4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2h-酞嗪-1-酮的制作方法

專利名稱：：4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2h-酞嗪-1-酮的制作方法4-[3-(4-環丙烷羰基-脈嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮本發明涉及晶型和藥物組合物以及所述晶型的用途。哺乳動物酶PARP(113_kDa多結構域蛋白質)通過其識別并快速結合到DNA單鏈或雙鏈斷裂的能力而與DNA損傷的信號傳導有關(D'Amours，等，Biochem.J.，342，249-268(1999))。一些觀察已經得出這樣的結論PARP參與多種與DNA有關的功能，包括基因擴增、細胞分裂、分化、凋亡、DNA堿基切除修復，并且還影響端粒長度和染色體穩定性(d’AddadiFagagna等，NatureGen.，23(1)，76-80(1999))。對PARP調節DNA修復和其他過程的機理的研究已經證實在細胞核內其在形成聚(ADP-核糖)鏈中的重要性(Althaus,F.R.和Richter,C.，ADP-RibosylationofProteins:EnzymologyandBiologicalSignificance,Springer—Verlag,Berlin(1987))0與DNA結合的、活化的PARP利用NAD在各種核靶蛋白(包括拓撲異構酶、組蛋白和PARP本身)上合成聚(ADP核糖)(Rhun等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，245，1-10(1998))。聚(ADP-核糖)化還與惡性轉化有關。例如，在分離的SV40-轉化的成纖細胞的細胞核內PARP的活性更高，而白血病細胞和結腸癌細胞比等量的正常白細胞和結腸粘膜顯示更高的酶活性(Miwa等，Arch.Biochem.Biophys.181,313-321(1977)；Burzio等，Proc.Soc.Exp.Bioi.Med.，149，933-938(1975)；以及Hirai等，CancerRes.，43，3441-3446(1983))。許多低分子量的PARP抑制劑已經被用于闡明聚(ADP-核糖)化在DNA修復中的功能性作用。在用烷化劑治療的細胞中，PARP的抑制導致DNA-鏈斷裂和細胞殺死的顯著±曾力口(Durkacz等，Nature，283，593—596(1980)；Berger,N.A.，RadiationResearch,101,4-14(1985))。后來，這些抑制劑被證明可以通過抑制潛在的致命損傷的修復來增強放射響應的作用(Ben-Hur等，BritishJournalofCancer,49(Suppl.VI),34-42(1984)；Schlicker等，Int.J.Radiat.Bioi.，75，91-100(1999))。據報道，PARP抑制劑在放射致敏的乏氧腫瘤細胞中有效(US5，032，617；US5，215，738和US5,041，653)。此外，PARP敲除(PARP-/-)的動物作為對烷化劑和Y-放射的響應顯示基因組不穩定性(Wang等，GenesDev.，9，509-520(1995)；MenissierdeMurcia等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94，7303-7307(1997))。已經證明PARP在某些血管疾病、膿毒性休克、缺血性損傷和神經毒性中起作用(Cantoni等，Biochim.Biophys.Acta,1014,1-7(1989)；Szabo等，J.Clin.Invest.,100,723-735(1997))。導致隨后被PARP識別的DNA鏈斷裂的氧自由基DNA損傷是這些疾病狀態的主要成因，如PARP抑制劑研究所示(Cosi等，J.Neurosci.Res.，39，38-46(1994)；Said等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.，93，4688-4692(1996))。最近，已證實PARP在失血性休克中起作用(Liaudet，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.