醇視黃酸酯、d- 6 -生育酚視黃酸酯、a-生育酚視黃酸酯和￠-生育酚視黃酸酯等維生素A類，￠-胡蘿卜素、a-胡蘿卜素、Y-胡蘿卜素、S-胡蘿卜素、番茄紅素、玉米黃質、隱黃質和海膽酮等維生素A原類，S-生育酚、a -生育酚、^ -生育酚、dl-a -生育酚琥珀酸酯、dl-a -生育酚琥珀酸鈣、5 -生育酚和生育酚煙酸酯等維生素E類，核黃素、黃素單核苷酸、黃素腺嘌呤二核苷酸、核黃素丁酸酯、核黃素四丁酸酯、核黃素5’ -磷酸酯鈉和核黃素四煙酸酯等維生素B2類，煙酸甲酯、煙酸和煙酰胺等煙酸類，抗壞血酸硬脂酸酯、L-抗壞血酸二棕櫚酸酯、抗壞血酸四異棕櫚酸酯(抗壞血酸四(2-己基癸酸)酯)、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、脫氫抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯鈉、抗壞血酸磷酸酯鎂和抗壞血酸葡萄糖苷等維生素C類，甲基橙皮苷、麥角骨化醇和膽鈣骨化醇等維生素D類，葉綠醌和法呢醌等維生素K類，二苯甲酰硫胺素、二苯甲酰硫胺素鹽酸鹽、硫胺素鹽酸鹽、硫胺素鯨蠟基鹽酸鹽、硫胺素硫氰酸鹽、硫胺素月桂基鹽酸鹽、硫胺素硝酸鹽、硫胺素單磷酸鹽、硫胺素賴氨酸鹽、硫胺素三磷酸鹽、硫胺素單磷酸酯磷酸鹽、硫胺素單磷酸酯、硫胺素二磷酸酯、硫胺素二磷酸酯鹽酸鹽、硫胺素三磷酸酯和硫胺素三磷酸酯單磷酸鹽等維生素BI類，鹽酸吡哆醇、乙酸吡哆醇、鹽酸吡哆醛、5’ -磷酸吡哆醛和鹽酸吡哆胺等維生素B6類、氰鈷胺、羥鈷胺和脫氧腺苷鈷胺等維生素B12類，葉酸和蝶酰谷氨酸等葉酸類，泛酸、泛酸鈣、泛醇(panthenol)、D-泛酰巰基乙胺、D-泛硫乙胺、輔酶A和泛醇乙醚等泛酸類，生物素和生物胞素等生物素類，以及肉堿、阿魏酸、a-硫辛酸、乳清酸和Y-谷維醇等維生素樣作用因子等。其中，優選視黃醇、視黃醇乙酸酯和視黃醇棕櫚酸酯等維生素A類，抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯鈉、抗壞血酸磷酸酯鎂和抗壞血酸四異棕櫚酸酯(抗壞血酸四(2-己基癸酸)酯)等維生素C類，S -生育酚和生育酚煙酸酯等維生素E類，以及煙酰胺等煙酸類。作為促進血液循環作用成分，可以舉出例如來源于植物(例如人參、明日葉、山金車、銀杏、茴香、藍萼香茶菜(二 > ^ 4 ^、才9 >夕''力 '>、洋甘菊、羅馬洋甘菊、胡蘿卜、龍膽、牛蒡、稻、山楂、香燕、銳刺山楂、歐洲刺柏、川；、日本猜牙菜、百里香、丁香、陳皮、當歸、桃仁、橘皮、胡蘿卜、大蒜、假葉樹、葡萄、牡丹、七葉樹、香蜂草、柚子、薏苡仁、迷迭香、玫瑰果、陳皮、當歸、橘皮、桃、杏、核桃或玉米)的成分，生育酚煙酸酯，葡糖基橙皮苷以及橙皮苷。其中，優選人參提取物、生育酚煙酸酯、葡糖基橙皮苷以及橙皮苷。作為保濕成分，可以舉出例如來源于植物(例如白茅)的成分，丙氨酸、絲氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、葡糖胺和茶氨酸等氨基酸及其衍生物，膠原蛋白、明膠、以及彈性蛋白等蛋白質、肽或它們的水解物，甘油、I，3- 丁二醇、丙二醇、聚乙二醇、一縮二丙二醇和雙甘油等多元醇，山梨糖醇等糖醇，卵磷脂和氫化卵磷脂等磷脂，透明質酸、透明質酸鈉、乙酰透明質酸、乙酰透明質酸鈉、肝素和軟骨素等粘多糖，乳酸、批咯烷酮羧酸鈉和尿素等來源于NMF的成分，聚谷氨酸，MPC聚合物(例如LIPIDURE(注冊商標)等)等具有磷脂極性基團的高分子，甲基葡萄糖苷聚氧丙烯醚，三甲基甘氨酸(甜菜堿)，羥乙基脲，丙烯酸 丙烯酰胺 二甲基二烯丙基氯化銨共聚物，以及山梨糖醇等。