交聯明膠載體和使用其用于控制釋放生理活性物質的載體的制作方法

交聯明膠載體和使用其用于控制釋放生理活性物質的載體的制作方法
【專利摘要】本發明涉及交聯明膠載體和使用其用于控制釋放生理活性物質的載體。本發明涉及一種交聯明膠載體，其中交聯明膠的表面帶有負電荷、并且在乙醇中的ζ電位是-3至-50mV；和一種用于控制釋放生理活性物質的載體，其包含：所述交聯明膠載體；和被吸附并且保持在所述交聯明膠載體上和/或內的生理活性物質。
【專利說明】交聯明膠載體和使用其用于控制釋放生理活性物質的載體

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種交聯明膠載體，和一種使用其用于控制釋放生理活性物質的載 體。具體來說，本發明涉及一種交聯明膠載體，其具有負電荷ξ電位，其中由粒子等形成的 交聯明膠的表面電荷是-3至_50mV ;尤其是由粒子等形成的交聯明膠載體，其中將水溶性 物質的含量控制至特定范圍；和一種用于控制釋放生理活性物質的載體，其中生理活性物 質被吸附并且保持在所述載體上。

【背景技術】
[0002] 明膠是通過用酸或堿處理動物來源的膠原并隨后提取而獲得的蛋白質，并且是用 于各種領域中的熟知材料，例如用作食品領域如果凍、藥物領域等中的膠凝劑，且還用于工 業用途如膠粘劑領域和膜領域。在這些各種用途中，醫療用途中所用的高度純化的明膠和 膠原也列在日本藥典中，并且已經被廣泛用作注射制劑的添加劑和用于產品如用于肝癌的 栓塞材料、用于止血的海綿材料和用于經口給用的膠囊材料中。
[0003] 如上所述，因為從構成生物組織的膠原中提取明膠，所以明膠是在生物相容性和 生物降解性方面極其優異的材料。此外，明膠通常具有相對容易溶解于水和溫水中的性質， 并且通過對明膠進行交聯處理而實現不溶化并控制不溶程度，具有在向活體給用時可以控 制明膠的生物降解時間的性質。因此，當生理活性物質如藥物被預先吸附至交聯且不溶化 的明膠時，在向活體給用的情況下，生理活性物質可以隨著明膠因生物降解而溶解從而逐 漸被釋放，從而使得可以發揮在一定時間周期內控制釋放生理活性物質的作用。
[0004] 專利文獻1公開了一種發明，其中使得作為生物相容物質的明膠為水不溶性的， 并且將其轉變成多孔粒子；并且描述了所述粒子可用于栓塞治療并且可用作醫療制劑的載 體。即，將該水不溶化的多孔粒子在其多孔部分中浸滲并保持有生理鹽水或藥物等的溶液。 然而，因為浸滲和保持是在其多孔部分中實現的，所以例如當改變孔徑和孔隙率時，其吸附 量在很大程度上發生變化，從而使得存在難以控制吸附量的問題。
[0005] 專利文獻1 :日本特許第3879018號公報


【發明內容】

[0006] 通常，在生理活性物質如藥物被預先吸附至交聯明膠并且用生理鹽水等懸浮之 后，向活體給用明膠以實現控制釋放生理活性物質的情況下，根據生理活性物質的處方和 治療目的而控制和調節交聯明膠中的生理活性物質的吸附量是重要的。
[0007] 然而，當交聯明膠載體不具有治療等所必要的生理活性物質的吸附量時，出現以 下問題：即使向活體給用載體，也不能發揮有效的治療效果，以及在期望時間周期內不能實 現控制釋放生理活性物質。
[0008] 作為制備能夠調節活體內的生物降解時間的交聯明膠、并且對影響生理活性物質 的吸附量的原因進行研究以解決以上問題的結果，本發明人已經發現，交聯明膠的表面電 荷顯著影響吸附量，并且交聯明膠中水溶性物質的含量強烈影響吸附量。因此，本發明人完 成了本發明。