，97(3)，10203-10208(2000))。還證實通過抑制PARP活性可以阻止哺乳動物細胞的有效逆轉錄病毒感染。這種重組逆轉錄病毒載體感染的抑制被證實在多種不同細胞類型中發生(Gaken等，J.Virology，70(6),3992-4000(1996))。因此，PARP抑制劑已經被研發用于抗病毒治療和癌癥治療的用途(W091/18591)。此外，已經推測PARP抑制可以延緩人類成纖細胞中老化特征的開始(Rattan和Clark,Biochem.Biophys.Res.Comm.，201(2)，665-672(1994))。這可能與PARP在控制端粒功能方面所起的作用有關(d，AddadiFagagna等，NatureGen.，23(1),76-80(1999))。WO2004/080976公開了許多酞嗪酮衍生物、其在抑制PARP中的活性以及其在治療癌癥中相應用途，無論是作為放射治療或化學治療的助劑，還是作為獨立的藥劑。WO2005/053662描述了PARP抑制劑(具體而言是酞嗪酮衍生物)作為堿基切除修復(BER)抑制劑的用途。對這些抑制劑在制備治療癌癥的藥物中的用途進行了描述，所述癌癥是同源重組(HR)依賴性DNADSB修復活性缺失的癌癥，具體而言是具有BRCAl和/或BRCA2缺失表型的癌癥。WO2004/080976中公開的4_[3_(4_環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)_4_氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物A)具有獨特的吸引力。Ι^γ^ροA在要求2006年10月17日提交的題目為“酞嗪酮衍生物”的US60/829，694的優先權的同時待決的申請，包括US11/873，671和WO2008/047082中公開了化合物A的一種晶型(晶型Α)。化合物A的特殊晶型可能具有有益的性質，例如，關于其溶解性和/或其穩定性和/或其生物利用度和/或其雜質分布和/或其過濾性質和/或其干燥性質和/或其吸濕性不足，和/或其可以更易于處理和/或降低顆粒體積和/或形成片劑。因此，本發明的第一方面提供基本上為晶型L的4-[3-(4_環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2Η-酞嗪-1-酮(化合物Α)。以上所用“基本上為晶型L”是指按重量計至少50%，優選按重量計至少70%、80%或90%的化合物A為晶型L。在一些實施方案中，按重量計至少95%、99%或甚至99.5%或更多可以是晶體形式的。晶型L的化合物A具有包含以下特征峰的X射線衍射圖(λ=1.5418Α)~51~|2θ°(±ο.ι°)~λ<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>晶型L的化合物A在X-射線衍射圖(λ=1.5418Α)中還具有下列附加峰<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>晶型L的化合物A還可以通過結合選自以上列出8個峰中的3個或更多個峰的任何組合來表征。晶型L的化合物A典型的粉末XRD圖如圖1所示。化合物A的晶型L基本上不含溶劑。本文所用術語“基本上不含溶劑”是指僅含有無效量的任意一種溶劑的晶型，例如具有總共0.5重量％或更少的任意一種溶劑的晶型。所述任意一種溶劑的總量可以是0.25重量％、0.1重量％、0.05重量％或0.025重量％或更低。化合物A的晶型L還可以用DSC表征。當以10°C/分鐘從25°C加熱到325°C時，化合物A的晶型L將在198.5°C士1°C開始熔融。晶型L的化合物A典型的DSC曲線如圖2所示。第二吸熱峰與由熔融的晶型L轉化的晶型A的熔融相對應。本發明的第二方面提供從晶型A的化合物A獲取晶型L的4-[3-(4_環丙烷羰基_哌嗪-1-羰基)-4_氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物A)的方法。該方法涉及將晶型A或晶型A和L的混合物在可含有最多30%水ν/ν的有機溶劑中漿化。在一些實施方案中，所述混合物可以不含有晶型L，或含有99%、90%或80%的晶型Α。在其他實施方案中，晶型L的量可以最多為所述混合物的50、70或80%。在一些實施方案中，所述有機溶劑可以不含水。在其他實施方案中，所述有機溶劑可以含有最多25或20%的水。所述溶劑可以選自為發生轉化提供足夠溶解性的溶劑。