其中，優選白茅根提取物、水解膠原蛋白、水解彈性蛋白、MPC聚合物甘油、I，3- 丁二醇、聚乙二醇、一縮二丙二醇、雙甘油、甲基葡萄糖苷聚氧丙烯醚、三甲基甘氨酸(甜菜堿)、羥乙基脲、丙烯酸 丙烯酰胺 二甲基二烯丙基氯化銨共聚物、氫化卵磷脂、透明質酸、透明質酸鈉、乙酰透明質酸、乙酰透明質酸鈉和山梨糖醇。
作為對DNA損傷具有預防和/或修復作用的成分，可以舉出例如來源于動物(例如鹵蟲)的成分，來源于植物(例如絨毛鉤藤)的成分，以及DNA、DNA鹽、RNA和RNA鹽等核酸成分。其中，優選鹵蟲提取物和DNA-Na。作為紫外線吸收成分，可以舉出例如對甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、2-[4_( 二乙氨基)-2-輕基苯甲酰基]苯甲酸己酯、2,4,6-三[4-(2-乙基己氧羰基)苯胺基]-I, 3, 5-三嗪、二甲氧基亞芐基氧代咪唑烷丙酸2-乙基己酯和2，4-雙[{4- (2-乙基己氧基)-2-羥基}-苯基]-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5_三嗪等。其中，優選對甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、2-[4-( 二乙氨基)-2-羥基苯甲酰基]苯甲酸己酯和2，4，6_三[4-(2-乙基己氧羰基)苯胺基]-I，3，5-三嗪。作為紫外線散射成分,可以舉出例如氧化鋅、氧化鈦、氧化鐵、氧化鋪、氧化錯、娃酸鈦、硅酸鋅、無水硅酸、硅酸鈰和含水硅酸等無機化合物。此外，可以舉出將這些無機化合物用含水硅酸、氫氧化鋁、云母或滑石等無機粉末包覆而得到的物質，或者與聚酰胺、聚乙烯、聚酯、聚苯乙烯或尼龍等樹脂粉末復合而得到的物質，以及用硅油或脂肪酸鋁鹽等進行處理而得到的物質等。其中，優選氧化鋅、氧化鈦和氧化鐵等無機化合物，將這些無機化合物用氫氧化鋁、含水硅酸、云母或滑石等無機粉末或硅油包覆而得到的物質。作為洗滌成分，可以舉出例如聚氧亞烷基烷基(或烯基)醚硫酸鹽、烷基(或烯基)硫酸鹽、高級脂肪酸鹽、醚羧酸鹽、酰胺醚羧酸鹽、烷基磷酸酯鹽、N-酰基氨基酸鹽、聚氧亞烷基脂肪酸酰胺醚硫酸鹽、酰基化羥乙基磺酸鹽和酰基化牛磺酸酯等陰離子表面活性齊U，氧化胺、甘油脂肪酸酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯、烷基糖苷(77力^ 4 F' )、聚氧亞烷基烷基醚、脂肪酸烷醇酰胺和聚氧亞烷基氫化蓖麻油等非離子表面活性劑，可加成有環氧烷的、以及具有直鏈或支鏈的長鏈烷基的單或二長鏈烷基季銨鹽等陽離子表面活性劑，羧化甜菜堿、磺化甜菜堿、咪唑鐓 甜菜堿和酰胺甜菜堿等兩性表面活性劑。其中，優選陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑和兩性表面活性劑。陰離子表面活性劑中，優選高級脂肪酸鹽(特別是棕櫚酸、月桂酸、肉豆蘧酸和硬脂酸等高級脂肪酸的鹽)以及N-酰基氨基酸鹽(特別是N-月桂酰天冬氨酸鈉、氫氧化鉀/N-椰油脂肪酸酰基谷氨酸鉀、椰油脂肪酸酰基甘氨酸鈉和肉豆蘧酰基谷氨酸)。非離子表面活性劑中，優選脂肪酸烷醇酰胺(特別是椰油脂肪酸二乙醇酰胺和椰油脂肪酸單乙醇酰胺)以及氧化胺(特別是椰油烷基二甲基氧化胺和月桂基二甲基氧化胺)。