【技術領域】
本發明屬于羥基積雪草甙制備技術領域，具體涉及一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝。
背景技術：
積雪草為雙子葉植物傘形科植物積雪草的全草或帶根全草，具有清熱利濕，消腫解毒之功效；用于治療濕熱黃疸，痢疾風疹、喉腫、腫毒和跌打損傷等。積雪草總甙是積雪草的活性成分，羥基積雪草甙是積雪草總甙的主要成分之一。已有研究發現，羥基積雪草甙具有較好的抗抑郁藥用，是較有發展前途的天然抗抑郁劑。
目前已公開的從積雪草中提取分離出羥基積雪草甙的方法不多，具體有：
(1)公開號為cn1377649a的發明專利中公開了可以制得羥基積雪草甙的方法，具體是先將積雪草總甙溶于甲醇后，進行硅膠正相色譜層析，以氯仿和甲醇的混合液為洗脫溶劑，收集其中氯仿∶甲醇＝2：1比例部分的洗脫液，減壓回收洗脫液，得到白色晶體狀單一化合物羥基積雪草甙。這種方法制得的羥基積雪草甙的純度不夠理想，而且洗脫溶劑中含有氯仿，不夠環保，危害操作人員的健康。
(2)公開號為cn101210039a的發明專利，公開了一種羥基積雪草甙化學對照品的分離制備方法，它是以重量含量30％-97％的羥基積雪草甙提取物為原料，以制備型高效液相色譜為分離手段，以甲醇-水溶液為洗脫體系，獲得純度98％以上羥基積雪草甙化學對照品。該方法雖然可獲得高純度的羥基積雪草甙單品，但它是以重量含量30％-97％的積雪草甙提取物為原料進行分離提純的，必須先從積雪草中提取出一定含量的積雪草甙提取物；此外，該方法所用設備制備型高效液相色譜價格較高，導致產品的生產成本偏高。
專利文獻“一種羥基積雪草甙的制備方法(專利號：zl201010269888.0)”公開了一種提取純化羥基積雪草甙的方法，得到的羥基積雪草甙的純度≥95％，質量不穩定，不滿足定性分析的要求。
技術實現要素：
本發明提供的一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，以解決現有技術提取羥基積雪草甙純度較低，質量不穩定，不滿足定性分析的要求的問題。本發明的方法制得的羥基積雪草甙的純度均高于現有技術制得的羥基積雪草甙的純度。
為解決以上技術問題，本發明采用以下技術工藝：
一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：
s1：將積雪草進行粉碎并過篩子，制得積雪草粉末；
s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入乙醇，在水浴條件下回流提取2-3次，每次提取時長為1.6-2h，提取完全后合并提取液，調節提取液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過活性炭脫色除雜，過濾后制得一次脫色液；
s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏4.8-5.2倍體積的40-45℃的水進行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進行萃取2-3次，繼續用無水乙酸乙酯進行2-3次結晶處理，結晶過程中固液比為1:4-5(w/v)，制得結晶粗品；
s4：將步驟s3制得的粗晶經55％-60％的乙醇溶解，調節溶液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過活性炭脫色除雜，過濾后制得二次脫色液；
s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙2％-10％，采用大孔吸附樹脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為48％-60％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的1.6-3.2倍，水洗區為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為3.6％-4.8％的koh溶液，吸附區流速5-10bv/h，解吸區流速10-20bv/h，水洗區流速20-25bv/h，再生區流速5-10bv/h，切換時間為700-750s，溫度為42-53℃，壓力為0.6-0.8mpa；
s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進行濃縮后結晶，所得晶體在溫度為40-43℃下真空干燥，制得積雪草羥基積雪草甙。
優選地，步驟s1中所述篩子的目數為30-70。
優選地，步驟s2中所述積雪草粉末與乙醇的重量比為1:6-8。
優選地，所述乙醇的體積分數為72％-86％。
優選地，步驟s2中所述通過活性炭脫色除雜的時間為0.6-1.3h。
優選地，步驟s4中所述通過活性炭脫色除雜的時間為0.4-0.9h。
優選地，步驟s5中所述大孔吸附樹脂為hpd700型大孔吸附樹脂。
優選地，步驟s6中所述濃縮為真空減壓濃縮。
優選地，步驟s6中所述結晶是在溫度為2-9℃下進行的。
優選地，步驟s6中所述晶體在溫度為40-43℃下真空干燥至含水率≤1％。
本發明具有以下有益效果：
本發明的方法制得的羥基積雪草甙的純度在99.06％以上，均高于現有技術制得的羥基積雪草甙的純度，且能作為定性、定量的對照品。
【具體實施方式】
為便于更好地理解本發明，通過以下實施例加以說明，這些實施例屬于本發明的保護范圍，但不限制本發明的保護范圍。
在實施例中，所述從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：
s1：將積雪草進行粉碎并過30-70目篩子，制得積雪草粉末；
s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量6-8倍72％-86％的乙醇，在水浴條件下回流提取2-3次，每次提取時長為1.6-2h，提取完全后合并提取液，調節提取液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過活性炭脫色除雜0.6-1.3h，過濾后制得一次脫色液；
s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏4.8-5.2倍體積的40-45℃的水進行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進行萃取2-3次，繼續用無水乙酸乙酯進行2-3次結晶處理，結晶過程中固液比為1:4-5(w/v)，制得結晶粗品；
s4：將步驟s3制得的粗晶經55％-60％的乙醇溶解，調節溶液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過活性炭脫色除雜0.4-0.9h，過濾后制得二次脫色液；
s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙2％-10％，采用hpd700型大孔吸附樹脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為48％-60％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的1.6-3.2倍，水洗區為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為3.6％-4.8％的koh溶液，吸附區流速5-10bv/h，解吸區流速10-20bv/h，水洗區流速20-25bv/h，再生區流速5-10bv/h，切換時間為700-750s，溫度為42-53℃，壓力為0.6-0.8mpa；