[0009] S卩，本發明提供了一種交聯明膠載體，其中交聯明膠的表面帶有負電荷、并且在乙 醇中的ξ電位是-3至_50mV。
[0010] 特別地，交聯明膠優選不是經歷用一般化學交聯劑等進行的化學交聯處理的交聯 明膠，而是通過加熱處理物理交聯的交聯明膠。更優選的是通過在交聯處理之后進一步進 行γ射線照射處理而經歷分解處理的交聯明膠。
[0011] 此外，優選的是，所述交聯明膠載體中水溶性物質的含量在所述分解處理之前是 15至50重量％并且在所述分解處理之后增加到25至75重量％。另外，優選的是，所述交 聯明膠載體是具有無孔結構的單個粒子或其粒子聚集體。
[0012] 此外，本發明可以提供一種用于控制釋放生理活性物質的載體，其通過將生理活 性物質吸附并且保持在上述交聯明膠載體上和/或內從而在控制釋放的能力方面優異。
[0013] 本發明的交聯明膠載體通過將表面電荷控制為負電荷、具體地將在乙醇中的ζ 電位控制為-3至_50mV的范圍，從而發揮可以準確調節生理活性物質的吸附、保持量的效 果。因此，通過使交聯明膠載體的表面電荷在特定ζ電位范圍內變動，可以獲得用于控制 釋放的載體，其實現了控制釋放生理活性物質、從而發揮期望的治療效果。
[0014] 此外，本發明的交聯明膠載體通過控制在分解處理之前與之后交聯明膠載體中水 溶性物質的含量以增加特定范圍的量，從而發揮可以準確調節生理活性物質的吸附、保持 量的效果。即，因為將在分解處理之前與之后交聯明膠載體中水溶性物質的量控制并變動 以使其在特定范圍中，所以可獲得用于控制釋放的載體，其實現了控制釋放生理活性物質、 從而發揮期望的治療效果。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1是顯示在實施例1?3中和比較例1中各自獲得的交聯明膠載體的表面電荷 (ξ電位）與作為生理活性物質的生長因子的吸附率之間的關系的圖。
[0016] 圖2是顯示在各實驗例中獲得的交聯明膠載體中水溶性物質的量與作為生理活 性物質的生長因子的吸附量之間的關系的圖。

【具體實施方式】
[0017] 關于本發明中所用的明膠，其種類（來源）沒有特別限制。舉例來說，可以使用源 自牛骨、牛皮、豬骨、豬皮等的明膠。
[0018] 本發明的交聯明膠載體是通過對成形為粒子的明膠進行交聯處理以對水性溶劑 不溶化而獲得的交聯明膠載體，并且優選是不經歷一般使用的以交聯劑進行的化學交聯處 理、而是理想地經歷通過加熱處理進行的熱交聯的交聯明膠載體。即，在進行用交聯劑進行 的化學交聯處理的情況下，存在交聯劑的反應產物或交聯劑的殘渣結合至明膠的可能性。 在將由此獲得的交聯明膠載體用于活體中的情況下，應小心地研究各種毒性等，并且對可 用交聯劑產生限制。
[0019] 另一方面，在通過加熱處理進行熱交聯的情況下，不存在如上述的任何擔憂，并且 與用交聯劑進行的交聯處理相比是在溫和的條件下進行交聯處理，從而使得影響生物降解 性的明膠的交聯度的調節變得相對容易。因此，在如本發明中那樣通過熱交聯制備交聯明 膠載體的情況下，因為可以根據預期目的而控制交聯度，所以可以容易地控制完全溶解于 水溶液中或血管內的時間（生物降解時間等）。
[0020] 為了獲得呈粒子形狀的本發明的交聯明膠載體，首先，可以通過已知造粒方法如 W/0分散法、微反應器法、噴霧干燥法、噴霧冷凍干燥法或粉碎法來制造粒子形狀的明膠載 體。