兩性表面活性劑中，優選咪唑鐓-甜菜堿(特別是2-烷基-N-羧甲基-N-羥乙基咪唑懲 甜菜堿和N-椰油脂肪酸酰基-N-羧基甲氧基乙基-N-羧甲基乙二胺二鈉)。作為抗菌成分，可以舉出例如氯己啶、水楊酸、苯扎氯銨、利凡諾、乙醇、芐索氯銨、甲酚、葡萄糖酸及其衍生物、聚維酮碘、碘化鉀、碘、異丙基甲基苯酚、三氯卡班、三氯生、感光素101號、感光素201號、對羥基苯甲酸酯、苯氧基乙醇、1，2-戊二醇和鹽酸烷基二氨基甘氨酸等。其中，優選苯扎氯銨、芐索氯銨、葡萄糖酸及其衍生物、異丙基甲基苯酚、三氯卡班、三氯生、感光素101號、感光素201號、對羥基苯甲酸酯、苯氧基乙醇、1，2_戊二醇和鹽酸烷基二氨基甘氨酸，更優選苯扎氯銨、葡萄糖酸及其衍生物、芐索氯銨和異丙基甲基苯酚。作為收斂成分，可以舉出例如明礬、羥基氯化鋁、氯化鋁、尿囊素鋁鹽、硫酸鋅和硫酸鋁鉀等金屬鹽，以及單寧酸、檸檬酸、乳酸和琥珀酸等有機酸。其中，優選明礬、羥基氯化鋁、氯化鋁、尿囊素鋁鹽、硫酸鋁鉀和單寧酸。本發明的化妝品組合物，可以通過將各成分依照常規方法進行混合攪拌來制備。食品組合物本發明的彈性蛋白酶活性抑制劑可以制成食品組合物。該食品組合物可以適合用作健康食品或營養輔助食品(包括均衡營養食品、補給品等)。另外，還適合作為保健功能食品(包括特殊保健用食品(包括標明降低疾病風險、規格標準型)、帶條件的特殊保健用食品或營養功能食品)。對劑型不特別限定，可以使用公知的方法將PQQ或其鹽直接或在其中配合通常用于食品的賦形劑或添加劑后制成片劑、丸劑、顆粒劑、散劑、粉劑、膠囊劑(包括軟膠囊劑)、水劑、乳劑、液體劑、浸膏劑或酏劑等劑型。其中，從容易服用及攜帶的方面考慮，優選片劑、丸劑、粉末劑、顆粒劑、膠囊劑和滴劑等制劑。作為賦形劑或添加劑，可以舉出油脂、穩定劑、乳化劑、分散劑、懸浮劑、香料、增稠劑、甜味劑、著色劑、香料、防腐劑、抗氧化劑和有機酸
坐寸o作為油脂，可以舉出例如花生油、可可脂、稻米胚芽油、紫蘇油、亞麻籽油等天然植物油等或這些天然植物油的氫化油、脂肪酸(包括中鏈脂肪酸)的甘油酯(甘油酯、雙甘油酯、三甘油酯等)以及蜂蠟等。其中，優選蜂蠟。作為乳化劑、分散劑、懸浮劑或穩定劑，可以舉出例如聚乙二醇、丙二醇、甘油和山梨糖醇等多元醇，甘油脂肪酸酯以及羧甲基纖維素鈉等。其中，優選甘油、甘油脂肪酸酯和羧甲基纖維素鈉。作為增稠劑，可以舉出例如槐豆膠、瓜爾膠、黃原膠、羅望子膠、果膠和角叉菜膠等。其中，優選黃原膠。作為甜味劑，可以舉出例如蔗糖、果糖、麥芽糖、赤蘚糖醇、海藻糖、麥芽糖醇、甘草提取物、甜菊加工甜味劑、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸鉀、山梨糖醇和木糖醇等。作為防腐劑，可以舉出例如苯甲酸或其鹽、山梨酸或其鹽、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸異丁酯、對羥基苯甲酸異丙酯和對羥基苯甲酸乙酯等。作為抗氧化劑，可以舉出例如抗壞血酸、抗壞血酸鈉、抗壞血酸硬脂酸酯、抗壞血酸硬脂酸鈉、抗壞血酸棕櫚酸酯、亞硫酸氫鹽、連二亞硫酸鈉、二氧化硫、EDTA 二鈉鈣、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉和生育酚等。其中，優選抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯和生育酚。作為有機酸，可以舉出例如檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、天冬氨酸、乳酸、蘋果酸、丙二酸、富馬酸和馬來酸等。賦形劑和食品添加劑可以單獨使用一種或組合使用兩種以上。
