本發明屬于微生物肥料
技術領域：
，具體涉及一種防治病害的薯類專用微生物菌肥及其制備方法。
背景技術：
：甘薯是一種高產穩產、營養豐富、用途廣泛的農作物，既是重要的糧食作物，又是良好的飼料作物，也是工業原料作物。近年來，國內外對甘薯的營養保健作用進行了深入的研究，其作為一種新型營養保健功能食品已日益引起人們的高度注重。甘薯在生產、儲藏過程中無污染、無公害，有關專家們評價它是“21世紀最理想的食物”，甘薯食品在人類食物結構中所占的比重將會愈來愈大，其影響將愈加廣泛，甘薯的產業化前景十分廣闊。我國甘薯病蟲害危害嚴重，已經發現報導的有30多種，其中甘薯黑斑病是發生比較廣泛、為害比較嚴重的真菌性病害。黑斑病在甘薯苗期、大田生長期和貯藏期都能發生，造成爛種、死苗、生長發育遲緩等危害。甘薯病害的防治主要實行包括選用抗病品種、物理防治、農業防治、生物防治及化學防治等綜合防治措施。選用抗病品種是一種最經濟有效而又安全方便的防治方法，但由于甘薯抗病育種相當的困難，選育出一個產量高、品質優、抗病性好(兼抗多種病害)的甘薯品種非常不容易；物理防治和農業防治措施需要的時間長、見效慢、費工費時；化學農藥所導致的土壤退化、農藥殘留、水源和環境的污染、生物鏈中斷、生態失衡、病害產生抗性等一系列問題日益凸現。生物防治的方法受到越來越多的重視，但還沒有相關將防治甘薯病害與肥料相結合的相關的發明進行公開。技術實現要素：本發明所要解決的問題是研制出一種防治病害的薯類專用微生物菌肥，制備該微生物菌肥的原料按重量份為：抗霉菌素鏈霉菌菌粉20-40份，濕鏈霉菌菌粉10-30份，飼料類芽孢桿菌菌粉10-30份，加米里類芽孢桿菌菌粉20-40份，黃腐酸鉀原粉20-40份；在所述微生物菌肥中，抗霉菌素鏈霉菌，濕鏈霉菌，飼料類芽孢桿菌，加米里類芽孢桿菌，四種菌是從400多株微生物菌株中篩選得到的能共生共存，能產生多種抗菌素如內霉素的復合物，非多烯抗真菌抗菌素，雙氫鏈霉素，濕菌素和鈷氨素類來抑制甘薯黑斑病病原菌有特別強大的效果，從而達到防治甘薯黑斑病的作用；另一方面，本發明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，或者通過次級代謝產物誘導甘薯產生抗病性，增強其防病效果；再次，本發明中所使用的這4株菌株都是可從土壤中直接分離得到，具有固氮，解磷，解鉀，并具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內部或土壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產物，能夠提高植物對養分的吸收、刺激植株生長起到肥料的效果；同時本發明中的黃腐酸鉀也可作物提供鉀肥與有機質。另一個目的，提供了一種防治病害的薯類專用微生物菌肥的制備方法，其具體制備方法，包括以下步驟：步驟一、抗霉菌素鏈霉菌菌粉的制備取出抗霉菌素鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養基劃平板進行復蘇，30℃培養7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養基的茄子瓶中，在培養箱中30℃培養6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為抗霉菌素鏈霉菌種子液；發酵：將上述制備的抗霉菌素鏈霉菌種子液以1%-3%的接種量接種至滅菌的抗霉菌素鏈霉菌固體發酵培養基上，菌種與抗霉菌素鏈霉菌固體培養基混合均勻后，將接好種的抗霉菌素鏈霉菌固體發酵培養基攤在發酵槽上，物料高度為3-6cm，控溫28-32℃，第一天空氣濕度保持為60%-75%，過后空氣濕度保持為40%-50%，發酵3-4天，檢測其孢子含量不低于20億CFU/g，即可低溫風干至水分低于8%，粉碎過40目篩，即得到抗霉菌素鏈霉菌菌粉；其中，所述的高氏一號固體培養基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5，硫酸鎂：0.5，氯化鈉：0.5，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的抗霉菌素鏈霉菌固體發酵培養基：玉米酒糟80%，菜粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麩皮7%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養基含水量為40%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟二，濕鏈霉菌菌粉的制備取出濕鏈霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養基劃平板進行復蘇，30℃培養7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養基的茄子瓶中，在培養箱中30℃培養6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為濕鏈霉菌種子液；發酵：將上述制備的濕鏈霉菌種子液以5%的接種量接種至滅菌的濕鏈霉菌固體發酵培養基上，菌種與濕鏈霉菌固體培養基混合均勻后，將接好種的濕鏈霉菌固體發酵培養基攤在發酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