在一些實施方案中，所述溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈和硝基甲烷。所述漿化可以在最高為所述溶劑沸點的溫度下進行，但通常在比該溫度低的溫度下進行。在一些實施方案中，漿化在20V到50V之間，或20V到40V之間，或20V到30V之間進行。隨溫度降低，漿化時間可能延長。典型地，漿化進行至少3小時、至少6小時或甚至至少24小時。在一些實施方案中，漿化進行至少3天、4天、1周或甚至3周。本發明的第三方面提供含有第一方面的化合物和藥學可接受載體或稀釋劑的藥物組合物。本發明的第四方面提供第一方面的化合物在人體或動物體的治療方法中的用途。本發明的第五方面提供如本發明第一方面定義的化合物在制備抑制PARP活性的藥物中的用途。本發明的其他方面提供如本發明第一方面定義的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療血管疾病；膿毒性休克；缺血性損傷；神經毒性；失血性休克；病毒感染；或通過抑制PARP活性改善的疾病。本發明的另一個方面提供如本發明第一方面定義的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用作在癌癥治療中的輔助劑或用于增強電離放射或化學治療對腫瘤細胞的治療效果。本發明的其他方面提供通過抑制PARP而減輕的疾病的治療，包括向需要治療的受試者施用治療有效量的第一方面定義的化合物，優選以藥物組合物的方式施用，以及癌癥的治療，包括向需要治療的受試者施用治療有效量的第一方面定義的化合物，優選以藥物組合物的方式，同時或先后與電離放射或化學治療劑組合施用。在本發明的其他方面，所述化合物可以用于制備治療同源重組(HR)依賴性DNADSB修復活性缺失的癌癥的藥物，或用于治療HR依賴性DNADSB修復活性缺失的癌癥的患者，包括向所述患者施用治療有效量的所述化合物。HR依賴性DNADSB修復途徑通過同源機制修復DNA雙-鏈斷裂(DSB)以重建連續的DNA螺旋(K.K.Khanna和S.P.Jackson,Nat.Genet.27(3):247_254(2001))。HR依賴性DNADSB修復途徑的組分包括但不限于ATM(NM_000051)、RAD51(NM_002875)、RAD51L1(NM_002877)、RAD51C(NM_002876)、RAD51L3(NM_002878)、DMCl(NM_007068)、XRCC2(NM_005431)、XRCC3(NM_005432)、RAD52(NM_002879)、RAD54L(NM_003579)、RAD54B(NM_012415)、BRCAl(NM_007295)、BRCA2(NM_000059)、RAD50(NM_005732)、MRE11A(NM_005590)和NBSl(NM_002485)。其他涉及HR依賴性DNADSB修復途徑的蛋白質包括調節因子例如EMSY(Hughes-Davies等，Cell，115，pp523_535)。在“Wood等，Science，291，1284-1289(2001)”中也對HR組分進行了描述。HR依賴性DNADSB修復缺失的癌癥可能包含一種或多種癌細胞或由一種或多種癌細胞組成，與正常細胞相比，所述癌細胞通過該途徑修復DNADSB的能力降低或消失，即在一種或多種癌細胞中HR依賴性DNADSB修復途徑的活性可能降低或消失。在患有HR依賴性DNADSB修復缺失的個體的一種或多種癌細胞中，HR依賴性DNADSB修復途徑的一種或多種組分的活性可能消失。在本領域已經對HR依賴性DNADSB修復途徑的組分進行了充分的表征(參見Wood等，Science,2911284-1289(2001))，并且包括以上所列的組分。在一些優選的實施方案中，癌細胞可能具有BRCAl和/或BRCA2缺失表型，即BRCAl和/或BRCA2活性在所述癌細胞中降低或消失。具有這種表型的癌細胞可能是BRCAl和/或BRCA2缺失的，即BRCAl和/或BRCA2的表達和/或活性在癌細胞中可能降低或消失，例如通過編碼核酸的突變或多態性，或通過編碼調節因子的基因(如編碼BRCA2調節因子的EMSY基因)的擴增、突變或多態性(Hughes-Davies等，Cell，115，523-535)。BRCAl和BRCA2是已知的腫瘤抑制基因，其野生型等位基因常常在雜合子攜帶者的腫瘤中消失(JasinM.