[0021] 然后，將所得明膠載體先借助于干燥方法如吹干、風干、真空干燥或冷凍干燥來干 燥，隨后在100?200°C、優選120?180°C的溫度范圍下加熱干燥2?48小時、優選2? 8小時，由此進行熱交聯以得到本發明的交聯明膠載體。然而，在不在靜置下加熱干燥而是 在攪拌或旋轉條件下加熱干燥的情況下，優選在150?170°C ±5°C的溫度范圍下進行熱處 理約3?5小時。在這種情況下，干燥可以在常壓下進行，但因為明膠是固有地水溶性的并 且容易受空氣中的氧、水分等影響，所以在真空下加熱處理對于以良好的再現性進行均勻 的熱交聯來說是優選的。本發明中的"在真空下"是指當將絕對真空看作是OkPa時可以通 過一般的真空干燥機實現的10kPa以下的壓力條件。
[0022] 此外，本發明中的交聯明膠載體還可以通過在進行如上所述的交聯處理之后進行 分解處理來獲得。在由此經歷分解處理的交聯明膠載體中，因為載體表面上的負電荷可以 通過分解處理而進一步增加，所以可以將可有效吸附生理活性物質的載體表面上的ξ電 位控制為-3至_50mV范圍內的期望值，因而所述載體是優選的。此外，通過在明膠經交聯 處理所得的水不溶化與水不溶化的明膠經分解處理所得的水中再溶化之間保持平衡，可以 控制生理活性物質的吸附量。
[0023] 作為本發明中的分解處理，可以提及通過用包括Y射線的射線照射、用電子束照 射等進行的分解處理。優選地，實際上期望使用還可以用作產品包裝之后的最終滅菌處理 的Y射線。Y射線的照射量優選是約10至約50kGy，但鑒于控制交聯明膠載體表面上的 ζ電位和分解經水不溶化的交聯明膠以使其確實地可溶于水，作為滅菌操作也可以充分適 應的25至50kGy的照射量是進一步優選的。
[0024] 在如上獲得的本發明的交聯明膠載體中，載體內部的結構沒有特別限制，但優選 的是，可以通過控制交聯處理或分解處理而容易地控制表面ξ電位并且容易地控制水溶 性物質的含量。當考慮這點時，在多孔結構情形下的控制變得困難，因為孔部的表面積的控 制也是必要的，因而其優選是具有無孔結構的粒子，并且進一步優選地具有無孔結構的單 個粒子或通過聚集其多個粒子而獲得的粒子聚集體是期望的。
[0025] 即，當載體是具有多孔結構的粒子時，比表面積變大，并且粒子內部的多孔部分中 的表面電荷也影響本發明的效果，使得作為交聯明膠載體的期望表面ξ電位變得難以控 制，并且生理活性物質的吸附量（保持量）傾向于難以設定為期望值。此外，當載體是具有 多孔結構的粒子時，因為孔部內的表面部分也通過分解處理而影響水溶性，并且還由于對 孔部的毛細管現象而發生生理活性物質的物理吸附，所以對本發明的效果即生理活性物質 的吸附性控制造成大的影響，并且因此存在難以以良好的再現性確實地獲得期望效果的傾 向。因此，為了確實發揮本發明的效果，優選使用具有無孔結構的明膠粒子。
[0026] 此外，在所得交聯明膠載體中，從將ζ電位控制在本發明的范圍內以使得可控制 生理活性物質的吸附量的觀點來看，期望的是，干燥狀態下交聯明膠的單個粒子的平均粒 徑是5至50 μ m、優選5至25 μ m。當平均粒徑小于5 μ m時，因為粒子太小，所以在將其引 入到活體中的情況下生物降解性增加，難以充分發揮本發明的效果。因此，為進行進一步交 聯則需要苛刻的交聯條件，并且ζ電位轉移到中性側，從而使得存在無法充分獲得本發明 的效果的傾向。另一方面，在平均粒徑超過50 μ m的情況下，粒子內部的電荷也會影響本發 明的效果，從而使得傾向于難以控制ξ電位以發揮作為交聯明膠載體的本發明效果，因此 所述情況是不優選的。
