專利名稱：一種高效精制粗品肝素鈉的方法
技術領域：
本發明涉及一種粗品肝素鈉精制方法，特別是一種肝素鈉生產工藝方法。
背景技術：
肝素鈉是一種臨床常用的抗凝血藥物，主要從豬小腸粘膜中提取的粘多糖物質， 具有顯著地抗凝血和防止血栓形成的作用。近年來低分子肝素鈉產品的涌現，使肝素鈉的應用越來越廣泛。傳統的生產工藝方法是將粗品肝素鈉進行一次或兩次氧化脫色及乙醇沉淀精制，其過氧化氫用量大(3-5% )，對肝素鈉效價損傷大，收率低。發明內容
本發明的目的提供一種精制粗品肝素鈉的高效工藝方法，克服了上述常規方法存在的問題，提高了收率，增加了經濟收益。
本發明的目的通過以下技術方案來達到，依次通過以下幾個步驟來實現。
1、粗品溶解將粗品肝素鈉按5_6Kg/億單位比例用純化水充分溶解；
2、第一次氧化調節pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15_20°C，按照O. 4-0. 6 % (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
3、第一次沉淀調節pH = 4. 0-5. O,按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉,攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置 10-14小時；
4、第二次氧化將3中的沉淀物用純化水按照5_6Kg/億單位比例充分溶解，調節 pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-20°C，按照O. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫， 攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
5、第二次沉淀 調節pH = 10. 0-11. 0，按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉， 攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時；
6、第三次氧化將5中的沉淀物用純化水按照5_6Kg/億單位比例充分溶解，調節 pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-20°C，按照O. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫， 攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
7、第三次沉淀調節pH = 4. 0-5. 0，按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時；
8、第四次氧化將7中的沉淀物用純化水按照5_6Kg/億單位比例充分溶解，調節 pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-20°C，按照O. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照O. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫， 攪拌條件下氧化脫色8-10小時；
9、第四次沉淀調節pH = 10. 0-11. 0，按照20_30g/L比例向料液中加入氯化鈉， 用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌， 靜置10-14小時；
將9)中所得沉淀物用純化水按照2_3Kg比例充分溶解后過濾，用乙醇沉淀后脫水干燥即得高收率高效價肝素鈉精品。
本技術方案的有益效果是經過多次梯度氧化脫色和酸堿交替沉淀，提高了收率，增加了收益。經本方法精制粗品肝素鈉，精品活性效價收率可達85-90%，單位效價彡180U/mg。傳統工藝方法精制粗品肝素鈉，精品活性效價收率只有65-80%，若要求其單位效價彡180U/mg，收率將更低。
第一，本技術方案中，使用過氧化氫進行梯度氧化脫色，O. 4-0.6% (v/v)與 O. 2-0.4% (v/v)梯度加入，前者氧化4-6小時，后者氧化8-10小時。減少了肝素鈉在水溶液中接觸過氧化氫的濃度，降低了過氧化氫對肝素鈉效價的破壞。
第二，本技術方案中，3，5，7，9步驟中，沉淀pH值采用酸堿交替法，3與7步驟中采用pH = 4. 0-5. 0，5與9步驟中采用pH = 10. 0-11. O。此方法可有效去除堿性雜質和酸性雜質。
第三，本技術方案中，3,5,7,9步驟中，乙醇沉淀讀數控制在35-40 %，所用乙醇為 5-10°C乙醇(80-95% )，可使酸性雜質和堿性雜質懸浮在乙醇溶液中而有效去除。
具體實施方式
以下實例詳細說明了本發明
1、粗品溶解將粗品肝素鈉100億單位加入到沉淀釜中，用600Kg純化水充分溶解，得料液700L。
2、第一次氧化調節pH = 9. 5，調節溫度15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
3、第一次沉淀調節pH = 4. 5,按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為 6°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35%，停止攪拌，靜置12小時。
4、第二次氧化將 3中的沉淀物加純化水至700L充分溶解，調節pH = 9. 5，調節溫度至15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
5、第二次沉淀調節pH = 10. 5，按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為 7°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為36%，停止攪拌，靜置12小時。