s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進行真空減壓濃縮后，在溫度為2-9℃下進行結晶，所得晶體在溫度為40-43℃下真空干燥至含水率≤1％，制得積雪草羥基積雪草甙。
實施例1
一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：
s1：將積雪草進行粉碎并過50目篩子，制得積雪草粉末；
s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量7倍78％的乙醇，在水浴條件下回流提取2次，每次提取時長為1.8h，提取完全后合并提取液，調節提取液的ph值至4.2，溫度控制為73℃，通過活性炭脫色除雜1h，過濾后制得一次脫色液；
s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5倍體積的42℃的水進行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進行萃取2次，繼續用無水乙酸乙酯進行2次結晶處理，結晶過程中固液比為1:4.5(w/v)，制得結晶粗品；
s4：將步驟s3制得的粗晶經58％的乙醇溶解，調節溶液的ph值至4.1，溫度控制為73℃，通過活性炭脫色除雜0.6h，過濾后制得二次脫色液；
s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙6％，采用hpd700型大孔吸附樹脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為55％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的2.5倍，水洗區為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為4.2％的koh溶液，吸附區流速8bv/h，解吸區流速15bv/h，水洗區流速22bv/h，再生區流速8bv/h，切換時間為720s，溫度為48℃，壓力為0.7mpa；
s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進行真空減壓濃縮后，在溫度為6℃下進行結晶，所得晶體在溫度為42℃下真空干燥至含水率為1％，制得積雪草羥基積雪草甙。
實施例2
一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：
s1：將積雪草進行粉碎并過30目篩子，制得積雪草粉末；
s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量6.2倍72％％的乙醇，在水浴條件下回流提取2次，每次提取時長為2h，提取完全后合并提取液，調節提取液的ph值至3.8，溫度控制為70℃，通過活性炭脫色除雜1.3h，過濾后制得一次脫色液；
s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏4.8倍體積的40℃的水進行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進行萃取2次，繼續用無水乙酸乙酯進行2次結晶處理，結晶過程中固液比為1:4(w/v)，制得結晶粗品；
s4：將步驟s3制得的粗晶經55％的乙醇溶解，調節溶液的ph值至3.8，溫度控制為70℃，通過活性炭脫色除雜0.9h，過濾后制得二次脫色液；
s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙2％，采用hpd700型大孔吸附樹脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為48％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的1.6倍，水洗區為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為3.6％的koh溶液，吸附區流速5bv/h，解吸區流速10bv/h，水洗區流速20bv/h，再生區流速5bv/h，切換時間為700s，溫度為42℃，壓力為0.6mpa；
s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進行真空減壓濃縮后，在溫度為2℃下進行結晶，所得晶體在溫度為40℃下真空干燥至含水率為0.8％，制得積雪草羥基積雪草甙。
實施例3
一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：
s1：將積雪草進行粉碎并過70目篩子，制得積雪草粉末；
s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量8倍85％的乙醇，在水浴條件下回流提取2次，每次提取時長為2h，提取完全后合并提取液，調節提取液的ph值至4.3，溫度控制為75℃，通過活性炭脫色除雜0.6h，過濾后制得一次脫色液；
s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5.2倍體積的45℃的水進行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進行萃取3次，繼續用無水乙酸乙酯進行3次結晶處理，結晶過程中固液比為1:5(w/v)，制得結晶粗品；
s4：將步驟s3制得的粗晶經60％的乙醇溶解，調節溶液的ph值至4.3，溫度控制為75℃，通過活性炭脫色除雜0.4h，過濾后制得二次脫色液；
s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙10％，采用hpd700型大孔吸附樹脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為60％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的3.2倍，水洗區為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為4.8％的koh溶液，吸附區流速10bv/h，解吸區流速20bv/h，水洗區流速25bv/h，再生區流速10bv/h，切換時間為750s，溫度為53℃，壓力為0.8mpa；
s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進行真空減壓濃縮后，在溫度為8℃下進行結晶，所得晶體在溫度為43℃下真空干燥至含水率為0.9％，制得積雪草羥基積雪草甙。
對比例1，采用“一種羥基積雪草甙的制備方法(專利號：zl201010269888.0)”的實施例1-3的方法制備羥基積雪草甙。
對實施例1-3和對比例1制得的羥基積雪草甙的純度進行檢測，結果如下表所示。
由以上表可知，本發明的方法制得的羥基積雪草甙的純度在99.06％以上，均高于現有技術制得的羥基積雪草甙的純度，且能作為定性、定量的對照品。
以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明，對于所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明由所提交的權利要求書確定的專利保護范圍。