[0027] 然而，從在整個明膠粒子上均勻地進行交聯處理和分解處理的觀點來看，期望 的是，干燥狀態下交聯明膠載體的單個粒子的平均粒徑是25至2, 000 μ m、優選60至 1，700 μ m。在平均粒徑小于25 μ m的情況下，因為粒子小，所以水溶性物質的量的調節變得 困難，以及例如，在將本發明的交聯明膠載體引入到活體中的情況下，存在生物降解性過度 增加并且本發明的效果難以充分發揮的傾向。在這方面，當旨在進行進一步交聯以降低生 物降解性時，則需要苛刻的交聯條件，從而使得即使當進行分解處理時，也不能獲得充分量 的水溶性物質。結果，無法充分獲得本發明的效果。另一方面，在平均粒徑超過2,000μπι 的情況下，難以在整個明膠粒子上進行均勻交聯處理，且分解處理也僅在表面層部分上部 分實現。結果，生物降解性的控制變得難以進行，并且存在對本發明的效果發揮不良影響的 傾向，從而使得所述情況是不優選的。
[0028] 順便提及，本發明中的交聯明膠載體不僅可以是如上所述的交聯明膠的單個粒 子，而且可以是通過聚集其多個粒子而獲得的粒子聚集體，并且在這種情況下平均粒徑可 以是25至2, 000 μ m、優選50至1，700 μ m、進一步優選約60至約200 μ m。
[0029] 在如上獲得的本發明的交聯明膠載體中，為了控制如后文提及的生理活性物質的 吸附量，重要的是，在乙醇中測定ξ電位的情況下，所述值落在-3至_50mV的范圍內。優 選地，優選將所述值控制為-10至_40mV的范圍。當ζ電位超過-3mV時，所得交聯明膠載 體接近于電中性狀態，吸附生理活性物質的性能減弱，并且由此存在無法獲得充分吸附性 的情況。另一方面，當電位小于_50mV時，所得交聯明膠載體的ζ電位的控制變得不穩定， 存在難以獲得具有穩定性能的交聯明膠載體的傾向，結果，存在被吸附并且保持的生理活 性物質所具有的目的效果不能得到充分發揮的情況。
[0030] 如下測定本發明中的ζ電位。在稱量干燥后的粒子狀交聯明膠載體以使其為 lmg/ml之后，利用10ml乙醇（特級試劑）對其進行懸浮，并且將懸浮液用特級試劑的乙 醇稀釋100倍。隨后，將在25°C下使用ζ電位測定裝置對所得經稀釋的懸浮液測定的值 看作本發明中的ξ電位。作為ξ電位測定裝置，可以使用市售裝置如ξ電位·粒度分 布測定裝置（由貝克曼庫爾特公司（Beckman Coulter, Inc.)制造，商品名：DelsaNano)、 ζ電位·粒徑測定系統（由大塚電子株式會社（Otsuka Electronics Co.，Ltd.)制造，商 品名：ELSZ-1000ZS)、ζ電位測定裝置（由馬爾文公司（Malvern Company)制造，商品名： Zetasizer Nano)、超聲粒度分布· ζ電位測定裝置（由Nihon Rufuto Co.，Ltd.制造，商 品名：DT1202)、用于表面分析的ζ電位測定裝置（由安東帕有限公司（Anton Paar GmbH) 制造，商品名：SurPASS)等。作為這些裝置的測定原理，采用激光多普勒多點檢測電泳法、 激光多普勒法（動態電泳光散射法）、相位分析光散射法、超聲振蕩電流法、流動電位?流動 電流測定法等，但可以使用任何原理。
[0031] 優選的是，本發明的交聯明膠載體是如上所述在對明膠載體進行交聯處理之后經 歷分解處理的交聯明膠載體，并且是其中在分解處理之前將交聯明膠載體中水溶性物質的 含量控制為15至50重量％并且在分解處理之后將交聯明膠載體中水溶性物質的含量控制 為25至75重量％的交聯明膠載體。在這方面，還可以通過僅進行交聯處理而不進行分解處 理而使得水溶性物質存在，從而將水溶性物質的含量控制為25至75重量％的范圍。然而， 這種情況下的水溶性物質不是通過分解處理形成的水溶性物質，而是低分子量明膠的不參 與交聯處理的殘余部分，并且因此不能充分發揮本發明的效果。因此，在本發明中，在分解 處理之前與之后控制水溶性物質的含量是重要的。順便提及，關于本發明中的水溶性物質， 其主要成分是明膠但不限于此，并且是指當在30°C下在靜置下將交聯明膠載體在純化水中 浸漬6小時時溶出到純化水中的任何水溶性物質。