，Oncogene,21(58)，8981-93(2002)；Tutt等，TrendsMolMed.，8(12)，571-6，(2002))。在本領域對BRCAl和/或BRCA2突變與乳腺癌的關聯進行了充分的表征(Radice，P.J.，ExpClinCancerRes.，21(3Suppl)，9-12(2002))。還已知編碼BRCA2結合因子的EMSY基因的擴增與乳腺癌和卵巢癌有關。BRCAl和/或BRCA2突變的攜帶者還處于卵巢癌、前列腺癌和胰腺癌的高風險中。在一些優選的實施方案中，就BRCAl和/或BRCA2或其調節因子的一種或多種變異例如突變和多態性而言，所述個體是雜合的。BRCAl和/或BRCA2變異的檢測在本領域是熟知的，并在例如“EP699754、EP705903,Neuhausen,S.L.和Ostrander，Ε.A.，Genet.Test,1,75-83(1992)；Chappnis,P.0.禾口Foulkes,W.D.,CancerTreatRes,107,29-59(2002)JanatovaΜ.等，Neoplasma，50(4)，246-50(2003)Jancarkova,N.，CeskaGyneko1.，68(1)，11-6(2003)”中進行了描述。在“Hughes-Davies等，Cell，115，523-535”中對BRCA2結合因子EMSY擴增的測定進行了描述。與癌癥有關的突變和多態性可以通過檢測變異核酸序列的存在而在核酸水平上檢測，或通過檢測變異(即突變或等位基因變異)多肽的存在而在蛋白質水平上檢測。圖1是晶型L的化合物A的典型的粉末XRD圖。圖2是通過以10°C/分鐘從25°C加熱到325°C得到的晶型L的化合物A的典型的DSC曲線。圖3是晶型A的化合物A的典型的粉末XRD圖。圖4是通過以10°C/分鐘從25°C加熱到325°C得到的晶型A的化合物A的典型的DSC曲線。麗本發明提供晶型L的化合物A作為活性化合物，具體而言，在抑制PARP活性方面是活性的。本文所用術語“活性”涉及能夠抑制PARP活性的化合物。下文實施例中描述了一種方便地測定所述化合物對PARP抑制作用的檢測方法。本發明進一步提供抑制細胞PARP活性的方法，包括用有效量的活性化合物接觸所述細胞，優選以藥學可接受組合物的形式。這一方法可以在體外或在體內實施。例如，細胞樣品可以在體外生長，用活性化合物與所述細胞接觸，并觀察化合物對所述細胞的作用。作為“作用”的實例，可以檢測一定時間的被作用的DNA修復的量。只要發現活性化合物對所述細胞施加影響，這就可以用作在治療攜帶相同細胞類型的細胞的患者的方法中的所述化合物功效的預后指標或診斷標記。就治療病癥而言，本文所用術語“治療”通常涉及對于人體或動物體(例如在獸醫應用中)獲得某些期望的治療效果的治療或療法，所述期望的治療效果例如抑制病癥發展，包括發展速率的下降、發展速率的停止、病癥的改善和病癥的治愈。還包括作為預防措施的治療(即預防)。本文所用術語“輔助的”涉及所述活性化合物與已知的治療手段聯合使用。這些手段包括用于治療不同癌癥類型時的細胞毒性藥物方式和/或電離輻射。具體而言，已知所述活性化合物可以增強多種癌癥化療治療劑的作用，所述化療治療劑包括用于治療癌癥的拓撲異構酶類毒性藥物(例如拓撲替康、依立替康和盧比替康)、大部分已知的烷化劑(例如DTIC、替莫唑胺)和基于鉬的藥物(例如卡鉬、順鉬)。所述活性化合物還可以用作細胞培養添加劑以抑制PARP，例如為了使細胞在體外對已知化療劑或電離放射治療敏感。所述活性化合物還可以用作體外檢測的一部分，例如為了確定候選宿主是否可能從用所討論的化合物治療中受益。所述活性化合物或含有所述活性化合物的藥用組合物可以通過任何方便的給藥途徑給受試者施用。無論全身性/外周性還是在期望的作用部位，包括但不限于口服(例如通過攝入)；局部(包括例如透皮、鼻內、眼內、口腔和舌下)；肺(例如，使用例如氣霧劑通過例如口或鼻的吸入或吹入療法)；直腸；陰道；胃腸外，例如通過注射，包括皮下、皮內、肌內、靜脈內、動脈內、心內、鞘內、脊柱內、囊內、囊下、眼眶內、腹膜內、氣管內、表皮下、關節內、蛛網膜下和胸骨內；通過植入藥庫，例如皮下或肌內。受試者可以是真核生物、動物、脊椎動物、哺乳動物、嚙齒動物(例如豚鼠、倉鼠、大鼠、小鼠)、鼠科動物(例如家鼠)、犬科動物(例如狗)、貓科動物(例如貓)、馬科動物(例如馬)、靈長類、類人猿(例如猴或猿)、猴類(例如絨猴、狒狒)、猿類(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、長臂猿)或人類。