6、第三次氧化將5中的沉淀物加純化水至700L充分溶解，調節pH = 9. 5，調節溫度至15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
7、第三次沉淀調節pH = 4. 5，按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為 7°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為36%，停止攪拌，靜置12小時。
8、第四次氧化將7中的沉淀物加純化水至700L充分溶解，調節pH = 9. 5，調節溫度至15-20°C，加入30%過氧化氫3. 5L，攪拌條件下氧化脫色4小時。之后，加入30%過氧化氫2. 1L，攪拌條件下氧化脫色8小時。
9、第四次沉淀調節pH = 10. 5,按照30g/L比例向料液中加入氯化鈉,用溫度為 7°C乙醇(90% )沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為36%，停止攪拌，靜置12小時。
10、將9中所得沉淀物用純化水250Kg充分溶解，用溫度為5°C乙醇(95% )沉淀， 邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為80%，停止攪拌，靜置12小時。`用無水乙醇脫水后真空干燥即得聞收率聞效價肝素納精品。
權利要求
1.一種高效精制粗品肝素鈉的方法，其特征是 (1)、粗品溶解將粗品肝素鈉按5-6Kg/億單位比例用純化水充分溶解； (2)、第一次氧化調節pH= 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-200C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0.4%(v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (3)、第一次沉淀調節pH= 4. 0-5. 0,按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉,攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (4)、第二次氧化將(3)中的沉淀物用純化水按照5-6Kg/億單位比例充分溶解，調節pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-20°C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (5)、第二次沉淀:調節pH= 10. 0-11. 0，按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉，攪拌條件下加入溫度為5-10°C的乙醇(80-95% )，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (6)、第三次氧化將(5)中的沉淀物用純化水按照5-6Kg/億單位比例充分溶解，調節pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-20°C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (7)、第三次沉淀調節pH= 4. 0-5. 0，按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (8)、第四次氧化將(7)中的沉淀物用純化水按照5-6Kg/億單位比例充分溶解，調節pH = 9. 0-10. 0，調節料液溫度至15-20°C，按照0. 4-0. 6% (v/v)比例加入濃度為30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色4-6小時，之后，按照0. 2-0. 4% (v/v)比例加入30%過氧化氫，攪拌條件下氧化脫色8-10小時； (9)、第四次沉淀調節pH= 10. 0-11. 0，按照20-30g/L比例向料液中加入氯化鈉，用溫度為5-10°C乙醇(80-95%)沉淀，邊攪拌邊加入，直至乙醇濃度為35-40%，停止攪拌，靜置10-14小時； (10)、將(9)中所得沉淀物用純化水按照2-3Kg比例充分溶解后過濾，用乙醇沉淀后脫水干燥即得高收率高效價肝素鈉精品。
2.按照權利要求書I所述的方法，其特征為(2)，(4)，(6)，(8)步驟中過氧化氫加入方法采用0. 4-0.6% (v/v)與0. 2-0. 4% (v/v)梯度加入法，前者氧化4_6小時，后者氧化8-10小時。
3.按照權利要求書I所述的方法，其特征為(3)，(5)，(7)，(9)步驟中，沉淀pH值采用酸堿交替法，3)與7)步驟中采用pH = 4. 0-5. 0,5)與9)步驟中采用pH = 10. 0-11. O。
4.按照權利要求書I所述的方法，其特征為(3)，(5)，(7)，(9)步驟中，所用乙醇溫度為 5-10°C，濃度為 80-95% o
5.按照權利要求書I所述的方法，其特征為(2)，(4)，(6)，(8)步驟中，料液氧化pH=9. 0-10. 0， 氧化溫度為 15-20°C ο
全文摘要
本發明涉及一種提高肝素鈉精品收率的方法。豬腸粘膜經鹽解、酶解、樹脂吸附等方法提取的肝素鈉粗品中含有大量的蛋白質和核酸雜質，需經進一步的氧化沉淀操作進行精制。傳統工藝采用一次或兩次氧化沉淀法進行精制，很難避免效價不高收率低等缺點。本發明采用多次梯度氧化和pH交替沉淀方法，克服了傳統方法的缺點，提高了肝素鈉精品收率和單位效價，顯著增加經濟效益，具有很高的實用價值。
文檔編號C08B37/10GK103044578SQ20121055143
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月7日 優先權日2012年12月7日
發明者劉乃山, 夏襯來, 遲培升, 陸玉梅 申請人:青島九龍生物醫藥有限公司