_2] <其它活性成分> 制劑中，除了 PQQ或其鹽之外，可以添加活性成分。作為其它活性成分，可以舉出例如維生素A類、維生素B類、維生素C類、維生素E類、維生素D類和維生素K類等維生素類，蘇氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、賴氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羥賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸和組氨酸等氨基酸，牛磺酸、膠原蛋白、葡糖胺、乙酰葡糖胺、透明質酸、異黃酮、聚苯酚(例如來源于栗子的內皮或葡萄籽等植物的聚苯酚)、生物素、乳清肽、大豆肽、蜂王漿、Y-谷維醇、乳清酸、蘆丁、橙皮苷、肉堿、氯化肉堿、膠原蛋白肽、彈性蛋白肽、神經酰胺、番茄紅素、蝦青素、乳酸菌提取物(例如LFK)、谷胱甘肽、蘆丁、來源于植物(例如絨毛鉤藤、葡萄、生姜、荷花、葡萄、甜瓜、雨生紅球藻、荔枝核、薔薇花瓣或余甘子提取物)的成分、泛醌衍生物(例如輔酶Q10)、燕窩、腋生醉魚草葉提取物、葡萄籽提取物、葡萄葉提取物、人參提取物、聚合草葉提取物、原花青素、橙皮苷、葡萄糖基橙皮苷和麥角硫因等。在此，作為維生素A類，可以舉出視黃醛、視黃醇、視黃酸、胡蘿卜素、脫氫視黃醛和番爺紅素等。作為維生素B類，可以舉出二硫胺、硫胺素二硫化物、硫胺素雙鯨蠟基硫酸酯鹽、苯磷硫胺、丙舒硫胺、呋喃硫胺、雙苯酰硫胺、賽可硫胺、奧托硫胺、蒜硫胺素、二硫丙基硫胺、呋喃硫胺、地賽硫胺、舒布硫胺、硫胺素單磷酸酯二硫化物、硫胺素焦磷酸、賽可硫胺、硫胺素乙基二硫化物、硫胺素丙基二硫化物、核黃素、黃素腺嘌呤二核苷酸、吡哆醇、吡哆醛、羥鈷胺、氰鈷胺、甲鈷胺、脫氧腺苷鈷胺、葉酸、四氫葉酸、二氫葉酸、煙酸、煙酰胺、煙醇、泛酸、泛醇、生物素、膽堿和肌醇等。作為維生素C類，可以舉出抗壞血酸、抗壞血酸鈉、抗壞血酸硬脂酸酯、抗壞血酸硬脂酸鈉、抗壞血酸棕櫚酸酯和異抗壞血酸等。作為維生素D類，可以舉出麥角骨化醇、膽鈣骨化醇、羥基膽鈣骨化醇、二羥基膽鈣骨化醇和二氫速留醇等，作為維生素E類，可以舉出生育酚及其衍生物等。該其它活性成分可以單獨使用一種或組合使用兩種以上。食品組合物為如上形成制劑的食品組合物時，PQQ或其鹽的含量相對于食品組合物的總量，優選為0. 00001重量％以上，更優選為0. 0001重量％以上，進一步更優選為0.001重量％以上。此外，優選為10重量％以下，更優選為I重量％以下，進一步更優選為0.3重量％以下。若在上述范圍內，則在可以自然攝取的量的食品組合物中，就會含有恰好能夠獲得充分的彈性蛋白酶活性抑制作用的PQQ或其鹽。此外，食品組合物為如上形成制劑的食品組合物時，PQQ或其鹽的含量相對于食品組合物的總量，優選為0. 00001 10重量％，更優選為0. 0001 I重量％，進一步更優選為0. 001 0. 3重量％。一般食品組合物