制劑盡管可以單獨施用所述活性化合物，但優選作為含有以上所定義的活性化合物與一種或多種藥學可接受的載體、佐劑、賦形劑、稀釋劑、填充劑、緩沖劑、穩定劑、防腐劑、潤滑劑或其他本領域技術人員熟知的物質以及任選的其他治療劑或預防劑的藥物組合物一起施用。因此，本發明進一步提供如上所定義的藥物組合物以及制作藥物組合物的方法，包括將以上所定義的活性化合物與一種或多種藥學可接受的載體、賦形劑、緩沖液、佐劑、穩定劑或其他本文所描述的物質混合，以使活性化合物保持晶型L。本文所用術語“藥學可接受的”涉及在合理醫學判斷范圍內適合用于與受試者(例如人)的組織接觸而不引起過度的毒性反應、刺激、過敏反應或其他問題或并發癥的化合物、物質、組合物和/或藥劑形式，其相當于合理的受益/風險比。每種載體、賦形劑等在與制劑的其他成分相容的意義上也必須是“可接受的”。可以在標準的藥物教科書中查到合適的載體、稀釋劑、賦形劑等，例如參見"HandbookofPharmaceuticalAdditives，，，第2版(Μ.Ash禾口I.Ash編),2001(SynapseInformationResources,Inc.,Endicott,NewYork,USA),"Remington'sPharmaceuticalSciences”，第20版，Lippincott，Williams&Wilkins出版，2000;和“HandbookofPharmaceuticalExcipients",%2片反，1994。制劑可以方便地采用單元藥劑形式，也可以通過藥劑學領域熟知的任何方法制備。這些方法包括使活性化合物與含有一種或多種助劑的載體組合的步驟。一般而言，制劑通過使活性化合物與液體載體或細分散固體載體或二者均勻充分組合，然后根據需要使產品成型來制備。制劑可以是混懸劑、片劑、顆粒劑、粉劑、膠囊、扁囊劑、丸劑或糊劑的形式。適于口服施用的制劑(例如通過攝入)可以采用每個單元含有預定量活性化合物的離散單元例如膠囊、扁囊劑或片劑；粉劑或顆粒劑；在水性或非水性液體中的混懸劑；或糊劑。片劑可以通過常規手段來制備，例如任選地與一種或多種輔助成分壓片或模制。壓制的片劑可以通過在合適的設備中將自由流動形式的(例如粉末或顆粒)活性化合物任選與一種或多種粘合劑(例如聚維酮、明膠、阿拉伯膠、山梨糖醇、黃蓍膠、羥丙基甲基纖維素)；填充劑或稀釋劑(例如乳糖、微晶纖維素、磷酸氫鈣)；潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石、二氧化硅)、崩解劑(如淀粉羥乙酸鈉、交聯聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑或濕潤劑(如十二烷基硫酸鈉)和防腐劑(如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸)混合壓制來制備。模制的片劑可以通過在合適的設備中模制與惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀的化合物的混合物來制備。片劑可以任選地進行包衣或壓痕，并且可以通過使用例如不同比例的羥丙基甲基纖維素以提供期望的釋放性質來配制片劑，以提供活性化合物的緩釋或控釋。片劑可以任選具有腸溶包衣以提供在腸道部分而不是在胃部的釋放。膠囊可以含有混懸劑形式的活性化合物。適于局部給藥(例如透皮、鼻內、眼內、口腔和舌下)的制劑可以制備成糊劑。適于眼睛局部給藥的制劑包括滴眼劑，其中活性化合物懸浮于合適的載體，特別是用于該活性化合物的水性溶劑中。適于鼻內給藥的、載體是固體的制劑包括具有例如顆粒尺寸在約20到約500微米范圍內的粗顆粒，其以采用嗅劑方式給藥，即將裝有粉末的容器靠近鼻子通過鼻道快速吸入。適合于通過吸入給藥的制劑包括從加壓包裝中產生噴霧劑的制劑，使用合適的氣霧噴射劑如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合適的氣體。劑量應當理解，活性化合物以及含有活性化合物的組合物的劑量可以因患者而異。確定最佳劑量通常涉及在治療獲益的水平與本發明治療的任何風險或有毒副作用之間進行權衡。所選劑量水平將取決于各種因素，包括但不限于具體化合物的活性、給藥途徑、給藥時間、化合物的排泄速率、治療的持續時間、結合使用的其他藥物、化合物和/或物質以及患者的年齡、性別、體重、病情、一般健康狀況和病史。