過后空氣濕度保持為40%-50%，發酵4-6天，檢測其孢子含量不低于10億CFU/g，即可低溫風干水分低于8%，粉碎過40目篩，即得到濕鏈霉菌菌粉；其中，所述的PDA培養基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的濕鏈霉菌固體發酵培養基：稻殼粉80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麩皮15%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養基含水量為40%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟三，加米里類芽孢桿菌菌粉的制備取出加米里類芽孢桿菌保藏管，用無氮固體培養基分別劃平板進行復蘇，30℃培養72小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有無氮固體培養基的茄子瓶中，在30℃培養箱中培養72小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L加米里類芽孢桿菌種子培養基的500L發酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為100L/min，8-24小時后通氣量為200L/min，24小時后通氣量為300L/min，30℃培養32-48小時，待總菌數含量不低于25億cfu/ml，即可作為加米里類芽孢桿菌種子液；發酵：將上述制備的加米里類芽孢桿菌種子液以10%-20%的比例接種至加米里類芽孢桿菌固體培養基上，混勻，在淺盤上發酵，堆料厚度為5-10cm，控制發酵溫度為30-40℃，發酵36-48小時，待芽孢含量不低于60億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，粉碎過100目篩，即得到加米里類芽孢桿菌菌粉；其中，所述無氮固體培養基：蔗糖10g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.1g，碳酸鈣5g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL，pH7.2；其中，所述加米里類芽孢桿菌種子培養基：糖蜜20g/L，木薯粉10g/L，菜粕粉40g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸錳0.6g/L，磷酸二氫鉀0.6g/L，碳酸鈣10g/L，pH7.0。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；其中，加米里類芽孢桿菌固體培養基：玉米酒糟57%，麩皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養基含水量50%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟四，飼料類芽孢桿菌菌粉的制備取出飼料類芽孢桿菌保藏管，用營養肉汁固體培養基分別劃平板進行復蘇，30℃培養48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養肉汁固體培養基的茄子瓶中，在30℃培養箱中培養48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養基的500L發酵罐中，開攪拌120r/min，前10小時通氣量為200L/min，10小時后通氣量為320L/min，30℃培養16-24小時，待總菌含量不低于30億cfu/ml，即可作為飼料類芽孢桿菌種子液；發酵：將上述制備的飼料類芽孢桿菌種子液以總接種量的10%-20%的接種量加至飼料類芽孢桿菌固體發酵培養基中，混勻，在淺盤上發酵，堆料厚度為5-10cm，控制發酵溫度為30-40℃，發酵36-48小時，待芽孢含量不低于80億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，粉碎過100目篩，即得到飼料類芽孢桿菌菌粉；其中，所述營養肉湯固體培養基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化鈉5.0g/L，瓊脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述液體種子培養基：玉米粉35g/L，豆粕粉20g/L，魚粉5g/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，碳酸鈣5.0g/L，pH7.0；其中，飼料類芽孢桿菌固體發酵培養基：麩皮60%，DDGS（玉米酒糟）32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養基含水量50%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟五，將上面制成的各種菌粉按抗霉菌素鏈霉菌菌粉20-40份，濕鏈霉菌菌粉10-30份，飼料類芽孢桿菌菌粉10-30份，加米里類芽孢桿菌菌粉20-40份，黃腐酸鉀原粉20-40份；混合均勻，即為防治病害的薯類專用微生物菌肥。