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一種提高釀酒酵母異戊二烯合成能力的方法與流程

文檔序號:11125870閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于:通過酶切連接將來源于銀白楊的IspS基因序列SEQ ID NO:1克隆到質粒上,轉化到釀酒酵母體內,以實現在釀酒酵母中合成異戊二烯;并通過GAL4過表達增強IspS轉錄水平,以實現提高釀酒酵母合成異戊二烯能力。

2.根據權利要求1所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,所述IspS由SEQ ID NO.1中的基因編碼,并且所述IspS氨基酸序列是序列表中SEQ ID NO.2的氨基酸序列。

3.根據權利要求2所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,所述質粒為p416xwp01質粒,在釀酒酵母中以附著型低拷貝質粒存在,篩選標記為URA3。

4.根據權利要求1所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,通過DNA同源重組,將含有GAL4表達盒的線性化質粒整合到釀酒酵母基因組上GAL1/7/10區域,敲除GAL1/7/10基因,同時增強GAL4的表達,以實現增強IspS轉錄水平。

5.根據權利要求4所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,所述含有GAL4表達盒的線性化質粒為含有KanMX篩選標記、GAL1/7/10同源臂序列、多克隆位點和GAL4表達盒。

6.根據權利要求4所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,所述GAL4表達盒序列如SEQ ID NO.17所示。

7.根據權利要求1所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,所述IspS基因序列為下列突變基因序列中的一個:

a.序列表中SEQ ID NO.3的核苷酸序列;

b.序列表中SEQ ID NO.5的核苷酸序列;

c.序列表中SEQ ID NO.7的核苷酸序列;

d.序列表中SEQ ID NO.9的核苷酸序列;

e.序列表中SEQ ID NO.11的核苷酸序列;

f.序列表中SEQ ID NO.13的核苷酸序列;

g.序列表中SEQ ID NO.15的核苷酸序列。

8.根據權利要求7所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,所述IspS氨基酸序列是下列氨基酸序列之一:

(1)序列表中SEQ ID NO.4的氨基酸序列;

(2)序列表中SEQ ID NO.6的氨基酸序列;

(3)序列表中SEQ ID NO.8的氨基酸序列;

(4)序列表中SEQ ID NO.10的氨基酸序列;

(5)序列表中SEQ ID NO.12的氨基酸序列;

(6)序列表中SEQ ID NO.14的氨基酸序列;

(7)序列表中SEQ ID NO.16的氨基酸序列。

9.根據權利要求1所述的提高釀酒酵母合成異戊二烯能力的方法,其特征在于,對釀酒酵母使用的宿主菌過度積累中間代謝產物DMAPP進行定向進化。

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