化合物的量和給藥途徑最終由醫生決定，但是通常所述劑量應能獲得作用位點處的局部濃度以實現期望的效果，而不引起實質的有害或有毒副作用。體內施用在整個療程中可以以單劑量、連續或間歇(例如在適當的間隔以分開的劑量)進行。確定最有效手段和劑量的方法對本領域技術人員是熟知的，并且因治療用的制劑、治療目的、要治療的靶向細胞和要治療的受試者而異。可以進行單次或多次給藥，藥劑水平和給藥方式由治療醫生選擇。總而言之，所述活性化合物的合適劑量在每m2受試者身體區域重量每天約IOmg至約600mg的范圍內。實施例一般方法粉末XRD采用BrukerD5000衍射儀(X-射線波長1.5418人銅源，電壓40kV，燈絲發射40mA)記錄粉末X-射線衍射。采用0.02°步寬和1秒時間計數對樣品在2-40°2θ進行掃描。差示掃描量熱法(DSC)采用帶有TS0801R0機器人系統的MettlerDSC820E記錄DSC。典型地，將低于5mg的物質盛裝于40ul蓋有穿孔蓋的鋁坩堝中，以10°C/分鐘的恒定加熱速率在25°C至325°C范圍內進行加熱。使用流量為IOOml/分鐘的氮氣吹掃氣。獲得晶型A的化合物A,AIAfC^yixO'NMR采用BrukerDPX400譜儀在400MHz下記錄1HNMR譜圖。在相對于四甲基硅內標的S標度上以百萬分率(PPm)記錄化學位移。除非另有說明，所有樣品都溶解于DMS0-d6。質譜在AgilentXCT離子阱質譜儀上用串聯質譜儀(MS/MS)記錄質譜譜圖用于結構確定。在陽離子電離質譜模式下操作該儀器。(a)4-[3-(4_環丙烷羰基-哌嗪羰基)_4_氟-芐基]_2H_酞嗪酮(化合物A)將2-氟-5-[(4-氧代_3，4-二氫酞嗪-1-基)甲基]苯甲酸⑶(15.23g，51.07mmol)在氮氣氛下攪拌懸浮于乙腈(96ml)中。加入二異丙基乙胺(19.6ml，112.3mmol)后再加入1_環丙基羰基哌嗪(I)(9.45g，61.28mmol)和乙腈(1ml)。將反應混合物冷卻至18°C。在30分鐘的時間里加入0-苯并三唑-1-基-四甲基脲六氟磷酸酯(25.18g，66.39mmol)并將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物冷卻至3°C并在此溫度下保持1小時，然后過濾。用冷(3°C)乙腈(20ml)洗滌濾餅，然后在最高40°C下將其真空干燥以得到淺黃色固體狀的標題化合物(20.21g)。質譜:MH+435IHNMR(400MHz,DMS0-d6)δ0.70(m,4H),1.88(brs,1H),3.20(brs，2H)，3.56(m,6H)，4.31(s,2H)，7.17(t,1H)，7.34(dd,1H)，7.41(m,1H)，7.77(dt,1H)，7.83(dt,1H)，7.92(d,1H)，8.25(dd,1H)，12.53(s,1H)。(b)化合物A從乙醇中重結晶將4-(3-{[4-(環丙基羰基)哌嗪-1-基]羰基}-4-氟芐基)酞嗪_1(2H)_酮(化合物A)(20.OOg,44.66mmol)懸浮于水(50ml)和乙醇(150ml)的混合物中。將該懸浮液攪拌加熱至回流。然后將制備的溶液冷卻至70°C并過濾。用水(8ml)和乙醇(22ml)的混合物洗滌濾餅。將濾液在攪拌下冷卻至45°C。加入晶型A的4-(3-{[4_(環丙基羰基)哌嗪-1-基]羰基}-4-氟芐基)酞嗪-1(2H)_酮(化合物A)(0.08g)以在混合物中形成晶種。將得到的懸浮液在2.5小時的時間里冷卻至20°C，并在此溫度下進一步攪拌16小時以建立結晶。在5小時的時間里加入水(200ml)，并保持溫度為20°C。加入結束時將懸浮液在20°C下保持2小時。將懸浮液過濾，并用乙醇(24ml)和水(56ml)的混合物洗滌濾餅。將分離的固體倒出并在40-60°C下將其真空干燥，得到灰白色晶型A的化合物A(18.Ig)。圖3是晶型A的化合物A的典型的粉末XRD圖，圖4是通過以10°C/分鐘從25°C加熱至325°C得到的晶型A的化合物A的典型的DSC曲線。該XRD圖是用前述方法得到的，但采用的是4秒計數。晶型A的化合物A具有含有以下特征峰的X-射線衍射圖(λ=1.5418Α):<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>晶型A的化合物A的X-射線衍射圖(λ=1.5418人)還含有下列附加峰<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>還可以通過選自以上所列的10個峰中的3個或更多個峰的任何組合來表征晶型A的化合物Α。