[0032] S卩，在本發明中，通過明膠的交聯而使明膠分子之間和分子中發生交聯，并且此后 通過對所得交聯明膠進行分解處理，不是交聯斷開而是交聯明膠分子被切斷，從而使得經 歷交聯處理的明膠分子鏈切斷為小段。結果，據推測，通過在明膠分子鏈的分解端部產生發 揮水溶性的官能團如羧基，顯示水溶性的分子增加，即使其源自交聯明膠。此外，據推測，通 過交聯明膠載體中水溶性明膠的增加，由此生理活性物質與水溶性物質之間發生置換，從 而可增加吸附量。
[0033] 在本發明中明膠載體中水溶性物質的含量在交聯處理之后（在分解處理之前）小 于15重量％的情況下，因為已經發生過度交聯處理，所以生物降解性顯著降低，即使當進 行分解處理時也不能充分調節生物降解性。因此，存在不能獲得充分控制釋放生理活性物 質的能力的可能性。另一方面，在超過50重量％的情況下，通過交聯處理實現的水不溶化 變得不充分，并且生物降解性過度增加。此外，因為生物降解性傾向于通過分解處理而增 力口，所以存在可以實現生理活性物質的控制釋放的期間過度縮短的傾向。另外，明膠載體在 使用時的制備時溶解于稀釋介質如生理鹽水中，并且因此存在不能獲得期望效果的擔憂。
[0034] 此外，在明膠載體中水溶性物質的含量在分解處理之后小于25重量％的情況下， 作為歸因于最終獲得的交聯明膠載體中的過度交聯而致疏水性增加的結果，生理活性物質 的吸附性能減弱，以及生物降解速率減慢，從而傾向于難以發生控制釋放生理活性物質以 發揮期望效果。另一方面，當水溶性物質的含量超過75重量％時，在將載體給用到活體中 以作為在其上吸附有生理活性物質的控制釋放載體的情況下，存在生物降解速率加速并且 不發揮控制釋放的能力的傾向。
[0035] 本發明的交聯明膠載體可以提供一種用于控制釋放生理活性物質的載體，其使得 可通過利用被控制為特定ζ電位范圍的其表面負電荷、并控制水溶性物質的含量，來控制 被吸附并且保持的生理活性物質的量，并且發揮期望效果。本發明中所用的生理活性物質 沒有特別限制，但例如可以使用用于通過給用到體內而治療各種疾病的目的的各種藥物、 以干擾素和白介素為代表的細胞因子、各種生長因子（增殖因子）等。
[0036] 以上用于控制釋放生理活性物質的載體是其中生理活性物質被吸附并且保持在 載體表面上和/或載體內、并且通過給用到活體中來實現控制釋放被吸附并且保持的生理 活性物質以發揮期望效果的載體。給用到活體中的方法的實例包括：將載體懸浮并且分散 于溶劑如生理鹽水中，隨后將該懸浮且分散的產物肌肉注射到活體的局部部位中以逐漸實 現控制釋放藥物的方法；注射并且給用到疾病的患部附近的血管中以栓塞血管，從而在栓 塞之后實現控制釋放所吸附的生理活性物質的方法等。在進行這些給用方法的情況下，除 了用于注射的注射器之外，還可以使用已知裝置如導管。
[0037] 作為制備本發明的用于控制釋放生理活性物質的載體的方法，舉例來說，可以將 交聯明膠載體與生理活性物質一起分散并且填充到注射器中并且使其被吸附。此外，可以 使用如下實施方式，如預先將交聯明膠載體單獨填充到注射器中并且在使用時將生理鹽水 吸入到注射器中以分散交聯明膠載體的情況；或者將交聯明膠載體填充到小瓶中，在使用 時投入生理鹽水以分散交聯明膠載體并且將分散液吸入到注射器中的情況，即所謂的使用 時制備。