其中，所述的防治病害的薯類專用微生物菌肥的施用方法為底施微生物菌肥5-10kg/畝。本發明具有的優點和有益效果：、本發明中包含的抗霉菌素鏈霉菌，濕鏈霉菌，飼料類芽孢桿菌，加米里類芽孢桿菌四種菌是從400多株微生物菌株中篩選得到的能共生共存，能在植株的根，莖，葉以及土壤中能夠生長繁殖，能產生多種抗菌素能產生多種抗菌素如內霉素的復合物，非多烯抗真菌抗菌素，雙氫鏈霉素，濕菌素和鈷氨素類來抑制甘薯黑斑病病原菌有特別強大的效果，從而達到防治甘薯黑斑病的作用，其對甘薯黑斑病的藥效高，平均防效在87.62%以上，且針對性強；、本發明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內的抗生、競爭、重寄生、溶菌作用，或者通過次級代謝產物誘導甘薯產生抗病性，增強其防病效果；、本發明中所使用的這四株菌株都是可從土壤中直接分離得到，具有固氮，解磷，解鉀，都具有根跡促生作用，可在作物表面、植株內部或土壤中繁殖生長的同時，并定向植物根際分泌某些次生代謝產物，能夠提高植物對養分的吸收、刺激植株生長起到肥料的效果；(4)、本發明復合微生物菌肥對人、畜安全，屬于環境友好型，利用本發明方法防治番茄灰霉病不易產生抗藥性，本發明制備方法簡單、菌種多，產生的拮抗物質廣泛，肥效顯著，成本低、使用簡單。具體實施方式實施例1一種防治病害的薯類專用微生物菌肥，其特征在于，制備該微生物菌肥的原料按重量份為：抗霉菌素鏈霉菌菌粉30份，濕鏈霉菌菌粉20份，飼料類芽孢桿菌菌粉20份，加米里類芽孢桿菌菌粉30份，黃腐酸鉀原粉30份；其具體制備方法，包括以下步驟：步驟一、抗霉菌素鏈霉菌菌粉的制備取出抗霉菌素鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號固體培養基劃平板進行復蘇，30℃培養7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號固體培養基的茄子瓶中，在培養箱中30℃培養6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為抗霉菌素鏈霉菌種子液；發酵：將上述制備的抗霉菌素鏈霉菌種子液以1%-3%的接種量接種至滅菌的抗霉菌素鏈霉菌固體發酵培養基上，菌種與抗霉菌素鏈霉菌固體培養基混合均勻后，將接好種的抗霉菌素鏈霉菌固體發酵培養基攤在發酵槽上，物料高度為3-6cm，控溫28-32℃，第一天空氣濕度保持為60%-75%，過后空氣濕度保持為40%-50%，發酵3天，檢測其孢子含量為25億CFU/g，低溫風干至水分低于8%，粉碎過40目篩，即得到抗霉菌素鏈霉菌菌粉；其中，所述的高氏一號固體培養基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5，硫酸鎂：0.5，氯化鈉：0.5，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的抗霉菌素鏈霉菌固體發酵培養基：玉米酒糟80%，菜粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麩皮7%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養基含水量為40%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟二，濕鏈霉菌菌粉的制備取出濕鏈霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養基劃平板進行復蘇，30℃培養7天。在平板下挑取單個菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養基的茄子瓶中，在培養箱中30℃培養6-8天，待菌苔長滿茄子瓶，產生大量孢子粉即可用500毫升的無菌生理鹽水洗脫，調節孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為濕鏈霉菌種子液；發酵：將上述制備的濕鏈霉菌種子液以5%的接種量接種至滅菌的濕鏈霉菌固體發酵培養基上，菌種與濕鏈霉菌固體培養基混合均勻后，將接好種的濕鏈霉菌固體發酵培養基攤在發酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過后空氣濕度保持為40%-50%，發酵5天，檢測其孢子含量為12億CFU/g，即可低溫風干水分低于8%，粉碎過40目篩，即得到濕鏈霉菌菌粉；其中，所述的PDA培養基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的濕鏈霉菌固體發酵培養基：稻殼粉80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麩皮15%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養基含水量為40%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟三，加米里類芽孢桿菌菌粉的制備取出加米里類芽孢桿菌保藏管，用無氮固體培養基分別劃平板進行復蘇，30℃培養72小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有無氮固體培養基的茄子瓶中，在30℃培養箱中培養72小