當使用DSC以10°C/分鐘從25°C加熱至325°C時，晶型A的化合物A將在210.rc士rc開始熔融。實施例1在小瓶中稱量23mg的晶型A的化合物A。向該固體中加入0.25ml由8.5mL甲醇和1.5mL水(即15%的水ν/ν)配制的溶液。將得到的漿液加熱至70°C，過濾并在蓋蓋的小瓶中緩慢冷卻至室溫。因而發生的結晶產生固體，將該固體在真空烘箱中干燥。產品是晶型L的化合物A。實施例2在反應管中加入約50mg晶型A的化合物A和Iml乙醇/水(8020v/v)。將該混合物在40°C漿化3周。將樣品過濾并在過濾器上干燥10分鐘，然后在工作臺上干燥過夜。產品為晶型L的化合物A。實施例3以與實施例2相似的方式，將晶型A的化合物A在60°C下在乙醇/水(8020v/ν)中漿化3周以生成晶型L的化合物Α。實施例4在反應管中加入約30mg晶型A的化合物A和Iml的乙醇/水(8020v/v)以形成晶型A的飽和懸浮液。向該飽和懸浮液中加入30mg晶型L的化合物A。將混合物在25°C下漿化3天。將樣品過濾并在過濾器上干燥10分鐘，然后在工作臺上干燥過夜。產品為晶型L的化合物A，而沒有晶型A。實施例5重復實施例4，但采用下列溶劑漿化晶型A和晶型L的混合物-在這些實驗中將樣品漿化4天。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>在每種情況中，產品是晶型L的化合物A，而沒有晶型A。實施例6抑制作用為測定活性化合物的抑制作用，采用下列檢測方法測定IC5tl值。在96孔FlashPlate(商標)(NEN，UK)中用Z-緩沖液(25mMHepes(Sigma)；12.5mMMgCl2(Sigma)；50mMKCl(Sigma)；ImMDTT(Sigma)；10%丙三醇(Sigma)0.001%NP-40(Sigma)；pH7.4)培養從Hela細胞核提取物中分離出的哺乳動物PARP，并且加入不同濃度的所述抑制劑。將所有化合物在DMSO中稀釋，使最終測定濃度在10至0.01μM，每孔DMSO最終濃度在1%。每孔總測定體積為40μ1。在30"C下培養10分鐘后，加入10μ1含有NAD(5μΜ)、3H-NAD和30mer雙鏈DNA-低聚體的反應混合物引發反應。將指定的陽性和陰性反應孔和化合物孔(未知)組合以計算酶活性％。然后將板震蕩2分鐘，并在30°C下培養45分鐘。培養后，向每個孔中加入50μ130%的乙酸使反應終止。然后將板在室溫下震蕩1小時。將板移至TopCountNXT(商標)(Packard，UK)上進行閃爍計數。記錄的值為對每個孔計數30秒后的每分鐘的計數(cpm)。然后用下式計算化合物的酶活性％%抑制=勵=(100*(未知cpm-平均陰性cpm)/(平均陽性cpm-平均陰性cpm))計算IC5tl值(50%酶活性被抑制的濃度)，其是在不同濃度范圍測定的，通常從10μM至0.001μΜ。這些IC5tl被用作比較值以鑒別增加的化合物功效。化合物A的IC5tl值為約5ηΜ。增效因子活性化合物的增效因子(PF5tl)計算為對照細胞生長的IC5tl除以加入PARP抑制劑的細胞生長的IC5tl的比值。對照細胞和化合物處理的細胞的生長抑制曲線都是有烷化劑甲磺酸甲酯(MMS)存在下的。使用固定濃度為0.2微摩爾的測試化合物。匪S的濃度范圍在0至Ij10μg/ml。使用磺酰羅丹明B(SRB)測定法測定細胞生長(Skehan，P.，等，(1990)Newcolorimetriccytotoxiciryassayforanticancer-drugscreening.J.Natl.CancerInst.82,1107-1112.)。將2000個HeLa細胞接種于體積為100μ1的平底96孔微量滴定板的每個孔中，并在37°C下培養6小時。使用單獨的培養基或含有最終濃度為0.5、1或5μM的PARP抑制劑的培養基替換細胞。使細胞進一步生長1小時，然后向未處理的細胞或PARP抑制劑處理的細胞中加入一系列濃度(通常為0、1、2、3、5、7和lOyg/ml)的匪S。單獨使用PARP抑制劑處理的細胞用于評價PARP抑制劑的生長抑制作用。將細胞再放置16小時，然后更換培養基并使細胞37°C下再生長72小時。然后移去培養基并用100μ1冰冷的10%(w/v)三氯乙酸將細胞固定。將平板在4°C下培養20分鐘，然后用水清洗4次。然后用100μ1的0.4%(w/v)SRB在乙酸溶液中將每個孔的細胞染色20分鐘，然后用的乙酸清洗4次。