[0038] 順便提及，給用到活體中的交聯明膠載體在活體中逐漸生物降解時實現控制釋放 被吸附并且保持的生理活性物質。可以通過控制獲得交聯明膠載體的交聯條件來調節生物 降解時間，結果，可以對控制釋放生理活性物質的時間進行控制。具體來說，在肌肉內將控 制釋放時間設定為約2周的情況下，在使明膠交聯的步驟中的加熱條件優選是100?180°C 和1?24小時。順便提及，在交聯步驟中，因為進行加熱操作，所以在存在交聯明膠載體被 氧化和變性的擔憂的情況下，為了抑制氧的影響，優選在減壓下或在惰性氣體氛圍下進行 交聯步驟。
[0039] 實施例
[0040] 以下將參考實施例更具體地描述本發明。然而，本發明不應被解釋為限于實施例 的描述，并且可以在不背離技術理念的范圍內作出各種修改。
[0041] 〈實施例1>
[0042] 在40°C下將5g明膠（源自豬皮，凝膠強度：100g(根據JIS K6503))溶解于100ml 水中之后，將其填充到塑料容器中。使明膠水溶液在2?10°C的溫度下靜置17小時以實現 凝膠化并隨后在_80°C下冷凍。然后，將冷凍的明膠在10kPa以下的真空下在冷凍干燥機中 干燥，從而獲得片狀產物。將產物在粉碎機中粉碎，并且使用25 μ m、63 μ m和1，700 μ m的 篩調節粒徑，從而獲得平均粒徑是25 μ m以下和63?1，700 μ m的明膠粉碎粒子。
[0043] 接著，在150°C (±5°C )下在真空（5kPa以下）下在小型滾筒（drum)真空干燥機 (由愛知電機株式會社（Aichi Electric Co·, Ltd.)制造，商品名：BHR-0. 5型）中在以每 分鐘18次的速率旋轉的狀態下對各明膠粒子進行加熱處理4小時，以獲得本發明的交聯明 膠載體。
[0044] 〈實施例2>
[0045] 以與實施例1中相同的方式獲得交聯明膠載體，不同之處在于，在實施例2中在 170°C (±5°C)下進行加熱處理4小時。
[0046] 〈實施例3>
[0047] 在空氣中在常壓下將實施例1中獲得的交聯明膠載體放在塑料容器中并且用鋁 包裝之后，將其用25kGy Y射線照射以獲得經歷了分解處理的交聯明膠載體。
[0048] 〈比較例1>
[0049] 以與實施例1和3中相同的方式獲得經歷了 Y射線照射處理（分解處理）的交 聯明膠載體，不同之處在于，在比較例1中將加熱處理的溫度變為160°c (±5°C )。
[0050] 在以上實施例和比較例中獲得的交聯明膠載體中，將平均粒徑是25μπι以下的交 聯明膠載體用于ξ電位測定，并且將平均粒徑是63?1，700 μ m的交聯明膠載體用于測定 生理活性物質的吸附量。將結果顯示在表1和圖1中。順便提及，在測定吸附量的操作中， 在將交聯明膠載體用生理活性物質浸滲之后，將載體懸浮于生理鹽水中，將不被吸附在交 聯明膠載體中的部分以上清液形式回收，并且將其用作測定溶液。為了避免細粉末混入到 測定溶液中，將平均粒徑是63?1，700 μ m的交聯明膠用于測定吸附量。
[0051] 通過以下方法測定作為以上實施例和比較例的產物的交聯明膠載體各自的ζ電 位和生理活性物質的吸附量。
[0052] 〈測定ζ電位〉
[0053] 使作為以上實施例和比較例的產物的交聯明膠載體各自呈干燥狀態，并且在稱量 平均粒徑是25 μ m以下的交聯明膠載體以使其為lmg/ml之后，將其用乙醇（特級試劑）稀 釋100倍并且懸浮。在25°C下使用ζ電位?粒度分布測定裝置（由貝克曼庫爾特公司制 造，商品名：DelsaNano)對所得懸浮液進行測定。