此外，該食品組合物可以通過在普通食品中添加PQQ或其鹽來制備。作為食品，可以舉出例如牛奶、奶飲料、乳酸菌飲料、果汁清涼飲料、碳酸飲料、蔬菜汁飲料、茶飲料、果汁飲料、離子飲料、運動飲料、功能性飲料、維生素補給飲料、營養補給均衡飲料、凝膠飲料、酒精飲料和湯類等飲料，蛋奶布丁、牛奶布丁和果汁布丁等布丁類、果凍類、調味醬類和奶油類等凝膠狀糕點、口香糖和泡泡糖等口香糖類(條狀口香糖、糖衣粒狀口香糖等)、巧克力類、軟糖(包括焦糖、牛軋糖、橡皮糖和棉花糖等)、太妃糖等焦糖類、餅干類(硬質餅干、軟質餅干、松餅、薄脆餅干和半易腐餅干等)以及蛋糕類等糕點類，冰淇淋、冰牛奶、奶味冰激淋、果汁牛奶凍('一 y卜)和雪糕等冷飲類，面包類，面條類以及寵物食品等。食品組合物為在普通食品中添加有效成分而得到的食品組合物時，PQQ或其鹽的含量相對于食品組合物的總量，優選為0. 00001重量％以上,更優選為0. 0001重量％以上，進一步更優選為0.001重量％以上。此外，優選為10重量％以下，更優選為I重量％以下，進一步更優選為0.3重量％以下。若在上述范圍內，則在可以自然攝取的量的食品組合物中，就會含有恰好能夠獲得充分的彈性蛋白酶活性抑制作用的PQQ或其鹽。
此外，食品組合物為在普通食品中添加有效成分而得到的食品組合物時,PQQ或其鹽的含量例如相對于食品組合物的總量，優選為0. 00001 10重量％，更優選為0. 0001 I重量％，進一步更優選為0. 001 0.3重量％。此外，普通食品組合物的情況下，除了 PQQ之外，還可以配合其它活性成分。作為其它活性成分，例如可以使用作為可添加到健康食品或營養輔助食品等制成制劑的食品組合物中的其它活性成分所舉出的成分。食品組合物的形態，從即使是對于不擅長或難以吞下(咽下)片劑、顆粒劑或膠囊劑等的消費者而言也可以簡單地攝取及容易咽下的方面考慮，優選飲料(特別是乳酸菌飲料、果汁清涼飲料和功能性飲料)、果凍類以及凝膠狀糕點，更優選乳酸菌飲料和功能性飲料。使用方法化妝品組合物以化妝品的通常的使用方法、使用次數進行涂抹即可。此外，食品組合物以PQQ或其鹽的I日攝取量為例如0. OOOlmg以上、優選0. Olmg以上、進一步優選0. Img以上的量攝取即可。此外，以PQQ或其鹽的I日攝取量為例如IOOmg以下、優選30mg以下、進一步優選IOmg以下的量攝取即可。若為上述攝取量，則能得到充分的彈性蛋白酶活性抑制作用的同時，不會產生過量攝取所導致的作用。此外，食品組合物例如以PQQ或其鹽的I日攝取量為例如0. 0001 lOOmg、優選
0.01 30mg、進一步優選0. I IOmg的量攝取即可。對本發明的制劑的使用對象不特別限定，對于化妝品組合物來說，可看出皮膚的緊致或彈性下降、皺紋、松弛、光澤下降或者皮膚紋理下降的人以及老人等是適合的對象。此外，對于食品組合物來說，除了上述人之外，患有角膜潰瘍等角膜障礙，風濕病，變形性關節炎和骨關節炎等關節炎等的關節障礙，或者炎癥性疾病等的患者也是適合的對象。此外，，無論是化妝品組合物還是食品組合物，都可以以健康人為對象，由此，可以預防因年齡增長、紫外線、日曬或過度洗滌等引起的皮膚緊致或彈性下降、皺紋、松弛、光澤下降或者皮膚紋理下降或者抑制其進行。