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L加米里類芽孢桿菌種子培養基的500L發酵罐中，開攪拌120r/min，前8小時通氣量為100L/min，8-24小時后通氣量為200L/min，24小時后通氣量為300L/min，30℃培養32-48小時，待總菌數含量不低于25億cfu/ml，即可作為加米里類芽孢桿菌種子液；發酵：將上述制備的加米里類芽孢桿菌種子液以15%的比例接種至加米里類芽孢桿菌固體培養基上，混勻，在淺盤上發酵，堆料厚度為5-10cm，控制發酵溫度為30-40℃，發酵40小時，檢測芽孢含量為65億cfu/g，曬干，待水分含量低于10%，粉碎過100目篩，即得到加米里類芽孢桿菌菌粉；其中，所述無氮固體培養基：蔗糖10g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.1g，碳酸鈣5g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL，pH7.2；其中，所述加米里類芽孢桿菌種子培養基：糖蜜20g/L，木薯粉10g/L，菜粕粉40g/L，硫酸鎂0.4g/L，硫酸錳0.6g/L，磷酸二氫鉀0.6g/L，碳酸鈣10g/L，pH7.0。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；加米里類芽孢桿菌固體培養基：玉米酒糟57%，麩皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養基含水量50%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟四，飼料類芽孢桿菌菌粉的制備取出飼料類芽孢桿菌保藏管，用營養肉汁固體培養基分別劃平板進行復蘇，30℃培養48小時。在平板下挑取單個菌落接種至裝有營養肉汁固體培養基，在30℃培養箱中培養48小時，用3000ml無菌水將三個茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養基的500L發酵罐中，開攪拌120r/min，前10小時通氣量為200L/min，10小時后通氣量為320L/min，30℃培養16-24小時，待總菌含量不低于30億cfu/ml，即可作為飼料類芽孢桿菌種子液；發酵：將上述制備的飼料類芽孢桿菌種子液以總接種量的10%-20%的接種量加至飼料類芽孢桿菌固體發酵培養基中，混勻，在淺盤上發酵，堆料厚度為5-10cm，控制發酵溫度為30-40℃，發酵42小時，檢測其芽孢含量為84億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，粉碎過100目篩，即得到飼料類芽孢桿菌菌粉；其中，所述營養肉湯固體培養基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化鈉5.0g/L，瓊脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述液體種子培養基：玉米粉35g/L，豆粕粉20g/L，魚粉5g/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，碳酸鈣5.0g/L，pH7.0；其中，飼料類芽孢桿菌固體發酵培養基：麩皮60%，DDGS（玉米酒糟）32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養基含水量50%-60%。各培養基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。步驟五，將上面制成的各種菌粉按抗霉菌素鏈霉菌菌粉30份，濕鏈霉菌菌粉20份，飼料類芽孢桿菌菌粉20份，加米里類芽孢桿菌菌粉30份，黃腐酸鉀原粉30份；混合均勻，即為防治病害的薯類專用微生物菌肥。實施例2微生物菌肥在甘薯大田中的應用效果1、試驗選擇在甘薯高產區中進行；2、試驗地址選擇在廣東省湛江市徐聞縣某農場；在前一年有明顯的甘薯黑斑病的土地試驗與對照；3、藥劑用法與用量：試驗組：底施實施例1生產的微生物菌肥5kg/畝，復合肥（15-15-15），10kg/畝；化肥組：復合肥（15-15-15），40kg/畝；有機肥組：農家肥600kg/畝；其它管理措施相同；4、試驗結果：從表1可以看出，本發明的微生物菌肥相對于全施用化學復合肥與有機肥組在大田試驗中具有明顯的增產優勢，使用本發明的微生物菌肥的平均畝產可以達到2432kg/畝，黑斑病指只有3.12，而全使用化肥組的產量也有2088kg，黑斑病指高達25.21；而使用有機肥的產量僅有1876kg，黑斑病也有明顯的降低，只有12.45，本發明的微生物菌肥相對于有機肥組能夠在大田上增產29.6%，而又相對于全用化肥組的對黑斑病的防效高達87.62%，具有顯著的效果。表1微生物菌肥在甘薯大田中的應用效果平均畝產（kg）增產率(%)黑斑病病指相對防效（%）試驗組243229.63.1287.62化肥組208811.325.21有機肥組187612.4550.61以上已將本發明做一詳細說明，以上所述，僅為本發明之較佳實施例而已，當不能限定本發明實施范圍，即凡依本申請范圍所作均等變化與修飾，皆應仍屬本發明涵蓋范圍內。當前第1頁1 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