[0054] 〈測定生理活性物質的吸附量〉
[0055] 使用分子量是約17, 000的生長因子和分子量是319. 85的顏料（亞甲基藍）作為 生理活性物質，如下測定交聯明膠載體中的吸附量。
[0056] 〈測定生長因子的吸附量〉
[0057] 將作為生理活性物質的生長因子溶解于生理鹽水中以使得濃度是0. 14mg/ml， 從而制備生理活性物質水溶液。對于校準曲線，將生理活性物質水溶液稀釋為濃度是 0· 028mg/ml、0. 056mg/ml、0. 084mg/ml、0. 1lmg/ml 和 0· 14mg/ml。
[0058] 為了測定作為生理活性物質的生長因子的吸附量，各自以0. 025g的量稱量作為 實施例和比較例的產物的交聯明膠載體。然后，將濃度是0. 14mg/ml的生理活性物質水溶 液以各自〇. 35ml的量添加到交聯明膠載體中，并且使整體在40°C下靜置1小時，從而使得 水溶液盡可能地遍布于交聯明膠載體上。此后，添加〇. 65ml生理鹽水，將上清液通過濾紙 過濾，并且在高效液相色譜上測定上清液的吸光度。根據預先制作的校準曲線，確定上清液 中生理活性物質的濃度，并且通過將初始的生理活性物質的添加量看作100%來計算吸附 率。
[0059] 〈測定顏料（亞甲基藍）的吸附量〉
[0060] 將作為生理活性物質的亞甲基藍溶解于純化水中以使得濃度是0.5重量％，從 而制備生理活性物質水溶液。對于校準曲線，將生理活性物質水溶液稀釋以使得濃度是 0. 00005 重量％、0. 00025 重量％、0. 00050 重量％和 0. 00075 重量％。
[0061] 為了測定作為生理活性物質的顏料的吸附量，各自稱量0. 04g的量作為實施例和 比較例的產物的交聯明膠載體。然后，將濃度是〇. 05重量％的生理活性物質水溶液以各自 0. 5ml的量添加到交聯明膠載體中，并且使整體在室溫下靜置1小時，從而使得水溶液盡可 能地遍布于交聯明膠載體上。此后，添加4. 5ml純化水，將上清液通過濾紙過濾，并且在吸 光度測定裝置上測定上清液的吸光度。根據預先制作的校準曲線，確定上清液中生理活性 物質的濃度，并且通過將初始的生理活性物質的添加量看作100%來計算吸附率。
[0062] [表 1]
[0063]

【權利要求】
1. 一種交聯明膠載體，其中交聯明膠的表面帶有負電荷、并且在乙醇中的ξ電位是-3 至 _50mV。
2. 根據權利要求1所述的交聯明膠載體，其中所述交聯明膠是熱交聯的。
3. 根據權利要求2所述的交聯明膠載體，其中所述交聯明膠進一步經歷了分解處理。
4. 根據權利要求3所述的交聯明膠載體，其中所述分解處理是γ射線照射處理。
5. 根據權利要求3所述的交聯明膠載體，其中所述交聯明膠載體中水溶性物質的含量 在所述分解處理之前是15至50重量％并且在所述分解處理之后增加到25至75重量％。
6. 根據權利要求1所述的交聯明膠載體，其中所述交聯明膠載體是具有無孔結構的單 個粒子或其粒子聚集體。
7. -種用于控制釋放生理活性物質的載體，其包含： 根據權利要求1所述的交聯明膠載體；和 被吸附并且保持在所述交聯明膠載體上和/或內的生理活性物質。
【文檔編號】C08J3/28GK104109252SQ201410163492
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年4月22日 優先權日:2013年4月22日
【發明者】菅原晉仁, 三浦智惠子, 須藤倫子, 中川雅央, 吉川利之 申請人:日東電工株式會社