然后在室溫下將板干燥2小時。向每個孔加入100μ1的IOmM的TrisBase將染色細胞上的染料溶解。將板輕柔震蕩并在室溫下放置30分鐘，然后在Microquant微量滴定板讀數器上測定564nm下的光密度。化合物A在200nM的PF5tl為至少20。權利要求晶型L的4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮。2.根據權利要求1所述的化合物，其粉末XRD具有下列特征峰<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>3.根據權利要求1所述的化合物，其粉末XRD具有下列特征峰<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>4.根據權利要求1至3中任意一項所述的化合物，當用DSC以10°C/分鐘從25°C加熱至325°C時，其在198.5°C士1°C開始熔融。5.從晶型A的4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮獲得晶型L的4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4_氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮的方法，包括在任選含有最多30%ν/ν水的有機溶劑中漿化晶型A的或晶型A和晶型L混合物的4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2Η-酞嗪-1-酮。6.含有根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物和藥學可接受載體或稀釋劑的藥物組合物。7.根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物在治療人體或動物體的方法中的用途。8.根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物在人體或動物體的治療中抑制PARP的方法。9.根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物在制備抑制PARP活性的藥物中的用途。10.根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療血管疾病；膿毒性休克；缺血性損傷；神經毒性；失血性休克；病毒感染；或通過抑制PARP活性改善的疾病。11.根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物在癌癥治療中用作輔助劑或用于增強電離放射或化學治療劑對腫瘤細胞的治療作用。12.根據權利要求1至4中任意一項所述的化合物在制備用于治療個體中的癌癥的藥物中的用途，所述癌癥是HR依賴性DNADSB修復途徑缺失的。13.根據權利要求12所述的用途，其中所述癌癥包括一種或多種通過HR修復DNADSB的能力相對于正常細胞降低或喪失的癌細胞。14.根據權利要求13所述的用途，其中所述癌細胞具有BRCAl或BRCA2缺失的表型。15.根據權利要求14所述的用途，其中所述癌細胞是BRCAl或BRCA2缺失的。16.根據權利要求12至15中任意一項所述的用途，其中所述個體就編碼HR依賴性DNADSB修復途徑組分的基因的突變而言是雜合的。17.根據權利要求16所述的用途，其中所述個體就BRCAl或BRCA2的突變而言是雜合的。18.根據權利要求12至17中任意一項所述的用途，其中所述癌癥是乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。19.根據權利要求12至18中任意一項所述的用途，其中所述治療還包括施用電離輻射或化學治療劑。全文摘要晶型L的4-[3-(4-環丙烷羰基-哌嗪-1-羰基)-4-氟-芐基]-2H-酞嗪-1-酮，獲得晶型L的方法，含有晶型L的藥物組合物以及使用晶型L及含有晶型L的組合物的方法。文檔編號C07D237/32GK101821242SQ200880111430公開日2010年9月1日申請日期2008年10月17日優先權日2007年10月17日發明者以斯拉·約翰·斯蒂爾,倫納德·杰西·池亞爾,凱瑟琳·安妮·奎格利申請人:庫多斯藥物有限公司