PQQ或其鹽由于對彈性蛋白酶活性、特別是皮膚的彈性蛋白酶活性進行抑制，本發明包括PQQ或其鹽在制備皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑中的應用。[實施例]以下舉出實施例對本發明進行更具體的說明，但是本發明不被這些實施例所限定。來自人成纖維細胞的彈性蛋白酶活性抑制試驗(I)使用含有10%胎牛血清的極限必需培養基(DMEM)將來自正常成人的皮膚成纖維 細胞(NHDF、々9 々社制)以2X IO4細胞/孔的密度接種到細胞培養用的96孔微孔板(Corning)，在37 °C、5% CO2培養箱中培養24小時。除去培養上清后，添加50 yl的0. 5%Triton X-100水溶液，使用在室溫下靜置30分鐘的液體作為粗酶液。向該粗酶液(50 u I)中分別添加0. IM Tris鹽酸緩沖液(pH8. 0) 50 U I (比較例2、對照)、含有400 u g/ml的PQQ-2Na的0. IM Tris鹽酸緩沖液(pH8. 0) 50 U I (實施例I)、含有0. 4 ii g/ml的EDTA 2Na(和光純藥工業)的0. IM Tris鹽酸緩沖液(pH8. 0) 50 yl (比較例I、陽性對照)。進一步地，將包含含I. 5mM PMSF的5mM的彈性蛋白酶合成底物琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-丙氨酰-對硝基苯胺卜''研究所制)的上述Tris鹽酸緩沖溶液IOOiU添加到各孔中，使孔內總量為200iU，在37°C下于暗處靜置2小時。使用吸光光度計對來自成纖維細胞的彈性蛋白酶水解產生的對硝基苯胺形成的405nm的吸光度進行測定。未添加試樣的僅為上述Tris鹽酸緩沖液時的吸光度的值設為C’、添加試樣時的吸光度的值設為S’，由下式算出彈性蛋白酶抑制率。來自成纖維細胞的彈性蛋白酶抑制率) = (1_(S’ /C’ )) XlOO結果如圖I和下表I所示。由圖I和表I可知，PQQ或其鹽有效地抑制或阻礙彈性蛋白酶活性。[表 I]
權利要求
1.一種吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽在制備彈性蛋白酶活性抑制劑中的應用。
2.根據權利要求I所述的應用，彈性蛋白酶為來自成纖維細胞的彈性蛋白酶。
3.根據權利要求I或2所述的應用，彈性蛋白酶活性抑制劑含有0.00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽。
4.根據權利要求I 3中的任意一項所述的應用，彈性蛋白酶活性抑制劑為化妝品組合物。
5.—種吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽在制備皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑含有0. 00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽。
7.根據權利要求5或6所述的應用，皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑為化妝品組合物。
全文摘要
本發明提供吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽在制備彈性蛋白酶活性抑制劑中的應用。吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的鹽在制備皮膚緊致的改善劑或者皮膚皺紋或松弛的預防或改善劑中的應用。
文檔編號A61Q19/08GK102670423SQ20121006491
公開日2012年9月19日 申請日期2012年3月13日 優先權日2011年3月14日
發明者辻雅夫 申請人:日本樂敦制藥株式會社